Name: יצירת מודל מכרסם של מפרצת אבי העורקים בבטן על ידי חסימת ואסה Adventitial וזורום זלוף (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: למדו ליצור מודל מכרסם של מפרצת אבי העורקים בבטן בעכברושים באמצעות חסימת זלוף וורידית והשתלת קטטר פוליאוריתן. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני התפתחות המחלה והתקדמותה בדומה לתופעות אנושיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי Grants-in-Aid עבור מדעי מחקר (B) (20291958) N.U.; Grants-in-Aid מדענים ומפתחים צעירים (א) (25713024) כדי N.Z.

טיפול בבעלי חיים, ניסויים בוצעו בהתאם לקווים המנחים של המלונות בהם צפיתי אוניברסיטת ועדות ביה ס של רפואה חיה טיפול במרכז לטיפול חיה.
 1. הליך כירורגי ליצירת הדגם הערה: למקם את מכשירי הניתוח מעקר חרוז 10 s preoperatively. להשתמש בכפפות סטריליות intraoperatively.
<ol><li>חולדות זכרים שימוש במשקל של 300-400 g... לאפשר החולדות גישה למזון ומים ad libitum.</li>
	<li>עזים ומתנגד העכברוש עם שאיפה איזופלוריין (2.0 – 3.0 גרם/ליטר). לאשר ההרדמה המתאים על ידי הבוהן קמצוץ.</li>
	<li>לגלח שיער על הבטן עם מכונת גילוח חשמלית, לשפשף את הבטן עם אלכוהול פתרון povidone יוד.</li>
	<li>למקם את החולדה במצב פרקדן על שולחן הניתוח. להשתמש הוטרינר משחה על החולדה &#39; s עיניים למניעת יובש תחת הרדמה.</li>
	<li>לבצע פתיחה של הבטן עם חתך בבטן קו האמצע הגחון באמצעות מספריים. לאבטחת שדה כירורגית ברור, לארוז את תוכן הבטן בתוך חלל הבטן עם גזה סטרילית באמצעות מפסק הפצע.</li>
	<li>כדי לנתק את העורקים מתוך הרקמה perivascular, בעדינות לאסוף ולהרוס את מקבץ עם פינצטה כדי לחשוף את הקיר אבי העורקים, נוגד העורקים מתחת לכליות בתוך השטח מאובחנת מהרמה של וריד הכליה השמאלית ההסתעפות של רקמה perivascular ( איור 1 א').</li>
	<li>Ligate כלי הסתעפות של העורק הראשי עם מחרוזת משי 5-0 על דם חסום אספקת בנקודה מן העורקים זה לא לצמצם לומן אבי העורקים.</li>
	<li>כדי לחסום את זרימת דם ותיני, מקום תפסים מתחת עורק הכליה ומעלה בלבד ההסתעפות של אבי העורקים. 
	הערה: הגודל של הקליפים צריך להיות גדול יותר קוטר אבי העורקים כדי לחסום את זרימת הדם לחלוטין. זמני 5-0 מחרוזת משי קשירה מספיקה גם לחסימת זרימת הדם במקום הקליפים.</li>
	<li>דומה ליצירת דימום תת-נקודה על פני הקיר אבי העורקים, חתך הקיר הקדמי אבי העורקים באמצעות מיקרו-מספריים 5 מ"מ רחוק מן הקליפ אבי העורקים, סמוך הענפים עורק הכליות, להכניס צנתר פוליאוריתן.</li>
	<li>נחדיר קטטר פוליאוריתן (מחוץ בקוטר 0.55 מ מ, בתוך קוטר מ מ 0.37) באמצעות 24-מד שכינתה מחט רדודות דרך החתך כדי לשטוף את הדם באבי העורקים עם מים. לנהל מזרק 1-mL מלא מים לתוך הצנתר פוליאורתן, לשטוף את הדם הנותרים באבי העורקים עם מים. לאחר שטיפה, להסיר את הצנתר של אבי העורקים.</li>
	<li>לפני הכנסת צנתר פוליאוריתן (מחוץ בקוטר 1.20 מ מ, בתוך קוטר מ"מ 0.94) באמצעות מחט שכנה של בקוטר 18, לחתוך את הצנתר פוליאוריתן 10 מ מ אורך ( איור 1B).
	<ol><li>הוספה החתך פיסת הקטטר פוליאוריתן לתוך לומן אבי העורקים של חתך שנעשה בשלב 1.9. לגמרי למקם את הצנתר 10 מ מ לתוך לומן אבי העורקים, מיקום נקודת האמצע של הקטטר כדי להתאים את המיקום של החתך (כלומר, לכסות את החתך עם הצנתר).</li>
	</ol></li> <li>לתקן את החתך בתפרים קטעה תוך שימוש במחרוזת monofilament 8-0 ( איור 1C).</li>
	<li>מאתרים ומפסיקים את העורק הראשי באמצעות שילוב של מיתרים משי 5-0, את הצנתר פוליאוריתן ( איור 1D). 
	הערה: אבי העורקים לומן יכול להישמר על ידי הקטטר שכנה. מאתרים ומפסיקים את העורקים בחוזקה כדי למנוע misaligning את מיקום הצנתר. המנתח &#39; s קשר מומלץ, כי זה מוסיף טוויסט נוסף כאשר קושר את הזריקה הראשונה של הקשר, יצירת קשר בוהן כפול, פנייה נוספת מספק חיכוך נוסף והוא יכול להפחית את התרופפות.</li>
	<li>לאחר מצדו, להסיר את הסרטון וסקולרית-ההסתעפות של אבי העורקים, ולאחר מכן, הסר את הקליפ כלי דם מתחת עורק הכליה כדי לשחזר את זרימת הדם תמיסה לשיתוק. לאשר pulsation אבי העורקים מגעיל.</li>
	<li>לסגור את החתך בבטן בשתי שכבות, של הצפק, שכבות אחרות, בתפר פוליפרופילן 4-0. בחוזקה תפר את החתך כדי למנוע איבר בלטו.</li>
	<li>החל לידוקאין אקטואלי על החתך בבטן. במקום העכברוש על כרית החימום עד מחזירה להכרה. אין להשאיר חולדה ללא השגחה עד זה שהכרתו מספיק כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. אל תשיבו חולדה עבר מבצע לחברה של חולדות אחרות עד זה הוא החלים לחלוטין.</li>
	<li>לפקח על העכברוש מקרוב אחרי הניתוח. להזריק סיילין מלח סטרילית (1.0-2.0 מ ל) subcutaneously אם עכבר מראה סימנים של מצוקה או של גוף במשקל.</li>
	<li>במשככי, להתבונן זמן-קורס פיתוח העורקים מוגדלת על echogram סאונד. למדוד הקוטר המרבי מבפנים קצה לקצה החיצוני של העורק הראשי כפי שמתואר 5.</li>
</ol> 2. קציר, תיקון ו Elastica-ואן Gieson (EVG) Staining <ol><li>עשרים ושמונה ימים במשככי, לנהל פנטל &#8805; 100 מ ג/ק ג intraperitoneally להרדים את החולדות.</li>
	<li>לחתוך את העכברוש &#39; s חללים בטן ventrally. לבצע את החתך הראשוני באמצעות אזמל. לקצור את המפרצת באמצעות מספריים ולמקם את aortas שנקטפו בפורמלין 10% נייטרליים באגירה מלאה עבור ה 24-48 
	הערה: המנתח להיות זהיר למנוע פגיעה העורקים ואיברים אחרים כאשר חושפים את המפרצת. איבר בטן מוגברות להתייחס, המציינת את היווצרות AAA. איור 2 מציג של ויוו תמונה ותמונה שמחוץ; זה במדגם מייצג של AAAs לא נקרע.</li>
	<li>EVG מכתים 9 <ol><li>פתרון הכנה <ol><li>הכנת Verhoeff &#39; s hematoxylin על ידי ערבוב הבאות בסדר הנתון: אלכוהוליים hematoxylin 20 מל ', 10% כלוריד הברזל ותחמוצת 8.0 מל ', ו Lugol &#39; s יוד 8 מ ל. מערבבים את הפתרון בין כל הוספה. פתרון זה ניתן להכין טרי כנדרש.</li>
			<li>הכן ואן Gieson &#39; s פתרון על ידי ערבוב fuchsin חומצה 1% 1 מ"ל ו רוויות חומצה picric 45 מ ל. מאפשרים לעמוד בלילה ומערבבים היטב. פתרון זה הוא יציב למשך שבועיים.</li>
			<li>להכין פתרון המבדילים (2% הברזל ותחמוצת כלוריד) על ידי ערבוב 10% FeCl 3 מ"ל ב- 40 מ ל מים מזוקקים. פתרון זה עשוי להיות מוכן טרי כנדרש.</li>
			<li>הכן היפו 5% על ידי המסת 5.0 גרם נתרן תיוסולפט במים 100 מ ל מזוקק. פתרון זה הוא יציב במשך שנה 1-</li>
		</ol></li> <li>Staining הליך הערה: ראה הפניה 9 לפרטים.
		<ol><li>בקצרה, מימה את המקטעים פרפין קבוע aortas שנקטפו במים מזוקקים במשך 10 דקות למקם את aortas Verhoeff &#39; s hematoxylin במשך 25 דק לשטוף עם מים, לטבול 10 - 30 פעמים המבדילים פתרון (2% FeCl 3). יש לשטוף במים. מקום זריקת שינה 5% 1 דקות לשטוף במים. במקום Gieson ואן &#39; s פתרון עבור 5 דק</li>
			סדר <li>Dehydrate באלכוהול הבאות: 75%-90%, 95%, 100%, 100% אלכוהול עבור 30 s כל. לאחר מכן, נקה, קסילן במשך 5 דקות, פעמיים. המקום coverslip שרפי הרכבה בינונית. 
			הערה: סיבים אלסטיים מופיעים כחול שחור לשחור; הגרעינים: כחול עד בלהck; קולגן: red; אלמנטים אחרים רקמות: צהוב-</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Wolinsky, H., Glagov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+abdominal+and+thoracic+aortic+medial+structure+in+mammals.+Deviation+of+man+from+the+usual+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of abdominal and thoracic aortic medial structure in mammals. Deviation of man from the usual pattern.</a> Circ Res. 25 (6), 677-686 (1969).</li>
<li>Sano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphangiogenesis+and+angiogenesis+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphangiogenesis and angiogenesis in abdominal aortic aneurysm.</a> PLoS One. 9 (3), e89830(2014).</li>
<li>Vorp, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+intraluminal+thrombus+in+abdominal+aortic+aneurysm+with+local+hypoxia+and+wall+weakening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Association of intraluminal thrombus in abdominal aortic aneurysm with local hypoxia and wall weakening.</a> J Vasc Surg. 34 (2), 291-299 (2001).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adventitial+vasa+vasorum+arteriosclerosis+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adventitial vasa vasorum arteriosclerosis in abdominal aortic aneurysm.</a> PLoS One. 8 (2), e57398(2013).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoperfusion+of+the+Adventitial+Vasa+Vasorum+Develops+an+Abdominal+Aortic+Aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoperfusion of the Adventitial Vasa Vasorum Develops an Abdominal Aortic Aneurysm.</a> PLoS One. 10 (8), e0134386(2015).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Spectrometry+Reveals+a+Unique+Distribution+of+Triglycerides+in+the+Abdominal+Aortic+Aneurysmal+Wall%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Spectrometry Reveals a Unique Distribution of Triglycerides in the Abdominal Aortic Aneurysmal Wall.</a> J Vasc Res. 52 (2), 127-135 (2015).</li>
<li>Kugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preventive+effect+of+fish+oil+on+abdominal+aortic+aneurysm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Biotechnol+Biochem%22%5BJournal%5D)">The preventive effect of fish oil on abdominal aortic aneurysm development.</a> Biosci Biotechnol Biochem. 80 (6), 1186-1191 (2016).</li>
<li>Kugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+in+vascular+wall+can+induce+the+rupture+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Adipocyte in vascular wall can induce the rupture of abdominal aortic aneurysm.</a> Sci Rep. 6, 31268(2016).</li>
<li>Lichtenberg, A., Cebotari, S., Tudorache, I., Hilfiker, A., Haverich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+scaffolds+for+heart+valve+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Biological scaffolds for heart valve tissue engineering.</a> Methods Mol Med. 140, 309-317 (2007).</li>
<li>Heistad, D. D., Marcus, M. L., Larsen, G. E., Armstrong, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+vasa+vasorum+in+nourishment+of+the+aortic+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Role of vasa vasorum in nourishment of the aortic wall.</a> Am J Physiol. 240 (5), H781-H787 (1981).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li>
<li>Azuma, J., Asagami, T., Dalman, R., Tsao, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+murine+experimental+abdominal+aortic+aneurysms+with+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Creation of murine experimental abdominal aortic aneurysms with elastase.</a> J Vis Exp. (29), (2009).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+Angiotensin+II+Infusion+using+Osmotic+Pumps+Induces+Aortic+Aneurysms+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li>
<li>United Kingdom, E. T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa0909305#t=article">Endovascular versus open repair of abdominal aortic aneurysm.</a> N Engl J Med. 362 (20), 1863-1871 (2010).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

בתנאים פיזיולוגיים, לשכבות הפנימיות של הקיר אבי העורקים מוזנים על ידי דיפוזיה של זרימת הדם luminal, ואילו השכבות החיצוניות או האמצעי מוזנים על ידי VV, אשר חודרים מ- adventitia אל ה VV המדיאלי1. VV זרימת הדם לתוך הקיר אב-עורקית של הבטן יכולות לנבוע מ- 3 הכיוונים/בתחומים הבאים: (1) לכיוון צינתור דרך הקיר אבי העורקים, כיוון הדיסטלי (2) דרך קיר של אבי העורקים, רקמות (3) perivascular10. הניתוח שלנו היסטולוגית של רקמות אנושיות זוהו בעבר, היצרות משמעותית או חסימה של VV בקיר AAA, רומז כי VV זרימת הדם לתוך הקיר של אבי העורקים בבטן יכול להיות מופחת4. זו נקודה מאוד חשובה של פרוטוקול זה מתחת לכליות AAA נגרמה על-ידי שילוב של קטטר פוליאוריתן ההכנסה תפר מצדו של העורק הראשי מתחת לכליות. פילינג בקפידה את שכבת רקמת, מנתחים עליך בצורה חלקה להכניס צנתר פוליאוריתן העורקים ולאחר בחוזקה מאתרים ומפסיקים לגרום היפוקסיה כרונית עקב זילוח adventitial VV, היווצרות מפרצת אבי העורקים. באמצעות טכניקות אלה, זרימת הדם בתוך הקיר אבי העורקים כתוצאה מכך יורדת, הנגרמת מחוסר חמצן סביבה מקומיים. הפחתת זרימת הדם של מפרצת היפוקסיה-induced היווצרות מציין כי VV זרימת הדם לתוך הקיר אב-עורקית של הבטן ממלא תפקיד בפתוגנזה של היווצרות AAA.
באופן ספציפי, מודל מפרצת אבי העורקים חייבים לעמוד בתנאים הבאים: עלייה 1.5-fold קוטר כלי הדם לעומת בסיסית, ניוון של התקשורת tunica, ודלקת של הקיר אבי העורקים. בעלי חיים הדגמים הפופולריים ביותר נבנו על ידי גרימת תגובות דלקתיות באמצעות חומרים, כגון2CaCl11, elastase12ו אנגיוטנסין II13. מודלים אלה תוכלו לעשות הפארמצבטית גבוהה, מן הסתם לגרום שינוי פתולוגי, הם בדרך כלל נעשה שימוש מחקרים. במודל שלנו, אנחנו העריכו את קוטר אבי העורקים באמצעות בדיקת אולטרה סאונד מדי 7 ימים בלבד לפני ההליך בוצע עד 28 יום לאחר ההליך (איור 3). תוצאות המחקר הראו כי קוטר אבי העורקים בינוני גדל במשך 28 הימים, המציינת כי שינוי זה קוטר דומה דגמים קודמים מכרסמים. תצפית ברוטו של הטופס כלי הדם הצביעו על צורה דמוי חלקה (איור 2). ביום 28, אנו הקריב את החולדות, לבצע ניתוח histopathological של אבי העורקים רקמת כי נמצאה. קורע והעלמות של סיבי אלסטי וקולגן adventitia ומדיה tunica נצפו (איור 4). יתר על כן, תאים דלקתיים, כגון מקרופאגים, היו במקום מ- adventitia tunica התקשורת tunica.
כיום, אפשרויות טיפול הזמינות עבור AAAs מוגבלים לתיקון כירורגי של endovascular הרכבה סטנט, עם שיעור תמותה של 30-50% אצל חולים עם קרע AAA14. עם זאת, התרופה לא אושרה לשימוש קליני לטיפול AAAs. אין ויכוח כי ישנם סתירות ממצאים פתולוגיים בין בני אדם ויצר מודלים בבעלי חיים השתמשו במחקר AAA. קווי דמיון בפתוגנזה בין האדם AAA AAA חייתיים חיוניים לפיתוח של טיפול תרופתי. לגבי האפקטיביות של מודלים מכרסמים, מודל עכברוש שלנו דומה מורפולוגית לבני במונחים של intraluminal כגון5 ו- adipogenesis8. יתר על כן, כ 20% של החולדות במחקר זה היה קרע AAA ומת בתוך 28 יום לאחר ההליך. אמנם האירוע הקריטי ביותר למחלה זו קרע מפרצת אבי העורקים, קרע נדיר עם ויצר מודלים AAA ניסיוני, המנגנון יש לא ובכל זאת כבר מבואר. לכן, מודל זה שימושי להבנת המנגנון של התרחבות של קוטר אבי העורקים, קרע של המפרצת.
היצירה של מודל זה נדרש עבור כמה ניתוחים. לכן, החוקרים חייבים לתרגל יצירת מודל זה, אשר הוא מגבלה של מודל זה. בעתיד, אנחנו רוצים ליצור מודל מכרסם בו נוכל לצמצם את זרימת הדם על ידי בהדרגה עיבוי הקירות VV, וכתוצאה מכך מפרצת אבי העורקים ספונטנית.

. העורק הראשי מורכב שלושת הרבדים הבאים: הקיר הפנימי וסקולרית (אינטימה) שכבה המדיאלי (מדיה), הקיר החיצוני וסקולרית (adventitia), אלה, adventitia יש בדיקת דם ייחודי לספק מערכת המכונה ואזא וזורום (VV). אבי העורקים רקמות מסופק עם חמצן דרך adventitial VV זלוף, דיפוזיה חמצן פשוטה זרימת דם ותיני1. עם זאת, מבחינה גיאוגרפית, העורק הראשי יש התפלגות לפחות VVs בהשוואה לזה בחלקים אחרים של אבי העורקים. 2
מחקר קודם דיווחו על רקמות חמצן. ילד אנושי מפרצת אבי העורקים בבטן (AAA) קירות עם intraluminal עבה כגון (ILT)3. בנוסף, הוכח כי VV adventitial בקירות aneurysmal הוא occluded עם שינויים arteriosclerotic בשיעור גבוה יותר באופן משמעותי, אשר מזוהה עם רקמת היפוקסיה קירות AAA4. על סמך ממצאים אלה, מודל מכרסמים הרומן של AAA נוצר על ידי גרימת VV adventitial זילוח5. במודל זה, גרם VV זילוח רקמת והתקפת התפתחות מתחת לכליות AAA, אשר היו מאפיינים פתולוגיים מורפולוגיים דומים לאלה של AAA האנושי6. דוגמאות הממשלה היו הנוכחות של ILTs ההצטברות של hyperplastic adipocytes6ופוטנציאל לגרום קרע7,8. ממצאים אלה נצפו לעתים נדירות במודלים מכרסמים הקודם. לכן, מודל זה במידה רבה עשויים לתרום הבנה עמוקה יותר של מנגנון האחראי על פיתוח AAA, קרע. אנחנו מציגים. ומתארות פרוטוקול סטנדרטי המשמש לזירוז AAAs דרך זילוח VV adventitial, נסביר כיצד לגרום היפוקסיה בקיר אבי העורקים באמצעות טכניקות ניתוחיות.

<table><tbody><tr><td>עכברוש</td><td>יפן SLC. Inc</td><td>Slc:SD חולדה</td><td>Sprague&ndash; Dawley ratTM</td></tr><tr><td>פובידון-יוד תמיסת</td><td>Libatape Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>4987335 111457</tr><tr><td>5-0 מחרוזת משי</td><td>Akiyama רפואי MFG. CO., LTD</td><td>JIS מס' 1</td><td></td></tr><tr><td>כלי דם קליפים</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td>קטטר פוליאוריטן <td>C-42-S-2</td><td></td></tr><tr><td>(מחט שוכנת 24 מד)</td><td>MEDIKIT</td><td>24G</td><td>Supercath Z4VTM, קטטר פוליאוריטן מחט שוכנת 24 מד</td></tr><tr><td>(מחט שוכנת 18 מד)</td><td>MEDIKIT</td><td>18G</td><td>Supercath Z3VTM, מחט שוכנת 18 מד</td></tr><tr><td>8-0 מחרוזת מונופילמנט</td> תפר <td>אתיקון</td><td>c-42-S-2</td><td>פרולן פוליפרופילן תפר , תקן את החתך עם התפר</td></tr></tbody></table>

יצירת מודל מכרסם של מפרצת אבי העורקים בבטן על ידי חסימת ואסה adventitial וזורום זלוף

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Adventitial צינורי (VV) מספק חמצן וההזנה לקיר אבי העורקים. היפוקסיה בקיר אבי העורקים עלול לגרום מפרצת אבי העורקים בטן מוגדלת (AAAs). מאמר זה מציג ומתאר פרוטוקול סטנדרטי המשמש לזירוז AAAs דרך זילוח VV adventitial שנוצרו באמצעות שילוב של קטטר פוליאוריתן הכניסה לתוך לומן אבי העורקים ואת תפר מצדו של העורק הראשי מתחת לכליות.
הפרוטוקול כרוכה בשימוש הגברי חולדות במשקל של 300-400 g, אשר הינם מסופקים מים ואוכל ad libitum. לאחר פתיחת בטן עם חתך בבטן הגחון קו האמצע, מבוצע קילוף של אבי העורקים, אשר חוסם את זרימת הדם מן הרקמה perivascular. Aortotomy מעורבים חתך קטן סמוך הענפים עורק הכליות מבוצעת, מוכנס קטטר פוליאוריתן באמצעות מחט שכנה של בקוטר 18. לאחר תיקון החתך, צמוד מצדו של אבי העורקים על הצנתר חוסמת זרימת דם VV מהכיוון צינתור דרך דופן אבי העורקים מבלי להפריע את זרימת הדם של אבי העורקים. טכניקה זו יכול לגרום של AAA עם הרחבה הדרגתית של אבי העורקים.
היתרון הגדול של מודל זה הוא כי VV זילוח גורמת רקמות והתקפת התפתחות מתחת לכליות AAA, אשר מאפיינים פתולוגיים מורפולוגיים דומים לאלה של AAA אנושי.

טכניקות פעיל שתואר ליצור מודל בעלי חיים הרומן ממפרצת כרונית אבי העורקים היפוקסיה-induced על-ידי שימוש בשילוב של קטטר פוליאוריתן הכניסה עם תפר מצדו של העורק הראשי מתחת לכליות בחולדות. העכברושים המתוארות בסעיף פרוטוקול היו לאללה 28 ימים לאחר הניתוח. Aortas שנקטפו, עם תמונה להמחיש היווצרות מפרצת. איור 2 מציג את התפתחות כישורי AAA. הקצוות העליונים והתחתונים של אבי העורקים ב- ex-vivo יש קוטר רגילה ללא הרחבה. אבי העורקים קטרים נמדדו באמצעות בדיקת אולטרה סאונד transabdominal (איור 3). הקוטר בדרך כלל מגיע לגודלו המירבי כ 14 ימים לאחר ההליך; לאחר מכן, היא נותרת ללא שינוי או מעט מעלה. איור 4 מראה את התמונה histopathological של המפרצת-הקוטר המרבי שלה לאחר EVG מכתים. התמונה של הרקמה ביום 28 (מפרצת) הראה השפלה הבולטים של סיבים אלסטיים בהשוואה לזה ביום 0.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig1.jpg"> 
איור 1: ניתוחים לזירוז מפרצת אב-עורקית של הבטן (AAA). (א) העורקים מתחת לכליות exfoliated מן הרקמה שמסביב. (ב) קטטר פוליאוריתן לחתוך 10 מ"מ מוחדר דרך חתך קטן באבי העורקים. (ג) את החתך יתוקן בתפר monofilament 8-0, זרימת הדם משוחזר. (ד) אבי העורקים הוא מאתרים בתפר משי 5-0 על הצנתר שנוספו. סרגל קנה מידה = 5 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig2.jpg"> 
איור 2: תוצאות נציג לאחר הניתוח. נוף מאקרוסקופית 28 יום לאחר הניתוח מראה התפתחות כישורי מפרצות של אבי העורקים בבטן. מהשוליים מוגברות של מקבץ מקביל הקצה החיצוני של המפרצת (קווים שבורים; שמאלה). הקצוות העליונים והתחתונים של אבי העורקים ב- ex-vivo נורמליות (מימין). סרגל קנה מידה = 3 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig3.jpg"> 
איור 3: מקסימום אבי העורקים קטרים נמדד באמצעות בדיקת אולטרה סאונד transabdominal. קוטר אבי העורקים גדל בהתמדה במודל זה עכברוש. אבי העורקים קטרים מוצגות כחלק סטיית תקן זאת אומרת ± (n = 12). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig4.jpg"> 
איור 4: להחליפן בתמונות של רקמת aneurysmal עם Elastica ואן Gieson מכתים. הערכה היסטולוגית עם EVG מכתים מציג הנדן אלסטי ניוונית מדיה, היווצרות כגון intraluminal 28 יום לאחר ההליך (מימין). סיבים אלסטיים בתקשורת אבי העורקים ולהפיק סיבי קולגן דליל ב- adventitia אבי העורקים הם נצפו ביום 28. יום 0 הוא לפני ההליך (משמאל). סרגל קנה מידה = 500 מיקרומטר. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

הכניסה פוליאוריתן קטטר לתוך לומן אבי העורקים ואת תפר מצדו של אבי העורקים לגרום היפוקסיה כרונית עקב זילוח של adventitial צינורי. מאמר זה מתאר מודל בעלי חיים הרומן של מפרצת אב-עורקית של הבטן (AAA) עם מאפיינים דומים לאלה של AAA בבני אדם.

יצירת מודל מכרסם של מפרצת אבי העורקים בבטן על ידי חסימת ואסה Adventitial וזורום זלוף

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להשרות היפוקסיה ברקמת האבורטה להשראת מפרצת באבי העורקים הבטני (abdominal aortic aneurysm או AAA) עם התרחבות הדרגתית של אבי העורקים בחולדה. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום המחקר של מפרצות באבי העורקים לגבי המנגנונים האחראים להתפתחותה ולקרע של מפרצת באבי העורקים הבטני. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהמאפיינים המורפולוגיים והפתולוגיים במודל החולדה דומים לאלו הנראים במפרצות של אבי העורקים הבטני בבני אדם.הרעיון לשיטה זו עלה לראשונה בעודנו חוקרים אפשרות אחרת של AAA אנושי. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, כיוון שניתוח להשראת היפוקסיה הוא קשה ללמידה באמצעות הוראות כתובות בלבד. את הפרוצדורה ידגימו Tatsuro Yata, המנתח כלי הדם שלנו, ו-Hirona Kugo, שניהם דוקטורנטים לשעבר מהמעבדה שלנו.לאחר אישור רמת הסדציה המתאימה באמצעות צביטה בבהונות, השתמש במכונת גילוח חשמלית לגילוח שיער הבטן של חולדה השוקלת 300 עד 400 milligram, ולאחר מכן בצע חיטוי רצף של העור החשוף באמצעות תמיסות אלכוהול ופובידון-יוד. הנח את החולדה על שולחן הניתוח במנח גב (supine) ומריח משחה על עיני החיה. לאחר מכן, השתמש במספריים כדי לבצע חתך בקו האמצע הבטני של הבטן, והשתמש בגזה סטרילית ובמרחיב פצע כדי לדחוס את תכולת הבטן בתוך חלל הבטן.כדי להפריד את האורטה מהרקמה הפרי-וסקולרית, השתמשו בפינצטה כדי להרים בעדינות ולקרוע את הרטרו-פריטונאום, ובכך לחשוף את דופן האורטה. לאחר מכן, קלפו את האורטה האינפרא-רנלית בתוך החלל הרטרו-פריטונאלי, מהוריד הרנלי השמאלי ועד לנקודת הפיצול, מהרקמה הפרי-וסקולרית. השתמשו בתפר משי 5-0 כדי לקשור את כלי הדם המת branching מהאורטה הבטנית, על מנת לחסום את אספקת הדם בנקודה המרוחקת מהאורטה שאינה מצמצמת את לומן האורטה.כדי לחסום את זרימת הדם באורטה, מקמו תסמיכי כלי דם (vascular clips) ממש מתחת לעורק הכליה וממש מעל לפיצול של האורטה. בדומה ליצירת דימום נקודתי על פני השטח של דופן האורטה, הכניסו מיקרו-מספריים 5 mm דיסטלית מתסמיך האורטה הסמוך לענפי עורק הכליה כדי לחתוך את דופן האורטה הקדמית, והשתמשו במחט קטטר (indwelling needle) בכילייב 24 כדי להחדיר בצורה רדודה קטטר פוליאוריטן דרך החתך. חברו מזרק של 1-mL מלא במים לפוליאוריטן ושטפו את שארית הדם מהאורטה.בשלב הבא, גזרו קטטר פוליאוריטן חד לאורך של 10 mm והכניסו אותו לחלוטין לתוך החתך בלומן של האורטה. reposition את נקודת האמצע של הקטטר כך שתתאים למיקום החתך, והשתמשו בתפר מונופילמנט 8-0 כדי לסגור את החתך בתפרים נפרדים. קשרו את האורטה הבטנית באמצעות קשר כירורגי בעזרת תפר משי 5-0 וקטטר הפוליאוריטן.כאשר הקטטר מקובע, הסירו את התסנני כלי הדם (vascular clips) בפיסולת האורטה וממתחת לעורק הכליה כדי לשחזר את זרימת הדם קדימה (antegrade) ולאשר את קיומה של פעימה אאורטלית גסה. לאחר הסרת הגזה, השתמשו בתפר פוליפרופילן 4-0 כדי לסגור בחוזקה את החתך הבטני בשתי שכבות, למניעת בלט של איברים. לאחר מכן, מרחו לידוקאין מקומי על החתך הבטני והניחו את החולדה על משטח חימום תחת ניטור עד להחלמה מלאה.בעקבות הניתוח, עקבו אחר התפתחות מהלך הזמן של הרחבת האורטה באקו-גרם אולטרסאונד, ומדדו את הקוטר המקסימלי מהדופן הפנימית לדופן החיצונית של האורטה הבטנית בהתאם לפרוטוקולים סטנדרטיים. 28 ימים לאחר הניתוח, השתמשו בסקאלפל כדי לפתוח את הבטן באמצעות חתך ונטרלי חדש והשתמשו במספריים כדי להוציא את המפרצת. העבירו את האורטות שהוצאו לפורמלין בבופר ניטרלי בריכוז 10% למשך 24 עד 48 שעות.לאחר הטמעת אבי העורקים בפרפין והשגת חתכים של רקמת אבי העורקים, בהתאם לפרוטוקולים סטנדרטיים, יש להעביר את חתכי הפרפין המקובעים לדהידרציה במים מזוקקים למשך 10 דקות, ולאחר מכן לדגירה ב-Verhoeff's haematoxylin. ניתן לזהות חלודה וקורוזיה באמצעות פעילות מעבדה עם Verhoeff's haematoxylin ופתרון van Gieson. לפיכך, רמת הטריות וזמני הדגירה של צבעי רקמה אלו חשובים לצורך ארכוב וצביעה אופציונלית.לאחר 25 דקות, שטפו את החיתוכים בשלושה שטיפות של דקה אחת במים, ולאחריהן 10 עד 30 טבילות בתמיסת בידול. שטפו את החיתוכים שוב שלוש פעמים במים והניחו את הדגימות ב-5% sodium thiosulfate למשך דקה אחת. לאחר שטיפה נוספת במים, טבלו את הדגימות בתמיסת van Gieson למשך חמש דקות.בשלב הבא, יש לבצע דהידרציה לרקמות באמצעות טבילות עולות באתנול למשך 30 שניות, ולאחריהן הבהרה באמצעות שתי דגירה ב-Xylene למשך 5 דקות. לאחר מכן, השתמשו בתוסף קיבוע (mounting medium) מסוג resonance כדי לכסות את החתכים עם זכוכיות כיסוי בגודל המתאים. בתמונות אלו מוצג מפרעת באורטה בבטן (abdominal aortic aneurysm) מייצגת, 28 ימים לאחר השחלת הקטטר.מדידה של הקצוות העליונים והתחתונים של האורטה באמצעות אולטרסאונד טרנס-אבדומינלי מגלה קוטר תקין ללא התרחבות מיד לאחר השמת הקטטר, אשר גדל לממדיו המקסימליים בערך 14 ימים לאחר ההשמה ונותר ללא שינוי או גדל מעט עד לסוף תקופת הניסוי. ניתוח היסטופתולוגי של מפרצת ביום ה-28 מגלה דגרדציה בולטת של סיבי אלסטין בהשוואה לזו שנצפתה ביום אפס. לאחר רכישת מיומנות, ניתן להשלים טכניקה זו בתוך כשעה אם היא מבוצעת כראוי.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון אנליזה in vitro, כדי לענות על שאלות נוספות לגבי התפקודים הסדרתיים האינדיבידואליים. לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום של מפרצת בעורק האורטלי הבטני (abdominal aortic aneurysm) לבחון את המחלה בדמוגרפיות ספציפיות של חולים. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשרות היפוקסיה ברקמת האורטה לצורך השראה של מפרצת בעורק האורטלי הבטני עם התרחבות פרוגרסיבית של האורטה בחולדה.זכרו כי עבודה עם מכשירים כירורגיים עלולה להיות מסוכנת ביותר, ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות למניעת פגיעות וזיהומים בעת ביצוע הליך זה.

creation-rodent-model-abdominal-aortic-aneurysm-blocking-adventitial

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

וידאו זה מראה כיצד לגרום מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) בעכברים באמצעות עירוי intraluminal חולף של elastase הלבלב חזירי לתוך מגזר infrarenal של אבי העורקים בבטן. המודל יש את היכולת להוסיף תובנות לתוך pathobiology רחב של AAA בשל הופעתה של מהונדס רבים נוקאאוט בעכברים גנים.

יצירת ניסויית מפרצת אבי העורקים הבטני Murine עם Elastase

וידאו זה מדגים את מודל orthotopic השתלת מסתם אאורטלי כמודל פשוט ללמוד את הפיתוח של vasculopathy ההשתלה (TVP) בחולדות.

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

שינויים היסטולוגית ויוכימי לאחר הרחקת endograft פרצה עדיין אינם ברורים. אנו מתארים מודל חדש של השתלת endograft על פרצה עכברית. באמצעות ניתוח פקיק עם ובלי ממשק persistant מחזור דם זרם, והערכת חומרים ביולוגית endovascular חדש, מודל זה יסייע להבין טוב יותר pathobiology הדרה מפרצת endovascular.

דגם Murine חדש של מפרצת אבי העורקים תיקון Endovascular

מפרצת דופן מיקרו-כירורגית בחולדות נוצרת על ידי אנסטומוזה מקצה לצד של שתל אבי העורקים לאבי העורקים הבטני. אנו מציגים הוראות שלב אחר שלב ודנים בפרטים אנטומיים וכירורגיים ליצירת מפרצת שקית ניסיונית.

הדפנות מפרצת דגם הלסינקי עכברוש Microsurgical

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית מתוקננת עבור מודל AAA המושרה אלסטאז באמצעות יישום ישיר של אלסטאז להרפתקנטיה של אבי העורקים הבטן האינפרא-יותרת בעכברים.

עכבר בטן מפרצת אבי העורקים מודל המושרה על ידי יישום פרי וסקולרי של אלסטאז

פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר של מפרצת אבי העורקים הבטני (AAA) המושרה על-ידי סידן פוספט, כדי לחקור את התכונות הפתולוגיות והמנגנונים המולקולריים של AAAs.

מודל מפרצת אבי העורקים בבטן הנגרמת על-ידי סידן פוספט על-ידי עכבר

כתב יד זה מציג פרוטוקול לביסוס מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר באמצעות סידן כלורי ואלסטאז, המשלב את היתרונות של שיטות מידול קודמות. מודל זה יכול לשמש לחקר המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס מפרצת אבי העורקים הבטני.

מודל מפרצת אבי העורקים הבטני של עכבר על ידי Periadventitial סידן כלורי והסננת אלסטאז

פרוטוקול זה מתאר גישה כירורגית שיטתית למידול מפרצות מתקדמות באבי העורקים הבטני בעכברים על ידי שילוב של יישום אלסטאז ישירות על אבי העורקים האינפרא-כלייתי ומתן ß-aminopropionitrile דרך מי שתייה.

מידול מפרצת אבי העורקים הבטני מתקדם בעכברים על ידי שילוב של אלסטאז מקומי ו-ß-aminopropionitrile פומי

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה כירורגית סטנדרטית לאינדוקציה של מפרצת צוואר במודל עכברי באמצעות ניתוח כירורגי יחיד.

מודל עכברי של היווצרות מפרצת קרוטיד

פרוטוקול זה מספק הליך מפורט, שלב אחר שלב, לאינדוקציה של דיסקציה של אבי העורקים החזי בעכברים. באופן ספציפי, הוא כולל חישוב מדויק של המינונים הנדרשים של β-אמינופרופיוניטריל ואנגיוטנסין II, הליך מילוי המשאבה האוסמוטית וטכניקת ההשתלה של המשאבה האוסמוטית.

מודל עכברי של דיסקציה של אבי העורקים החזי המושרה על ידי עירוי β-אמינופרופיוניטריל דרך הפה ואנגיוטנסין II תת עורי

פרוטוקול זה מספק שיטה ניתנת לחזרה ואמינה להשראת מפרצות אאורטה בטנית (AAAs) בעכברים C57BL/6 באמצעות רגישות לאלסטין ויישום אלסטאז פריוסקולרי, כמודל AAA הכולל רכיב רגישות חיסונית.

יצירת מודל אמין של אנוריזמה באאורטה בטנית בעכבר באמצעות רגישות לאלסטין ואלסטאז פריוסקולרי

למדו ליצור מודל מכרסם של מפרצת אבי העורקים בבטן בעכברושים באמצעות חסימת זלוף וורידית והשתלת קטטר פוליאוריתן. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני התפתחות המחלה והתקדמותה בדומה לתופעות אנושיות.

יצירת מודל מכרסם של מפרצת אבי העורקים בבטן על ידי חסימת ואסה Adventitial וזורום זלוף

גלה סרטונים נוספים