Name: חתך בלוטות החלב שלמות מלא עבור זיהוי הנגע (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: למד שיטה לעיבוד רקמת בלוטות חלב שלמות בעכברים לזיהוי נגעים ברמת המיקרוסקופ. הטכניקה משפרת הערכה היסטופתולוגית ומגבירה את הסיכוי לאיתור לקויות בבלוטות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים היו רוצים להכיר פאם Ovwigho, טנט ג &#39;ונס, ו נטשה קלייטון, NIEHS, על המומחיות הטכנית שלהם תמיכה עם הפרויקט הזה.

כל שימוש בבעלי חיים ונהלים עבור מחקר זה אושרו על ידי המעבדה NIEHS בעלי חיים טיפול ושימוש הוועדה נערך במסגרת איגוד הערכה והסמכה של מעבדה טיפול בבעלי חיים מוכר מתקן. 1. החלב שלמה הר הכנה 2 , 3 , 6 , 7 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוצא את בלוטות החלב המשפיעות מצד אחד של עכבר CD-1 לא בהריון, כמתואר בהתייחסות 3 , ומקם אותן על שקף טעונה אלקטרוסטטית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסים את הבלוטה עם נייר שאינו מקל או הסרט ומניחים שקופית נוספת על גבי. הוסף לחץ ( כלומר, משקולות מים) לשקופית כדי להפיץ את בלוטת החוצה שטוח כך הבלוטה ידבק לשקופית עבור קיבעון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להטביע את השקופיות ב מקבע ( למשל, אתנול 100%, כלורופורם, חומצה אצטית קרחוני ביחס 6: 3: 1)לילה בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הבלוטות מן מקבע ולשטוף באתנול במשך 15-30 דקות. לאחר 30 דקות לשטוף, בהדרגה לשנות למים על ידי שפכו החוצה 1/3 של אתנול והוספת מים. בואו לשטוף לשבת על 5 דקות בכל פעם, וחזור עם תוספת של מים 3 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כתם ( למשל, פתרון alarm carmine) עבור 12-24 שעות. הערה: רקמות עבה ידרוש פעמים מכתים ארוכים יותר. ראה התייחסות 3 לפרטים מכתים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את הכתם לאחר הזמן המוקצב ולשטוף את השקופיות במים במשך 30 s. מייבשים את הרקמות על ידי שטיפת השקופיות באתנול 70% במשך 15 דקות, ואחריו ביצוע לשטוף 15 דקות באתנול 95% ו לשטוף הסופי באתנול 100% במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את השומן מן הרקמות על ידי הצבת אותם קסילן למשך מינימום של 24 שעות, או יותר אם הרקמה היא עבה, כך שכל האזורים אטומים או לבנים מוסרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הרקמה של קסילן להוסיף במהירות מ &#39;Ounting בינוני לשקופית, כדי למנוע התייבשות רקמה; במקום קוברסליפ. אפשר לשקף להתייבש לפחות 48 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את הרקמה רכוב כולו על חריגות, כמתואר 2 . הערה: כאשר נגעים מזוהים ב mounts שלם חתך יש צורך להקים את זהותם, השלבים הבאים יש לעקוב. </li></ol> 2. הסרת הר שלם של החזה משקופית זכוכית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את coverslip ו המדיום הרכבה על ידי שקע החזה כל שקע הר בצנצנת מכתים זכוכית מלא קסילן לילה. הערה: רקמות עבות יותר שקופיות עם פתרון הרכבה מוגזמת עשוי לדרוש זמן נוסף להסרת coverslip. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר לילה הראשון להשרות, במקום שקופיות קסילן טרי להשרות 6 שעות. בצע אחד הסופי להשרות קסילן טרי בן לילה. הערה: coverslip יהיה בקלות ליפול את השקופית לאחר האחרון להשרות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם agיד אהוב, להחזיק את השקופית להסיר בזהירות את coverslip עם זוג מלקחיים כדי להבטיח כי הוא הוסר חתיכה אחת. הערה: במידה וה- coverslip עדיין מחובר לשקופית הזכוכית, המשיכו לשטוף עד שניתן יהיה להסיר אותו במאמץ קל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר coverslip מוסר, להחזיק את השקופית בניצב על צלחת פטרי זכוכית המכילים קסילן, בזהירות לקחת חד חד פעמי, להב גילוח והחלק את הלהב בתנועה אחת בשקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הרקמה מוסר, במהירות להטביע את פנקס החלב לתוך צלחת פטרי מלא זכוכית קסילן כדי להבטיח כי הרקמה לא באוויר יבש. הערה: היזהר בשלב זה. כל הר הוא דק (≤ 1 מ&quot;מ), ושביר מ xylene עיבוד. כל רשמים או דמעות עשויים לשנות את המורפולוגיה של הרקמה ולסבך הערכות מאוחר יותר. </li></ol> 3. עיבוד רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הרקמה היא בצלחת פטרי, בזהירות להעביר אותולקלטת היסטולוגיה מסומנת. תפוס את קצה כרית השומן עם מלקחיים בוטה, משונן- tipped מלקחיים כדי למזער נזק לרקמות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות סכין גילוח, לחתוך רקמות גדולות יותר (במיוחד עבור חולדות) במחצית ולמקם אותם שתי קלטות שכותרתו נפרדת כי יהיה להתאים את גודל הרקמה. מניחים את הרקמה בצד ימין למעלה (להשתמש בלוטות הלימפה כהפניה). ודא כי הרקמה בלי בלוטות הלימפה נשמרת באותו מקום, זקוף כאשר הוא מועבר הקלטת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הקלטת לתוך מיכל של קסילן עד 2 שעות לפני הצבת אותו במעבד רקמות. הערה: מומלץ לעבד את הדגימות באותו יום שבו הן ממוקמות לתוך הקלטת. מורחבת השריית קסילן לא נבדק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את המספר המרבי של קלטות לתוך מעבד רקמות ביד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני תחילת, לתכנת את כל ריאגנטים אשר ישמשו בתהליך זה לתוך רשימת המעבד של המעבד. כדי להפוך את התנועה לאוטומטיתמתחנה אחת לאחרת, להשתמש באפשרויות התפריט וליצור תוכנית חדשה. לאחר השלמת כל השלבים, בחר &#39;אישור&#39; כדי להמשיך. הערה: המעבד יאפשר לעיין בכל פרטי התחנות לפני תחילת העבודה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוטומציה של המעבד להשרות את הקלטות ב קסילן במשך 30 דקות על 37 מעלות צלזיוס, ואחריו השני להשרות קסילן טרי תחת אותם תנאים. אוטומציה של המעבד כדי להסיר את הקלטות מן הפתרון קסילן ולהעביר את הרקמות לתחנה הבאה המכיל 1: 1 קסילן: תערובת פרפין מותכת, מוגדר על 60 מעלות צלזיוס, למשך 30 דקות. הערה: המעבד לאחר מכן להעביר את הקלטות לתוך תא חדש המכיל פרפין מותך עבור 1 שעות. לאחר 1 שעה, דגימות יועברו באופן אוטומטי לתא חדש של פרפין מותך טריים יעובדו עבור 2 שעות נוספות. שני השלבים מתבצעים ב 60 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המעבד לאחר מכן מעביר את הקלטות לתחנה המכילה פרה מותכתFfin עבור 1 h. לאחר מכן, הדגימות מועברות באופן אוטומטי לתחנה הסופית של פרפין מותך טריים ומעובד עבור 2 שעות נוספות. שני השלבים מתבצעים ב 60 ° C. </li></ol></li></ol> 4. הטבעת רקמת החלב המעובד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הקלטות ב 58 ° C פרפין מחזיק טנק של תחנת הטבעה עד מוכן להטביע את הרקמה בתבנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מכסה הקלטת כדי לקבוע את גודל עובש הטוב ביותר עבור הרקמה. ודא כי עובש גדול מספיק כדי להתאים את הרקמה, ולהשאיר מספיק מקום יש גבול ללא רקמות של פרפין סביב המערכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 3-4 מ&quot;מ של פרפין מותכת על התבנית לכוון את החלב כולו הר משטח, שהיה סמוך לתחתית שקופיות הזכוכית ואת החלק התחתון של קלטת, פונה למעלה בתבנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את התבנית לצלחת קירור במהירות להתאים את הרקמה לפי הצורך, כך מקביל עובש באוקטום. הערה: לאחר hardens hardens, את הרקמה יהיה besecured במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים חמים, במקום את החלק התחתון, שכותרתו של הקלטת על גבי התבנית; לחץ בחוזקה באמצעות מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף נוסף פרפין מותך על התבנית בתנועה מתמשכת כדי לכסות את הקלטת כולה. מעבירים את התבנית מהצלחת החמה לצלחת קרה כדי להשלים התקשות של הבלוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הבלוק מן התבנית כאשר פרפין לחלוטין solidifies כדי למנוע סדקים או בועות אוויר. הערה: אחסן את הרקמות מוטבע paraffin בטמפרטורת החדר עד מוכן סעיף. </li></ol> 5. חתך את רקמת החלב paraffin- מוטבע על המיקרוטום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני חתך, דגירה בלוקים פרפין ב -20 מעלות צלזיוס למשך 1 שעות. הערה: יהיה אמצעי גובר הרכבה בבלוק מן הרקמה coverslipped המקורי הר. מצמרר את הבלוק משפר חתך בלוק ו סרט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את המיקרופוןRotome על ידי הפעלת על אמבט מים, המכיל מים מזוקקים טריים, ולהתאים את הטמפרטורה ל 42-45 מעלות צלזיוס. מניחים טריים, להב פרופיל נמוך על microtome ולהגדיר אותו 4 מיקרומטר. הערה: איכות סעיף מופחת עם סעיפים עבים יותר מ 4 מיקרומטר בגלל נוכחות של המדידה הרכבה שיורית ברקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הבלוק לתוך microtome עם שעווה מול להב מיושר עם המטוס האנכי. לאחר מכן, להרטיב קטע של פד גזה במים קרים ומניחים אותו על הבלוק במשך כמה דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק את הבלוק על ידי סיבוב הגלגל הגדול בתנועה בכיוון השעון, בשילוב עם גלגל מתקדם גס, עד פנים מלא או קטע נציג של בלוק מתקבל. הערה: הרקמה היא רזה בגלל ניקוי קסילן במהלך תהליך הר כולו. יישור בלוק כראוי עם להב כדי למזער את מספר הקיצוצים בקבלת קטע נציג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את הסרטסעיף למעלה ביד, בזהירות לצוף את הסרט באמבטיה חמימה (45 מעלות צלזיוס) מים (מוכן מראש), לאפשר קמטים רקמות להתפזר בזהירות לצוף קטע על שקופית זכוכית נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השקופיות זקוף על מתלה ייבוש להסיר מים עודף. דגירה השקופיות בתיבת שקופיות נפתחה מעט לילה ב 37 מעלות צלזיוס. </li></ol> 6. אוטומטי ו ידני H &amp; E מכתים של רקמות החלב סעיף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני מכתים, השקופיות מאוחסנים בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מכתים אוטומטיים, בחר H &amp; E מתוך אפשרויות הכתם בתפריט הראשי. Deparaffinization, מכתים, והתייבשות כולם הושלמו על כתם אוטומטי. השתמש בינוני הרכבה ו coverslip כדי לטעון את החלקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם מכתים את השקופיות באופן ידני, deparaffinize את הסעיפים על ידי שקוע שקופיות קסילן במשך 5 דקות. העברת קסילן טרי וחזור במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Rehydrate את השקופיות על ידי שקוע הEm פעמיים באתנול 100% עבור 3 דקות כל אחד, ואחריו שתי חזרות באתנול טרי 95% ושני שוטף נפרד 1X לשטוף 1X ב 5 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את השקופיות במים מזוקקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את השקופיות כדי hematoxylin עבור 1-2 דקות. הסר את השקופיות ולשטוף אותם עם מי ברז פועל במשך 5 דקות. הערה: מסנן hematoxylin לפני כל שימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השקופיות ב 1% חומצה אצטית קרחוני עבור 30 s כדי לקדם את בידול צבע, ולאחר מכן לשטוף במי ברז ברז במשך 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף שקופיות ל 1X PBS עבור 30 שניות עד 1 דקות כחול סעיפים רקמה, ואחריו שטיפה 5 דקות במי ברז ולאחר מכן ב אלכוהול 95% עבור 15 - 20 s. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Counterstain עם פתרון eosin במשך 30 דקות עד 1. בעקבות זאת, לייבש את השקופיות פעמיים באתנול טרי 95%, ואחריו שתי חזרות טריות באתנול 100%. בצע כל לשטוף במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את השקופיות קסילן, עם שני שינויים קסילן במשך 5 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coverslipאת החלק רקמות עם הרכבה בינונית ויבשה שטוחה בטמפרטורת החדר. </li></ol>

<ol><li>Rudel, R. A., Fenton, S. E., Ackerman, J. M., Euling, S. Y., Makris, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+exposures+and+mammary+gland+development%3A+State+of+the+science%2C+public+health%2C+implications%2C+and+research+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Environmental exposures and mammary gland development: State of the science, public health, implications, and research recommendations.</a> Environ Health Perspect. 119 (8), 1053-1061 (2011).</li>
<li>Keenan, K. P., Wallig, M. A., Hascheck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+via+Nurture%3A+Effect+of+Diet+on+Health%2C+Obesity%2C+and+Safety+Assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Nature via Nurture: Effect of Diet on Health, Obesity, and Safety Assessment.</a> Toxicol Pathol. 41 (2), 190-209 (2013).</li>
<li>Stanko, J. P., Fenton, S. E. <a target="_blank" href="https://www.jove.com/video/55789/quantifying-branching-density-rat-mammary-gland-whole-mounts-using">Quantifying branching density in rat mammary gland whole mounts using the Sholl analysis method.</a> J Vis Exp. , In press (2017).</li>
<li>Toxicology Program, N. ational Specifications for the conduct of studies to evaluate the toxic and carcinogenic potential of chemical, biological, and physical agents in laboratory animals for the national toxicology program (NTP). National Toxicology Program, National Institutes of Environmental Health Sciences. , Research Triangle Park, NC. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://ntp.niehs.nih.gov/ntp/test_info/finalntp_toxcarspecsjan2011.pdf">http://ntp.niehs.nih.gov/ntp/test_info/finalntp_toxcarspecsjan2011.pdf</a> (2011).</li>
<li>Toxicology Program, N. ational Specifications for the conduct of studies to evaluate the reproductive and developmental toxicity of chemical, biological, and physical agents in laboratory animals for the National Toxicology Program (NTP). National Toxicology Program, National Institutes of Environmental Health Sciences. , Research Triangle Park, NC. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://ntp.niehs.nih.gov/ntp/test_info/finalntp_reprospecsmay2011_508.pdf">http://ntp.niehs.nih.gov/ntp/test_info/finalntp_reprospecsmay2011_508.pdf</a> (2011).</li>
<li>Mammary gland whole mount processing and staining. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.cpl.colostate.edu/pathology/protocols/wm.htm">http://www.cpl.colostate.edu/pathology/protocols/wm.htm</a> (2016).</li>
<li>Whole mount preparations. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.protocol-online.org/cgi-bin/prot/view_cache.cgi?ID=2149">http://www.protocol-online.org/cgi-bin/prot/view_cache.cgi?ID=2149</a> (2016).</li>
<li>Filgo, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+gland+evaluation+in+juvenile+toxicity+studies%3A+Temporal+developmental+patterns+in+the+male+and+female+Harlan+Sprague+Dawley+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mammary gland evaluation in juvenile toxicity studies: Temporal developmental patterns in the male and female Harlan Sprague Dawley Rat.</a> Toxicol Pathol. 44 (7), 1034-1058 (2016).</li>
<li>Tucker, D. K., Foley, J. K., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+high-quality+hematoxylin+and+eosin-stained+sections+from+rodent+mammary+gland+whole+mounts+for+histopathologic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Preparation of high-quality hematoxylin and eosin-stained sections from rodent mammary gland whole mounts for histopathologic review.</a> Toxicol Pathol. 44 (7), 1059-1064 (2016).</li>
<li>Hvid, H., Thorup, O., Oleksiewicz, M. B., Sjogren, I., Jensen, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+preparation+of+tissue+sections+from+the+rat+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Path%22%5BJournal%5D)">An alternative method for preparation of tissue sections from the rat mammary gland.</a> Exp Toxicol Path. 63 (4), 317-324 (2011).</li>
<li>Munoz-de-Toro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+exposure+to+bisphenol-A+alters+peripubertal+mammary+gland+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Perinatal exposure to bisphenol-A alters peripubertal mammary gland development in mice.</a> Endocrinology. 146 (9), 4138-4147 (2005).</li>
<li>Padilla-Banks, E., Jefferson, W. N., Newbold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+exposure+to+the+phytoestrogen+genistein+alters+mammary+gland+growth+and+developmental+programming+of+hormone+receptor+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Neonatal exposure to the phytoestrogen genistein alters mammary gland growth and developmental programming of hormone receptor levels.</a> Endocrinology. 147 (10), 4871-4882 (2006).</li>
<li>Nikaido, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+maternal+xenotestrogen+exposure+on+development+of+the+reproductive+tract+and+mammary+gland+in+female+CD-1+mouse+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Effects of maternal xenotestrogen exposure on development of the reproductive tract and mammary gland in female CD-1 mouse offspring.</a> Reprod Toxicol. 18 (6), 803-811 (2004).</li>
</ol>

אין למחברים אינטרסים מתנגשים להצהיר בהקשר למחקר, להמחשה ו / או לפרסום מאמר זה.

הר בלוטת החלב כולו הוא כלי רב עוצמה שניתן להשתמש בו כדי להמחיש את התפתחות החלב הנורמלי שינויים מורפולוגיים שעשויים להתעורר ולהתמיד בעקבות החשיפה לכימיקלים, כולל משברים האנדוקרינית. כאשר כל הר ו H &amp; E סעיף מאותו בעל חיים מוערכים יחד, הם יכולים לספק תמונה חזותית מדויקת של שינויים מוקדמים, אשר יכול להתקדם למצב חולה יותר. היכולת להשיג מידע שימושי זה טמונה להבטיח כי הטיפול נלקח כדי לשמר ולא להתפשר מורפולוגיה בלוטת...

הכל mountis החלב שיטה שימושית וזולה מיושמת רבים עכברים ועכבר מחקרים כדי להבין הן נורמלי כימית-המושרה, התפתחות חריגה. באופן כללי, בלוטת החלב שנאספה בשלבים שונים במהלך התפתחות המכרסמים ( כלומר, גיל ההתבגרות, ההתבגרות, אמצע עד מאוחר ההריון, ואת שלב הפירוק) יראה שינויים מורפולוגיים בארכיטקטורה רקמות הסלולר מושפעים על ידי פרקרין, האנדוקרינית, גורמים אוטוקרינית 1 . ב עכברוש ההזדקנות, מנות אפיתל ו סטרומה של הבלוטה הופכים צפופים יותר ויותר, מה שהופך מדידה פרמטרים מורפולוגיים קשה בהר שלם. לכן, זה נוהג נפוץ לאסוף בלוטה להערכה היסטולוגית לזהות שינויים ברמה מיקרוסקופית. שני התהליכים שימושיים במיוחד במחקרים העוסקים בחשיפה כימית ( כלומר, סביבתיים או פרמצבטיים) או כדי לבחון את השינויים המורפולוגיים המלווים בגורם גנטיAtions. טכניקות ויכולות לשימוש בלוטת החלב בהערכת הסיכון ממשיכות להתפתח. בעוד הכנה שלמה הר היא שגרתית סטנדרטית, שינויים חתך להמשיך 2 , 3 . קבוצות מחקר רבות מרקעים שונים (למשל , אקדמיה, ממשל ותעשייה) התאימו חלקים קטנטריים / אורכיים של רקמת החלב כשיטה מועדפת, בעוד שחלק מהמעבדות עדיין משתמשות בקטעים חתוכים דרך העור 4 . השיטה השנייה תוצאות ייצוג מופרז של העור (העור), ולא רקמת עניין: אפיתל בלוטת החלב 2 . חתכים העטרה או האורך הם שימושיים יותר לאפיון רקמות נורמלי 5 לשפר באופן משמעותי את איתור של ליקויים נגעים בשל שטח הפנים מוגברת ומספר המבנים הנוכחיים. בסך הכל, זה עושה את כל מוUnt שיטה מתאימה להערכת histopathological השוואתית של בלוטת החלב 1 , 2 . בין אם באמצעות עכבר או עכברוש, תחזור, ושימור של 4 וה 5 th בלוטות מפשעתי מומלץ מאוד עבור ההשוואה של הר השלם כדי מדור H &amp; E נגדי. כאשר נעשה שימוש בשילוב, סעיף H &amp; E ואת הר שלם לספק תיאור מדויק של השינויים הסלולר ומורפולוגי הנגרמת על ידי חשיפה סביבתית. זה נכון במיוחד מסוימים זנים מכרסם שבו המודל בעל רגישות נמוכה להיווצרות הגידול או גידול אינו גלוי לעין. בנסיבות מסוימות, לא ניתן תמיד להשיג את הרקמה הנדרשת באמצעות שתי הטכניקות ( כלומר, כמות רקמה לא מספקת, משאבים או תוצאות ניסיוניות בלתי צפויות). במקרה שלנו, הפרעות נצפו הר שלם החלב, ואילו histopathoהממצאים הלוגיים בבלוטת H &amp; E הנגדית היו ברובם נורמליים. הפער המכריע בין הבלוטות הנגדיות הוביל אותנו לפתח הליך חסכוני ויעיל כדי לזהות את החריגות של כל mounts. באמצעות עיבוד עיבוד שונה תהליך ההטבעה, באיכות גבוהה H &amp; E- מוכתמים סעיפים היו מוכנים מ mounts מוטבע paraffin כולו. אנו לדמיין את הפרוטוקול הזה הופך כלי זיהוי רב עוצמה עבור השפעות חשיפה כימית, שיפור השוואות בין המעבדה.

<table><tbody><tr><td>Xylene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>214736</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td>מדיית הרכבה לכיסוי תושבות שלמות ו-H& סעיפים E</td></tr><tr><td>מעבד אוטומטי Leica</td><td>Leica</td><td>Biosystems דגם # ST5020</td><td></td></tr><tr><td>HM 355S אוטומטי מיקרוטום</td><td>תרמו פישר מדעי&nbsp;</td><td>905200</td><td></td></tr><tr><td>פרפין</td><td>Leica Biosystems</td><td>EM-400</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost פלוס מיקרוסקופ שקופיות</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4951PLUS-001</td><td>טעון אלקטרוסטטי</td></tr><tr><td>Fisher Finest 24x60x1</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-548-5P</td><td>Coverslips</td></tr><tr><td>Varistain Gemini ES אוטומטי מכתים שקופיות</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A78000014</td><td></td></tr><tr><td>Sta-On</td><td>Leica Biosystems</td><td>3803107</td><td>דבק נוזלי; משמש באמבט מים בחתך</td></tr><tr><td>שונה Harris Hematoxylin 72711</td><td>Richard-Allan Scientific (חלק מ-Thermo Scientific)</td><td>72711</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Leica Biosystems</td><td>3801600</td><td></td></tr><tr><td>ליתיום קרבונט</td><td>SkyTech Laboratories</td><td>LCQ500</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית קרחונית</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>A38-500</td><td>דרוש בכלורופורם הקיבוע של</td></tr><tr><td></td><td>קרנוי מקרון כימיקלים עדינים</td><td>4440-04</td><td>דרוש בקיבוע</td></tr><tr><td>100% אתנול</td> של קרנוי <td>חברת וורנר גרהאם</td><td>6505001050000</td><td>דרוש בשקופיות הקיבוע והכביסה של קרנוי</td></tr><tr><td>95% אתנול</td><td>חברת וורנר גרהאם</td><td>6505011137320190</td><td></td></tr><tr><td>קרמין אלום</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1022-25G</td><td></td></tr><tr><td>אלומיניום אשלגן גופרתי דודקהידרט, Sigma Ultra</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7210-500G</td><td></td></tr><tr><td>מאגר כביסה אוטומטי, 20X</td><td>Biocare Medical</td><td>TWB945</td><td></td></tr></tbody></table>

חתך בלוטות החלב שלמות מלא עבור זיהוי הנגע

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

התפתחות בלוטת החלב הנורמלית עשויה להשתנות על ידי חשיפה לחומרים רעילים סביבתיים ומוצרים פרמצבטיים, חשיפה מוגזמת להורמונים ושינויים גנטיים. בלוטת החלב כולו mounts הם שיטה זולה כדי ללכוד את התקדמות שינויים מורפולוגיים שעשויים להתעורר לאחר החשיפה. עם זאת, בשלב מאוחר יותר בחיים, כאשר הפרעות נוטות יותר לפתח, ההסתמכות הבלעדית על שיטה אחת זו לא תמיד מספקת מספיק מידע כדי לבצע אבחנה נכונה של חריגות. מבחינה היסטורית, במחקרים כימיים מבחן קו מנחה, בלוטת החלב אחד מוסר ב necropsy ומוכן כמו hematoxylin ו eosin (H &amp; E) מוכתם בסעיף. שילובם של אוסף שלם של חולי כליה וניתוחם מקטין את הסבירות להערכה שלילית שגויה. הערכה של כל הר מוגבל על ידי נוכחות של אחד או שניים בלוטות החלב כולו בשקופית, ובמקרים מסוימים, את הפרעות שנצפו הר שלם הם לאלא מיוצגים באופן אחיד בחלק H &amp; E. מטרת מחקר זה היתה לפתח פרוטוקול להמרת mountsipped כל החלב hs כדי H &amp; E- כתמים מוכתמים כך נגעים שאחרת היה החמיצו או שקשה לאבחן ניתן לזהות. כאן, אנו מפרטים שיטה לייצר באיכות גבוהה, paraffin- מוטבע H &amp; E סעיף מתוך בלוטת החלב כי הוכנה בתחילה כמו הר שלם. לעומת רקמה שהוכנה במתכוון עבור חתך H &amp; E, כל ההר דורש הכנה נוספת להסרת רקמות ועיבוד. עם זאת, שיטה זו נחשבת זולה, כפי שהוא דורש ריאגנטים מעבדה משותפת זמן נוסף קטן. כתוצאה מכך, שיטה זו יכולה לספק מידע רב ערך על איך חשיפות כימיות וסביבתיות לשנות את התפתחות החלב רגילה, כמו גם להציג שינויים המתרחשים בגלל שינויים גנטיים.

שיטה זו יעילה ב סיוע עם אבחנות כי ייתכן אחרת החמיצו אם המקורי H &amp; מקביל סעיף H של פנקס החלב לא הראו שינויים היסטולוגיים. עם זאת, התוצאה תהיה שימושית רק אם הטיפול נלקח במהלך ההכנות הראשונית הר, כמו גם במהלך הכנת הרקמה להערכה היסטולוגית. הטבעה פרפין יספק הגנה יעזור לשמר את הרקמה עבור חתך בעתיד. כדי לקבוע את עובי אידיאלי של רקמת החלב, 4 מיקרומטר ו...

פיתחנו שיטה כדי להסיר בהצלחה, לעבד, קטע, כתם, להערכה histopathological, רקמת החלב שנקבע במקור על שקופיות כמו mounts שלם. שיטה זו עשויה לקדם את איסוף והערכה של בלוטת החלב כולו mounts במחקרים הנחייה מבחן הרבייה.

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא ליצור חתכים צבועים באיכות גבוהה מרקמת שד של עכבר שהועמדה כולה (whole mounted), לצורך זיהוי נגעים ברמה המיקרוסקופית. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח הנוגעות להערכת בלוטות השד, כגון זיהוי היסטופתולוגי של סוגי נגעים שזוהו בבדיקה מאקרוסקופית של דגימות שד שלמות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מגבירה את הסיכוי לזיהוי נגעים שעשויים להיות קיימים בבלוטות השד כאשר משתמשים ברקמות שהועמדו כשלמות.הרעיון לשיטה זו עלה לראשונה כאשר השווינו פנוטיפים של דגימות שלמות (whole mount) לדוחות היסטופתולוגיים של בלוטות קונטרלטרליות מהאותם בעלי חיים, אשר קובעו בפורמלין ונצבעו ב-H and E. הבחנו בפער באבחנות, כאשר בשיטת ה-whole mount נראו נגעים רבים יותר. הדגמה ויזואלית של שיטה זו היא חשובה, שכן שלבי ההוצאה והטמיעה של הדגימה השלמה הם קריטיים להצלחת הפרוצדורה.הבלוטה עדינה בשל טבעה הדק והשביר. לאחר הכנת דגימות זיכרון שלמות (whole mount) ואנליזה של הרקמה לאנומליות בהתאם לפרוטוקול הכתוב, הסירו את זכוכית הכיסוי ואת חומר ההרכבה על ידי טבילת השקופיות בתוך צנצנת צביעה מזכוכית מלאה ב-xylene. הדגירו למשך לילה או למשך זמן ממושך יותר.העבירו את השקופיות לקסילן טרי והשרו את הדגימות למשך שש שעות. לאחר מכן, העבירו את הדגימות שוב לקסילן טרי והשרו אותן למשך הלילה. בשלב הבא, החזיקו את השקופית ביד עם כפפה והשתמשו בפינצטה כדי להסיר בזהירות את זכוכית הכיסוי כחתיכה אחת.ייתכן שתהיה שונות במידת קלות הסרת זכוכית הכיסוי, בהתאם לעובי תוך המכינה ולזמן שעבר מאז כיסוי הדגימה. לכן, חיוני שהסלייד יישאר ב-xylene עד שזכוכית הכיסוי תשתחרר בקלות. לאחר הסרת זכוכית הכיסוי, השתמש להסרת הדגימה בלהב תער חד וחד-פעמי על ידי החלקת הלהב בתנועה אחת לאורך הסלייד.לאחר מכן, טבל במהירות את רפידת הזיכרון בתוך צלחת פטרי מזכוכית מלאה ב-xylene כדי להבטיח שהרקמה לא תתייבש באוויר. השתמש בתער כדי לחתוך רקמות גדולות יותר לחצי. לאחר מכן, כדי למזער את הנזק לרקמה, השתמש בפינצטה עם קצה משונן וראש קהה כדי לתפוס את קצה רפידת השומן והנח את החצאים כשהצד הימני פונה כלפי מעלה בשתי קסטות נפרדות ומסומנות שיתאימו לגודל הרקמה.הניחו את הקסטה במיכל עם xylene למשך עד שעתיים לפני הנחתה במעבד הרקמות. לאחר מכן, טענו ידנית את מספר הקסטות המקסימלי למעבד הרקמות. לפני התחלת הפעולה, תכננו את המעבד לעיבוד רקמות.כדי להפוך את הפרוצדורה לאוטומטית, בחרו את התחנה, הטמפרטורה והגדירו את הוואקום ל-on. הגדירו את המעבד באופן אוטומטי להשריה של הקסטות ב-xylene למשך 30 דקות ב-37 °C, ולאחר מכן להשריה שנייה ב-xylene טרי תחת אותם תנאים. לאחר מכן, הגדירו את המעבד באופן אוטומטי להוצאת הקסטות מתמיסת ה-xylene ולהעברת הרקמות לתא בתוך המעבד המכיל תערובת של xylene ופרפין מותך ביחס של 1:1, בטמפרטורה של 60 °C למשך 30 דקות.עם השלמת כל השלבים, בחר okay או start כדי להמשיך. מקם את הקסטות במיכל ההחזקה של אמבט פאראפין בטמפרטורה של 58 degrees celsius עד למועד הנחתן בתבנית. הסר את מכסי הקסטות כדי לקבוע את גודל התבנית המתאים ביותר עבור הרקמות.הוסיפו שלושה עד ארבעה מילימטרים של פראפין מותך מהפיה לתבנית, ולאחר מכן כווןו את הרקמה בתוך הפראפין המותך כך שפני השטח של ה-mammary whole mount, שהיו צמודים לתחתית השקופית והתחתית של הקסטה, יפנו כלפי מעלה בתבנית. העבירו את התבנית לפלטת קירור וכווננו במהירות את הרקמה לפי הצורך, כך שתהיה מקבילה לתחתית התבנית. בעזרת פינצטה, הניחו את הקסטה המסומנת בחוזקה על גבי התבנית.מזגו פראפין מותך נוסף לתוך התבנית בתנועה רציפה כדי לכסות את כל הקסטה. העבירו את התבנית מהפלטה החמה לפלטה קרה כדי לקדם קיבוע במיקום המדויק שנבחר לחיתוך. כאשר בלוק הפראפין מתמצק לחלוטין, הפרידו את הבלוק מהתבנית.יש לאחסן את הדגימות בטמפרטורת החדר עד למועד החיתוך. לפני החיתוך, יש להדגריר את בלוקי הפרפין בטמפרטורה של 20- °C למשך שעה אחת. לאחר מכן, יש להכין את המיקרוטום על ידי הפעלת אמבט המים המכיל מים מזוקקים טריים וכיוון הטמפרטורה ל- 42 עד 45 °C.בשלב הבא, מקמו להב בעל פרופיל נמוך חדש על המיקרוטום וכוון אותו לארבעה micrometers. הכניסו את הבלוק למיקרוטום כאשר השעווה פונה כלפי הלהב ומיושרת עם המישור האנכי. לאחר מכן, הרטיבו חלק מרפידה של גזה במים קרים והניחו אותה על הבלוק למשך מספר דקות.בצעו חיתוך של הבלוק על ידי סיבוב הגלגל הגדול עם כיוון השעון בשילוב עם גלגל ההקדמה הגס, עד לקבלת פנים מלא או חתך מייצג של הבלוק. לאחר מכן, העבירו את חתך הרקמה ביד לאמבט מים חמימים, לפני הרמתו באמצעות סלייד נקי. הניחו את הסליידים על מתקן ייבוש להסרת עודפי מים.לאחר מכן, אחסנו את נתחי הרקמה בטמפרטורה של 37 °C למשך לילה. לאחר הוצאת השקופיות מהאינקובטור ב-37 °C, אחסנו אותן בטמפרטורת החדר עד למועד הצביעה. לצביעה אוטומטית, בחרו באפשרות H and E מתוך תפריט אפשרויות הצביעה בתפריט הראשי כדי לצבוע את השקופיות.הסרת הפרפין, הצביעה והדהוי בוצעו כולם בצובע אוטומטי. השתמשו במדיום עיגון ובזכוכית כיסוי כדי לעגן את החתכים. כדי לקבוע את העובי האידיאלי של רקמת השד, הוכנו חתכים בעובי של ארבעה מיקרומטרים ושישה מיקרומטרים.חתכים בעובי ארבעה מיקרומטרים הניבו תוצאות אופטימליות, שבהן ניתן להבחין בקלות בין אזורים אפיתליאליים לאזורי סטרומה ובין סוגי התאים התואמים להם. דמויות אלו מייצגות חתכים היסטולוגיים של בלוטות תקינות. שתי הבלוטות מראות מבנים של צינוריות המוקפות באוכלוסייה חסונה והומוגנית של אדיפוציטים.כל צינור מצופה בשכבה בודדת של תאי אפיתל קובואידיים פשוטים ונשמר על ידי שכבה שנייה של תאים בסיאליים. הדגימות השלמות (whole mounts) מהצד הנגדי הכילו אזור של עכירות מוגברת שמעריבה על צינורות בלוטות הזיכרון. עם זאת, לא היה ברור אם העכירות נבעה משינוי היפרפלסטי, דלקתי או נאופלסטי.דגימות שלמות מהצד הנגדי מוצגות כאן. חתכים אלו אובחנו כדלקת פרי-vסלרית (perivascular inflammation) עקב מספר מוגבר של לימפוציטים סביב כלי דם גדול בחתך של בלוטות החלב. בדגימות אלו, המבנה הלוובולרי של בלוטת החלב נשמר, אך היה מוגדל עקב עלייה במספרם ובגודלם של אלבאולי ותעלות נורמליים, המאפיינים היפרפלזיה לוובולרית-אלבאולרית (lobular alveolar hyperplasia).הלוביולות המורחבות הכילו מספר מוגבר של אלבאולי ותעלות שרופדו על ידי תאים אפיתליאליים מובחנים היטב, לרוב עם ואקואולות, אשר יצרו לומנא שהכילו נוזל חלבוני. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור שהרקמה שבירה כתוצאה מהקסילן והיא עלולה להישבר בקלות, ובכך להרוס את הדגימה. מומלץ להפיק תמונות באיכות גבוהה של הרכבים שלמים (whole mounts) באמצעות סורק שטוח לפני ניסיון ביצוע שיטה זו.זוהי הזדמנות לתחום הפתולוגיה הרעילה להתקדם לכיוון של הערכה של דגימות שלמות (whole mount) לצורך סריקה כימית. כך, כאשר מזוהים נגעים ברמה זו, ניתן כעת להפיק חתכים באיכות גבוהה לצורך אבחנה היסטופתולוגית. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן ההסרה, הטמיעה והחתכה של דגימות שלמות של בלוטת העלה לצורך זיהוי נגעים.זכרו כי בעבודה עם xylene, יש לנקוט באמצעי זהירות, כגון לבישת חלוק מעבדה וכפפות, והעבודה חייבת להתבצע תחת מנדף.

sectioning-mammary-gland-whole-mounts-for-lesion-identification

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

פרוטוקול שלנו מתאר כיצד לנתח את בלוטת החלב בטן עכברוש ואיך להכין mounts בלוטת החלב כולו. הוא גם מתאר כיצד לנתח מורפולוגיה בלוטת החלב באמצעות שלוש נקודות קצה (מספר ניצנים סוף סופני, התארכות בידול אפיתל) ולהשתמש התוצאות הללו כדי לחזות את הסיכון לסרטן השד אצל חולדות אשר נחשפו שינויים...

שינויים במורפולוגיה בלוטת החלב ואת הסיכון לסרטן השד אצל חולדות

שיטה זו מתארת ​​כיצד לנתח ולהעריך התפתחות תפקוד בלוטת החלב ומן העכברים. בלוטות החלב נכרת מוערכים לתואר הפיתוח באמצעות הר שלם תוך פליטה החלב מוערך באמצעות אוקסיטוצין מבוססי assay myoepithelial התכווצות התא.

הערכת התפתחות בלוטת החלב פונקציה ועל מודלים עכבר

הדמית זמן לשגות משמשת כדי להעריך את ההתנהגות של תאים ראשוניים preneoplastic חלב האפיתל הנגזרים ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סיכון לסרטן שד על מנת לקבוע אם יש קשר בין פרמטרים התנהגותיים ספציפיים ונגעים גנטיים מובחנים.

הדמית זמן לשגות של תאי אפיתל חלב Preneoplastic ראשוניים הנגזרת ממודלי עכבר מהונדס גנטי של סרטן השד

אנו מציגים גישת רישום תמונה לשחזור נפח היסטולוגיה תלת מימדית (תלת מימדית), המאפשרת לחקור את השינויים של איבר ברמת מבני המאקרו המורכבים מתאים. באמצעות גישה זו, חקרנו את השינויים התלת-ממדיים בין בלוטות חלב מסוג בר לבלוטות חלב Igfbp7-null.

שחזור נפח היסטולוגיה 3 ממדים ויישומו לחקר מאוס החלב בלוטות

מודלים פרה-קליניים המעריכים טיפול אדג'ובנטי למיקוד גרורות לסרטן השד נעדרים. כדי להתמודד עם זה, פיתחנו מודל Murine של novo ריאתי אדמוקרצינומה החלב ריאתי, שבו טיפולים שניתנו הגדרה אדג'ובנטית (כריתה כירורגית לאחר ניתוח) ניתן להעריך את היעילות להשפיע על גרורות בעבר ריאתי seeded.

כירורגית נהלים ומתודולוגיה עבור מודל Murlin פרה קלינית של דה נובו גרורות סרטן החלב

פרוטוקול זה מתאר שיטות לטיהור, quantitating, אפיון שלפוחית ​​תאיים (EVs) / exosomes מ שאינם חסיד / mesenchymal תאים אפיתל החלב ועל השימוש בהם כדי להעביר את בלוטת החלב יוצרי היכולת לתאי אפיתל החלב לומינל. EVS / exosomes נגזר גזע כמו תאי אפיתל החלב יכול להעביר תכונה זו התא לתאים לבלוע EVs / exosomes.

העברת בלוטת החלב ביצירת יכולת בין תאי אפיתל בסל החלב תאים לומיני החלב באמצעות שלפוחיות תאיים / אקסוסומות

התפתחות בלוטת החלב במכרסם הוערכה בדרך כלל באמצעות הערכות תיאוריות או על ידי מדידת תכונות פיזיות בסיסיות. צפיפות הענף היא אינדיקטור להתפתחות החלב שקשה לכמת באופן אובייקטיבי. פרוטוקול זה מתאר שיטה אמינה להערכת כמותית של מאפייני הבלוטות החלב.

כימות צפיפות הענף בבלוטת החלב עכברוש- mounts כולו באמצעות שיטת ניתוח Sholl

כאן, אנו מציגים עבור בידודו של שלמה, שלמה עכבר פרוטוקול עטין לחקור מורפולוגיה ductal וביטוי מטריצה חוץ-תאית (ECM). בלוטות בטן העכבר #4 היו מופק עכברים nulliparous נקבה שבוע 8-10, קבוע בפורמלין במאגר נייטרלי, למחלקה והמוכתמות בעזרת אימונוהיסטוכימיה ECM חלבונים.

בידוד של בלוטות מוגדלות ללא פגע, כל עכבר לניתוח של בלוטת מורפולוגיה וביטוי מטריצה חוץ-תאית

פרוטוקול זה מתאר חלון הדמיה חדש של יונקים עם מכסה הניתן להחלפה (R.MIW). מיקרוסקופיה תוך-ורידית לאחר השתלת ה-R.MIW מאפשרת הדמיה אורכית ורב-יומית של בלוטת החלב הבריאה והחולה עם רזולוציה תאית בשלבי ההתפתחות השונים.

מיקרוסקופיה תוך-ורידית אורכית באמצעות חלון הדמיה של יונקים עם מכסה הניתן להחלפה

שיטת ההדמיה התוך-ורידית המתוארת כאן משתמשת בדור ההרמוני השני של הקולגן ובפלואורסצנציה אנדוגנית מהקו-פקטור המטבולי NAD(P)H כדי לפלח באופן לא פולשני מיקרו-סביבה של גידול ללא תווית לתוך תאי גידול, סטרומל וכלי דם לצורך ניתוח מעמיק של תמונות תוך-ורידיות 4D.

גישת סגמנטציה ללא תווית להדמיה תוך-ורידית של מיקרו-סביבה של גידולי יונקים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה קלה להדמיה תוך-חיונית של בלוטת החלב של עכבר מניק, באמצעות סריקת לייזר, מיקרוסקופ קונפוקלי ומולטיפוטון.

מיקרוסקופיה תת-תאית תוך חיונית של בלוטת החלב

למד שיטה לעיבוד רקמת בלוטות חלב שלמות בעכברים לזיהוי נגעים ברמת המיקרוסקופ. הטכניקה משפרת הערכה היסטופתולוגית ומגבירה את הסיכוי לאיתור לקויות בבלוטות.

חתך בלוטות החלב שלמות מלא עבור זיהוי הנגע

גלה סרטונים נוספים