לא פולשנית דגימה של נוזל שורות Mucosal עבור כימות של In Vivo דרכי הנשימה העליונות החיסון-מגשרת רמות

המטרה הכוללת של שיטת דגימת נוזל רירית זו היא לחקור את החתימה החיסונית המקומית של דרכי הנשימה ללא צורך בהליכי גירוי. שיטה זו מאפשרת לך ללמוד שאלות מפתח בתחום מחלות נשימה בילדים כמו זיהומים, אסטמה ואלרגיה. היתרונות של השיטה הם שניתן למדוד רמות נמוכות מאוד של מתווכים חיסוניים ברירית דרכי הנשימה הלא מגורה in vivo.

הדגמת ההליך תיעשה על ידי ד"ר וולסק. לאיסוף מדגם יילודים, ראשית לחתוך לפחות שתיים רצועות שלוש על 15 מילימטר מיריעות סינון פוליאסטר הידרוקסיל סיביות. לאחר מכן, הניחו את היילוד על מיטה ושימו לב לכל תסמינים של זיהום בדרכי הנשימה.

לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי להכניס פיסת נייר סינון אחת כסנטימטר אחד לחלק הקדמי של הטורבינת התחתונה של כל נחיר של התינוק ולתת מי סוכר ליילוד לנוחות לפי הצורך. שימו לב לכל התעטשות, בכי מתמשך או אפיסטקסיס המתרחשים במהלך תקופת הדגימה. לאחר שתי דקות של ספיגה, העבירו את ניירות הסינון לצינור מסומן לאחסון מיידי בטמפרטורה שלילית של 80 מעלות צלזיוס.

מי שתדגים את הליך הניסוי תהיה ליסבת רוזהולם, טכנאית במעבדה שלי. לכימות מתווך חיסוני של דרכי הנשימה, הניחו עד 10 דגימות מאחסון שלילי של 80 מעלות צלזיוס על קרח ורשמו את מספרי הזיהוי שלהן. לאחר שהדגימות הופשרו, טבלו את שני ניירות הסינון לכל נבדק ב-150 מיקרוליטר של חיץ טרי שהוכן לכל נייר סינון, בתוספת טבליה אחת שלמה של מעכב פרוטאז לכל 25 מיליליטר של תמיסת מלאי חיץ.

מעבירים את הדגימות לשייקר צלחת ב -400 סל"ד למשך חמש דקות. העבירו את ניירות המאגר והסינון לכוסות של מסנני צינור אצטט תאית בודדים. צנטריפוגה את הדגימות כדי לאסוף את תמצית האף המסוננת בתחתית צינורות המיקרו-צנטריפוגה.

לאחר מכן, הסר את הכוסות והניח את הצינורות על קרח. לאחר מכן, העבירו 150 מיקרוליטר של תמצית האף לבארות בודדות של צלחות אחסון נמוכות חלבון ואחסנו את הצלחות בטמפרטורה שלילית של 80 מעלות צלזיוס עד לניתוח. לאחר מכן, מדוד את ריכוז המתווכים החיסוניים באף המעניינים על ידי מערך מרובה מבוסס אלקטרוכימילומינסנציה ברגישות גבוהה על פי פרוטוקולי בדיקה סטנדרטיים.

בניתוח מייצג זה של 620 יילודים, רוב המתווכים החיסוניים שנמדדו הראו רמת זיהוי נמוכה. רמות הגמא של IFN היו מתחת לגבול הזיהוי התחתון בכמעט מחצית מהדגימות, בעוד שרמות TNF alpha, CCL4 ו-TGF beta היו מתחת לגבול הזיהוי התחתון בפחות מ-1% מהדגימות. רב-קולינאריות חזקה ניכרה עבור 20 רמות המתווך שזוהו, כפי שמודגם על ידי מפת החום.

בילודים נגועים בנגיף הפיקורנה ללא תסמינים, נצפה פרופיל מווסת שנפגע בעיקר של מתווכים חיסוניים מסוג 1, מה שמרמז על תפקיד מעורר חיסון של חיידקים ווירוסים מתיישבים בחלק המוקדם ביותר של החיים. נקבע גם קשר בין נוכחות של אחים במשק הבית בלידה, לבין תגובה חיסונית מכוונת ספציפית מסוג 1 מסוג 17 עם ראיות למתאם של תופעה זו עם אפקט תחול חיסוני ברחם שנמצא בקורלציה הפוכה לזמן שחלף מאז הלידה האחרונה. בנוסף, ילדים שנולדו לאימהות שקיבלו תוספי תזונה ברמה גבוהה לעומת פלצבו התאפיינו בוויסות מוגבר במתווכים חיסוניים ספציפיים, מה שמרמז על כך שוויטמין D מקדם תגובה חיסונית אנטיבקטריאלית שאינה תלויה בזו הנגרמת על ידי וירוס, חיידקים, אחים או אטופיה אימהית.

ניתן להשתמש בשיטה זו של מיקרו-דגימה גם באמצעות ברונכוסקופ, המאפשר לחקור את המתווכים החיסוניים בדרכי הנשימה התחתונות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד למדוד מתווכים ברירית דרכי הנשימה הלא מגורה in vivo ביילודים ובילדים גדולים יותר.