Name: חיזוי השתקת ג ין באמצעות שליטה Spatiotemporal של siRNA שחרור מ תגובה תגובה פולימרית פולימרית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: למדו לחזות השתקת גנים באמצעות שחרור siRNA מבוקר אופטית מפולימרים רגישים לאור. שיטה זו מאפשרת שליטה מרחבית-זמנית מדויקת בביטוי חלבונים ללא השפעות לוואי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים למוסד הלאומי למדעי הרפואה הכללית של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) לתמיכה כספית באמצעות פרס פיתוח מוסדי (IDeA) תחת מספר מענק P20GM103541 וכן מענק מספר P20GM10344615. ההצהרות המובאות כאן אינן משקפות את עמדות ה - NIH. כמו כן, אנו מכירים את המכון הביוטכנולוגי של דלאוור (DBI) ואת משרד הפיתוח הכלכלי של דלאוור (DEDO) לתמיכה כספית באמצעות פרס המרכז למדעי החיים (Bioscience CAT) (12A00448).

<ol><li>Forbes, D. C., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+delivery+of+small+RNA+and+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Oral delivery of small RNA and DNA.</a> J Control Release. 162 (2), 438-445 (2012).</li>
<li>Davis, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+RNAi+in+humans+from+systemically+administered+siRNA+via+targeted+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Evidence of RNAi in humans from systemically administered siRNA via targeted nanoparticles.</a> Nature. 464 (7291), 1067-1070 (2010).</li>
<li>Bouchie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Companies+in+footrace+to+deliver+RNAi%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Companies in footrace to deliver RNAi.</a> Nat Biotechnol. 30 (12), 1154-1157 (2012).</li>
<li>Burke, P. A., Pun, S. H., Reineke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancing+Polymeric+Delivery+Systems+Amidst+a+Nucleic+Acid+Therapy+Renaissance%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Macro+Lett%22%5BJournal%5D)">Advancing Polymeric Delivery Systems Amidst a Nucleic Acid Therapy Renaissance.</a> ACS Macro Lett. 2 (10), 928-934 (2013).</li>
<li>Gooding, M., Browne, L. P., Quinteiro, F. M., Selwood, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((siRNA+Delivery%3A+From+Lipids+to+Cell-penetrating+Peptides+and+Their+Mimics%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biol+Drug+Des%22%5BJournal%5D)">siRNA Delivery: From Lipids to Cell-penetrating Peptides and Their Mimics.</a> Chem Biol Drug Des. 80 (6), 787-809 (2012).</li>
<li>Motta-Mena, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optogenetic+gene+expression+system+with+rapid+activation+and+deactivation+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">An optogenetic gene expression system with rapid activation and deactivation kinetics.</a> Nat Chem Biol. 10 (3), 196-202 (2014).</li>
<li>Wang, X., Chen, X., Yang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+control+of+gene+expression+by+a+light-switchable+transgene+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal control of gene expression by a light-switchable transgene system.</a> Nat Methods. 9 (3), 266-269 (2012).</li>
<li>Ziauddin, J., Sabatini, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarrays+of+cells+expressing+defined+cDNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Microarrays of cells expressing defined cDNAs.</a> Nature. 411 (6833), 107-110 (2001).</li>
<li>Saltzman, W. M., Olbricht, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+drug+delivery+into+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Building drug delivery into tissue engineering.</a> Nat Rev Drug Discov. 1 (3), 177-186 (2002).</li>
<li>Mura, S., Nicolas, J., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimuli-responsive+nanocarriers+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Stimuli-responsive nanocarriers for drug delivery.</a> Nat Mater. 12 (11), 991-1003 (2013).</li>
<li>Shim, M. S., Kwon, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimuli-responsive+polymers+and+nanomaterials+for+gene+delivery+and+imaging+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Delivery+Rev%22%5BJournal%5D)">Stimuli-responsive polymers and nanomaterials for gene delivery and imaging applications.</a> Adv Drug Delivery Rev. 64 (11), 1046-1058 (2012).</li>
<li>Kelley, E. G., Albert, J. N. L., Sullivan, M. O., Epps, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimuli-responsive+copolymer+solution+and+surface+assemblies+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Stimuli-responsive copolymer solution and surface assemblies for biomedical applications.</a> Chem Soc Rev. 42 (17), 7057-7071 (2013).</li>
<li>Weber, W., Fussenegger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+biomedical+applications+of+synthetic+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Emerging biomedical applications of synthetic biology.</a> Nat Rev Genet. 13 (1), 21-35 (2012).</li>
<li>Konermann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+control+of+mammalian+endogenous+transcription+and+epigenetic+states%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Optical control of mammalian endogenous transcription and epigenetic states.</a> Nature. 500 (7463), 472-476 (2013).</li>
<li>Shimizu-Sato, S., Huq, E., Tepperman, J. M., Quail, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+light-switchable+gene+promoter+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A light-switchable gene promoter system.</a> Nat Biotechnol. 20 (10), 1041-1044 (2002).</li>
<li>Huschka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Silencing+by+Gold+Nanoshell-Mediated+Delivery+and+Laser-Triggered+Release+of+Antisense+Oligonucleotide+and+siRNA%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Gene Silencing by Gold Nanoshell-Mediated Delivery and Laser-Triggered Release of Antisense Oligonucleotide and siRNA.</a> ACS Nano. 6 (9), 7681-7691 (2012).</li>
<li>Li, H. -J., Wang, H. -X., Sun, C. -Y., Du, J. -Z., Wang, J. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/-/content/articlelanding/2014/ra/c3ra44866e#!divAbstract">Shell-detachable nanoparticles based on a light-responsive amphiphile for enhanced siRNA delivery.</a> R Soc Chem Adv. 4 (4), 1961-1964 (2014).</li>
<li>Braun, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-Activated+Gene+Silencing+via+Gold+Nanoshell-siRNA+Conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Laser-Activated Gene Silencing via Gold Nanoshell-siRNA Conjugates.</a> ACS Nano. 3 (7), 2007-2015 (2009).</li>
<li>Gilleron, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+analysis+of+lipid+nanoparticle-mediated+siRNA+delivery%2C+intracellular+trafficking+and+endosomal+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Image-based analysis of lipid nanoparticle-mediated siRNA delivery, intracellular trafficking and endosomal escape.</a> Nat Biotechnol. 31 (7), 638-646 (2013).</li>
<li>Wittrup, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+lipid-formulated+siRNA+release+from+endosomes+and+target+gene+knockdown%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Visualizing lipid-formulated siRNA release from endosomes and target gene knockdown.</a> Nat Biotechnol. 33 (8), 870-876 (2015).</li>
<li>Roth, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+measurements+and+rational+materials+design+for+intracellular+delivery+of+oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Prog%22%5BJournal%5D)">Quantitative measurements and rational materials design for intracellular delivery of oligonucleotides.</a> Biotechnol Prog. 24 (1), 23-28 (2008).</li>
<li>Mao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+polyethylene+glycol+chain+length+on+the+physicochemical+and+biological+properties+of+poly%28ethylene+imine%29-graft-poly%28ethylene+glycol%29+block+copolymer%2FSiRNA+polyplexes%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Influence of polyethylene glycol chain length on the physicochemical and biological properties of poly(ethylene imine)-graft-poly(ethylene glycol) block copolymer/SiRNA polyplexes.</a> Bioconjugate Chem. 17 (5), 1209-1218 (2006).</li>
<li>Raab, R. M., Stephanopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+gene+silencing+by+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Dynamics of gene silencing by RNA interference.</a> Biotechnol Bioeng. 88 (1), 121-132 (2004).</li>
<li>Cuccato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+RNA+interference+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Systems+Biology%22%5BJournal%5D)">Modeling RNA interference in mammalian cells.</a> BMC Systems Biology. 5, 1(2011).</li>
<li>Varga, C. M., Hong, K., Lauffenburger, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+synthetic+gene+delivery+vector+design+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of synthetic gene delivery vector design properties.</a> Mol Ther. 4 (5), 438-446 (2001).</li>
<li>Chen, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+comparison+of+intracellular+unpacking+kinetics+of+polyplexes+by+a+model+constructed+from+quantum+Dot-FRET%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Quantitative comparison of intracellular unpacking kinetics of polyplexes by a model constructed from quantum Dot-FRET.</a> Mol Ther. 16 (2), 324-332 (2008).</li>
<li>Bartlett, D. W., Davis, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+kinetics+of+siRNA-mediated+gene+silencing+from+live-cell+and+live-animal+bioluminescent+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Insights into the kinetics of siRNA-mediated gene silencing from live-cell and live-animal bioluminescent imaging.</a> Nucleic Acids Res. 34 (1), 322-333 (2006).</li>
<li>Foster, A. A., Greco, C. T., Green, M. D., Epps, T. H., Sullivan, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-Mediated+Activation+of+siRNA+Release+in+Diblock+Copolymer+Assemblies+for+Controlled+Gene+Silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Light-Mediated Activation of siRNA Release in Diblock Copolymer Assemblies for Controlled Gene Silencing.</a> Adv Healthc Mater. 4 (5), 760-770 (2015).</li>
<li>Greco, C. T., Epps, T. H., Sullivan, M. O. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acsbiomaterials.6b00336">Mechanistic Design of Polymer Nanocarriers to Spatiotemporally Control Gene Silencing.</a> ACS Biomater Sci Eng. 2 (9), 1582-1594 (2016).</li>
<li>Green, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catch+and+release%3A+photocleavable+cationic+diblock+copolymers+as+a+potential+platform+for+nucleic+acid+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Polym+Chem%22%5BJournal%5D)">Catch and release: photocleavable cationic diblock copolymers as a potential platform for nucleic acid delivery.</a> Polym Chem. 5 (19), 5535-5541 (2014).</li>
<li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+Gel+Electrophoresis+for+the+Separation+of+DNA+Fragments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Agarose Gel Electrophoresis for the Separation of DNA Fragments.</a> J Vis Exp. (62), e3923(2012).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Marquer, C., Leveque-Fort, S., Potier, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Lipid+Raft+Partitioning+of+Fluorescently-tagged+Probes+in+Living+Cells+by+Fluorescence+Correlation+Spectroscopy+%28FCS%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Determination of Lipid Raft Partitioning of Fluorescently-tagged Probes in Living Cells by Fluorescence Correlation Spectroscopy (FCS).</a> J Vis Exp. (62), (2012).</li>
<li>Staaf, E., Bagawath-Singh, S., Johansson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Diffusion+in+Plasma+Membranes+of+Primary+Lymphocytes+Measured+by+Fluorescence+Correlation+Spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Molecular Diffusion in Plasma Membranes of Primary Lymphocytes Measured by Fluorescence Correlation Spectroscopy.</a> J Vis Exp. (120), e54756(2017).</li>
<li>Buyens, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+disassembly+of+siRNA+polyplexes+in+serum+is+crucial+for+predicting+their+biological+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Monitoring the disassembly of siRNA polyplexes in serum is crucial for predicting their biological efficacy.</a> J Control Release. 141 (1), 38-41 (2010).</li>
<li>Eden, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteome+Half-Life+Dynamics+in+Living+Human+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Proteome Half-Life Dynamics in Living Human Cells.</a> Science. 331 (6018), 764-768 (2011).</li>
<li>Towbin, H., Staehelin, T., Gordon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoretic+transfer+of+proteins+from+polyacrylamide+gels+to+nitrocellulose+sheets%3A+procedure+and+some+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad.+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications.</a> Proc Natl Acad. Sci U S A. 76 (9), 4350-4354 (1979).</li>
<li>Wittwer, C. T., Herrmann, M. G., Moss, A. A., Rasmussen, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+Fluorescence+Monitoring+of+Rapid+Cycle+DNA+Amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Continuous Fluorescence Monitoring of Rapid Cycle DNA Amplification.</a> Biotechniques. 54 (6), 314-320 (2013).</li>
<li>Cho, S. K., Dang, C., Wang, X., Ragan, R., Kwon, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mixing-sequence-dependent+nucleic+acid+complexation+and+gene+transfer+efficiency+by+polyethylenimine%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Mixing-sequence-dependent nucleic acid complexation and gene transfer efficiency by polyethylenimine.</a> Biomater Sci. 3 (7), 1124-1133 (2015).</li>
<li>Liu, Y. M., Reineke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28glycoamidoamine%29s+for+gene+delivery%3A+Stability+of+polyplexes+and+efficacy+with+cardiomyoblast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Poly(glycoamidoamine)s for gene delivery: Stability of polyplexes and efficacy with cardiomyoblast cells.</a> Bioconjugate Chem. 17 (1), 101-108 (2006).</li>
<li>Schwanhausser, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+quantification+of+mammalian+gene+expression+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Global quantification of mammalian gene expression control.</a> Nature. 473 (7347), 337-342 (2011).</li>
<li>Greco, C. T., Muir, V. G., Epps, T. H., Sullivan, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+tuning+of+siRNA+dose+response+by+combining+mixed+polymer+nanocarriers+with+simple+kinetic+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Efficient tuning of siRNA dose response by combining mixed polymer nanocarriers with simple kinetic modeling.</a> Acta Biomater. 50, 407-416 (2017).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

ישנם מספר צעדים בשיטה קריטיים במיוחד. כאשר ניסוח nanocarriers, את הסדר של תוספת רכיב מהירות ערבוב הם שני פרמטרים חשובים המשפיעים על יעילות 39 . פרוטוקול זה דורש כי רכיב cationic, mPEG- b- AP (APNBMA), נוסף מרכיב anionic, siRNA, בצורה dropwise בזמן vortexing. בהתאם נפח ניסוח הכולל, תהליך זה ערבוב לוקח 3-6 s. כדי לבדוק אם nanocarriers נוצרו כראוי, למדוד את התפלגות גודל באמצעות טכניקה כגון פיזור אור דינמי. MPEG- b- AP (APNBMA) / niocarriers s...

קטן RNAs להפריע (siRNAs) לתווך שלאחר השתעת גן השתקה דרך מסלול RNAi קטליטי כי הוא ספציפי מאוד, חזק, ומותאם לכל גן יעד כמעט 1 . המאפיינים המבטיחים הללו אפשרו לתרופה siRNA להתקדם בניסויים קליניים בבני אדם לטיפול במחלות רבות, כולל מלנומה גרורתית ומופיליה 2 , 3 . עם זאת, בעיות משלוח משמעותיות נמשכות כי יש הפרעה תרגום 4 . בפרט, כלי אספקה ​​צריך להישאר יציב ולהגן על siRNAs מ השפלה תאיים, אך גם לשחרר את המטען לתוך הציטופלסמה 5 . יתר על כן, יישומים רבים RNAi דורשים שיטות משופרות כדי להסדיר השתקת גנים בחלל ובזמן 6 , אשר תפחית תופעות לוואי בטיפול siRNA 7 ולאפשר טרנספורמטיביDvances ביישומים החל microarrays תא לגילוי סמים 8 אפנון של תגובות התא רגמות regenerative 9 . אתגרים אלה מדגישים את הצורך בחומרים ושיטות חדשים כדי לשלוט טוב יותר מחייב לעומת שחרור nanocarriers siRNA. אחת האסטרטגיות המבטיחות ביותר לשליטה שחרור siRNA ושיפור הרגולציה spatiotemporal היא שימוש בחומרים מגיבים תגובה 10 . לדוגמה, מגוון רחב של biomaterials כבר מהונדסים עם שינוי זיקה חומצה גרעין לשינוי בתגובה לשינוי פוטנציאל החמצה או pH, או שדות מגנטיים מיושמים, אולטראסאונד, או אור 11 . למרות שרבות מהמערכות הללו מדגימות בקרה משופרת על פעילות חומצות גרעין, השימוש באור כגורם מפעיל הוא בעל יתרון מיוחד בשל תגובתו הזמנית המיידית, רזולוציה מרחבית מדויקת וקלות <suP class = &quot;xref&quot;&gt; 12. יתר על כן, הפוטנציאל של טכנולוגיות רגישות לתמונות עבור ויסות ביטוי גנטי הוכיח על ידי המדינה- of-the-art מקדם מעורר ומערכות הרגולציה optogenetic; עם זאת, מערכות אלה סובלות מאתגרים רבים, כולל יכולות מוגבלות להסדרת גנים אנדוגניים, בעיות בטיחות כמו immunogenicity, וקשיים באספקה ​​של הרכבות מרובות רכיבים 13 , 14 , 15 . צילום תגובה niocarriers siRNA הם אידיאליים כדי להתגבר על חסרונות אלה ולספק גישה פשוטה יותר חזקים spatiotemporally לווסת ביטוי גנים 16 , 17 , 18 . למרבה הצער, שיטות כדי לחזות במדויק את התגובה החלבון וכתוצאה מכך להישאר חמקמק. האתגר העיקרי הוא כי הערכות כמותיות של שחרור siRNA הםנדיר 19 , 20 , ואפילו כאשר הערכות אלה מבוצעות, הם לא היו מצמידים לניתוחים של דינמיקה מחזור siRNA / חלבונים. הן כמות siRNA שפורסמו ההתמדה שלה / חיים הם הגורמים החשובים של הדינמיקה השתקת הגן שנוצר; לפיכך, חוסר מידע כזה הוא ניתוק מרכזי המונע חיזוי מדויק של מינון בתגובה RNAi 21 . התמודדות עם אתגר זה היה לזרז את ניסוח של מבנה המתאים תפקוד היחסים nanocarriers ולהודיע ​​טוב יותר עיצובים ביולוגיים 22 . יתר על כן, גישות כאלה יאפשר פיתוח יעיל יותר פרוטוקולי מינון siRNA. בניסיון להבין את תגובת ההשתקה הדינמית, כמה קבוצות חקרו מודלים מתמטיים של RNAi 23 , 24 , 25 . מסגרות אלה היומוצלח במתן תובנות לשינויים בתיווך siRNA בביטוי גנטי וזיהוי צעדים להגבלת שיעור 26 . עם זאת, מודלים אלה יושמו רק על מערכות מסחריות של אספקת גנים ( למשל , Lipofectamine ו- polyethylenimine (PEI)) שאינם מסוגלים לשחרור siRNA מבוקר, והמורכבות של המודלים הגבילה מאוד את תועלתם 27 . חסרונות אלה מדגישים צורך בלתי מסופק עבור חומרים חדשים המסוגלים לשחרר siRNA מתכוונן בדיוק משולב עם מודלים קינטיים יעיל מנבא וקל לשימוש. השיטה שלנו כתובות את כל האתגרים הללו באמצעות שילוב של פלטפורמה nanocarrier רגיש לאור עם שיטות מצמידים לכמת חינם siRNA מודל RNAi דינמיקה. בפרט, פלטפורמה SiRNA שלנו נשלט בדיוק של פלטפורמה 28 הוא פיקוח על ידי שתי שיטות משלימות לכימות מדוייק encapsulated לעומת unSiRNA כבול. הנתונים הניסוייים של מבחני אלה הם נכנסו מודל קינטי פשוט לחזות יעילות השתקת גנים מראש 29 . לבסוף, את on / off הטבע של nanocarriers הוא ניצל בקלות כדי ליצור דפוסי תאים ביטוי גנים עם שליטה מרחבית על אורך הסלולרי. לכן, שיטה זו מספקת שיטה להתאמה בקלות לשלוט ולחזות השתקת גנים במגוון של יישומים אשר ייהנו רגולציה spatiotemporal של התנהגות התא.

<table><tbody><tr><td>siRNA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SIC001</td><td>בקרה שלילית אוניברסלית לא ממוקדת,</td></tr><tr><td>mPEG-b-P (APNBMA)</td> <td>מסונתז במעבדה שלנו</td><td>N/A</td><td>פולימר מגיב לאור</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP310-100</td><td></td></tr><tr><td>נתרן דודציל סולפט&nbsp;</td><td></td> אטם גומי 436143 <td></td><td>Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td></td><td>McMaster-Carr</td><td>3788T21</td> לייזר UV <td>בעובי 0.5 מ"ל</td></tr><tr><td>&nbsp;</td>עדשת קולימציה <td>של Excelitas Technologies</td><td>Omnicure S2000</td><td>ומסנן 365 ננומטר בשימוש</td></tr><tr><td>באגרוז</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP160-100</td><td></td></tr><tr><td>אתידיום ברומיד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP1302-10</td><td></td></tr><tr><td>siRNA מסומן ב-Dy547</td><td>GE Healthcare Dharmacon, Inc.</td><td>הזמנה מותאמת אישית</td><td>פלואורופור מצומד לשקופית מיקרוסקופ גדיל קצה 5</td></tr> '<tr><td></td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-A3</td><td>זכוכית מנוקה מראש</td></tr><tr><td>Secure-Seal Spacer</td><td>Life Technologies</td><td>S24735</td><td>דבק דו צדדי</td></tr><tr><td>LSM 780&nbsp;</td><td>קרל זייס</td><td>N/A</td><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td></tr><tr><td>ZEN 2010</td><td>קרל זייס</td> תוכנת ניתוח <td>N/A</td><td>FCS</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks</td><td>N/A</td><td>שפת תכנות</td></tr><tr><td>NIH/3T3 תאים&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>ATCC CRL-1658</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Mediatech</td><td>10-013-CV</td><td>גידול מדיה</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Mediatech</td><td>35-011-CV</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td> מומת בחום <td>Mediatech</td><td>&nbsp; 30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>צלחות 6 בארות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-772-1B</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Life Technologies</td><td>11058021</td><td>מדיה טרנספקציה</td></tr></tbody></table>

חיזוי השתקת ג &#39;ין באמצעות שליטה spatiotemporal של sirna שחרור מ תגובה תגובה פולימרית פולימרית

Predicting Gene Silencing Through the Spatiotemporal Control of siRNA Release from Photo-responsive Polymeric Nanocarriers

חומרים חדשים ושיטות נדרשים כדי לשלוט טוב יותר מחייב לעומת שחרור של חומצות גרעין עבור מגוון רחב של יישומים הדורשים את הרגולציה המדויקת של פעילות הגן. במיוחד, חומרים חדשים עם תגובה לגירויים עם שליטה משופרת spatiotemporal על ביטוי גנים היה לפתוח פלטפורמות translatable של גילוי תרופות וטכנולוגיות רפואה משובי. יתר על כן, יכולת משופרת לשלוט על שחרור חומצות גרעין מחומרים תאפשר פיתוח של שיטות יעילות לחזות יעילות nanocarrier מראש , מה שמוביל לסקירה מואצת של כלי הלידה. להלן, אנו מציגים פרוטוקול לחיזוי יעילות השתקת גנים והשגת שליטה spatiotemporal על ביטוי גנים באמצעות מודולרי תגובה תגובה nanocarrier המערכת. RNA קטן המפריע (siRNA) הוא מורכב עם mPEG- b- פולי (5- (3 (אמינו) propoxy) -2-nitrobenzyl methacrylate) (mPEG- b -P (APNBMA)) פולימרים כדיRm יציב nanocarriers כי ניתן לשלוט עם אור כדי להקל על מתכוונן, on / off לשחרר siRNA. אנו מתאר שתי מבחני משלימים המעסיקים ספקטרוסקופיה מתאם פלואורסצנטי ג &#39;ל אלקטרופורזה עבור כימות מדויק של שחרור siRNA מ פתרונות חיקוי סביבות תאיים. מידע שנצבר מבחני אלה שולב לתוך הפרעה פשוטה RNAi (מודל RNAi) מודל קינטי לחזות את התגובות דינמי השתקה לתמונות שונות תמריצים התמונה. בתורו, אלה בתנאי הקרנה אופטימיזציה אפשרה חידוד של פרוטוקול חדש לשליטה spatiotemporally השתקת גנים. שיטה זו יכולה ליצור דפוסים סלולריים בביטוי גנים עם רזולוציה תאית לתא ולא תופעות לזיהוי היעד. יחדיו, הגישה שלנו מציעה שיטה קלה לשימוש לניבוי שינויים דינמיים בביטוי גנים ובדיוק שליטה על פעילות siRNA בחלל ובזמן. קבוצה זו של מבחני יכול להיות מותאם בקלות לבחון מגוון רחב של otשלה מגיבים מערכות הגירוי על מנת להתמודד עם אתגרים מרכזיים רלוונטי שפע של יישומים במחקר ביו רפואה ורפואה.

בעקבות ניסוח של nanocarriers, מבחני שחרור siRNA נערכו כדי ליידע את תנאי הקרנה לשמש transfections במבחנה . מינונים שונים של אור יושמו כדי לקבוע את אחוז siRNA אשר שוחרר. Assay הראשון המשמש ג&#39;ל אלקטרופורזה להפריד את מולקולות siRNA חינם מן מולקולות siRNA עדיין מורכבים / הקשורים עם הפולימר. Nanocarriers שלא טופלו באור נשאר יציב ולא לשחרר כל siRNA. כמו משך הזמן הקרינה גדל, עוצמת הקרינה של להקות siRNA חינם גדל. כימות של עוצמות הלהקה באמצעות ת...

אנו מציגים שיטה חדשנית המשתמשת קופולימרים לחסום צילום תגובה עבור שליטה יעילה יותר spatiotemporal של השתקת הגן ללא תופעות לזיהוי מחוץ לגילוי. בנוסף, שינויים בביטוי גנים ניתן לחזות באמצעות מבחני שחרור siRNA פשוטים מודלים קינטיים פשוטים.

חיזוי השתקת ג &#39;ין באמצעות שליטה Spatiotemporal של siRNA שחרור מ תגובה תגובה פולימרית פולימרית

New materials and methods are needed to better control the binding vs. release of nucleic acids for a wide range of applications that require the precise ...

המטרה הכללית של שיטות אלו היא לאפשר את חיזוי יעילויות השתיקה הגנית המתווכת על ידי RNA מפריע קטן (small interfering RNA) ולהקל על השליטה ברמות ביטוי החלבון הנובעות מכך, באופן מרחבי וזמני. שיטה זו יכולה להשיר קשרים בין מבנה לתפקוד ולהבין נשאי אספקה המגיבים לגירויים. השגת שליטה טובה יותר על קשירה לעומת שחרור עשויה להוביל לפיתוח פלטפורמות ניתנות לתרגום קליני וגילוי תרופות, כמו גם לטכנולוגיות של רפואה רגנרטיבית.היתרונות המרכזיים של טכניקה זו הם כי ניתן לשלוט בשינויים בביטוי הגנים ולנבא אותם על בסיס בדיקות פשוטות לשחרור siRNA ומודלים קינטיים. אף ששיטות אלו עושות שימוש בפולימרים חדשניים המגיבים לאור, ניתן להתאים בקלות את מערך הבדיקות הזה לבחינת מגוון רחב של מערכות אחרות המגיבות לגירויים. ראשית, הכין תמיסת siRNA בריכוז 32 µg/mL, על ידי הוספת siRNA לתמיסת HEPES בריכוז 20 µM ב-pH 6.לאחר מכן, הכין תמיסת פולימר על ידי הוספת פולימרים מומסים של mPEG block polyAPN BMA לתמיסת HEPES בריכוז 20 millimolar ב-pH six. כדי להגיע לריכוז של 220 micrograms per milliliter, ריכוז זה יביא ליחס N ל-P של ארבעה, כלומר מספר קבוצות האמין בפולימר יהיה גבוה פי ארבעה ממספר קבוצות הפוספט ב-siRNA. לאחר מכן, הוסף את תמיסת הפולימר בטיפות לנפח שווה של תמיסת siRNA, תוך כדי ערבוב עדין במכשיר vortex.המשיכו לערבל ב-vortex למשך 30 שניות לאחר הוספת הפולימר. לאחר מכן, דגרו את הדגימות בחושך בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. הוסיפו את תמיסת ה-STS לכל תמיסת נשא ננומטרי בצורה של טיפות, תוך ערבוב עדין במכשיר vortex.המשיכו בערבול במכשיר vortex למשך 30 שניות לאחר הוספת ה-SDS. סחררו את הדגימות בצנטריפוגה ב-3,000 Gs למשך חמש שניות, ולאחר מכן הדגירו את הדגימות בחושך בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. כיילו והגדירו לייזר UV עם פילטר של 365 ננומטר לעוצמה של 200 ווט לשני מטרים רבועים.בשלב הבא, גזרו חור באטם גומי והניחו את אטם הגומי על שקופית זכוכית נקייה ויבשה. טפטפו בעזרת פיפטה את תמיסת ה-SDS של הננו-נשא אל תוך החור באטם הגומי על גבי שקופית הזכוכית. העמיסו כמות עודפת של תמיסה על שקופית הזכוכית, תוך הימנעות ממגע עם אטם הגומי.הניחו את השקף השני מעל לאטם השקף. כדי למנוע היווצרות בועות אוויר, הניחו קודם כל קצה אחד של השקף ולאחר מכן הורידו באיטיות את הקצה השני. הצמידו תפסים לכל צד של תא הזכוכית כדי להחזיקו סגור.הקרינו את הדגימות למשך הזמן הרצוי, באמצעות לייזר UV עם מסנן 365 ננומטר בעוצמה של 200 ואט למטר רבוע. הסירו את תסנני הנייר (binder clips) ופתחו את התא. לאחר מכן, העבירו באמצעות פיפט 25 מיקרוליטר של דגימות נשא-ננו SDS שהוקרנו אל מבחנות מיקרו-צנטריפוגה.דגרו את התמיסות בחושך בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. הוסיפו 5 µL של תמיסת loading buffer ל-25 µL מכל דגימת SDS של ננו-נשאים. דגרו את הדגימות בחושך בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.לאחר מכן, טענו 30 µL מכל דגימת ננו-נשא SDS לתוך ג'ל agarose בריכוז 2%, שנצבע מראש ב-ethidium bromide. הריצו את הג'ל בחשיכה במתח של 100 volts למשך 30 דקות. דגמו תמונת ג'ל באמצעות מערכת לדימות ג'לים עם מסנני ethidium bromide.שמרו את קבצי תמונת הג'ל והמשיכו לכימות עוצמת הקימור כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב. הסירו את פיסות הנייר מרצועת מרווח דביקה דו-צדדית כדי לחשוף את פני השטח הדביקים. הצמידו את המרווח לכיסוי זכוכית (coverslip).טפטפו בעזרת פפט את תמיסת ה-SDS של הננו-נשא על לביש העטיפה. לאחר מכן, הניחו למעלה מהלביש שקף זכוכית שנשטף מראש, כך שהחור מהספייסר הדביק יהיה ממורכז סביב הדגימה. לחצו על שקף הזכוכית כדי להבטיח שהשקף ולביש העטיפה מחוברים היטב ויוצרים אטימה.השתמשו במיקרוסקופ קונפוקאלי עם עדשה אפרכרומטית (aperchromal), טבילה במים, הגדלה של 40 פעם, בעלת מפתח מספרי של 1.2 עבור מדידות FCS. השתמשו בערוץ לייזר העירור המתאים כדי לאסוף לפחות 30 מדידות של 10 שניות כל אחת, לכל דגימה. לאחר מכן, הזינו את נתוני שחרור ה-siRNA מה-FCS למודל קינטי כדי לחזות תגובות השתקה של גנים, כפי שפורט בפרוטוקול הכתוב.להכנת הובלה של siRNA in-vitro, הוסיפו תחילה שני מיליליטרים של סספנזיית תאים לכל באר בלוח בעל שש בארות. אפשרו לתאים להיקשר ולהתאושש במשך 24 שעות באינקובטור. לאחר שטיפת התאים בתמיסת סליין עם בופר פוספט (phosphate buffered saline), הכינו אותם לטרנספקציה על ידי הוספה של 1.5 מיליליטר של מצע טרנספקציה ללא סרום ואנטיביוטיקה.בשלב הבא, הוסיפו 25 µL של תמיסת ננו-נשא, המכילה 30 pmol של siRNA, לכל באר. שאיפו בעדינות את המצע למעלה ולמטה כדי לערבב. הכניסו את התאים לאינקובטור למשך שלוש שעות.הסיר את מצע הטרנספקציה (transfection medium) ושטוף כל באר עם PBS. לאחר מכן, הוסף מיליליטר אחד של מצע גידול מועשר והנח את התאים באינקובטור להתאוששות למשך 30 דקות. כדי להכין את התאים לטיפול בגירוי פוטואקטיבי (photo stimulus), הסר את מצע הגידול המועשר.לאחר מכן, הוסיפו מיליליטר אחד של מדיום טרנסווקציה (transvection medium) לכל באער. לאחר כיול לייזר ה-UV כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב, הניחו את התאים על פלטה מחוממת המכוון ל-37 °C. הסירו את המכסה מלוח ששת הבאערים.הקרינו את התאים מלמעלה של הפלטה למשך הזמן הרצוי, באמצעות לייזר UV עם פילטר של 365 nanometer בעוצמה של 200 watts per square meter. הסירו את מצע הטרנסווקציה והוסיפו שני מיליליטרים של מצע גידול מועשר. הניחו את התאים באינקובטור עד לניתוח נוסף.להכנת מסכה פוטוגרפית החוסמת לחלוטין אור באורך גל של 365 ננומטר וממזערת השתקפויות, חתכו, נקבקו ו/או עיבדו תחילה את הצורה הרצויה במסכה הפוטוגרפית. הדביקו את המסכה הפוטוגרפית לתחתית פלטת ששת התאים, כאשר התבנית ממורכזת מעל התא המכיל את התאים והצד האנטי-רפלקטיבי פונה אל הפלטה. הקימו שני מעמדי טבעות במרחק של כ-25 מטרים זה מזה, וחברו פלטפורמה לכל מעמד, כך שהפלטפורמות יהיו בגובה שווה.השעה את פלטת התאים בין שני המעמדים על ידי הנחת הפלטה על גבי הפלטפורמות. הקר את התאים מלמטה, מתחת לדגימה, למשך הזמן הרצוי, באמצעות לייזר UV עם פילטר של 365 nanometer, בעוצמה של 200 watts per square meter. הסר את מצע התעתוק והוסף שני milliliters של מצע גידול מועשר.לאחר מכן, העבירו את התאים לאנקובטור להתאוששות למשך 24 שעות לפחות. צלמו את התאים באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית כפי שתואר קודם לכן. מוצגת כאן דוגמה למודל קינטי פשוט של דינמיקת השתקת גנים.המודל הופעל כדי לחזות את ריכוזי ה-mRNA, החלבון וה-siRNA, כפונקציה של הזמן לאחר שחרור siRNA המושרה על ידי אור. הכמויות היחסיות של siRNA ששוחררו בעקבות מינונים שונים של אור, הוזנו כריכוז ה-siRNA הראשוני במודל הקינטי. תחזיות המודל שהתקבלו עבור רמות ביטוי החלבון היו תואמות לרמות הביטוי שנקבעו באופן ניסיוני באמצעות western blotting.לצורך ויזואליזציה, תאים המבטאים GFP טופלו ב-siRNA המכוון ל-GFP, ומסכת אור טבעתית הונחה על הפיתח לפני ההקרנה כדי ליצור תבנית מעגלית. תאים שהוגנו מפני האור הפגינו עוצמת פלואורסצנציה שלא הייתה ניתנת להבחנה מדגימות ביקורת שלא טופלו ב-siRNA ובאור. עם זאת, כמעט כל התאים בתוך התבנית המעגלית לא הפגינו ביטוי של GFP, מה שמעיד על שחרור יעיל של siRNA ודיכוי גנים (gene knockdown).יתרה מכך, השימוש באור מהווה טריגר המאפשר ביטוי גנים, שניתן לשלוט בו בקנה מידה תאי. לסיכום, שיטה זו מאפשרת קביעה מהירה של תנאי הקרינה לשליטה מרחבית-זמנית בשחרור siRNA וחיזוי השתקת גנים מראש (a priori). שימוש בפרוטוקול זה יסייע להבהיר את קשרי המבנה-תפקוד השולטים ביציבות ובביעילות של נשאים ננומטריים.טכניקה זו עשויה לאפשר יישומים ברפואה רגנרטיבית הדורשים בקרה מרחבית-זמנית על ביטוי גנים. פורמולציות אלו מתאימות גם לטיפול בהפרעות מקומיות כגון סרטן העור, וכן בהפרעות דרמטולוגיות.

predicting-gene-silencing-through-spatiotemporal-control-sirna

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

התערבות RNA (RNAi) הוא בעל יתרונות רבים על פני בנוקאאוט הגן נעשה שימוש נרחב ככלי במחקרים גנים תפקודיים. המצאת ה-DNA וקטור מבוססי RNAi הטכנולוגיה הפכה לטווח ארוך הגן מושרה מציאה אפשרי, גם הגדילה את הכדאיות של השתקת...

וקטור מבוסס DNA התערבות RNA ללמוד לתפקד גנים סרטן

סרטון זה מדגים את השימוש ב-RNA מפריע קטן (siRNA) כדי להשתיק גנים ספציפיים בעלי עניין בתאי גזע עצביים ולהתמיין אותם לסוגי תאים רצויים באמצעות אמצעי התמיינות מתאים. הליך זה מאפשר לחקור את התפקיד הקריטי של גנים ספציפיים בתהליך ההתמיינות של תאי גזע עצביים.

השתקת גנים בתיווך siRNA בתאי גזע עצביים

זריקות רטרו מסלולית חוזרות ונשנות של מתחמי קטיוני liposomes/siRNA/ITSN-1s בעכברים, בכל 72 שעות למשך 24 ימים, ביעילות לספק דופלקס siRNA לmicrovasculature ריאות עכבר הפחתת mRNA ITSN-1S וביטוי חלבון על ידי 75%. טכניקה זו היא שחזור מאוד במודל של בעלי חיים, אין לו תופעות לוואי ונמנע הרוגים.

השתקה ארוכת טווח של Intersectin-1S בעכבר על ידי משלוח ריאות חוזר ונשנה של siRNA ספציפי באמצעות ליפוזומים קטיוני. הערכה של השפעות מציאה על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים

משלוח נשאר האתגר המרכזי ליישום הטיפולי של RNA הקטן מפריע (siRNA). פרוטוקול זה כרוך בשימוש בפלטפורמת משלוח siRNA רב תכליתי וביולוגית, בהיקף של ארגינין וmicroparticles סיליקון הנקבובי polyethylenimine מורכב.

הנקבובי הסיליקון microparticles למשלוח Therapeutics siRNA

כאן אנו מתארים הליך לעיכוב תפקוד גן ביתושי וקטור מחלה באמצעות chitosan / מפריע חלקיקי RNA המעובדים על ידי זחלים.

Chitosan / השתקת הגנים RNA Nanoparticle המתווכת להתערב במחלת וקטור כילה נגד זחלים

זה נשאר אתגר גדול לפתח מותנה נוקאאוט גנטי או יעיל ג'ין-נוקאאוט באיברים דג זברה למבוגרים. כאן אנחנו מדווחים על פרוטוקול עבור ביצוע siRNA בתיווך nanoparticle ג'ין להחרשת בלב דג זברה למבוגרים, ובכך מספק שיטה אובדן-של-פונקציה חדשה ללמוד. האיברים הבוגרים דג זברה ואורגניזמים אחרים מודל.

בתיווך Nanoparticle siRNA ג'ין להחרשת בלב דג זברה למבוגרים

אנו מתארים שיטה של שימוש polyethyleneimine (פיי)-מצופה חלקיקי תחמוצת ברזל פאראמגנטי עבור מקרופאגים transfecting עם siRNA. חלקיקים אלה יכולים להעביר ביעילות siRNA מקרופאגים במבחנה , ויוו , שתיקה ביטוי גנים היעד.

חלקיקי תחמוצת ברזל מצופה Polyethyleneimine כרכב למסירה של RNA מפריעות קטן כדי מקרופאגים במבחנה , In Vivo

נדגים את הסינתזה של חלקיקים fusogenic הסיליקון הנקבובי למסירה oligonucleotide במבחנה, ויוו יעיל. הסיליקון הנקבובי חלקיקים נטענים עם siRNA ליצירת הליבה, שהטיחה מאת fusogenic שומנים דרך ההבלטה כדי ליצור את הקליפה. Functionalization moiety מיקוד איפיון חלקיקים הינם כלולים.

סינתזה Functionalization, איפיון חלקיקים הסיליקון הנקבובי Fusogenic למסירה Oligonucleotide

שיטות להכין ולאפיין את המאפיינים הפיסיוכימיים ואת אתריים של מחויב נייטרליים, מגיב pH-תגובה sirna מוצגים. הקריטריונים של siRNA nanomedicines מוצלחת כגון גודל, מורפולוגיה, טעינה משטח, העמסה siRNA, והשתקה גנים נדונים.

הכנת מנטרל-טעון, pH-מגיבים חלקיקים פולימריים עבור משלוח ציטוזה מסירה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבחירה חוץ גופית של מדכאי שעתוק מהונדסים (ETR) עם יעילות השתקה גבוהה, ארוכת טווח, יציבה, על המטרה ופעילות נמוכה מחוץ למטרה. תהליך עבודה זה מאפשר לצמצם רפרטואר ראשוני ומורכב של תעודות סל מועמדות לרשימה קצרה, המתאימה להערכה נוספת במסגרות רלוונטיות מבחינה טיפולית.

במבחנה בחירת מדכאי שעתוק מהונדסים להשתקה אפיגנטית ממוקדת

למדו לחזות השתקת גנים באמצעות שחרור siRNA מבוקר אופטית מפולימרים רגישים לאור. שיטה זו מאפשרת שליטה מרחבית-זמנית מדויקת בביטוי חלבונים ללא השפעות לוואי.

חיזוי השתקת ג 'ין באמצעות שליטה Spatiotemporal של siRNA שחרור מ תגובה תגובה פולימרית פולימרית

גלה סרטונים נוספים