Name: והקאה הפתוגן הקרנה באמצעות מגנטו-פלורסנט ננו-חיישן: איתור מהיר של e. Coli O157:H7 (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: למדו לסנתז ננו-חיישנים מגנטו-פלורסנטיים לזיהוי מהיר של חיידקים פתוגניים כמו E.coli O157:H7. השיטה משלבת שני מצבי גילוי לרגישות ומהירות מיטביות בזיהוי זיהומים בקטריאליים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי K-INBRE P20GM103418, קנזס סויה הנציבות (הדיסקברי/ספק כח 1663), ACS PRF 56629-UNI7 כח פולימר כימיה הפעלה קרן, כל אס. אנו מודים הצלם האוניברסיטה, מר יעקב Anselmi, עבור עבודתו מצטיינים עם הווידאו. אנו מודים גם מר רוג'ר Heckert ואת גברת קאתה Heckert על תמיכתם הנדיבה למחקר.

1 סינתזה, Functionalization של מגנטו-פלורסנט רב פרמטרית Nanosensors (MFnS).
<ol><li>סינתזה של תחמוצת ברזל פאראמגנטי חלקיקים (IONPs) <ol><li>כדי להתכונן סינתזה IONP, להכין את הפתרונות הבאים 3: פתרון 1: FeCl 3 (0.70 g) ו- FeCl 2 H 2 O (2 מ"ל), פתרון 2: NH 4 הו (מל ' 2.0, מ' 13.4) H 2 O (15 מ ל), ו- 3 פתרון: חומצה polyacrylic (0.855 גרם) ב- H 2 O (5 מ"ל).</li>
		<li>להוסיף 90 µL של 2 מ' חומצת מימן כלורי (HCl) פתרון 1, ואז מיד מערבבים עם 2 פתרון תוך כדי vortexing-875 סל ד. לאחר מכן להוסיף 3 פתרון. המשך vortexing עבור 60 דקות</li>
		<li>צנטריפוגה כעשרים דקות ב 1,620 x ג Centrifuge את תגובת שיקוע במשך 20 דקות ב- g x 2,880...</li>
		<li>לטהר את תגובת שיקוע הסופי באמצעות דיאליזה. להוסיף את תגובת שיקוע שקית דיאליזה (MWCO 6 &#8722; 8 K) ומניחים אותו בתוך המכיל פוספט buffered תמיסת מלח (PBS) (ה-pH = 7.4) ובר ספין. תן לזה משרים למשך 12 שעות, החלפת מאגר טריים כל ה 2-3</li>
	</ol></li> <li>ההטיה של נוגדנים ספציפיים ליעד השטח של IONPs <ol><li>להכין את הפתרונות הבאים ארבע: פתרון א': 5 מ ג 1-אתיל - 3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide הידרוכלוריד (EDC) ב- 250 µL MES [2-(N- חומצה ethanesulfonic מורפולינו)] מאגר (0.1 M, pH = 6.8), פתרון ב': 3 מ ג של N-Hydroxysuccinimide (NHS) ב- µL 250 MES מאגר (0.1 M, pH = 6.8), 5 c: הפתרון µg של IgG1, mAb e. coli, ב- µL 225 של באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS) (pH 7.4) , ואת הפתרון d: 4 מ ל IONP (5.0 mmol) ב 1 מ"ל ל- PBS (pH 7.4).</li>
		<li>להוסיף 2 (N-מורפולינו) ethanesulfonic חומצה (MES) מאגר פתרון A, לאחר מכן מיד להוסיף פתרון A D פתרון במרווחים קטנים בתוך 15 s, היפוך הפתרון לאחר כל הוספה לערבוב.</li>
		<li>מיד להתחיל להוסיף פתרון B D פתרון במרווחים קטנים במשך שלוש דקות. מיקס על ידי היפוך הפתרון לאחר כל הוספה.</li>
		<li>להוסיף פתרון C פתרון, במרווחים של 5 µL, היפוך הפתרון לאחר כל הוספה לערבוב.</li>
		<li>לאפשר תגובה במשך 3 שעות בטמפרטורת החדר ולאחר מכן המשך הדגירה ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.</li>
		<li>לטהר IONPs מצומדת Ab הנוצרת באמצעות מגנטי עמודה תוך שימוש PBS (ה-pH = 7.4, גמר [Fe] = 3.5 mmol) כדי להסיר את כל הנוגדנים unconjugated.
		<ol><li>שטיפת העמודה מגנטי עם PBS (1 מ"ל). הצמד את העמודה לוח מגנטי, והוסף פתרון IONP.</li>
			<li>לרחוץ את העמודה מגנטי עם PBS (1 מ"ל) שוב. הסר את העמודה מגנטי צלחת מגנטית. להוסיף העמודה PBS ולאסוף את הפתרון. החנות ב 4 ° C</li></ol></li></ol></li> <li>ומגעים פלורסנט 1, 1 &#39; - Dioctadecyl - 3,3,3 &#39;, 3 &#39;-צבע פרכלורט Tetramethylindocarbocyanine (DiI) לתוך הציפוי חומצה (במספר דוכנים) polyacrylic של IONPs מצומדת נוגדן באמצעות שיטת דיפוזיה הממס.
	<ol><li>כדי 4 מיליליטר IONPs, להוסיף dropwise 2.0 µL של DiI צבע (2 mmol) ב- µL 100 של דימתיל סולפוקסיד עם ערבוב רציף ב 1100 סל ד.</li>
		<li>Dialyze הפתרון שיתקבל (KDa MWCO 6-8, 12 שעות) נגד PBS, יצירת פתרון MFnS אחרון עם ריכוז הברזל הסופי של [Fe] = 2 mmol.</li>
	</ol></li> <li>אפיון של MFnS <ol><li>לניתוח spectrophotometric, להשתמש בקורא את הצלחת לזהות צבע DiI שעברו אנקפסולציה עם פליטת קרינה פלואורסצנטית-595 nM.</li>
		<li>אור דינאמי פיזור <ol><li>למקם מדגם של הפתרון MFnS zetasizer כדי לקבוע את גודל ממוצע ואת משטח פיקוד MFnS. 
			הערה: כאן, גודל ממוצע ודמי פני השטח של MFnS תפקודית נמצאו 77.09 nm ו-22.3 mV, בהתאמה.</li>
		</ol></li></ol></li></ol> 2. חיידקי Culturing והכנות פתרון מניות <ol><li><ol>Culturing חיידקי <li>מימה גלולה הליחה (e. coli O157:H7) ב 1 מ ל מרק מזין ולאחר מכן להוסיף אוטם 5 נוספים מרק.</li>
		<li>100 להחיל µL של פתרון זה צלחת אגר, פס באמצעות לולאה חיסון סטרילי, ואחריו הדגירה ב 37 ° C עבור 24h.</li>
		<li>לאחר 24 שעות, בחר של המושבה מבודד מהצלחת אגר ולהוסיף אותו 15 מ ל מרק תרבות. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4-6 ה', תוך מעקב אחר הערך צפיפות אופטית (ספיגת על 600 nm).</li>
		<li>ברגע מתקבל ערך צפיפות אופטית של 0.1, תפסיק culturing ולבצע דילולים טורי.</li>
	</ol></li> <li>דילולים טורי <ol><li>µL 900 להוסיף מרק מזין כדי 8 צינורות סטרילי microcentrifuge.</li>
		<li>להוסיף 100 µL של חיידקי התליה אל הצינור הראשון (דילול 10 -1).</li>
		<li>לקחת 100 µL מהרגע הראשון צינור והוסף אותו השנייה, כדי להשיג לדילול של 10 -2. להמשיך את הדפוס הזה עד שהשפופרות הנותרים, המסתיימים לדילול הסופי של 10 -8-</li>
		<li>העברת 100 µL מהצינור כל להפריד בין פלטות אגר, ולאחר תקופת דגירה של 24 שעות ביממה ב- 37 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>למחרת, לספור את המושבה יוצרי יחידות (CFUs) על כל צלחת. בחר את הצלחת עם ~ 100 CFUs. השתמש דילולים התואם לניסויים נוספים (100 µL = ~ 100 CFUs). 
		הערה: כאן זה היה דילול 10 -6 שתוצאתם ~ 100 CFUs.</li>
	</ol></li></ol> 3. מהיר O157:H7 הזיהוי של אי קולי באמצעות MFnS <ol><li>ספייק פתרונות PBS שונים (1 X, ה-pH 7.4, 300 µL) עם הגדלת כמויות של המניה חיידקי 10 -6, וכתוצאה מכך ב CFU נע בין 1 ל- 100. להוסיף כמות עקבית של MFnS (100 µL) לפתרונות אלה.</li>
	<li>ליצור פתרון בסיסי אחד המכיל רק PBS (1 X, ה-pH 7.4, 300 µL) ו MFnS (100 µL).</li>
	<li>דגירה פתרונות למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס ולאפשר להם להתקרר לטמפרטורת החדר ואז.</li>
	<li>פתרונות ייחודיים העברה מגנטי relaxometer (0.47 טסלה), שינויים בתקופות רגיעה (T2) ביחס CFUs כל פתרון.
	<ol><li>כדי להקליט שינויים בערכי T2, להתחיל על ידי מדידת הערך T2 של הפתרון בסיסית המכילה רק PBS ואת MFnS.
		Relaxometer <ol><li>המקום הפתרון ב המגנטי. פתח את התוכנה המתאימים, בחר &#34; T2 הרפיה &#34; בהגדרה ולחץ &#34; מידה. &#34;</li></ol></li> <li>בעקבות אוסף המוזיאון של התוכנית הבסיסית T2, למדוד את הערכים T2 של הפתרונות נוספים היו מתובל שונים ריכוזי חיידקים. 
		הערה: השינוי ב T2 שווה ל בסיסית T2 המופחת של T2 מחודדים.</li>
	</ol></li> <li>להסיר דגימות relaxometer מגנטי, centrifuge הצינורות ב g x 2880 במשך 10 דקות</li>
	<li>Decant את תגובת שיקוע, resuspend כדורי חיידקי ב 100 µL ל- PBS (1 X, ה-pH 7.4).</li>
	<li>80 להוסיף µL של כל resuspension צלחת 96-ובכן, עוצמות קרינה פלואורסצנטית הרשומה ב- 595 nM. 
	הערה: בדיקות שניתן לחזור על שימוש ממיסים שונים, כולל אגם מים, חלב ואחרים כפי שמתואר במקטע תוצאות</li></ol>

<ol><li>Law, J. W., Ab Mutalib, N. S., Chan, K. G., Lee, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+methods+for+the+detection+of+foodborne+bacterial+pathogens%3A+principles%2C+applications%2C+advantages+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid methods for the detection of foodborne bacterial pathogens: principles, applications, advantages and limitations.</a> Front Microbiol. 5, 770(2014).</li>
<li>Pandey, P. K., Kass, P. H., Soupir, M. L., Biswas, S., Singh, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contamination+of+water+resources+by+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22AMB+Express%22%5BJournal%5D)">Contamination of water resources by pathogenic bacteria.</a> AMB Express. 4, 51(2014).</li>
<li>Zhao, X., Lin, C. W., Wang, J., Oh, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+rapid+detection+methods+for+foodborne+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Advances in rapid detection methods for foodborne pathogens.</a> J Microbiol Biotechnol. 24 (3), 297-312 (2014).</li>
<li>Heithoff, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspecies+variation+in+the+emergence+of+hyperinfectious+bacterial+strains+in+nature%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Intraspecies variation in the emergence of hyperinfectious bacterial strains in nature.</a> PLoS Pathog. 8 (4), e1002647(2012).</li>
<li>Ishii, S., Sadowsky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli+in+the+Environment%3A+Implications+for+Water+Quality+and+Human+Health%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Environ%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli in the Environment: Implications for Water Quality and Human Health.</a> Microbes Environ. 23 (2), 101-108 (2008).</li>
<li>Chiou, C. S., Hsu, S. Y., Chiu, S. I., Wang, T. K., Chao, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrio+parahaemolyticus+serovar+O3%3AK6+as+cause+of+unusually+high+incidence+of+food-borne+disease+outbreaks+in+Taiwan+from+1996+to+1999%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vibrio parahaemolyticus serovar O3:K6 as cause of unusually high incidence of food-borne disease outbreaks in Taiwan from 1996 to 1999.</a> J Clin Microbiol. 38 (12), 4621-4625 (2000).</li>
<li>Zhou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PCR+methods+for+the+rapid+detection+and+identification+of+four+pathogenic+Legionella+spp.+and+two+Legionella+pneumophila+subspecies+based+on+the+gene+amplification+of+gyrB%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">PCR methods for the rapid detection and identification of four pathogenic Legionella spp. and two Legionella pneumophila subspecies based on the gene amplification of gyrB.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 91 (3), 777-787 (2011).</li>
<li>Chen, J., Tang, J., Liu, J., Cai, Z., Bai, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+a+multiplex+PCR+for+simultaneous+detection+of+five+foodborne+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of a multiplex PCR for simultaneous detection of five foodborne pathogens.</a> J Appl Microbiol. 112 (4), 823-830 (2012).</li>
<li>LeBlanc, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Switching+gears+for+an+influenza+pandemic%3A+validation+of+a+duplex+reverse+transcriptase+PCR+assay+for+simultaneous+detection+and+confirmatory+identification+of+pandemic+%28H1N1%29+2009+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Switching gears for an influenza pandemic: validation of a duplex reverse transcriptase PCR assay for simultaneous detection and confirmatory identification of pandemic (H1N1) 2009 influenza virus.</a> J Clin Microbiol. 47 (12), 3805-3813 (2009).</li>
<li>Mahony, J. B., Chong, S., Luinstra, K., Petrich, A., Smieja, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+bead-based+multiplex+PCR+assay+for+combined+subtyping+and+oseltamivir+resistance+genotyping+%28H275Y%29+of+seasonal+and+pandemic+H1N1+influenza+A+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Virol%22%5BJournal%5D)">Development of a novel bead-based multiplex PCR assay for combined subtyping and oseltamivir resistance genotyping (H275Y) of seasonal and pandemic H1N1 influenza A viruses.</a> J Clin Virol. 49 (4), 277-282 (2010).</li>
<li>Alvarez, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+recognition+of+influenza+A%2FH1N1%2F2009+antibodies+in+human+serum%3A+a+simple+virus-free+ELISA+method%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Specific recognition of influenza A/H1N1/2009 antibodies in human serum: a simple virus-free ELISA method.</a> PLoS One. 5 (4), e10176(2010).</li>
<li>Huang, C. J., Dostalek, J., Sessitsch, A., Knoll, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-range+surface+plasmon-enhanced+fluorescence+spectroscopy+biosensor+for+ultrasensitive+detection+of+E.+coli+O157%3AH7%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Long-range surface plasmon-enhanced fluorescence spectroscopy biosensor for ultrasensitive detection of E. coli O157:H7.</a> Anal Chem. 83 (3), 674-677 (2011).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+visual+detection+of+highly+pathogenic+Streptococcus+suis+serotype+2+isolates+by+use+of+loop-mediated+isothermal+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid visual detection of highly pathogenic Streptococcus suis serotype 2 isolates by use of loop-mediated isothermal amplification.</a> J Clin Microbiol. 51 (10), 3250-3256 (2013).</li>
<li>Han, F., Wang, F., Ge, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+potentially+virulent+Vibrio+vulnificus+strains+in+raw+oysters+by+quantitative+loop-mediated+isothermal+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detecting potentially virulent Vibrio vulnificus strains in raw oysters by quantitative loop-mediated isothermal amplification.</a> Appl Environ Microbiol. 77 (8), 2589-2595 (2011).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+detection+of+pathogenic+bacteria+and+screening+of+phage-derived+peptides+using+microcantilevers%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Rapid detection of pathogenic bacteria and screening of phage-derived peptides using microcantilevers.</a> Anal Chem. 86 (3), 1671-1678 (2014).</li>
<li>Banerjee, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiparametric+Magneto-fluorescent+Nanosensors+for+the+Ultrasensitive+Detection+of+Escherichia+coli+O157%3AH7%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Multiparametric Magneto-fluorescent Nanosensors for the Ultrasensitive Detection of Escherichia coli O157:H7.</a> ACS Infect Dis. 2 (10), 667-673 (2016).</li>
<li>Shelby, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+magnetic+relaxation+nanosensors%3A+an+unparalleled+%26%2334%3Bspin%26%2334%3B+on+influenza+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Novel magnetic relaxation nanosensors: an unparalleled &#34;spin&#34; on influenza diagnosis.</a> Nanoscale. 8, 19605-19613 (2016).</li>
<li>Bui, M. P., Ahmed, S., Abbas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Digit+Pathogen+and+Attomolar+Detection+with+the+Naked+Eye+Using+Liposome-Amplified+Plasmonic+Immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Single-Digit Pathogen and Attomolar Detection with the Naked Eye Using Liposome-Amplified Plasmonic Immunoassay.</a> Nano Lett. 15 (9), 6239-6246 (2015).</li>
<li>Farnleitner, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enzymatic+detection+of+Escherichia+coli+contamination+in+polluted+river+water%5BTitle%5D)+AND+%22Lett+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid enzymatic detection of Escherichia coli contamination in polluted river water.</a> Lett Appl Microbiol. 33 (3), 246-250 (2001).</li>
<li>Huh, Y. S., Lowe, A. J., Strickland, A. D., Batt, C. A., Erickson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface-enhanced+Raman+scattering+based+ligase+detection+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Surface-enhanced Raman scattering based ligase detection reaction.</a> J Am Chem Soc. 131 (6), 2208-2213 (2009).</li>
<li>Jayamohan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+sensitive+bacteria+quantification+using+immunomagnetic+separation+and+electrochemical+detection+of+guanine-labeled+secondary+beads%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Highly sensitive bacteria quantification using immunomagnetic separation and electrochemical detection of guanine-labeled secondary beads.</a> Sensors (Basel). 15 (5), 12034-12052 (2015).</li>
<li>Kaittanis, C., Naser, S. A., Perez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step%2C+nanoparticle-mediated+bacterial+detection+with+magnetic+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">One-step, nanoparticle-mediated bacterial detection with magnetic relaxation.</a> Nano Lett. 7 (2), 380-383 (2007).</li>
<li>Meeker, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+Photothermal+and+Antibiotic+Killing+of+Biofilm-Associated+Staphylococcus+aureus+Using+Targeted+Antibiotic-Loaded+Gold+Nanoconstructs%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Synergistic Photothermal and Antibiotic Killing of Biofilm-Associated Staphylococcus aureus Using Targeted Antibiotic-Loaded Gold Nanoconstructs.</a> ACS Infect Dis. 2 (4), 241-250 (2016).</li>
<li>Wang, Y., Ye, Z., Si, C., Ying, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtractive+inhibition+assay+for+the+detection+of+E.+coli+O157%3AH7+using+surface+plasmon+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Subtractive inhibition assay for the detection of E. coli O157:H7 using surface plasmon resonance.</a> Sensors (Basel). 11 (3), 2728-2739 (2011).</li>
<li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+bioassay+for+single+bacterial+cell+quantitation+using+bioconjugated+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A rapid bioassay for single bacterial cell quantitation using bioconjugated nanoparticles.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (42), 15027-15032 (2004).</li>
</ol>

היישום והפגינו של ננו-טכנולוגיה זו היא לא אושרו על ידי ה-FDA.

פרוטוקול זה תוכנן כדי לייצר MFnS תקינים הכי פשוט ככל האפשר. עם זאת, ישנם רבים נקודות מפתח בו שינוי בפרוטוקול עשוי להיות שימושי, בהתאם למטרה הקצה של המשתמש. לדוגמה, השימוש של נוגדנים שונים תאפשר מיקוד של רבים פתוגנים אחרים. בנוסף, פרוטוקול זה אינה מוגבלת לשימוש של נוגדנים כמו פילוח מולקולות. כל מולקולה אשר יש זיקה מחייבת ספציפי עבור פתוגנים היעד, כגון קולטני התא המארח, עשוי לשמש גם פילוח מולקולות. כל עוד המולקולה מיקוד amine הראשי או אלכוהול קבוצה, או יכול להיות functionalized אחד, זה עשוי...

המופע מתמיד לזיהום חיידקי בשני בכמויות מסחריות מזון, מקורות המים יצרה צורך פלטפורמות אבחון יותר ויותר מהירה, מדויקת. 1 , 2 חלק נפוץ יותר חיידקים מזהמים אחראי לזיהום מים ואוכל הם סוגים סלמונלה, סטפילוקוקוס, ליסטריה, ויבריו, שיגלה, Bacillus ו Escherichia. 3 , 4 זיהום חיידקי על ידי פתוגנים אלה לעיתים קרובות תוצאות סימפטומים כגון חום, כולרה, דלקת הקבה והמעים, שלשול. 4 זיהום מקורות מים לעיתים קרובות יש תופעות לוואי דרסטית על קהילות ללא גישה למים מסוננים מספיק, ולא מזון וזיהום הוביל מספר רב של מחלות, המוצר אחזור המאמצים. 5 , 6
על מנת לצמצם את המופע של מחלות הנגרמת על ידי זיהום חיידקי, היו מספר המאמצים לפתח שיטות שבו מים ומזון ניתן ביעילות לסרוק לפני מכירה או הצריכה. 3 טכניקות כגון PCR,1,7,8,9,10 , אליסה,11,(בתיווך לופ הגברה איזותרמי12 המנורה),13,14 בין היתר,15,16,17,18,19,20,21, 22,23,24 לאחרונה שימשו לצורך זיהוי של פתוגנים שונים. בהשוואה לבקטריאלי מסורתי culturing שיטות, טכניקות אלו יעילים הרבה יותר לגבי ירידה לפרטים וזמן. עם זאת, שיטות אלה עדיין מתקשים עם תוצאות false חיוביות, שליליות, הליכים מורכבים ועלות. 1 , 3 , 25 זה מהסיבה הזאת מגנטו-פלורסנט multiparametric nanosensors (MFnS) מוצעים כאמצעי חלופי לגילוי חיידקי.
באופן ייחודי, אלה nanosensors זוג יחד הרפיה מגנטי ואופני פלורסנט, המאפשר פלטפורמה כפולה-זיהוי מהיר ומדויק. באמצעות e. coli O157:H7 כמו לדוגמה מזהם, הוא הפגין היכולת של MFnS לאתר CFU אחד בתוך דקות. נוגדנים ספציפיים הפתוגן משמשים כדי להגדיל ירידה לפרטים, השילוב של שיטות המגנטי והן פלורסנט מאפשר זיהוי, כימות של חיידקים מזהמים בטווחים בשני נמוך ולא גבוה-זיהום. 16 במקרה של זיהום חיידקי, nanosensors שוחים מסביב החיידקים בשל היכולות מיקוד של נוגדנים ספציפיים הפתוגן. האיגוד בין nanosensors מגנטי לבין חיידקים מגביל את האינטראקציה בין ליבת ברזל מגנטית של הפרוטונים במים שמסביב. זה גורם גידול טיימס הרפיה T2, כפי שנרשם על ידי relaxometer מגנטי. כמו ריכוז החיידקים בתמיסה עולה, nanosensors לפזר עם מספר גדל של חיידקים, וכתוצאה מכך T2 ערכים נמוכים יותר. לעומת זאת, פליטת קרינה פלואורסצנטית יגדל בפרופורציה עם ריכוז חיידקים, עקב מספר מוגברת של nanosensors קשורה ישירות הפתוגן. צנטריפוגה של הדגימות, ובידוד של בגדר חיידקי, יהיה רק לשמר על חלקיקים מחובר ישירות החיידקים, הסרת כל nanosensors לתרשים, ישירות מתאם את פליטת קרינה פלואורסצנטית עם מספר חיידקים להציג פתרון. ייצוג סכמטי של מנגנון זה מיוצג באיור1.
הפלטפורמה MFnS תוכנן עם בשלב של טיפול הקרנה במוח, וכתוצאה מכך מאפיינים נמוכים ונייד. MFnS יציבים בטמפרטורת החדר, נדרשים רק בריכוזים מאוד נמוכים עבור איתור מדויק של חיידקים מזהמים. יתר על כן, לאחר סינתזה, השימוש MFnS היא פשוטה, ללא צורך בשימוש אנשי מקצוע מיומנים בתחום. לבסוף, הפלטפורמה האבחון מאפשר מיקוד להתאמה, מתן אמצעים על-ידי אילו זה פלטפורמה אחת עשוי לשמש כדי לזהות פתוגנים מכל הסוגים, הגדרות שונות רבות.

<table><tbody><tr><td>ברזל כלוריד טטרהידראט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>I90-500</td><td></td></tr><tr><td>ברזל כלוריד הקסהידראט</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>I88-500</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום הידרוקסיד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A669S-500</td><td></td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A144S-500</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פוליאקרילית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>323667-100G</td><td></td></tr><tr><td>EDC</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>22980</td><td></td></tr><tr><td>NHS</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC157270250</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד E. coli O111&nbsp;</td><td>sera care</td><td>5310-0352</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן אנטי-E. coli O157:H7 [P3C6]&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab75244</td><td></td></tr><tr><td>DiI Stain</td><td>Fisher Scientific</td><td>D282</td><td></td></tr><tr><td>מרק תזונתי</td><td>Difco</td><td>233000</td><td></td></tr><tr><td>מיובש בהקפאה E. coli O157:H7 גלולה</td><td>ATCC</td><td>700728</td><td></td></tr><tr><td>Relaxomteter&nbsp;</td><td>Bruker</td><td>mq20</td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer</td><td>Malvern</td><td>NANO-ZS90</td><td></td></tr><tr><td>קורא צלחות &nbsp;</td><td>עמודה</td> מגנטית Tecan <td>Infinite M200 PRO</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>QuadroMACS</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td> מסדרת <td></td><td>Eppendorf</td><td>5804</td></tr><tr><td>צנטריפוגה (accuSpin Micro 17)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-100-676</td><td></td></tr><tr><td>חממת טלטול דגם רצפה</td><td>SHEL LAB</td><td>SSI5</td><td></td></tr><tr><td>איזון אנליטי</td><td>Metler Toledo</td><td>ME104E</td><td></td></tr><tr><td>מערבולת דיגיטלית מיקסר</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-215-370</td><td></td></tr><tr><td>שייקר נדנדה באוויר הפתוח</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>02-217-765</td><td></td></tr></tbody></table>

והקאה הפתוגן הקרנה באמצעות מגנטו-פלורסנט ננו-חיישן: איתור מהיר של e. coli o157:h7

Foodborne Pathogen Screening Using Magneto-fluorescent Nanosensor: Rapid Detection of E. Coli O157:H7

Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 נקשר שניהם waterborne והקאה מחלות ואת השרידים איום למרות השיטות מזון, מים-סינון בשימוש כיום. תוך כדי שיטות זיהוי חיידקים קונבנציונליים, כגון תגובת שרשרת פולימראזית (PCR), מבחני מקושרים-אנזים immunosorbent (אליסה) יכול לזהות באופן ספציפי מזהמים פתוגניים, הם דורשים קליניים נרחבים ההמתנה ממושך. בנוסף, שיטות עבודה מומלצות אלה דורשים מכשירי מעבדה מתוחכמת, הגדרות, צריך להתבצע על ידי אנשי מקצוע מיומנים. במסמך זה, פרוטוקול מוצע עבור טכניקה אבחון פשוט מציע שילוב ייחודי של הפרמטרים מגנטי, פלורסנט פלטפורמה מבוססת ננו-חלקיק. המוצע multiparametric מגנטו-פלורסנט nanosensors (MFnS) יכול לזהות זיהום O157:H7 e. coli , עם מעט ככל המושבה יוצרי יחידה 1 נוכח פתרון בתוך פחות משעה. יתר על כן, היכולת של MFnS להישאר פונקציונלי מאוד בתקשורת מורכבים כגון חלב אומת המים באגם. מבחני ירידה לפרטים נוספים שימשו גם להפגין את היכולת של MFnS רק לזהות חיידקים היעד הספציפי, אפילו בנוכחות מינים דומים חיידקי. הזיווג של שיטות מגנטי, פלורסנט מאפשר זיהוי, כימות של פתוגן זיהום במגוון רחב של ריכוזים, מפגין שלה ביצועים גבוהים בזיהוי זיהום שני, מאוחר-בשלב מוקדם. היעילות, מקלחון, ניידות של MFnS לבצע אותם מועמדת אידיאלית עבור בשלב של טיפול הקרנה של חיידקים מזהמים במגוון רחב של הגדרות, מאגרים ימיים מזונות ארוזים בצורה מסחרית.

מנגנון הפעולה MFnS מיוצג באיור1. קיבוץ באשכולות של MFnS סביב השטח של חיידקים מזהמים משבש האינטראקציות בין את magnetic cores של MFnS גרעינים מימן שמסביב. בעקבות זה הרפיה קיבוץ באשכולות, מגנטי ערכים להגדיל. ריכוז חיידקים מזהמים גודלת, קיבוץ באשכולות מפחית, מקטין השינוי בערכים T2. לפיכך, התוספת של פלורסנט מודאליות חיוני. ריכוז חיידקי גודלת, מגביר עוצמת האות פלורסנט המיוצר על ידי MFnS, המאפשרות זיהוי חיידקים מזהמים בטווחים הן ריכוז נמוך וגבוה רגיש.
בעקבות הפרוטוקול,<s...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה לסנתז nanosensors תפקודית עבור ניידים, חסכוני, זיהוי מהיר של דווקא בחרו חיידקים פתוגניים באמצעות שילוב של הרפיה מגנטי ואופני פליטת קרינה פלואורסצנטית.

והקאה הפתוגן הקרנה באמצעות מגנטו-פלורסנט ננו-חיישן: איתור מהיר של e. Coli O157:H7

Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 has been linked to both waterborne and foodborne illnesses, and remains a threat despite the food- and ...

המטרה העיקרית של פרוטוקול זה היא לתכנן ולסנתז ננו-חיישנים דו-מודאליים המסוגלים לזהות מזהמים חיידקיים כגון E.coli O157:H7. ננו-חיישנים מגנטו-פלואורסצנטיים מסנתזים על ידי פונקציונליזציה של ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל באמצעות הליך דו-שלבי. ראשית, נוגדנים למטרה מצומדים לפני השטח של הננו-חלקיק.לאחר מכן, צבע פלואורסצנטי נטען אל תוך הקידוד שלו. השילוב של מודליות אלו מאפשר זיהוי מהיר ורגיש של מזהמי בקטריות הן בתמיסות בריכוז נמוך והן בתמיסות בריכוז גבוה. בנוכחות כמות קטנה של בקטריות, הננו-חיישנים יתרכזו סביב הבקטריות הודות למיקוד של הנוגדנים המצומדים.התקבצות זו משנה את האינטראקציות של הליבה המגנטית של הננו-חיישנים עם פרוטוני המים שמסביב, מה שמאפשר זיהוי רגיש של שינויים בערכי הרלקסציה המגנטית. ככל שריכוז המזהמים החיידקיים בתמיסות עולה, התקבצות פוחתת והיכולת של המודאליות המגנטית לכמת את הזיהום פוחתת. עם זאת, ככל שריכוז החיידקים עולה, כך עולה גם הפליטה הפלואורסצנטית של הביו-ננו-חיישנים.מסיבה זו, השילוב בין מודליות מגנטיות לפלואורסצנטיות הוא חשוב. שילוב זה אפשר זיהוי של יחידה אחת בלבד של יחידה יוצרת מושבה (colony forming unit) של E.coli O157:H7 בתוך דקות ספורות. השלב הראשון בסינתזה של ננו-חיישנים מגנטו-פלואורסצנטיים הוא הכנת תמיסת מלח ברזל המורכבת הן מכלוריד פרוס והן מכלוריד פריס.הברזל יספק לננו-חיישנים ליבה מגנטית המאפשרת את התאמתם לפלטפורמות של רלקסציה מגנטית. תמיסות נוספות הדרושות הן חומצה פוליאקרילית ואמוניום הידרוקסיד. חומצה כלורידית מתווספת לתמיסת מלח הברזל, אשר מתווספת לאחר מכן לתמיסת האמוניום הידרוקסיד תוך כדי ערבוב בוורטקס (vortexing).לבסוף מוסיפים את תמיסת ה-polyacrylic acid, והתערובת המתקבלת נערבבת במכשיר vortex למשך שעה נוספת בזמן שהתגובה נמשכת. התמיסה המתקבלת עוברת צנטריפוגה כדי להשקיע את המולקולות הגדולות יותר ולבודד ננו-חלקיקים שגודלם קטן מ-100 nanometers. לאחר מכן, התמיסה עוברת דיאליזה למשך לילה לצורך טהרה.השלב הבא הוא הצמדה (conjugation) של נוגדנים מכווני-מטרה לציפוי של חומצה פוליאקרילית של ננו-חלקיקי תחמוצת הברזל שסונטזו acabado. החומרים הדרושים כוללים MES buffer, EDC, NHS והנוגדנים שנבחרו. ראשית מוסיפים EDC לתמיסת הננו-חלקיקים, לאחר מכן NHS ולבסוף את הנוגדן.לאחר מכן, התערובת מועמדת על מערבל שולחני למשך שלוש שעות בזמן שהתגובה נמשכת. התמיסה מטוהרת באמצעות עמודה מגנטית. העמודה המגנטית לוכדת את הננו-חלקיקים, ובכך מאפשרת רק לנוגדנים החופשיים לצאת.לאחר מכן שוטפים את העמודה עם בופר PBS, ואוספים את הננו-חיישנים המצומדים. כעת הננו-חלקיקים מוכנים להוספת צבע פלואורסצנטי, המספק את המודאליות המרכזית השנייה המשמשת לזיהוי. אחד המאפיינים המרכזיים ביותר של הננו-חיישן שלנו הוא השילוב בין המודאליות המגנטית לפלואורסצנטית, דבר החשוב ממספר סיבות.ראשית, השילוב של שיטות העבודה מאפשר לכל אחת מהן לבצע מעין בדיקה הצלבית של השנייה, דבר המפחית משמעותית את הסיכון לתוצאות חיוביות שגויות ותוצאות שליליות שגויות, המהוות את אחד המכשולים הגדולים ביותר העומדים בפני פלטפורמות אבחוניות שונות המשמשות כיום. שנית, השילוב של שיטות העבודה מרחיב מאוד את הטווח שבו אנו יכולים לא רק לזהות, אלא גם לכמת זיהום חיידקי. השלב האחרון בהכנת הננו-חיישנים הוא כליאת צבע פלואורסצנטי בתוך הציפוי של הננו-חלקיק.דבר זה מושג פשוט על ידי הוספת צבע לתמיסה תוך כדי ערבוב ב-vortex, ולאחר מכן המתנה לזמן נוסף כדי לאפשר לצבע לדף אל תוך הקידוד של הננו-חיישן. הננו-חיישנים הפונקציונליים באופן מלא עוברים דיאליזה פעם אחת אחרונה לצורך טיהור. כדי לאפיין את הננו-חיישנים, הגודל והפליטה הפלואורסצנטית נמדדים באמצעות zetasizer וקורא לוחות פלואורסצנטי.מדגם קטן של הננו-חיישן מתווסף לתמיסת מים בקוובטה ומונח ב-zetasizer למדידת הגודל. לצורך ניתוח פלואורסצנציה, מדגם של הננו-חיישן מונח בלוחית 96 בארות ומוכנס לקורא לוחות פלואורסצנציה. באופן אידיאלי, קוטרם של הננו-חיישנים יהיה כ-70 nanometers, ופליטת הפלואורסצנציה שלהם תהיה ב-575 nanometers.בנוסף לסינתזה של הננו-חיישנים, נדרש גידול של חיידקים כדי לספק את המטרות החיידקיות במעבדה. מאגר גליצרין של חיידקים משמש להכנת תרבית במוציר הזנה (nutrient broth). לאחר מכן, תמיסה זו נשארת לדגירה.בעקבות תקופת הדגירה הראשונית, מבוצעים מהלולי דילול כדי להשיג טווח רחב של ריכוזי חיידקים. מאה מיקרוליטרים של כל ריכוז נזרעים על צלחת אגר מזין ולאחר מכן מדגירים למשך 24 שעות. לאחר דגירה זו, סופרות המושבות בכל צלחת כדי לקבוע את מספר היחידות יוצרות המושבות, או ספירת CFU, לכל מיליליטר של כל מלאי מדולל.כעת, לאחר שהתמיסות של מאגרי החיידקים הוכנו, ניתן להשתמש בהן בשילוב עם הננו-חיישנים שהוכנו. היבט חשוב של סרטיפ ספציפי זה של החיידקים, המבדיל אותו מסרטיפים אחרים, הוא שככל הנראה במקרה של הדבקה בסרטיפים אחרים, נדרש מספר רב של יחידות יוצרות מושבות (colony forming units) כדי שתיווצר הדבקה. אך ב-E.coli ספציפי זה, 10 עד 100 CFUs או יחידות יוצרות מושבות מספיקות כדי לגרום להדבקה.הטכנולוגיה שלנו מבוססת כך שלא תפספסו אפילו מושבה אחת של זיהום חיידקי. כדי להכין תמיסות לקריאה ברלקסומטר המגנטי, יש להעביר תחילה 300 µL של PBS לשפופרת Eppendorf. לאחר מכן מוסיפים דגימה של תרבית חיידקים, ולאחריה את הננו-חיישנים.לאחר מכן מעבירים את התמיסה לשפופרת זכוכית, ומניחים על גביה פיסת פראפילם כדי למנוע התאיידות. את שפופרת הזכוכית מניחים בתוך שפופרת NMR גדולה יותר ומכניסים אותה לתוך הרלקסומטר המגנטי. תמיסת ביסוס שאינה מכילה חיידקים וכוללת רק ננו-סנסור ו-PBS משמשת לקבלת קריאת T2 של קו הבסיס כפי שמוצג.לאחר מכן, תמיסות המכילות ריכוזים שונים של חיידקים מוכנסות לרלקסומטר המגנטי לניתוח, והשינויים בערכי T2 נגרמים מהקישור בין הננו-חיישנים לבין החיידקים. כפי שמוצג, ניתן לזהות נוכחות של CFU חיידקי אחד בלבד בתוך דקות באמצעות שיטה זו. עם זאת, ככל שריכוז החיידקים עולה, קריאות ה-MR הופכות לפחות כמותיות, וזו הסיבה שהשימוש בנתוני פליטה פלואורסצנטיים הוא אף הוא חיוני לצורך כימות מדויק של החיידקים.לפני שניתן יהיה לאסוף נתוני פלואורסצנציה, יש לצנטריפוג את הדגימה. את התמיסה מעבירים מהמבחנה מזכוכית למבחנת Eppendorf ולאחר מכן מבצעים צנטריפוגה. פעולה זו מפרידה את החיידקים ואת הננו-חיישנים הקשורים אליהם מהננו-חיישנים החופשיים בתמיסה.את הנוזל העליון שופכים, ואת משקע החיידקים מרחיפים מחדש ב-PBS. לבסוף, ניתן לנתח את הדגימה באמצעות פליטה פלואורסצנטית. עוצמת הפליטה תהיה יחסית לכמות הננו-חיישנים שנותרו בתמיסה, ולפיכך גם לכמות החיידקים הנוכחת.כפי שניתן לראות, העוצמה הפלואורסצנטית מתחזקת ככל שריכוז החיידקים עולה, והיא גם הופכת לרגישה יותר. זו הסיבה שהשילוב בין המודליות המגנטית לפלואורסצנטית מאפשר גילוי וכימות של זיהום חיידקי הן בשלבים מוקדמים והן בשלבים מאוחרים של ההתפתחות. בנוסף לגילוי חיידקים בתמיסות פשוטות כגון PBS, לננו-חיישנים אלו יש גם את היכולת לתפקד במצעים מורכבים יותר, כגון מי אגם או חלב.יתרה מכך, ננו-חיישנים אלו נבחנו לבדיקת הספציפיות בנוכחות חיידקים שאינםו המטרה וחיידקים מטרה שהובילו אינאקטיבציה תרמית. כפי שניתן לראות, לננו-חיישנים מגנטו-פלואורסצנטיים יש תגובה מועטה עד אפסית עם חיידקים שאינם המטרה או חיידקים שאינם חיים, וזאת בשל הספציפיות של הנוגדנים הצמודים. הדבר מדגים את יעילותם לזיהוי חיידקים ספציפיים בנוכחות מינים אחרים.לבסוף, חשוב לציין כי ניתן להתאים בקלות ננו-חיישנים אלו גם לזיהוי של פתוגנים אחרים. ניתן לסנתז או להכין ננו-חיישנים כפי שעשינו במעבדה שלנו בתוך חודש אחד בלבד. ניתן לבצע זאת בתוך חודש, ותוצרי אותו חודש עשויים לספק לכם יישומים למשך כ-10 שנים.

foodborne-pathogen-screening-using-magneto-fluorescent-nanosensor

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

דיווחנו לאחרונה גישה חדשנית להפקת בדיקות DNAzyme fluorogenic כי ניתן להחיל על הקמת פשוט, "תמהיל-and-לקרוא" assay ניאון לגילוי חיידקי. אלו בדיקות דנ"א מיוחד לזרז את המחשוף של מצע ה-DNA-RNA-chromophore שונה chimeric בנוכחות תערובת תאי גולמי (CEM) המיוצר על ידי חיידק מסוים, ובכך לתרגם את גילוי החיידק לדור אותות הקרינה. בדוח זה נתאר את הליכי הניסוי העיקריים שבהם בדיקה DNAzyme מסוים כונה "RFD-EC1" מועסק לצורך זיהוי של החיידק...

זיהוי של חיידקים באמצעות DNAzymes Fluorogenic

סרטון זה מדגים טכניקה לזיהוי מזהמים חיידקיים בדגימות מזון ומים באמצעות ננו-חיישנים. חיידקי המטרה הפתוגניים מזוהים באמצעות שילוב של הרפיה מגנטית ושיטות פליטה פלואורסצנטיות.

זיהוי זיהום חיידקי באמצעות ננו-חיישנים מגנטו-פלואורסצנטיים

Assay qPCR פותח לצורך זיהוי של O157 החיידקים Escherichia: H7 מיקוד סמן גנטי ייחודי, Z3276. QPCR היה בשילוב עם טיפול monoazide propidium (PMA) לגילוי תא חי. פרוטוקול זה כבר שונה ומותאם לפורמט צלחת 96 היטב לטיפול קל ועקבי של דגימות רבות...

איתור של שידור חי<em&gt; חיידקי Escherichia</em&gt; O157: H7 תאים על ידי PMA-qPCR

פרוטוקול הכולל ריכוז משולב, העשרה וזיהוי קולורימטרי של נקודת קצה של פתוגנים הנישאים במזון בכמויות גדולות של מים חקלאיים מוצג כאן.  המים מסוננים באמצעות Modified Moore Swabs (MMS), מועשרים במדיה סלקטיבית או לא סלקטיבית, והזיהוי מתבצע באמצעות התקנים אנליטיים מבוססי נייר (μPAD) המשובצים במצעים קולורימטריים אינדיקטיביים חיידקיים.

מבוסס נייר Colorimetric איתור של<em&gt; חיידקי Escherichia</em&gt;,<em&gt; סלמונלה</em&gt; Spp., ו<em&gt; חיידקי ליסטריה</em&gt; מכמויות גדולות של מים לחקלאות

אנו מתארים פרוטוקול לזיהוי קולורימטרי של E. coli באמצעות בדיקת לקמוס שונה המנצלת DNAzyme, אוראז וחרוזים מגנטיים.

איתור מדד-צבע של חיידקים באמצעות מבחן לקמוס

פרוטוקול מפורט של דגם העכבר עבור enterohemorrhagic e. coli (EHEC) מושבת באמצעות חיידקים התווית על-ידי ביולומינסנציה מוצג. זיהוי חיידקים זוהרים אלו באמצעות פולשני ויוו מערכת בבעלי חיים הדמיה יכול לקדם את ההבנה הנוכחית שלנו של EHEC קולוניזציה.

זיהוי של כיבוש Escherichia Coli Enterohemorrhagic מאתר מארח על-ידי המערכת לא פולשנית In Vivo ביולומינסנציה

פרוטוקול לפיתוח ביוסנסור אלקטרוכימי DNA הכוללת של אלקטרודות פחמן חלקיקי-לאחרונה, המסך המודפס מיוצב חומצה, זהב polylactic לזהות ויבריו parahaemolyticus מוצג.

התפתחות ביוסנסור אלקטרוכימי דנ א כדי לזהות חיידק והקאה

סלמונלה spp /שיגלה spp. הם נפוצים פתוגנים לייחס שלשול. כאן, אנו מתארים פלטפורמה תפוקה גבוהה להקרנה של סלמונלה spp / spp.שיגלה באמצעות PCR בזמן אמת בשילוב עם תרבות מודרכים.

פלטפורמה תפוקה גבוהה להקרנה של סלמונלה spp /שיגלה spp.

פרוטוקול זה מתאר כיצד לבנות מערכת שרשרת זרימה רציפה פולימראז המבוססת על שבב מיקרופלואידי וכיצד לבנות מערכת אלקטרופורזה נימית במעבדה. הוא מציג שיטה פשוטה לניתוח חומצות גרעין במעבדה.

הגברה של Escherichia coli בשבב מיקרופלואידי PCR בזרימה רציפה וגילויו באמצעות מערכת אלקטרופורזה נימית

פתוגנים חיידקיים שונים עלולים לגרום לזיהומים בדרכי הנשימה ולהוביל לבעיות בריאותיות חמורות אם לא מזהים אותם במדויק ומטפלים בהם מיד. זיהוי מהיר ומדויק של פתוגנים אלה באמצעות הגברה איזותרמית בתיווך לולאה מספק ניהול ובקרה יעילים של זיהומים בדרכי הנשימה בסביבות קליניות.

זיהוי מהיר של פתוגנים חיידקיים הגורמים לזיהומים בדרכי הנשימה התחתונות באמצעות הגברה איזותרמית בתיווך לולאה בתיווך שבב מיקרופלואידי

למדו לסנתז ננו-חיישנים מגנטו-פלורסנטיים לזיהוי מהיר של חיידקים פתוגניים כמו E.coli O157:H7. השיטה משלבת שני מצבי גילוי לרגישות ומהירות מיטביות בזיהוי זיהומים בקטריאליים.

והקאה הפתוגן הקרנה באמצעות מגנטו-פלורסנט ננו-חיישן: איתור מהיר של e. Coli O157:H7

גלה סרטונים נוספים