Name: מסגרת מתודולוגית מאוחדת למחקר שוואנומה שיווי המשקל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: למד שיטת תרבית תאים ראשונית מדגימות שוואנומה וסטיבולרית אנושיות לחקר אונקולוגיה ומדעי המוח. שיטה זו מאפשרת שימור חיוניות התאים ובדיקת תרופות פוטנציאליות ישירות על תאי הגידול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי של חירשות הפרעות תקשורת אחרות מעניקה R01DC015824 (KMS) ו T32DC00038 (תמיכה JES ו SD), משרד הביטחון מענק W81XWH-14-1-0091 (KMS), קרן ברטרלי (KMS) , Nancy Sayles Day Foundation (KMS), מרכז המחקר לאואר טיניטוס (KMS) וקרן בארנס (KMS).

<ol><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vestibular+schwannomas+in+the+modern+era%3A+epidemiology%2C+treatment+trends%2C+and+disparities+in+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Vestibular schwannomas in the modern era: epidemiology, treatment trends, and disparities in management.</a> J Neurosurg. 119 (1), 121-130 (2013).</li>
<li>Gal, T. J., Shinn, J., Huang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+epidemiology+and+management+trends+in+acoustic+neuroma%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Current epidemiology and management trends in acoustic neuroma.</a> Otolaryngol Head Neck Surg. 142 (5), 677-681 (2010).</li>
<li>Propp, J. M., McCarthy, B. J., Davis, F. G., Preston-Martin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Descriptive+epidemiology+of+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Descriptive epidemiology of vestibular schwannomas.</a> Neuro Oncol. 8 (1), 1-11 (2006).</li>
<li>Stangerup, S. E., Tos, M., Thomsen, J., Caye-Thomasen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((True+incidence+of+vestibular+schwannoma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">True incidence of vestibular schwannoma?</a> Neurosurgery. 67 (5), 1335-1340 (2010).</li>
<li>Tos, M., Stangerup, S. E., Caye-Thomasen, P., Tos, T., Thomsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+real+incidence+of+vestibular+schwannoma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">What is the real incidence of vestibular schwannoma?</a> Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 130 (2), 216-220 (2004).</li>
<li>Stangerup, S. E., Caye-Thomasen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+natural+history+of+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and natural history of vestibular schwannomas.</a> Otolaryngol Clin North Am. 45 (2), 257-268 (2012).</li>
<li>Mahaley, M. S., Mettlin, C., Natarajan, N., Laws, E. R., Peace, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+patterns+of+care+of+brain+tumor+patients+in+the+United+States%3A+a+study+of+the+Brain+Tumor+Section+of+the+AANS+and+the+CNS+and+the+Commission+on+Cancer+of+the+ACS%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Analysis of patterns of care of brain tumor patients in the United States: a study of the Brain Tumor Section of the AANS and the CNS and the Commission on Cancer of the ACS.</a> Clin Neurosurg. 36, 347-352 (1990).</li>
<li>Carlson, M. L., Link, M. J., Wanna, G. B., Driscoll, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+sporadic+vestibular+schwannoma%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Management of sporadic vestibular schwannoma.</a> Otolaryngol Clin North Am. 48 (3), 407-422 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sporadic+vestibular+schwannomas+associated+with+good+hearing+secrete+higher+levels+of+fibroblast+growth+factor+2+than+those+associated+with+poor+hearing+irrespective+of+tumor+size%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Sporadic vestibular schwannomas associated with good hearing secrete higher levels of fibroblast growth factor 2 than those associated with poor hearing irrespective of tumor size.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 748-754 (2013).</li>
<li>Caye-Thomasen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF+and+VEGF+receptor-1+concentration+in+vestibular+schwannoma+homogenates+correlates+to+tumor+growth+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">VEGF and VEGF receptor-1 concentration in vestibular schwannoma homogenates correlates to tumor growth rate.</a> Otol Neurotol. 26 (1), 98-101 (2005).</li>
<li>Koutsimpelas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VEGF%2FVEGF-R+axis+in+sporadic+vestibular+schwannomas+correlates+with+irradiation+and+disease+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22ORL+J+Otorhinolaryngol+Relat+Spec%22%5BJournal%5D)">The VEGF/VEGF-R axis in sporadic vestibular schwannomas correlates with irradiation and disease recurrence.</a> ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 74 (6), 330-338 (2012).</li>
<li>Dilwali, S., Roberts, D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+VEGF-A+and+cMET+signaling+in+human+vestibular+schwannomas+and+schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Interplay between VEGF-A and cMET signaling in human vestibular schwannomas and schwann cells.</a> Cancer Biol Ther. 16 (1), 170-175 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., Kao, S. Y., Fujita, T., Landegger, L. D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsteroidal+anti-inflammatory+medications+are+cytostatic+against+human+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Nonsteroidal anti-inflammatory medications are cytostatic against human vestibular schwannomas.</a> Transl Res. 166 (1), 1-11 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+validation+of+anti-nuclear+factor-kappa+B+therapy+to+inhibit+human+vestibular+schwannoma+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Preclinical validation of anti-nuclear factor-kappa B therapy to inhibit human vestibular schwannoma growth.</a> Mol Oncol. 9 (7), 1359-1370 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., Landegger, L. D., Soares, V. Y., Deschler, D. G., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secreted+Factors+from+Human+Vestibular+Schwannomas+Can+Cause+Cochlear+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Secreted Factors from Human Vestibular Schwannomas Can Cause Cochlear Damage.</a> Sci Rep. 5, 18599(2015).</li>
<li>Blakeley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+drug+treatments+for+neurofibromatosis+type+2-associated+vestibular+schwannoma%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Development of drug treatments for neurofibromatosis type 2-associated vestibular schwannoma.</a> Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg. 20 (5), 372-379 (2012).</li>
<li>Schroeder, R. D., Angelo, L. S., Kurzrock, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF2%2Fmerlin+in+hereditary+neurofibromatosis+2+versus+cancer%3A+biologic+mechanisms+and+clinical+associations%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">NF2/merlin in hereditary neurofibromatosis 2 versus cancer: biologic mechanisms and clinical associations.</a> Oncotarget. 5 (1), 67-77 (2014).</li>
<li>Schularick, N. M., Clark, J. J., Hansen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+human+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primary culture of human vestibular schwannomas.</a> J Vis Exp. (89), (2014).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+human+Schwann+and+schwannoma+cells%3A+improved+and+simplified+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Primary culture of human Schwann and schwannoma cells: improved and simplified protocol.</a> Hear Res. , 25-33 (2014).</li>
<li>Brown, C. M., Ahmad, Z. K., Ryan, A. F., Doherty, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+expression+in+sporadic+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor expression in sporadic vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 32 (1), 158-162 (2011).</li>
<li>Cioffi, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-21+overexpression+contributes+to+vestibular+schwannoma+cell+proliferation+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-21 overexpression contributes to vestibular schwannoma cell proliferation and survival.</a> Otol Neurotol. 31 (9), 1455-1462 (2010).</li>
<li>Doherty, J. K., Ongkeko, W., Crawley, B., Andalibi, A., Ryan, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ErbB+and+Nrg%3A+potential+molecular+targets+for+vestibular+schwannoma+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">ErbB and Nrg: potential molecular targets for vestibular schwannoma pharmacotherapy.</a> Otol Neurotol. 29 (1), 50-57 (2008).</li>
<li>Aguiar, P. H., Tatagiba, M., Samii, M., Dankoweit-Timpe, E., Ostertag, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparison+between+the+growth+fraction+of+bilateral+vestibular+schwannomas+in+neurofibromatosis+2+%28NF2%29+and+unilateral+vestibular+schwannomas+using+the+monoclonal+antibody+MIB+1%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurochir+%28Wien%29%22%5BJournal%5D)">The comparison between the growth fraction of bilateral vestibular schwannomas in neurofibromatosis 2 (NF2) and unilateral vestibular schwannomas using the monoclonal antibody MIB 1.</a> Acta Neurochir (Wien). 134 (1-2), 40-45 (1995).</li>
<li>Cattoretti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+against+recombinant+parts+of+the+Ki-67+antigen+%28MIB+1+and+MIB+3%29+detect+proliferating+cells+in+microwave-processed+formalin-fixed+paraffin+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1 and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed paraffin sections.</a> J Pathol. 168 (4), 357-363 (1992).</li>
<li>Hung, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemistry+study+of+human+vestibular+nerve+schwannoma+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemistry study of human vestibular nerve schwannoma differentiation.</a> Glia. 38 (4), 363-370 (2002).</li>
<li>Archibald, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1+expression+in+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">B7-H1 expression in vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 31 (6), 991-997 (2010).</li>
<li>Landegger, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synthetic+AAV+vector+enables+safe+and+efficient+gene+transfer+to+the+mammalian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A synthetic AAV vector enables safe and efficient gene transfer to the mammalian inner ear.</a> Nat Biotechnol. 35 (3), 280-284 (2017).</li>
<li>Zinn, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Silico+Reconstruction+of+the+Viral+Evolutionary+Lineage+Yields+a+Potent+Gene+Therapy+Vector%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">In Silico Reconstruction of the Viral Evolutionary Lineage Yields a Potent Gene Therapy Vector.</a> Cell Rep. 12 (6), 1056-1068 (2015).</li>
<li>Kim, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulforaphane%2C+a+natural+component+of+broccoli%2C+inhibits+vestibular+schwannoma+growth+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Sulforaphane, a natural component of broccoli, inhibits vestibular schwannoma growth in vitro and in vivo.</a> Sci Rep. 6, 36215(2016).</li>
<li>Soares, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+derived+from+human+vestibular+schwannomas+associated+with+poor+hearing+damage+cochlear+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles derived from human vestibular schwannomas associated with poor hearing damage cochlear cells.</a> Neuro Oncol. 18 (11), 1498-1507 (2016).</li>
<li>Lysaght, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteome+of+human+perilymph%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Proteome of human perilymph.</a> J Proteome Res. 10 (9), 3845-3851 (2011).</li>
<li>Caye-Thomasen, P., Borup, R., Stangerup, S. E., Thomsen, J., Nielsen, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deregulated+genes+in+sporadic+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Deregulated genes in sporadic vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 31 (2), 256-266 (2010).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+nerve+microenvironment+for+schwannoma+development%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The importance of nerve microenvironment for schwannoma development.</a> Acta Neuropathol. 132 (2), 289-307 (2016).</li>
<li>Torres-Martin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+profiling+in+vestibular+schwannomas+shows+critical+deregulation+of+microRNAs+and+upregulation+in+those+included+in+chromosomal+region+14q32%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Global profiling in vestibular schwannomas shows critical deregulation of microRNAs and upregulation in those included in chromosomal region 14q32.</a> PLoS One. 8 (6), e65868(2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

כתב יד זה מתאר מסגרת מתודולוגית אחידה למחקר VS, המתאר את העיבוד בו-זמני של דגימות VS ו- GAN אנושיים עבור יישומי מחקר במורד הזרם. כאשר מחקר VS נכנס לרפואה מדויקת, הכנת המדגם אותו בצורות המסוגלות לענות על שאלות מחקר רבות תאפשר גילוי של תובנות מולקולריות, תאיות, גנטיות ופרוטומטיות ספציפיות לחולים בודדים. הטוהר של תא שוואן האנושי ותרבויות VS הוערכו ביסודיות לאורך זמן באמצעות אימונוציטוכימיה, תוך שימוש ביחס של תאים חי...

שוונומות שיווי המשקל (VS) הן הנפוצים ביותר של זווית cerebellopontine, מאובחנים 1 בכל 100,000 אנשים. אם כי לא גרורות, גידולים אלה משפיעים קשות על איכות החיים של המטופל 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 . אנשים נפגעים בדרך כלל לחיות עם אובדן שמיעה, טינטון, ותחושה של מלאות aural. התסמינים הופכים יותר ויותר מתישים ככל הגידול גדל, גרימת בעיות איזון, שיתוק בפנים, ואת הליקוי של תפקודים עצביים גולגולתיים אחרים. סיבוכים מסכני חיים עקב דחיסת גזע המוח עשויים גם להתרחש 7 . אפשרויות ניהול עבור VS מוגבלים בעיקר ממתין מחכה לגידולים סטטיים ו הקרנות סטריאוטקטיות או כריתה כירורגית לגידול גידולים <sUp class = &quot;xref&quot;&gt; 8. הסרה כירורגית של גידולים אלה בבתי חולים המזוהים עם מחקר מציעה הזדמנות לרכוש ולנתח רקמות סרטניות חדשות שנאספו במהלך ניתוחים לחולים. גישה כירורגית ספציפית ל VS, הניתוח של translabyrinthine, יכולה אף להציע גישה לאפיתל סנסורי אנושי חשוב מהאוזן הפנימית ומהפרילימף. מכיוון ש - VSs נובעים מעצב חושי היקפי ( כלומר, עצב שיווי המשקל), חשוב להשוות בין תצפיות הקשורות ל - VS לבין אלו הנובעות מעצב בקרה מתאים, כגון עצב האאוריקולרי האנושי (GAN). גנים בריאים הם מקריבים באופן קבוע במהלך parotidectomies או חתכים הצוואר והוא יכול לשמש מודלים חזקים לבריאות פיזיולוגית התא Schwann 9 . מאחר שאין תרופות המאושרות על ידי ה- FDA לטיפול או למניעת VS סדיר, חיוני שחוקרים יבהירו את המולה המולקולרית הבסיסיתNisms של המחלה כדי לזהות מטרות טיפוליות. חלבונים אשר הוכיחו כי הם ממלאים תפקיד בפתוגנזה של VS כוללים את המארלין, גורם הגדילה האנדותל של כלי הדם (VEGF), cyclooxygenase 2 (COX-2), גורם גרעיני kappa B (NF-κB), גורם נמק בגידול אלפא (TNF-alpha) , קולטן גורם גדילה של אפידרמיס (EGFR), ומולקולות איתות קשורות 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 . ההתקדמות האחרונות הרחיבו ושיפרו פרוטוקולים לאיסוף, עיבוד, תרבות, ומחקר במורד הזרם של schwannomas וסטיבולרי ראשוני האדם ורקמות עצב בריא 18 , 19 . עם זאת, רוב הפרוטוקולים הקיימים נועדו להתאים את הכנהAtion של רקמות כאלה עבור יישום מחקר במורד אחד ( כלומר, תרבות התא לבד). מאמר זה מציג מסגרת מתודולוגית מאוחדת לעיבוד סימולטני של מדגם VS ראשוני יחיד או מדגם GAN ליישומים רבים במורד הזרם: סוג תא ספציפי תרבות, מיצוי חלבונים, שימור רנ&quot;א, אוסף הפרשת הגידול וקיבוע רקמות. עבודה זו גם מפרטת את האוסף הכירורגי ואת העיבוד של נוזל המוח השדרה האנושי (CSF) ו perlymph במהלך כריתת VSS translanabyrinthine, כמו אלה רקמות הקשורות קשר הדוק עשוי לשמש מקורות חשובים של סמנים ביולוגיים עבור VS. לבסוף, פרוטוקול זה מציג שלבים התמרה ויראלי של תאים VS האדם העיקרי בתרבות כמו יישום חדשני של רקמה זו לשימוש בטיפול גנטי.

<table><tbody><tr><td>BioCoat Poly-D-Lysine/Laminin 12 מ"מ #1 354087 כיסוי זכוכית גרמנית</td><td>קורנינג</td><td></td><td>או הכינו כיסויים עם קורנינג למינין (CB-40232) ו-Cultrex Poly-L-Lysine (3438-100-01)</td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה CELLSTAR 15 מ"ל, תחתית חרוטית, סיום לימודים,</td><td>גריינר סטרילי Bio-One</td><td>188161</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה CELLSTAR 50 מ"ל, תחתית חרוטית, סיום לימודים,</td><td>גריינר סטרילי Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים CELLSTAR, 60 מ"מ</td><td>גריינר ביו-וואן</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז מ-Clostridium histolyticum,</td><td>סיגמא-אולדריץ</td>' <td>C1639</td><td></td>מסונן סטרילי</tr><tr><td>Costar 24 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates,</td><td>קורנינג</td> סטרילי <td>3526</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, גלוקוז גבוה, פירובט, ללא גלוטמין, 500 מ"ל</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10313-039</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, 500 מ"ל</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 מלקחיים, Dumoxel</td><td>Fine Science Tools</td><td>11231-30</td><td>חיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים, קצה סטנדרטי, Inox</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td>אוטוקלאב לפני השימוש</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי, מוסמך, אזורים מאושרים על ידי USDA, 500 מ"ל</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10437-028</td><td>Aliquot בצינורות של 50 מ"ל ומאחסנים ב-20&deg; מקפיא C</td></tr><tr><td>Hyaluronidase מאשכי בקר, סוג I-S, אבקת ליופיליזציה</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP יחידת מסנן מזרק, 0.22 ומיקרו; m, פוליאתרסולפון, 33 מ"מ,</td><td>סטרילי EMD Millipore</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde, דרגת ריאגנט,</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td> גבישי <td>P6148</td><td>לפני השימוש: קבע נהלי הפעלה סטנדרטיים המבוססים על פרוטוקולים זמינים באינטרנט</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4, 500 מ"ל</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010-023</td><td>אוטוקלאב לפני השימוש</td></tr><tr><td>בפניצילין-סטרפטומיצין (10,000 U/mL), 100 מ"ל</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>טבליות מעכב פוספטאז PhosSTOP טבליות מעכב</td><td>פרוטאז Roche</td><td>04906845001</td><td></td></tr><tr><td>Pierce</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>88666</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטות ופיפטות, 5/10/25 מ"ל</td><td></td><td>משתנה</td><td></td></tr><tr><td>פלסטיק הומוגניזציה עבור 1.5/2.0 מ"ל מיקרו-צינורות</td><td>E& K Scientific</td><td>EK-10539</td><td></td></tr><tr><td>מחטי PrecisionGlide, 27 גרם x 1 1/2</td><td>ב-BD</td><td>301629</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Buffer</td><td>Boston BioProducts</td><td>BP-115</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater (תמיסת ייצוב RNA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה עם נעילה בטוחה, פוליפרופילן, 0.5 מ"ל</td><td>Eppendorf</td><td>022363719</td><td>חיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה עם נעילה בטוחה, פוליפרופילן, 1.5 מ"ל</td><td>אפנדורף</td><td>022363204</td><td>חיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>מי מלח - 0.9% הזרקת נתרן כלורי, בקטריוסטטי, 20 מ"ל</td><td>Hospira</td><td>0409-1966-05</td><td></td></tr><tr><td>להבי אזמל - #15</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Schuknecht צינור יניקה 24 מד</td><td>Bausch + Lomb</td><td>N1698 42</td><td>שימושי לגישה הכירורגית (בנוסף למכשירים כירורגיים אוטולוגיים נפוצים) ולמשל סמן כירורגי כחול</td></tr><tr><td>מיכל דגימה, או סטרילי, 4OZ</td><td>Medline</td><td>DYND30331H</td><td></td></tr><tr><td>Stemi 2000-C מיקרוסקופ סטריאו</td><td>Zeiss</td><td>000000-1106-133</td><td></td></tr><tr><td>שילוב מזרק/מחט, קצה Luer-Lok, 5 מ"ל, 22 גרם x 1 אינץ'.</td><td>מזרק</td> טוברקולין BD <td>309630</td><td></td></tr><tr><td>בלבד, קצה החלקה, 1 מ"ל</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>מזרק טוברקולין בלבד, קצה החלקה, 3 מ"ל</td><td>BD</td><td>309656</td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר אולטראסוני, סדרת 4710, בדיקה CV18</td><td>Cole-Parmer</td><td>CP25013</td><td></td></tr></tbody></table>

מסגרת מתודולוגית מאוחדת למחקר שוואנומה שיווי המשקל

A Unified Methodological Framework for Vestibular Schwannoma Research

Schwannomas שיווי המשקל הם neoplasms הנפוצים ביותר של זווית cerebellopontine, מה שהופך את 6-8% אחוז של כל גדיולים תוך גולגולתיים. למרות שגידולים אלה גורמים לאובדן שמיעה חושי עד ל -95% מהנפגעים, המנגנונים המולקולריים שבבסיס אובדן השמיעה נותרים חמקמקים. מאמר זה מתאר את הצעדים שנקבעו במעבדה שלנו כדי להקל על איסוף ועיבוד של דגימות רקמות אדם שונות עבור יישומים במורד הזרם מחקר אינטגרלי ללימוד שוואנומות שיווי המשקל. באופן ספציפי, עבודה זו מתארת ​​מסגרת מתודולוגית אחידה לאיסוף, לעיבוד ולתרבות של שוואן ותאי שוואנומה מדגימות כירורגיות. זה משולב עם צעדים עיבוד מקבילים שנחשבים כיום חיוניים למחקר הנוכחי: אוסף של גידול הפרשות העצבים, שימור של רנ&quot;א והפקת חלבון מ רקמות שנאספו, קיבוע של הרקמה להכנת סעיפים,ד את החשיפה של תאים אנושיים ראשוניים כדי adeno הקשורים וירוסים ליישום על טיפול גנטי. בנוסף לכך, עבודה זו מדגישה את הגישה התיראבינארית-כירורגית לאיסוף גידול זה כהזדמנות ייחודית להשגת אפיתל חושי אנושי מהאוזן הפנימית ומהפרילימף. טיפים לשיפור האיכות הניסיונית מסופקים ומלכודות נפוצות מודגשות.

תאים אנושיים VS ראשוני בתרבות, כפי שנקבע בסעיף 5, ניתן להתייחס כמודלים אינפורמטיבי עבור תהליכים הקשורים המחלה ביישומים מחקר במורד רבים ( איור 1 ). תאים בריאים Schwann מתורבת בסעיף 6 לספק נקודה ישירה ומאלפת של השוואה. כפי שמתואר להלן, נתונים נרחבים של VSs ו- GANs שעובדו על פי מסגרת מתודולוגית אחידה זו זמינים במספר מאמרים שפורסמו בעבר 12 , 13 , <sup cl...

המטרה של פרוטוקול זה הוא מתאר את אוסף ועיבוד של דגימות כירורגיות אנושיות עבור יישומים במורד הזרם רבים schwannoma שיווי המשקל מחקר שוואן התא.

Vestibular schwannomas are the most common neoplasms of the cerebellopontine angle, making up 6-8% percent of all intracranial growths. Though these ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לעבד דגימה של שוואנומה וסטיבולרית אנושית שהתקבלה מחדר הניתוח, לצורך תרבית תאים ראשונית ואיסוף הפרשות מהגידול. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחום המחקר של שוואנומה וסטיבולרית, כגון הדרך המיטבית לקבלת, אחסון ועיבוד של דגימת גידול אנושית ראשונית המיועדת לשימוש במספר בדיקות ביו-מולקולריות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא עושה שימוש בשיטת תרבית בעלת מניפולציה מינימלית להרבאת תאי שוואנומה וסטיבולרית אנושיים ראשוניים.השלכותיה של טכניקה זו משתרעות עד לטיפול בשוואנומה וסטיבולרית, מכיוון שניתן לבחון מועמדים טיפוליים מבטיחים ישירות על תאים בתרבית. התחילו בהעברת מיכל הדגימה המכיל את דגימת השוואנומה הוסטיבולרית או את דגימת העצב האוריקולרי הגדול שנקצרו זה עתה, מהקרח ששימש להובלה מחדר הניתוח אל מתוך מCל Laminar Flow Hood במעבדה. השתמשו בפינצטה סטרילית כדי להעביר בזהירות את הדגימה לפרוביטה הראשונה מתוך שלוש פרוביטות של 1.5 millilitre הממולאות ב-1.4 millilitre של PBS חיצוני אחד.סגרו כל מבחנה לאחר הכנסת הדגימה ונערו בעדינות לשטיפה. הניחו את הדגימה בצלחת פטרי יבשה בקוטר 60 מילימטר והשתמשו בפינצטה כדי להסיר רקמות מתות באזורים עם כלי דם בולטים. השתמשו בפינצטה או בלהב סקלפל כדי לחלק את הדגימה לחלקים נפרדים עבור שימור RNA, מיצוי חלבונים, איסוף הפרשות, קיבוע ותרבית תאים.העבירו את חלק הדגימה המיועד לתרבית תאים לצלוחית תרבית חדשה בקוטר 60 מילימטר המכילה 5 עד 8 מיליליטר של מצע DMEM F12 קר מועשר. מקמו את חלק ה-vestibular schwannoma או את עצב ה-great auricular המיועד לאיסוף הפרשות לתוך מבחנה ריקה של 1.5 מיליליטר. התחילו בהעברה בפיפט של 500 מיקרוליטר של DMEM ללא תוספת של FBS, לתוך שתי מבחנות של 1.5 מיליליטר.השפור הראשון ישמש לאיסוף הפרשות הגידול והשפור השני ישמש כביקורת תואמת. הנח את אחד השפורים המכילים DMEM על מאזניים דיגיטליים מכויילים. אפס את המאזניים, הנח את חלק הדגימה המיועד לאיסוף ההפרשות לתוך השפור ושקול אותו.רשמו את התוצאה, שתייצג את משקל הרקמה בלבד. תחת מ 그런 flow hood (מ╅ flow hood), התאימו את נפח ה-DMEM במבחנה ל-100 µL לכל 10 mg של הדגימה. הכניסו את המבחנה המכילה את דגימת הרקמה ואת הביקורת התואמת לה אל האינקובטור.דגרו למשך 72 שעות לפחות, כדי לאסוף כמויות שימושיות מבחינה ביולוגית של הפרשות גידול או עצב. לאחר דגירה של 72 שעות, השתמשו בפיפט של מיליליטר אחד כדי להוציא את המצע המכיל את ההפרשה מהדגימה. כדי למנוע מחזורי הקפאה והפשרה חוזרים, חלקו את המצע למשבצות (aliquots) במבחנות חדשות בהתאם לניתוחים המתוכננים בהמשך.אחסנו את פיסת הרקמה המקורית, את ההפרשות ואת ה-DMEM של הביקורת במקפיא של 80- מעלות צלזיוס עד לתחילת היישומים הבאים. התחילו את הליך התרבית על ידי שימוש בזוג פינצטות בכל יד כדי להפריד את רקמת השוואנומה הווסטיבולרית לפיסות של כ-1 מילימטר מעוקב. לאחר מכן, שאבו את המצע ואת פיסות הגידול באמצעות פיפטה סרולוגית של 10 מילימטר והעבירו את כל התוכן לפחל קוני של 15 מיליליטר.סבבו בצנטריפוגה למשך שלוש דקות ב-1000G בטמפרטורה של 25 °C. במהלך הסבב, הכינו את מצע הפירוק על ידי ערבוב של 4.7 milliliters של מצע DMEM F12 מועשר עם 250 microliters של collagenase ו-50 microliters של hyaluronidase בתוך צלחת תרבית של 60 millimeter. לאחר הסבב בצנטריפוגה, חלקי הגומלה יצטברו כשכבה בתחתית הפסולה הקונית.שאבו בזהירות את הנוזל העליון והשליכו אותו. לאחר מכן, הוסיפו שני מיליליטר של מדיום לפירוק המכיל אנזים שהוכן טרי אל החך הגידולי. שאבו למעלה ולמטה מספר פעמים כדי להניע את הרקמה, ואז העבירו אותה לצלחת תרבית של 60 מילימטר.הניחו את צלחת התרבית באינקובטור למשך 18 שעות. למחרת, חממו מצע DMEM F12 המועשר ב-10% FBS וב-1% penicillin streptomycin באמבט מים בטמפרטורה של 37 degree celsius. הוציאו את הצלחת המכילה את תרבית השוואנומה הווסטיבולרית מהאינקובטור והעבירו אותה למCסננת זרימה (flow hood). באמצעות מחט בכיול 22 המחוברת למזרק של שישה מיליליטר, שאבו את המצע המכיל את התרבית והעבירו אותו לפרונטה קונית חדשה של 15 מילימטר.סבבו בצנטריפוגה במשך חמש דקות ב-1000G בטמפרטורה של 37 degree celsius. במקביל, השתמשו בפינצטה סטרילית כדי להניח את המספר הנדרש של כיסויי זכוכית מצופים ב-polydelycine וב-laminin לתוך פלטת תרבית בעלת 24 בארות. ניתן לתרבל 24 עד 32 בארות מתוך קוביית גידול של גידול בגודל של סנטימטר אחד, לכן עבור רוב הגידולים הקטנים יותר, תכנון של שמונה עד 16 בארות של תרבית תאים הוא הולם.לאחר סנטריפוגציה, השליכו את הנוזל העליון (supernatant) והשעיקו מחדש את משקע התאים השארי במצע המחמם מראש, כך שיתקבל מיליליטר אחד של תגשוש תאים עבור כל באער מתוכנן. השתמשו בפיפט סרולוגי של חמישה מיליליטר כדי לשאוב שני מיליליטר של תגשוש תאים והעבירו מיליליטר אחד לבאר בלוח בעל 24 באערים. המשיכו לשאוב ולהעביר את המצע המכיל תאי גידול, בשאיבות של שני מיליליטרים מהם מועבר מיליליטר אחד לכל באער מתוכנן, עד שכל תגשוש תאי הגידול יחולק באופן שווה בין כל הבאערים שהוכנו.הניחו את הפלטה בעלת 24 הבארים באינקובטור בטמפרטורה של 37 degree celsius למשך לילה. בדקו את הפלטה למחרת; אם נצפה שארית משמעותית בתחתית הבארים, החליפו בזהירות את המדיום בכל באר למדיום תרבית DMEM F12 חדש ומועשר, תוך הקפדה לא להסיר תאים דבקים. אם אין שאריות, החזירו את הפלטה לאינקובטור והחליפו את המדיום בפעם הראשונה ביום החמישי, ומאותו היום מדי שלושה ימים.תמונה זו בשדה בהיר (bright field) ממחישה את דפוס הארגון הטיפוסי של תאי שוואנומה וסטיבולרית בתרבית. תמונות אימונופלואורסצנטיות אלו של תרבית ראשונית של שוואנומה וסטיבולרית אנושית צולמו לאחר 48 שעות של חשיפה ל-ink 80 המבטא GFP, המופיע בירוק. הפלואורסצנציה האדומה נובעת מצביעה אימונולוגית של F actin באמצעות פאלואידין, הצובעת את השלד התאי, והפלואורסצנציה הכחולה היא dapi, הצובע את הגרעין.התמונה המוכנסת היא תמונה בהגדלה גבוהה יותר של אזור מהתמונה בהגדלה נמוכה. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לרשום את הזמנים שבהם הכנסתם את דגימת ההפרשה ואת דגימת התרבית למדגרה, כדי להבטיח ששלבים מאוחרים יותר יבוצעו לאחר תקופות הדגרה נכונות. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון טרנסדוקציה ויראלית, קיבוע, אימונופלורסצנציה, טיפול תרופתי והוצאת RNA כדי לענות על שאלות נוספות, כגון כיצד וירוסים שונים מובעים בתאים או כיצד הביטוי הגני משתנה לאחר טיפול תרופתי.לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום השוואנומה הווסטיבולרית לבחון את האופן שבו תאים אנושיים ראשוניים מגיבים לתרופות שונות בחולים חיים שעברו ניתוח.

a-unified-methodological-framework-for-vestibular-schwannoma-research

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

שיטה מתוארת למדוד רפלקסים עיניים vestibulo תלת ממדי (3D VOR) בבני אדם באמצעות שש דרגות חופש (6DF) סימולטור התנועה. הרווח וחוסר התיאום של VOR הזוויתי 3D מספקים מדד ישיר לאיכות תפקוד שיווי משקל. נציגי נתונים על נבדקים בריאים...

שלוש בדיקות שיווי משקל ממדית Ocular Reflex שימוש בשש דרגות חופש תנועה של פלטפורמה

שיווי המשקל schwannomas (VSS) הם גידולים לא ממאירים ממוצא שוואן תא (SC), הקשורים עם מוטציות בגן המדכא גידולי NF2. אנו מדווחים על פרוטוקול לשחזור, יעיל לאנושי ראשוני VS תרבית תאים המאפשר מניפולציה ניסויית מולקולרית ותאית וניתוח ומשחזר את האופי הטרוגנית של מחלות בבני אדם.

העיקרית של תרבות האנושית שיווי המשקל schwannomas

כדי להעריך שינויים מורפולוגיים של עצבי כגון אובדן עצבית מבנים או נפיחות של עצבי של Menière המחלה (MD) או אנשים בריאים ויוו, פרוטוקול הערכה פותחה באמצעות תהודה מגנטית (MRI) . אישור מבוסס-MRI של MD בוצעה.

אין ויוו ניתוח Morphometric של עצבי האנושי באמצעות תהודה מגנטית של Menière מחלת האוזניים ואת האוזניים שמיעה רגילה

שיטת שיקום חדשה מוצגת לאיזון מחדש של מערכת שיווי הדרך בחולים עם תגובות אסימטריים, אשר מורכב סיבובים חד כיווני לעבר הצד החלש. על ידי שינוי ישיר של מסלול הפרוזדור במקום לשפר את ההיבטים רב חושי של פיצוי, סימטריה יכול להיות מנורמל בתוך 1-2 הפעלות ולהראות השפעות מתמשך.

שימוש בסיבובים חד כיווני לשיפור שיווי מערכת בתוך שיווי מערכות סימטריה בחולים עם חוסר תפקוד לקוי

תפיסת הכבידה נקבעת בדרך כלל על-ידי האנכי החזותי הסובייקטיבי בראש מעמד זקוף. הערכה נוספת בראש נוטה של ± 15 ° ו ± 30 ° במישור הגליל מבטיח תוכן מידע מוגבר לאיתור התפיסה הלקויה של הראייה.

הערכה של התפישה הסטטית במישור הגליל באמצעות הפרדיגמה הקודקואלית החזותית הסובייקטיבית

במאמר זה, אנו מתארים את מערך הניסוי, החומר והנהלים להערכת תנועות עיניים רפלקסיביות, תפיסת תנועה עצמית ומשימות קוגניטיביות תחת גירוי שיווי משקל מגנטי, כמו גם את האוריינטציה האנטומית של איברי שיווי המשקל, בסורק טומוגרפיית תהודה מגנטית 7 טסלה (7T-MRT).

מדידת ההשפעה של גירוי שיווי משקל מגנטי על ניסטגמוס, תפיסת תנועה עצמית וביצועים קוגניטיביים ב- MRT 7T

כאן, אנו מתארים טכניקה לקצירת איברי קצה שיווי משקל אנושיים בתנאים פיזיולוגיים במהלך כריתת מבוך וניתוחם באמצעות צביעה חיסונית.

קציר איברי קצה שיווי משקל בתנאים פיזיולוגיים במהלך כריתת מבוך

המתודולוגיה חקרה תרומות חזותיות ושיווי משקל לייצוב המבט במהלך סיבובים אופטוקינטיים וכל הגוף. הגירויים בוצעו באמצעות ניסויים חזותיים, וסטיבולריים וויזו-ויזאווסטיבולריים. רווח תנועת עיניים פיתול ותדרי ניסטגמוס שימשו כאינדיקטורים לממסר תת-קורטיקלי של מידע תנועה ספציפי חושי לעבר תגובת גזע המוח הרפלקסיבית עבור כל ניסוי.

שימוש במעקב עיניים כדי להעריך את החשיבות היחסית של קלט חזותי ושיווי משקל לעיבוד תנועה תת-קורטיקלית במישור הגלגול

הטיפול בסרטן ריאות חוזר מבודד בשדה שהוקרן בעבר הוא מאתגר. כאן, אנו מתארים הזרקת ציספלטין מונחית אולטרסאונד אנדוברונכיאלי (EBUS) לניהול חולים עם הישנות מקומית של סרטן ריאות בשדה שהוקרן בעבר.

Endobronchial אולטראסאונד מונחה הזרקת intratumoral של ציספלטין לטיפול ישן Mediastinal הבודדה של סרטן הריאות

עכברים הנושאים את קרצינומת המעי הגס-26 (C26) מייצגים מודל קלאסי של קאשקסיה סרטנית. דלדול שרירים מתקדם מתרחש בקשר לצמיחת גידול, ביטוי יתר של יוביקוויטין ליגאזות ספציפיות לשריר והפחתה באזור חתך השריר. נצפה גם אובדן שומן. קאשקסיה נחקרת באופן תלוי זמן עם חומרת בזבוז הולכת וגוברת.

קולון-26 קרצינומה גידול נושאות עכבר כמודל לחקר סרטן תשישות

למד שיטת תרבית תאים ראשונית מדגימות שוואנומה וסטיבולרית אנושיות לחקר אונקולוגיה ומדעי המוח. שיטה זו מאפשרת שימור חיוניות התאים ובדיקת תרופות פוטנציאליות ישירות על תאי הגידול.

מסגרת מתודולוגית מאוחדת למחקר שוואנומה שיווי המשקל

גלה סרטונים נוספים