Name: תת עורית נוירוטרופין 4 עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות או הזרקת שרירים ישירה משפר הזדקנות עכברים שרירי הלוע. (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 50 s
Description: חקור שיטת הזרקת Neurotrophin 4 לשרירי הלוע בעכברים מזדקנים באמצעות משאבות אוסמוטיות או הזרקה ישירה. טכניקה זו מאפשרת שיפור תפקוד קולי והפיכת אטרופיה שרירית קשורת לגיל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי לחירשות והפרעות תקשורת אחרות (R21DC010806 ל- CAM ו- JCS ו- R01DC011285 ל- CAM).

השתמש זכר Fischer 344-Brown חולדות נורבגיה בגיל 6 ו 30 חודשים של גיל עבור פרוטוקול זה. חולדות התקבלו מן המכון הלאומי של זקנה מכרסמים המושב. השתמשנו עכברושים עבור מחקר זה, כי המבנה של הגרון חולדה דומה לזו של האדם, פונקציונלית המשרתים להגנה על דרכי הנשימה ו vocalizations המין המיוחד מחקר זה בוצע בהתאם למדיניות PHS על טיפול הומאני ושימוש בחיות מעבדה, מדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה, וחוק רווחת בעלי חיים (7 USC et seq); פרוטוקול השימוש בבעלי חיים אושר על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש (IACUC) של אוניברסיטת קנטקי. 1. הרדמה של חולדות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את ההרדמה על ידי ערבוב קטמין הידרוכלוריד (הרדמה דיסוציאטיבית) ו xylazine hydrochloride (הרגעה משכך כאבים) ב שנאגרו מלוחים. ריכוז ketamine ו xylazine בפתרון הסופי הם 100 מ&quot;ג / 8 מ&quot;ג לק&quot;גמשקל הגוף בהתאמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את הרדמה לתוך החולדה על ידי הממשל intraperitoneal באמצעות מזרק עם מחט 25 G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע כי החולדה הוא הרדים מספיק על ידי צביטה הבוהן או הרגל עם מלקחיים. אם החולדה לא מגיבה על קמצוץ, ואז הניתוח יכול להתחיל. אם החולדה מגיבה על קמצוץ הבוהן עם התכווצויות רפלקס או שריר, ואז לחכות 1-2 דקות לחזור על מבחן קמצוץ. אם החולדה מגיבה שוב, להחליף את החולדה עם בעל חיים חדש הליך חוזר החל מ שלב 1.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל משחה עיניים לעיניים של חולדה, לאחר החולדה הוא נייח, כדי למנוע את הקרניות להתייבש. </li></ol> 2. אוסמוטי משאבת ההשתלה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה הגחון על אזור כירורגי aseptic. ניהול meloxicam כתרופה preanesthetic. ניהול intraperitoneally במינון של 1-4 מ&quot;ג / ק&quot;ג של משקל הגוף באמצעות מזרק עם מחט 25 G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בקוצץ כדי להסיר קירובTale 1 &quot;x 1&quot; מרובע פרווה מגב הצוואר, וכ 1 &quot;הזנב של שטח בין כתפיים. להתגלח קרוב ככל האפשר לעור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רטוב את הגב והצוואר עם אתנול חיטוי (70%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר גילוח, לשפשף את היבט הגב של הצוואר עם 3 מקרצף ברצף של אלכוהול האלכוהול הגמר עם אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על טמפרטורת הגוף של החולדה על ידי הנחת אותו על כרית חימום מוגדר 34 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממלאים משאבות אוסמוטי מוכן aseptically עם או 50 μL של NTF4 או מלוחים עבור טיפול NTF4 מערכתית ( איור 1 ). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באזמל כדי לבצע חתך אופקית כ 2 ס&quot;מ רחב דרך העור, רק גולגולתי לחלל בין scapulae. הרם את הקצה האחורי של החתך עם מלקחיים עם יד אחת תוך החדרת קצה hemostats בעדינות דוחף אחורי החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קצה hemostats הוא כ 2 ס&quot;מ cרץ את החתך, לפתוח את הידיות על hemostats, הרחבת הקצות כדי ליצור חלול &quot;כיס&quot; תת עורית לאתר החתך. זה יהיה המיקום מיקום המשאבה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוריינט את המשאבה משלוח הפורטל בסוף הראשון עם הכניסה כדי למזער כל אינטראקציה של NTF4 ואת הריפוי של אתר החתך כיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספק 50 μL של מלוחים NTF4 עבור 7 או 7 ימים. קבוצת 7 ימים קיבלה 6.72 מ&quot;ג ליום של NTF4 במינון כולל של 47.04 מ&quot;ג. קבוצת הגיל 14 קיבלה 6.72 מ&quot;ג ליום עבור מינון כולל של 94.08 מ&quot;ג של NTF4 25 . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש חוט 5-0 ניילון תפר, hemostats ו מלקחיים כדי לסגור את החתך עשה עבור מיקום המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים לב חולדות במשך מינימום של 30 דקות כפי שהם להתאושש מהרדמה. הקריטריונים להשלמת הניטור כוללים את החיה להיות פעיל, נע על הכלוב, מי שתייה, ומתחילים פעילויות רגילות אחרות כגון טיפוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג חיות היומיבשבוע הראשון על ידי התבוננות בריפוי של אתר כירורגי, תזונה נורמלית וצריכת מים וחולפת שתן / צואה, וכל סימנים התנהגותיים חריגים של לחץ, כאב או סיבוכים לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם חולדה נראה כואב או מצוקה, לספק חולדה עם 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג הזרקת תת עורית של carprofen פעם כל 24 שעות עד 5 ימים כדי להקל על הכאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש זיהום, להתייעץ עם וטרינר כדי לגרום כי הפצע מרפא כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם קבוצה ניסיונית החולדה ב, להסיר את תפר 5-0 ניילון 7-10 ימים לאחר הניתוח כדי למנוע גירוי מהחוט. </li></ol> 3. הרדמה של חולדות להזרקת ישיר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למנוע מזון מן החולדות בלילה לפני ההליך. זה מבטיח כי אין מזון לחסום את אנדוסקופ או מחט הזרקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול חולדות ולהכין acepromazine 1-2 מ&quot;ג / ק&quot;ג משקל גוף. להזריק intramuscularly (מיקום IM הואשריר thyroarytenoid שמאל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה בתיבה אינדוקציה. להשרות הרדמה בתיבה אינדוקציה עם 5% isoflurane ו 1 LO 2 . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעביר את החולדה על חרוט האף עם isoflurane 2% ו 600 מ&quot;ל O 2 . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע כי החולדה הוא הרדים מספיק על ידי צביטה הבוהן או הרגל עם מלקחיים. אם החולדה לא מגיבה על קמצוץ, אז פרוטוקול ההזרקה יכול להתחיל. אם החולדה מגיבה על קמצוץ הבוהן עם התכווצויות רפלקס או שריר, ואז לחכות 1-2 דקות לחזור על מבחן קמצוץ. אם החולדה מגיבה שוב, להחליף את החולדה עם בעל חיים חדש הליך חוזר החל מ שלב 3.4. </li></ol> 4. הזרקה ישירה ויזואליזציה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום מוכן aseptically 50 μL מינונים המכילים NTF4 או מלוחים ב H 2 O אמבטיה להגדיר 25 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפני ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החולדה במצב שכיבה ו שכיבה על פלטפורמת פרספקס ( איור 2 ). סוסמכופפים את העכברוש בתנוחה השעורה מהחלק העליון של החותכות הקדמיות, דרך חוט תיל המתוח על החלק העליון של הרציף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף 50 מ&quot;מ, 30 מד, 100 מזרק μL ל 1.9 מ&quot;מ, 30 ° סינוס אנדוסקופ ( איור 3 ). הערה: מכלול המזרק מחובר באמצעות חפיפה המחזיקה את הצינורית בחוזקה לקיר החיצוני של האנדוסקופ. האנדוסקופ מאפשר הדמיה של קפל ווקאלי והכוונה של מזרק intraorally. המיקום של קצה צינורית מותאם לפני כל חיה כדי להבטיח את קצה במלואו וברור לעין באמצעות תצוגה אנדוסקופית ( איור 4 ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש זוג מוטה גומי מורט להאריך את הלשון ולהזיז אותו רוחבית. לאחר מכן, הכנס משקולת פלסטיק כדי לשמור על הפטנט בעל פה. הפוך את speculum מ 5 מ&quot;ל חבית פלסטיק חבית כי הוא חתך באורך של 1.5 עד 2 ס&quot;מ, עם הקצוות לחתוך deburred ו מלוטש חלקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את האורות ברוומ &#39;ו לצרף מקור האור הלוגן ל אנדוסקופ. הפעל את מקליט הווידאו כדי ללכוד את ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטבול את הקצה הדיסטלי של אנדוסקופ במים חמים למשך כמה שניות כדי למזער את הפיתוח של עיבוי על קצה זכוכית כאשר מוכנס לתוך הפה של החולדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות משוב חזותי מהצג, בקפידה להנחות את המחט לאזור הקפל השמאלי השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזמן את הזרקת הפתרון עם השלב השראה של מחזור הנשימה של בעלי חיים כדי לגשת באופן מלא לקפל ווקאלי. במהלך שלב ההשראה של הנשימה, קפל הקול נחשף במלואו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קפל ווקאלי גלוי לחלוטין, הכנס את המחט לתוך thyroarytenoid שמאל, נמצא לרוחב קצה המדיאלי הלבן של קפל ווקאלי. עם המחט במקום, לספק את הזרקת דרך דיכאון של המזרק. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את מקור האור הלוגן על אנדוסקופ ונגן וידאו, ופנה בחזרה על roאורות אום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את החולדה לכלוב הבית שלה במקום על כרית חימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר עכברוש להתאושש לפני הסרת כרית החימום. החלף מזון ומים בכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעקב חולדות במשך 7 ימים לאחר ההזרקה ולאחר מכן להרדים. הסר את הגרונות עבור cryosectioning 24 . </li></ol> 5. הרדמה של חולדות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים חולדות עם קטמין הידרוכלוריד ו xylazine hydrochloride (100 מ&quot;ג / 8 מ&quot;ג לכל ק&quot;ג משקל גוף מוזרק זריקה intraperitoneal). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים על ידי exsanguination לאחר thoracotomy המדיאלי. </li></ol>

<ol><li>Trupe, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlates+and+consequences+of+eating+dependency+in+institutionalized+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Geriatrics+Society%22%5BJournal%5D)">Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly.</a> J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).</li>
<li>Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2498813">Aging of the voice and swallowing.</a> Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).</li>
<li>Gay, E. G., Kronenfeld, J. J., Dettmann, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+on+the+effect+of+regulation+on+health+care+for+the+older+American%3A+a+tale+of+two+states%5BTitle%5D)+AND+%22Gerontologist%22%5BJournal%5D)">A comparison on the effect of regulation on health care for the older American: a tale of two states.</a> Gerontologist. 34 (6), 787-796 (1994).</li>
<li>Hagen, P., Lyons, G. D., Nuss, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysphonia+in+the+elderly%3Adiagnosis+and+management+of+age-related+voice+changes%5BTitle%5D)+AND+%22South.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Dysphonia in the elderly:diagnosis and management of age-related voice changes.</a> South. Med. J. 89 (2), 204-207 (1996).</li>
<li>Broniatowski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+evaluation+and+treatment+of+patients+with+swallowing+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol.+Head+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Current evaluation and treatment of patients with swallowing disorders.</a> Otolaryngol. Head Neck Surgery. 120 (4), 464-473 (1999).</li>
<li>Lundy, D. S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10187936">Aspiration: cause and implications.</a> Otolaryngol. Head Neck Surg. 120 (4), 474-478 (1999).</li>
<li>Schindler, J. S., Kelly, J. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12150508">Swallowing disorders in the elderly.</a> Laryngoscope. 112 (4), 589-602 (2002).</li>
<li>Gambino, D. R., Malmgren, L. T., Gacek, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+the+neuromuscular+junctions+in+the+human+posterior+cricoarytenoid+muscles%3A+a+quantitative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in the neuromuscular junctions in the human posterior cricoarytenoid muscles: a quantitative study.</a> Laryngoscope. 100 (3), 262-268 (1990).</li>
<li>Sinard, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+voice%3A+how+to+differentiate+disease+from+normal+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Geriatrics%22%5BJournal%5D)">The aging voice: how to differentiate disease from normal changes.</a> Geriatrics. 53 (7), 76-79 (1998).</li>
<li>Baker, K. K., Olson-Raming, L., Sapir, S., Luschei, E. S., Smith, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+vocal+loudness+in+young+and+old+adults%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Speech+Lang.+Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Control of vocal loudness in young and old adults.</a> J. Speech Lang. Hear Res. 44 (2), 297-305 (2001).</li>
<li>McMullen, C. A., Andrade, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+morphological+evidence+of+age-related+denervation+in+rat+laryngeal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A.+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Functional and morphological evidence of age-related denervation in rat laryngeal muscles.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 64 (4), 435-442 (2009).</li>
<li>Lai, K., Ip, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postsynaptic+signaling+of+new+players+at+the+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Postsynaptic signaling of new players at the neuromuscular junction.</a> J. Neurocytol. 32 (5-8), 727-741 (2003).</li>
<li>Huang, E. J., Reichardt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophins%3A+roles+in+neuronal+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurotrophins: roles in neuronal development and function.</a> Annu. Rev. Neurosci. 24 (1), 677-736 (2012).</li>
<li>Gonzalez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Trkb+mediated+signaling+induces+disassembly+of+postsynaptic+receptor+clusters+at+neuromuscular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Disruption of Trkb mediated signaling induces disassembly of postsynaptic receptor clusters at neuromuscular junctions.</a> Neuron. 24 (3), 567-583 (1999).</li>
<li>Hirano, S., Kishimoto, Y., Suehiro, A., Kanemaru, S., Ito, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19029860">Regeneration of aged vocal folds: first human case treated with fibroblast growth factor.</a> Laryngoscope. 118 (12), 2254-2259 (2008).</li>
<li>Branski, R. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19374154">Effects of transforming growth factor-beta 1 on human vocal fold fibroblasts.</a> Ann. Oto. Rhinol. Laryngol. 118 (3), 218-226 (2009).</li>
<li>Kishimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19746761">Effects of exogenous hepatocyte growth factor on vocal fold fibroblasts.</a> Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 118 (8), 606-611 (2009).</li>
<li>Belluardo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+junction+disassembly+and+muscle+fatigue+in+mice+lacking+neurotrophin-4%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular junction disassembly and muscle fatigue in mice lacking neurotrophin-4.</a> Mol. Cell. Neurosci. 18 (1), 56-57 (2001).</li>
<li>Johnson, A. M., Ciucci, M. R., Connor, N. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23671289">Vocal training mitigates age-related changes within the vocal mechanisms in the old rat.</a> J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 68 (12), 1458-1468 (2013).</li>
<li>Roscow, D. E., Parikh, P., Vivero, R. J., Casiano, R. R., Lundy, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+initial+dosing+of+botulinum+toxin+in+treatment+of+adductor+spasmodic+dysphonia%5BTitle%5D)+AND+%22Oto.+HeadNeck+Surg%22%5BJournal%5D)">Considerations for initial dosing of botulinum toxin in treatment of adductor spasmodic dysphonia.</a> Oto. HeadNeck Surg. 148 (6), 1003-1006 (2013).</li>
<li>Benninger, M. S., Hanick, A., Hicks, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cricothyroid+muscle+botulinum+toxin+injection+to+improve+airway+for+bilateral+recurrent+laryngeal+nerve+paralysis%2C+A+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Voice%22%5BJournal%5D)">Cricothyroid muscle botulinum toxin injection to improve airway for bilateral recurrent laryngeal nerve paralysis, A case series.</a> J. Voice. 30 (1), 96-99 (2016).</li>
<li>Coppoolse, J. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+study+of+composite+microgels+based+on+hyaluronic+acid+and+gelatin+for+the+reconstruction+of+surgically+injured+rat+vocal+folds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Speech+Lang+Hear+Res%22%5BJournal%5D)">An in vivo study of composite microgels based on hyaluronic acid and gelatin for the reconstruction of surgically injured rat vocal folds.</a> J. Speech Lang Hear Res. 57 (2), S658-S673 (2014).</li>
<li>Hertegård, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-linked+hyaluronan+used+as+augmentation+substance+for+treatment+of+glottal+insufficiency%3A+Safety+aspects+and+vocal+fold+function%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Cross-linked hyaluronan used as augmentation substance for treatment of glottal insufficiency: Safety aspects and vocal fold function.</a> Laryngoscope. 112 (12), 2211-2219 (2002).</li>
<li>Walker, W. F. Jr, Homberger, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalker%2C+WF+%22Anatomy+and+dissection+of+the+rat%22">Anatomy and dissection of the rat</a>. , Third Edition, W.H. Freeman and Company. New York. (1997).</li>
<li>Ohno, T., Hirano, S., Rousseau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-associated+changes+in+the+expression+and+deposition+of+vocal+fold+collagen+and+hyaluronan%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Oto.+Rhinol.+Laryngol%22%5BJournal%5D)">Age-associated changes in the expression and deposition of vocal fold collagen and hyaluronan.</a> Ann. Oto. Rhinol. Laryngol. 25 (1), 192-197 (2009).</li>
<li>Stemple, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+aging+rat+laryngeal+muscles+with+endogenous+growth+factor+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rep%22%5BJournal%5D)">Enhancement of aging rat laryngeal muscles with endogenous growth factor treatment.</a> Physiol. Rep. 4 (10), e12798(2016).</li>
<li>McMullen, C. A., Andrade, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+dysfunction+and+altered+metabolic+profile+of+the+aging+rat+thyroarytenoid+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">Contractile dysfunction and altered metabolic profile of the aging rat thyroarytenoid muscle.</a> J. Appl. Phys. 100 (2), 602-608 (2006).</li>
<li>Engle, W. K., Cunningham, G. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14079951">Rapid examination of muscle tissue. An improved trichrome method for fresh-frozen biopsy section.</a> Neurology. (13), 919-923 (1963).</li>
<li>Sheehan, D. C., Hrapchack, B. B. Theory and practice of histotechnology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSheehan%2C+DC+%22Battelle%22">Battelle</a>. , Columbus, OH. (1980).</li>
<li>Kulakowski, S. A., Parker, S. D., Personius, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+TrkB+expression+results+in+precocious+age-like+changes+in+neuromuscular+structure%2C+neurotransmission%2C+and+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">Reduced TrkB expression results in precocious age-like changes in neuromuscular structure, neurotransmission, and muscle function.</a> J. Appl. Phys. 111 (3), 844-852 (2011).</li>
<li>Nishida, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23100084">Age-related change in rat intrinsic laryngeal muscles: analysis of muscle fibers, muscle fiber proteins and subneural apparatuses.</a> Eur Arch Otorhinolaryngol. 270 (3), 975-984 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שרירי הגרון חשופים להשפעות של הזדקנות. מחקרים קודמים הראו שינויים בשרירי הגרון המזדקנים הכוללים שינויים בגודל הסיבים, מספר הסיבים הכולל, יכולת התחדשות, גודל NMJ ושינויים בכמות, בנוסף לשינויים בתפקוד הקונסטרוקלי ובמיוסין איזופורם משמרות 4 , 11 , 27 , 30 , 31 . הזדקנות שריר הגרון ניתן לשנות על ידי יישום של נוירוטרופים. שי...

שרירי הגרון מתכווצים במהירות ועקביות, והם פגיעים לתופעות הלוואי של ההזדקנות. פעילות מתמדת זו נחשבת לתורמת לבעיות קוליות או לדיספגיה שנצפתה אצל אנשים מעל גיל 65 שנים , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . מספר מנגנונים מולקולריים ו פתופיזיולוגיים תורמים לתפקוד לקוי הקשור לגיל. מנגנונים אלה יכולים לכלול שיפוץ של רירית הגרון, ניוון שריר או אובדן, חוסר סיבים שריר התחדשות או ניוון אשר גורם קשת של קפל ווקאלי חוסר יכולת של הסגר 8 , 9 , 10 , 11 . אין טיפול רפואי מוכח בשלב זה יכול comלמנוע או לשקם שינויים אלה הקשורים לגיל אלה שרירים. אפנון האפקטיביות של שידור neuromuscular יכול להשפיע מאוד על הביצועים neuromotor. משפחת הנוירוטרופים כוללת גורם לגדילה עצבית (NGF), גורם גדילה עצבי המופק על ידי המוח (BDNF), נוירוטרופין 3 (NTF3) ו- NTF4 12 , 13 . נוירוטרופים הוכחו כדי לווסת את יעילות הסינפטי 1 , 4 . גורם הצמיחה hepatocyte, הפיכת גורם גדילה ביתא גורם הגידול fibroblast לאחרונה נעשה שימוש בבני אדם לטיפול הצטלקות קפל 15 - 17 . NTF4 גם מסדיר את יעילות NMJ; עכברים חסרים NTF4 להראות מפורקים NMJs 11 , 18 , 19 . מחקרים אלה מובילים להשפעות מבטיחות של מטפליםT של הזדקנות שרירים הגרון ואת שימור עם גורמי גדילה. טיפול הזרקה ישירה לרקמות של קפל ווקאלי הם לא תקדים בבני אדם. לדוגמה, זריקות מקומיות של toxin botulinum משמשים כיום כטיפול יעיל להפרעות תנועה נוירולוגיות המשפיעות על השרירים בגרון, כגון דיספוניה של עוויתות ושיתוק עצבי חוזר דו-צדדי חוזר 20 , 21 . חומצה היאלורונית הידרוגנית נוספת היא זריקה, המשמשת לטיפול מפחיד ווקאלי קיפול וחסר glutal 22 , 23 . הזריקה laryngoplasty ניתן להשתמש כדי לטפל במגוון של הפרעות בתקשורת 24 . שיטות הזרקה ישירה אלו מקיימות הבטחה לשיפור תפקוד הקול והבלעה באוכלוסיות ההזדקנות.

<table><tbody><tr><td>נוירוטרופין 4</td><td>פפרו טק</td><td>450-04</td><td>200 ננוגרם ב-50 &mu; L</td></tr><tr><td>Alzet משאבה אוסמוטית</td><td>DURECT Corporation</td><td>2001D</td><td></td></tr><tr><td>30 &deg; אנדוסקופ</td><td>Stoltz</td><td>61029D</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"מ 30 מד 100-&mu; מזרק L</td><td>המילטון</td><td>84850 ותמיסת מלח 201812</td><td></td></tr><tr><td>(תמיסת נתרן כלורי)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד</td><td>הנרי שיין</td><td>56344</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין הידרוכלוריד</td><td>הנרי שיין</td><td>33198</td><td></td></tr><tr><td>25 גרם 5/8 מחט</td><td>בקטון-דיקינסון</td><td>305901</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק</td><td>בקטון-דיקינסון</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>משחת עיניים</td><td>הנרי שיין</td><td>8897</td><td></td></tr><tr><td>קוצץ</td><td>אוסטר</td><td>44-018</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>דקון</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>יוד (בטאדין)</td> <td>Purdue Pharma L.P.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>606404 כרית חימום</td><td>Sunbeam</td><td>731-5</td><td></td></tr><tr><td>5-0 חוט תפר ניילון</td><td>AD כירורגי</td><td>PMN-518R6</td><td></td></tr><tr><td>קריל המוסטט</td><td>Fine Science</td><td>Tools 13005-14</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עדינים לקשירת תפרים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td></td></tr><tr><td>מלוקסיקם</td><td>הנרי שיין</td><td>49756</td><td></td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>Merritt Veterinary Supplies</td><td>148700</td><td></td></tr><tr><td>משחה אנטיביוטית</td><td>הנרי שיין</td><td>57110</td><td></td></tr><tr><td>acepromizine Aceproject</td><td>הנרי שיין</td><td>3845</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן איזותזיה</td><td>הנרי שיין</td><td>50033</td><td></td></tr><tr><td>תיבת אינדוקציה (קופסת הרדמה)</td> <td>מכשיר הרווארד</td><td>50-0116</td><td></td></tr><tr><td>מיכל דחוס חמצן</td><td>סקוט גרוס</td> פלטפורמת פרספקס <td>UN1072</td><td></td></tr><tr><td></td><td>חלקים קטנים בע"מ (אמזון)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>מלקחיים עם קצה גומי</td> כלי <td>מדע עדינים גומי</td><td>11075-00</td><td></td></tr><tr><td>גומי נוזלי למלקחיים מעל</td> ספקטולה פלסטיק <td>42518</td><td></td><td>של Lowe</td></tr><tr><td>(מזרק BD חתוך לאורך)</td> <td>Becton-Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>מקור אור הלוגן קרנף-גרון סטרובוסקופ</td><td>Kay-Pentax</td><td>RLS 9100 B</td><td></td></tr><tr><td>מקליט וידאו</td><td>Kay-Pentax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389-500G</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>קריוסטט Mictotom HM525</td><td>Thermo Scientific</td><td>HM 525</td><td></td></tr><tr><td>זימים 1 המטוקסילין</td><td>VWR</td><td>10143-142</td><td></td></tr><tr><td>Shandon eosin-Y אלכוהולי</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>6766007</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן אנטי נתרן Nav1.5 המיוצר בארנב</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0819</td><td></td></tr><tr><td>טקסס אדום-X פלואידין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T7471</td><td></td></tr><tr><td>אלפא-בונגרוטוקסין אלקסה פלואור 488 מצומד</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>B-13422</td><td></td></tr><tr><td>הרדמה של בעלי חיים קטנים מכונה</td><td>סמיתס רפואי</td><td>CDS 9000</td><td></td></tr></tbody></table>

תת עורית נוירוטרופין 4 עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות או הזרקת שרירים ישירה משפר הזדקנות עכברים שרירי הלוע.

Subcutaneous Neurotrophin 4 Infusion Using Osmotic Pumps or Direct Muscular Injection Enhances Aging Rat Laryngeal Muscles

תפקוד לקוי של הגרון אצל קשישים הוא גורם עיקרי לחולי נכות, מהפרעות קוליות ועד לקשיי ראייה ואובדן רפלקסים מגנים על דרכי הנשימה. מעטים, אם בכלל, קיימים טיפולים כי המטרה גיל הקשורים לתפקוד שרירים בגרון. נויטרופונים מעורבים בעצב שרירים ובידול של צמתים ניירומוסקולריים (NMJs). הוא חשב כי neurotrophins לשפר את העברת neuromuscular על ידי הגדלת שחרור נוירוטרנסמיטר. הצמתים הניירומוסקולריים (NMJ) הופכים קטנים יותר ופחות בשפע בשרירי הגרון העכברים המזדקנים, עם ראיות לשימור תפקודי. בחנו את ההשפעות של NTF4 לשימוש קליני עתידי כטיפול לשיפור תפקוד ההזדקנות בשרירי הגרון האנושיים. כאן, אנו מספקים את פרוטוקול מפורט עבור יישום מערכתי הזרקת ישירה של NTF4 לחקור את היכולת של הזדקנות חולדה עכברוש הגרון לשפץ בתגובה יישום NTF4. בשיטה זו, חולדות או קיבלו NTF4 או באופן שיטתי דרך oמשאבה סמוטית או על ידי הזרקה ישירה דרך קפל ווקאלי. שרירי הלוע היו אז גזור ומשמש לבדיקת היסטולוגית של מורפולוגיה ושימור הקשורים לגיל.

חולדות היו מורדמים לאחר שבועיים של עירוי משאבת אוסמוטי או 1 שבוע לאחר הזרקה ישירה של NTF4. Larynges נקצרו, הניח cryoprotectant (סוכרוז 30% ו 70% פוספט שנאגרו מלוחים) ולאחר מכן מקוטע סדרתי ברוחב 10 מיקרומטר עם cryostat. הזדקנות שרירי הגרון מושפעים על ידי הממשל של NTF4 25 . בנוסף חולדה צעירה וישנה, ​​השווה את הצד מוזרק ולא מוזרק של השרירים thyroarytenoid. בדרך כלל אנו רואים שינוי בגודל סיבי עם הגיל, אשר משתנה בהתאם לתוואי של נ...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לתאר את השימוש של neurotrophin 4 (NTF4) באופן שיטתי ישירות כדי לשפץ עכברוש ההזדקנות שרירים הגרון.

Laryngeal dysfunction in the elderly is a major cause of disability, from voice disorders to dysphagia and loss of airway protective reflexes. Few, if ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להעביר Neurotrophin 4 לצורך השראת עיצוב מחדש (remodeling) של שרירי הגרון בחולדה מזדקנת. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח הקשורות לתפקוד שרירי הגרון. לדוגמה, האם ניתן להפוך את ניוון השרירים הקשור לגיל כדי לשפר את התפקוד הקולי.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן להעבירה בקלות למודלים אנושיים של הזדקנות קולית. ניתן להשתמש בשיטות הזרקה השגורות אצל רופאי אף-אוזן-גרון בבני אדם כדי להזריק את התמיסות הדרושות לשיפור התפקוד הקולי. בדרך כלל, אנשים שאינם בקיאים בשיטה זו יתקשו בביצועה בשל הרגישות של הליכי ההשתלה וההזרקה.את הפרוצדורה ידגימו טניה סוורד, טכנאית מהמחלקה לפיזיולוגיה, וריצ'רד אנדרייטה, פרופסור חבר במדעי התקשורת והפרעות, שניהם מאוניברסיטת קנטקי. כדי להשתיל את המשאבה, ראשית הניחו את החולדה בעמדה גחונית (ventral position) באזור כירורגי אספטי. הרטיבו את הגב והצוואר ביוד.לאחר מכן, קרצפו את הצד הגבי של הצוואר עם 70% ethanol. בשלב הבא, העבירו את בעל החיים למשטח חימום בטמפרטורה של 34 degree Celsius והעניקו טיפול תרופתי טרום-הרדמה. מלאו את המשאבות האוסמוטיות שהוכנו באופן אספטי ב-50 microliters של Neurotrophin 4.השתמשו בסכין מנתחים כדי לבצע חתך אופקי ברוחב שני סנטימטרים דרך העור, ממש מאחורי הרווח שבין השכמות. הרימו את הקצה האחורי של החתך בעזרת פינצטה והחדירו בעדינות את קצות ההמוסטט אל מאחורי החתך. כאשר הקצה נמצא במרחק של כשני סנטימטרים מאחורי החתך, פתחו את ידיות ההמוסטט כדי ליצור כיס חלל תת-עורי מתחת לאתר החתך.החדירו את המשאבה לתוך התו של הכיס, תוך הכוונת קצהו של פתח ההגשה כך שהשפעתו של הטיפול על ריפוי אתר החתך של הכיס תהיה מינימלית. לאחר מכן, השתמשו בחוט תפירה מסוג nylon 5-0, בהמוסטט ובפינצטה כדי לסגור את החתך של השתלת המשאבה, ועקבו אחר בעל החיים עד שיהיה ער לחלוטין ומסוגל להתנייד. 30 דקות לפני ההזרקה, חממו מנות של 50 microliter של Neurotrophin או תמיסת מלח שהוכנו באופן אספטי באמבט מים של 25 degree Celsius.כאשר הטיפולים מוכנים, השכיחו חולדה מורדמת בתנוחה גבית (supine) על פלטפורמת פלקסיגלס והשתמשו בחוט המנחה כדי לתלות את החיה באמצעות השיניים החותכות הקדמיות העליונות. לאחר מכן, חברו מזרק בנפח 100 µL, באורך 50 mm ובמידה 30 gauge, לאנדוסקופ סינוס של 1.9 mm בזווית של 30 מעלות. חברו את מכלול המזרק למתקן (jig) על הדופן החיצונית של האנדוסקופ.כאשר המזרק מאובטח, טענו את התכשיר לטיפול וחברו את מכלול האנדוסקופ למצלמה. לאחר מכן, השתמשו בפינצטה עם קצוות גומי כדי להסיט את הלשון הצידה והחדירו ספקולום פלסטי כדי לשמור על פתיחות הפה. הדליקו את מקור אור ההלוגן של האנדוסקופ.כאשר מקליט הווידאו פועל, טבלו את הקצה הדיסטלי של האנדוסקופ במים חמימים למשך מספר שניות כדי למזער את היווצרות העיבוי על קצה הזכוכית. לאחר מכן, הכניסו בזהירות את המחט לאזור של מיתר הקול השמאלי, תוך שימוש במשוב חזותי מהמסך כמדריך. כאשר מיתר הקול נראה במלואו, הזריקו את המחט אל ה-thyroid arytenoid השמאלי, לטרס של הקצה הלבן והמדיאלי של מיתר הקול.לחץ על הבוכנה כדי להעביר את הטיפול. אם האפיגלוטיס (מכסה הגרון) נשאר סגור וחוסם את הראות הברורה של הלרינקס (גרון), השתמש בתנועת ניקוי כלפי מעלה עם קצה המזרק כדי לשחרר בעדינות את הרקמה. לאחר מכן, שלוף את המחט והנח את החיה בכלוב המגורים שלה על פד חימום עד להגעה להרפיה מלאה.בדרך כלל, נצפה שינוי בגודל הסיבים עם הגיל בבעלי חיים שטופלו ב-Neurotrophin 4. רמה נמוכה יותר של פיברוזיס ויצירת סיבים נצפתה גם בבעלי חיים מזדקנים שטופלו ב-Neurotrophin, בעוד שכמות המצמדים העצביים-שריריים (neural muscular junctions) עלתה.ברגע ששולטים בטכניקה, ניתן להשלים הן את השתלת המשאבה האוסמוטית והן את הליך ההזרקה בתוך שעה אחת, במידה והם מבוצעים כראוי. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור להשתמש במחט בתנועה איטית ועדינה כדי למנוע שריטות ופגיעות באזור הלרינקס.

subcutaneous-neurotrophin-4-infusion-using-osmotic-pumps-or-direct

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

מאמר זה מדגים שתי שיטות שונות של הזרקת מאוד: 1) לתוך המוח (intracerebroventricular) ו 2) מערכתית (תוך ורידי) כדי להציג את סוכני טיפולית לתוך מערכת העצבים המרכזית של עכברים הילוד.

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

אנו מתארים נהלים לניהול חוזרות ונשנות של מעכבי איתות muscarinic כדי longus levator auris (LAL) השרירים של עכברים בוגרים צעירים עבור immunostaining הבאות של צמתים neuromuscular שלה (NMJs) ב wholemounts. השריר LAL יש יתרונות ייחודיים עבור...

תת עורי מינהל היריבים Muscarinic ו Triple-Immunostaining של השריר Levator Longus Auris של עכברים

מקור: Andreatta, R. D. et al., עירוי נוירוטרופין תת עורי 4 באמצעות משאבות אוסמוטיות או הזרקה ישירה של שרירים משפר את שרירי הגרון של חולדות מזדקנות. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים עירוי נוירוטרופין 4 (NTF4) במודל חולדה מזדקנת כדי לשחזר את תפקוד שרירי הגרון המושפע מניתוק עצבים הקשור להזדקנות וצמתים עצביים-שריריים מופחתים. NTF4 מפעיל התחדשות עצבית ומקדם היווצרות צומת עצבי-שרירי, ומדגיש את הפוטנציאל הטיפולי שלו לתפקוד לקוי של הגרון.

עירוי נוירוטרופין 4 להתחדשות עצב הגרון בחולדה מזדקנת

תאי ensheathing חוש ריח (OECs) הם תאי רכס עצביים המאפשרים צמיחה של תאי עצב ההרחה הראשוניים. נכס ספציפי זה יכול לשמש להשתלת תאים. אנו מציגים כאן מודל של השתלה סלולרית המבוסס על השימוש בOECs במודל פציעת עצב בגרון.

השתלה של תאי ensheathing חוש ריח להערכת החלמה תפקודית לאחר פגיעה עצבית היקפית

היעילות של ספיגה תוך שרירית והובלה לאחור של מולקולות לנוירונים מוטוריים מתאימים תלויה במיקום אתרי ההזרקה ביחס ללוחות הקצה המוטוריים (MEPs). כאן, אנו מתארים כיצד לאתר MEPs על שרירי השלד כדי לייעל את ההובלה לאחור של עוקבים לנוירונים מוטוריים.

זריקות לשריר לאורך צלחות מוטוריות סיום: גישה פולשנית להסעות קליעים נותבים ישירות לתוך מנוע נוירונים

השתלה תת עורית של משאבות האוסמוטי מספקת גישה נוחה למסירה ממושכת ועקבית של תרכובות. גישה זו נעשתה שימוש נרחב כדי ללמוד שני פרצות אב העורקים בבטן ובית חזה בעכברים.

תת עורית אנגיוטנסין II עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות גורם אבי העורקים מפרצת בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להזריק עצמיים שריר-derived בתאי גזע מהקרבה העצב בגרון חוזרים ונשנים עם העזרה של הקוצב העצבי חשמל... טכניקה חדשנית זו עשוי להיות שימושי עבור הטיפול של הסוסים חוזרים ונשנים נוירופתיה בגרון.

עצב מונחה ממריץ הזרקה של תאי גזע עצמיים ליד הסוסים עזבו חוזרים ונשנים עצב בגרון

המוצג כאן הוא פרוטוקול עבור ייצור של מערכת הוהשתלות עבור בהקלטה vivo כרונולוגי של פוטנציאל אלקטרומגנט מעורר וספונטני. המערכת חלה על חקירת שימור של שרירי הגרון לאחר פגיעת העצבים.

מערכת ולוהשתלות לכרוני בVivo האלקטרומגרפיה

פרוטוקול זה מתאר שיטות המשמשות להכנת קפלי קול חולדה למחקר נוירו-שרירי היסטוכימי.

הכנת קפל קול חולדה עבור ניתוחים עצביים שריריים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המשלב אלקטרופורציה in vivo וניתוק עצבים של שריר levator auris longus (LAL). הליך זה מאפשר לחקור את התפקיד הפוטנציאלי של חלבונים שמקורם בשריר בהתחדשות הסינפסה העצבית-שרירית.

משולב באלקטרופורציה של Vivo ועצבוב מחדש לטווח קצר של שריר השלד של שריר השלד Auris longus

אנו מציגים פרוטוקול להזרקה ישירה של עצב הנרתיק בחולדות, המאפשר העברת תרופות ישירות לעצב ללא סיבוכים לאחר ההזרקה. שיטה זו חלה על מחקרים נוירולוגיים פרה-קליניים הכוללים מניפולציה של מערכת העצבים האוטונומית. זה יכול לשמש להזרקת עצבים ישירה לעצבים אחרים בחולדות ובמינים אחרים, עם השינויים הנדרשים.

פרוטוקול הזרקת עצב תועה ישיר לחולדות

חקור שיטת הזרקת Neurotrophin 4 לשרירי הלוע בעכברים מזדקנים באמצעות משאבות אוסמוטיות או הזרקה ישירה. טכניקה זו מאפשרת שיפור תפקוד קולי והפיכת אטרופיה שרירית קשורת לגיל.

תת עורית נוירוטרופין 4 עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות או הזרקת שרירים ישירה משפר הזדקנות עכברים שרירי הלוע.

גלה סרטונים נוספים