Name: בבדיקה היסטולוגית ו echocardiographic של מורפולוגיה לב העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 22 s
Description: למד הליך אקו-קרדיוגרפי משולב עם ניתוח היסטולוגי לבחינת מורפולוגיה ותפקוד לב בעכברים טרנסגניים. שיטה זו מציעה גישה חסכונית להערכת תפקוד הלב במודלים שונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

העבודה נתמך על ידי הממשלה הצרפתית (סוכנות המחקר הלאומית, ANR) דרך התוכנית "השקעות עבור העתיד" LABEX SIGNALIFE (הפניה ANR-11-LABX-0028-01) ויוצקים על ידי מענקים ק' וו ד מ האגודה la Recherche sur le סרטן, Fondation דה פראנס, לתכנן Inserm סרטן. ד B. נ א קיבלו מלגות את Fondation pour la Médicale רשרש ומן העיר ניס, בהתאמה. Echocardiograph את המתמר היו מתבקשים המסופקים על ידי פיליפס. אנו מודים Borderie א, ס Destree, מ Cutajar-Bossert, א Landouar, א Martres, Biancardini א ו ס מ וגנר לסיוע טכני מיומן שלהם.

<ol><li>Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+of+animals%3A+ethical+issues%2C+including+welfare+concerns%5BTitle%5D)+AND+%22Can+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns.</a> Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).</li>
<li>Karl, T., Pabst, R., von Hörsten, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+mice+in+pharmacological+and+toxicological+research%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological research.</a> Exp Toxicol Pathol. 55 (1), 69-83 (2003).</li>
<li>Phoon, C. K., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+Imaging+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular Imaging in Mice.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 6 (1), 15-38 (2016).</li>
<li>Wagner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+proliferator-activated+receptor+beta+stimulation+induces+rapid+cardiac+growth+and+angiogenesis+via+direct+activation+of+calcineurin%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Peroxisome proliferator-activated receptor beta stimulation induces rapid cardiac growth and angiogenesis via direct activation of calcineurin.</a> Cardiovasc Res. 83 (1), 61-71 (2009).</li>
<li>Wagner, K. D., Vukolic, A., Baudouy, D., Michiels, J. F., Wagner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+Conditional+Vascular-Specific+Overexpression+of+Peroxisome+Proliferator-Activated+Receptor+Beta%2FDelta+Leads+to+Rapid+Cardiac+Hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22PPAR+Res%22%5BJournal%5D)">Inducible Conditional Vascular-Specific Overexpression of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Beta/Delta Leads to Rapid Cardiac Hypertrophy.</a> PPAR Res. 2016, 7631085(2016).</li>
<li>Ghanbarian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dnmt2%2FTrdmt1+as+Mediator+of+RNA+Polymerase+II+Transcriptional+Activity+in+Cardiac+Growth%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dnmt2/Trdmt1 as Mediator of RNA Polymerase II Transcriptional Activity in Cardiac Growth.</a> PLoS One. 11 (6), e0156953(2016).</li>
<li>Meguro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclosporine+attenuates+pressure-overload+hypertrophy+in+mice+while+enhancing+susceptibility+to+decompensation+and+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Cyclosporine attenuates pressure-overload hypertrophy in mice while enhancing susceptibility to decompensation and heart failure.</a> Circ Res. 84 (6), 735-740 (1999).</li>
<li>de Araújo, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+and+moderate+aerobic+training+before+allergic+asthma+induction+reduces+lung+inflammation+and+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Med+Sci+Sports%22%5BJournal%5D)">Regular and moderate aerobic training before allergic asthma induction reduces lung inflammation and remodeling.</a> Scand J Med Sci Sports. 26 (11), 1360-1372 (2016).</li>
<li>Benavides-Vallve, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+strategies+for+echocardiographic+evaluation+of+left+ventricular+function+in+a+mouse+model+of+long-term+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">New strategies for echocardiographic evaluation of left ventricular function in a mouse model of long-term myocardial infarction.</a> PLoS One. 7 (7), e41691(2012).</li>
<li>Colazzo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+left+atrium+and+left+atrial+appendage+structure+and+function%3A+echocardiographic+and+morphologic+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Murine left atrium and left atrial appendage structure and function: echocardiographic and morphologic evaluation.</a> PLoS One. 10 (4), e0125541(2015).</li>
<li>Pachon, R. E., Scharf, B. A., Vatner, D. E., Vatner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Best+anesthetics+for+assessing+left+ventricular+systolic+function+by+echocardiography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Best anesthetics for assessing left ventricular systolic function by echocardiography in mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308 (12), H1525-H1529 (2015).</li>
<li>Gao, S., Ho, D., Vatner, D. E., Vatner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiography+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Echocardiography in Mice.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 1, 71-83 (2011).</li>
<li>Mor-Avi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+and+evolving+echocardiographic+techniques+for+the+quantitative+evaluation+of+cardiac+mechanics%3A+ASE%2FEAE+consensus+statement+on+methodology+and+indications+endorsed+by+the+Japanese+Society+of+Echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Echocardiogr%22%5BJournal%5D)">Current and evolving echocardiographic techniques for the quantitative evaluation of cardiac mechanics: ASE/EAE consensus statement on methodology and indications endorsed by the Japanese Society of Echocardiography.</a> J Am Soc Echocardiogr. 24 (3), 277-313 (2011).</li>
<li>Collins, K. A., Korcarz, C. E., Lang, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+echocardiography+for+the+phenotypic+assessment+of+genetically+altered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Use of echocardiography for the phenotypic assessment of genetically altered mice.</a> Physiol Genomics. 13 (3), 227-239 (2003).</li>
<li>Rottman, J. N., Ni, G., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+evaluation+of+ventricular+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Echocardiography%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic evaluation of ventricular function in mice.</a> Echocardiography. 24 (1), 83-89 (2007).</li>
<li>Hart, C. Y., Burnett, J. C., Redfield, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+avertin+versus+xylazine-ketamine+anesthesia+on+cardiac+function+in+normal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of avertin versus xylazine-ketamine anesthesia on cardiac function in normal mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 281 (5), H1938-H1945 (2001).</li>
<li>Moran, C. M., Thomson, A. J., Rog-Zielinska, E., Gray, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+echocardiography+in+the+assessment+of+cardiac+physiology+and+disease+in+preclinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">High-resolution echocardiography in the assessment of cardiac physiology and disease in preclinical models.</a> Exp Physiol. 98 (3), 629-644 (2013).</li>
<li>Fayssoil, A., Tournoux, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+left+ventricular+function+in+mice+with+Doppler+echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Fail+Rev%22%5BJournal%5D)">Analyzing left ventricular function in mice with Doppler echocardiography.</a> Heart Fail Rev. 18 (4), 511-516 (2013).</li>
<li>Schoensiegel, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+echocardiography+in+conscious+mice%3A+training+and+primary+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Ultraschall+Med%22%5BJournal%5D)">High throughput echocardiography in conscious mice: training and primary screens.</a> Ultraschall Med. 32, Suppl 1. S124-S129 (2011).</li>
<li>Yariswamy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac-restricted+Overexpression+of+TRAF3+Interacting+Protein+2+%28TRAF3IP2%29+Results+in+Spontaneous+Development+of+Myocardial+Hypertrophy%2C+Fibrosis%2C+and+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Cardiac-restricted Overexpression of TRAF3 Interacting Protein 2 (TRAF3IP2) Results in Spontaneous Development of Myocardial Hypertrophy, Fibrosis, and Dysfunction.</a> J Biol Chem. 291 (37), 19425-19436 (2016).</li>
<li>Jara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac-Specific+Disruption+of+GH+Receptor+Alters+Glucose+Homeostasis+While+Maintaining+Normal+Cardiac+Performance+in+Adult+Male+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Cardiac-Specific Disruption of GH Receptor Alters Glucose Homeostasis While Maintaining Normal Cardiac Performance in Adult Male Mice.</a> Endocrinology. 157 (5), 1929-1941 (2016).</li>
<li>Kerr, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+and+function+of+adult+vasculature+is+sustained+by+Akt%2FJagged1+signalling+axis+in+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Stability and function of adult vasculature is sustained by Akt/Jagged1 signalling axis in endothelium.</a> Nat Commun. 7, 10960(2016).</li>
<li>Wagner, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+vessel+development+requires+activation+of+the+TrkB+neurotrophin+receptor+by+the+Wilms%27+tumor+transcription+factor+Wt1%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Coronary vessel development requires activation of the TrkB neurotrophin receptor by the Wilms' tumor transcription factor Wt1.</a> Genes Dev. 19 (21), 2631-2642 (2005).</li>
<li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Wilms%27+tumour+suppressor+Wt1+is+a+major+regulator+of+tumour+angiogenesis+and+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">The Wilms' tumour suppressor Wt1 is a major regulator of tumour angiogenesis and progression.</a> Nat Commun. 5, 5852(2014).</li>
<li>Yang, X. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+assessment+of+cardiac+function+in+conscious+and+anesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic assessment of cardiac function in conscious and anesthetized mice.</a> Am J Physiol. 277 (5 Pt 2), H1967-H1974 (1999).</li>
<li>Rottman, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+ventricular+function+assessed+echocardiographically+in+conscious+and+anesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Echocardiogr%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in ventricular function assessed echocardiographically in conscious and anesthetized mice.</a> J Am Soc Echocardiogr. 16 (11), 1150-1157 (2003).</li>
<li>Quiñones, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+quantification+of+Doppler+echocardiography%3A+a+report+from+the+Doppler+Quantification+Task+Force+of+the+Nomenclature+and+Standards+Committee+of+the+American+Society+of+Echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Echocardiogr%22%5BJournal%5D)">Recommendations for quantification of Doppler echocardiography: a report from the Doppler Quantification Task Force of the Nomenclature and Standards Committee of the American Society of Echocardiography.</a> J Am Soc Echocardiogr. 15 (2), 167-184 (2002).</li>
<li>van Laake, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+cell+therapy+and+assessment+of+cardiac+function+using+magnetic+resonance+imaging+in+a+mouse+model+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Monitoring of cell therapy and assessment of cardiac function using magnetic resonance imaging in a mouse model of myocardial infarction.</a> Nat Protoc. 2 (10), 2551-2567 (2007).</li>
<li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Wilms%27+tumor+suppressor+Wt1+is+expressed+in+the+coronary+vasculature+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">The Wilms' tumor suppressor Wt1 is expressed in the coronary vasculature after myocardial infarction.</a> FASEB J. 16 (9), 1117-1119 (2002).</li>
<li>Wagner, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+induction+and+inheritance+of+epigenetic+cardiac+hypertrophy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">RNA induction and inheritance of epigenetic cardiac hypertrophy in the mouse.</a> Dev Cell. 14 (6), 962-969 (2008).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Ruifrok, A. C., Johnston, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+histochemical+staining+by+color+deconvolution%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Quant+Cytol+Histol%22%5BJournal%5D)">Quantification of histochemical staining by color deconvolution.</a> Anal Quant Cytol Histol. 23 (4), 291-299 (2001).</li>
<li>Lazzeroni, D., Rimoldi, O., Camici, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+Left+Ventricular+Hypertrophy+to+Dysfunction+and+Failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+J%22%5BJournal%5D)">From Left Ventricular Hypertrophy to Dysfunction and Failure.</a> Circ J. 80 (3), 555-564 (2016).</li>
<li>Ismail, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistologic+labeling+of+murine+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunohistologic labeling of murine endothelium.</a> Cardiovasc Pathol. 12 (2), 82-90 (2003).</li>
<li>Benton, R. L., Maddie, M. A., Minnillo, D. R., Hagg, T., Whittemore, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Griffonia+simplicifolia+isolectin+B4+identifies+a+specific+subpopulation+of+angiogenic+blood+vessels+following+contusive+spinal+cord+injury+in+the+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Griffonia simplicifolia isolectin B4 identifies a specific subpopulation of angiogenic blood vessels following contusive spinal cord injury in the adult mouse.</a> J Comp Neurol. 507 (1), 1031-1052 (2008).</li>
<li>Ayoub, A. E., Salm, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+morphological+diversity+of+microglia+in+the+activated+hypothalamic+supraoptic+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Increased morphological diversity of microglia in the activated hypothalamic supraoptic nucleus.</a> J Neurosci. 23 (21), 7759-7766 (2003).</li>
<li>Maddox, D. E., Shibata, S., Goldstein, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulated+macrophages+express+a+new+glycoprotein+receptor+reactive+with+Griffonia+simplicifolia+I-B4+isolectin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Stimulated macrophages express a new glycoprotein receptor reactive with Griffonia simplicifolia I-B4 isolectin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 79 (1), 166-170 (1982).</li>
<li>dela Paz, N. G., D'Amore, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arterial+versus+venous+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Arterial versus venous endothelial cells.</a> Cell Tissue Res. 335 (1), 5-16 (2009).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

שיטות שונות פותחו כדי להעריך את מבנה הלב ותפקודו בעכברים, כולל אקוקרדיוגרפיה חדות משופרת MRI, מיקרו CT, סריקת PET. בשל העלות האפקטיביות שלה פשטות, אקו הוא הטכניקה הנפוצה ביותר לניתוח פונקציונלי עכברים11. באופן כללי, בגלל גודלו הקטן של הלב ואת תדירות גבוהה של קצב הלב בעכברים, מתמרים עם תדירות &#62; 10 מגה-הרץ אמור לשמש, למרות מידות מוצלחת דווחו עם 8 או 9 מגה-הרץ מתמרים4,7 . כמו תפקוד הלב קשורה קשר הדוק טמפרטורת הגוף ותדירות לב, חשוב לשלוט פ...

מגוון רחב של מודלים מהונדס גנטית עכבר זמינים, מספר מחקרים בעכברים גבוהה1,2. אקוקרדיוגרפיה MRI הגישות הנפוצות עבור אפיון פנוטיפי מורפולוגיה של מודלים אלה עכבר3ותפקוד הלב בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. המטרה של פרוטוקול הציג היא לנתח את תפקוד הלב ואת מורפולוגיה בעכברים בוגרים. הוא משלב echocardiographic, היסטולוגית, מדידות immunohistochemical. בדיקה echocardiographic נעשה שימוש נרחב עכברים4,5,6,7,8,9,10,11, 12. . Pachon et al. 11 מזוהה 205 מחקרים שפורסמו בזרימת הדם, זרימת הדם מחקר, כתב העת האמריקאי לפיזיולוגיה - פיזיולוגיה הדם והלבומחקר לב וכלי דם בין 2012 ו 2015 זה שימוש בבדיקה echocardiographic בבעלי חיים.
אקוקרדיוגרפיה משמש לזיהוי פנוטיפים לב עכברים מהונדסים5,6,13,14,15,16, 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22, כמו גם וניתוח תפקוד הלב אצל היפרטרופיה הנוצרות על-ידי עומס יתר כרונית, איסכמיה בשריר הלב, ומודלים של שריר הלב בעכברים (נבדקה12). ציוד אקוקרדיוגרפיה משופר מאפשר המדד הסטנדרטי של שמאל-חדרית (LV) בהתכווצות והתרחבות של מידות, הדמיה דופלר רקמות, ניגודיות שריר הלב echography את ההערכה של הפונקציה אזוריים LV ושמורת כלילית 12. באופן אידיאלי, יש לבצע בדיקה echocardiographic בעכברים בהכרה כדי למנוע את ההשפעות השליליות של הרדמה על הפונקציה כויץ, שליטה רפלקס אוטונומי, ולדרג את הלב11. עם זאת, גישה זו הוא מוגבל על ידי הדרישה לאמן את החיות; קשיים בשמירה על טמפרטורת הגוף יציב; תנועת חפצים; לחץ; תדרים לב גבוהה מאוד; את הדרישה לפחות שני חוקרים כדי לבצע את הניסוי, במיוחד אם מספר גדול של בעלי חיים נמצאים תחת חקירה. מעניין, מחקר שנערך לאחרונה דיווח אין הבדלים בפרמטרים echocardiographic מיומנים ובעלי לא מאומן19. אנו מבצעים מדידות echocardiographic בעכברים מורדם. פרוטוקולי הרדמה שונות יידונו להלן.
למרות אקוקרדיוגרפיה ברזולוציה תקנית (&#62; 10 מגה-הרץ) היא מספקת מידה LV סיסטולי, דיאסטולי מידות, תפקוד הלב בעכברים מבוגרים, השיטה היא מוגבלת בתיאור שלה התופעות המבנית הבסיסית. לפיכך, אנו משלבים את המידות ויוו עם היסטולוגית וניתוחים immunohistological כדי למדוד, לדוגמה, צפיפות cardiomyocyte בקוטר של כלי השיט. חקירות היסטולוגית ו immunohistological אחרים, כגון הקביעה של התפשטות, בחינת אפופטוזיס, מדידות גודל לאוטם, קביעה של פיברוזיס, ועל חופש הביטוי סמן ספציפיים, ניתן גם לבצע את אותו סוג של עובד הרקמה אך אינם הנושא של פרוטוקול זה. השילוב של ויוו echocardiographic בדיקה היסטולוגית ניתוחים מספק תובנות נוספות המשמשות כבסיס שינויים מבניים. בצעד נוסף, אנחנו יכולים להשלים מדידות אלה עם חקירות מולקולרית ומבניים אולטרה. ניתוחים היסטולוגית לא רק להשלים את הבדיקה echocardiographic, אלא גם להפוך חיוניות כאשר הרזולוציה של אקוקרדיוגרפיה אינה מספיקה. זהו המצב, מודלים של עכברים מהונדסים כי הם מתחלקים קטלני23,24.

<table><tbody><tr><td>נבט חיטה אגלוטינין (WGA) מצומד טטרמתילרודמין</td><td>טכנולוגיות חיים, בדיקות מולקולריות</td><td>W849</td><td></td></tr><tr><td>עז ביוטינילציה אנטי-ארנב נוגדן IgG</td><td>Vectorlabs</td><td>BA-1000</td><td></td></tr><tr><td>אבידין / ביוטין ערכת חסימת</td><td>Vectorlabs</td><td>SP-2001</td><td></td></tr><tr><td>ערכת VECTASTAIN Elite ABC HRP (פרוקסידאז, סטנדרטי)</td> <td>Vectorlabs</td><td>PK-6100</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Antifade מדיום הרכבה עם DAPI</td><td>Vectorlabs</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>SIGMAFAST 3,3'-Diaminobenzidine טבליות</td><td>Sigma</td><td>D4168</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מי חמצן</td><td>Sigma</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Pecam-1 (CD31) נוגדן</td><td>Abcam</td><td>ab28364</td><td></td></tr><tr><td>ג'ל העברת אולטרסאונד, ג'ל Aquasonic 100</td><td>Parker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>בדיקת אולטרסאונד ליניארית, אקו לב L15-7io</td><td>Philips Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, IE33 xMATRIX</td> מיקרוסקופ בריאות <td></td><td></td>של <td>פיליפס</td></tr>, <tr><td>ערכת מסנני פלואורסצנציה Leica</td><td></td><td></td> DMi8 Leica ערכת מסננים DAPI Leica 11525304 <td></td></tr> מצלמה דיגיטלית <tr><td>TxR</td><td>Leica</td><td>11525310</td><td></td></tr>, <tr><td></td><td></td> SPOT RT3 צבע מחוון ספוט <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> תוכנת הדמיית הדמיה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, SPOT 5.2 תוכנה מתקדמת ובסיסית</td> מחשב <td>הדמיה</td><td></td><td></td>נקודתית</tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td></td> של Dell <td></td> Fine Science Tools 14028-10 <td></td></tr><tr><td>מספריים גדולים</td><td>Fine Science Tools</td><td>14501-14</td><td></td></tr><tr><td>להבי אזמל</td><td>Fine Science</td><td>Tools 10023-00</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11650-10</td><td></td></tr><tr><td>מכונת גילוח מכרסמים</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>34-0243</td><td></td></tr><tr><td>קלטות להטמעת פרפין</td><td>סאקורה</td><td>4155F</td><td></td></tr><tr><td>ניטרלי מאגר פורמלין</td><td>סאקורה</td><td>8727</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>סאקורה</td><td>8733</td><td></td></tr><tr><td>Paraffine TEK III</td><td>סאקורה</td><td>4511</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר הטבעה אוטומטי, תחנת הטמעת פרפין Tissue-Tek VIP</td><td>Sakura</td><td>6032</td><td></td></tr> להבי מיקרוטום <tr><td>Tissue-Tek TEC 5</td><td>Sakura</td><td>5229</td><td></td></tr>, שקופיות מיקרוסקופיה <tr><td>Accu-Edge S35</td><td>Sakura</td><td>4685</td><td></td></tr>, תלושי כיסוי <tr><td>Tissue-Tek</td><td>Sakura</td><td>9533</td><td></td></tr>, <tr><td>Tissue-Tek</td><td>Sakura</td><td>9582</td><td></td></tr><tr><td>הרכבה בינונית Tissue-Tek</td><td>Sakura</td><td>1408</td><td></td></tr><tr><td>קופסאות שקופיות</td><td>Sakura</td><td>3958</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת אאוזין</td><td>Sakura</td><td>8703</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת המטוקסילין</td><td>Sakura</td><td>8711</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוטום, אמבט</td> מים <td>RM2125RT Leica</td><td>720-1880 (VWR),</td><td></td></tr> <tr><td>Leica HI1210</td><td>Leica</td><td>720-0113 (VWR)</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>VWR</td><td>ACRO444220050</td><td></td></tr><tr><td>צינורות 15 מ"ל</td><td>VWR</td><td>734-0451</td><td></td></tr><tr><td>צנצנות ויטראז'</td><td>VWR</td><td>MARI4220004</td><td></td></tr><tr><td>צנצנות מכתים</td><td>VWR</td><td>MARI4200005</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור</td><td>קלסר</td><td>9010-0012</td><td></td></tr><tr><td>טבליות מי חמצן DAB ואוריאה, SIGMAFAST 3,3&prime;-טבליות דיאמינובנזידין</td><td>סיגמא</td><td>D4293</td><td></td></tr><tr><td>PBS (10X)</td><td>תרמו פישר 70011044</td><td></td><td></td> מדעי</tr></tbody></table>

בבדיקה היסטולוגית ו echocardiographic של מורפולוגיה לב העכבר

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

מספר גדל והולך של מודלים מהונדס גנטית העכבר הפך זמין בשנים האחרונות. יתר על כן, מספר מחקרים שבוצעו בעכברים הוא גבוה. אפיון פנוטיפי של מודלים אלה העכבר גם דורש הבחינה של תפקוד הלב ואת מורפולוגיה. אקוקרדיוגרפיה דימות תהודה מגנטית (MRI) גישות נפוצות כדי לאפיין מורפולוגיה בעכברים ותפקוד הלב בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. ציוד Echocardiographic ו- MRI המתמחה בשימוש מכרסמים קטנים הוא יקר ודורש שטח ייעודי. פרוטוקול זה מתאר מידות הלב בעכברים באמצעות מערכת echocardiographic קליניים גשש כלי דם אנושי 15 מגה-הרץ. המדידות מבוצעות על עכברים בוגרים מורדם. רצפי תמונות לפחות שלושה מוקלט, נותחו עבור כל בעל חיים במצב M בתצוגת ציר קצר מתחת. לאחר מכן מבוצעת בדיקה היסטולוגית הלב, קטרים cardiomyocyte נקבעים ב hematoxylin-agglutinin eosin - או נבט חיטה (WGA)-פרפין סעיפים מוכתמים. צפיפות כלי הוא נחוש morphometrically אחרי immunostaining Pecam-1. הפרוטוקול עבר בהצלחה שימושית ללימודים תרופתי ושונה גנטי מודלים בעלי חיים בתנאים בסיסית, כמו גם לאחר ניסיוני אוטם שריר הלב על ידי מצדו קבוע של השמאלי הקדמי היורד עורקים ( LAD). מניסיוננו, חקירה echocardiographic מוגבל לבעלי מרדימים, הוא ריאלי בעכברים בוגרים במשקל של פחות 25 גרם.

איור 1, הקלטות echocardiographic נציג מדגימים את התועלת אקוקרדיוגרפיה כדי לזהות פנוטיפים הלב בעכברים מהונדסים. ניתן בקלות לזהות את ההבדל בין עכבר עם תפקוד הלב תקין (איור 1 א') חיה עם החדר השמאלי מורחבים, LV מופחתת פונקציה (איור 1B). איור 2 מציג ההשוואה של cardiomyocyte מידות קוטר בבעלי חיים בלי (איור 2 א) ועם היפרטרופיה (<strong class="xfig"...

בדיקה echocardiographic משמש לעתים קרובות בעכברים. מכשירי אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה יקר פותחו למטרה זו. פרוטוקול זה מתאר הליך echocardiographic סבירים בשילוב עם morphometric היסטולוגית ניתוחים כדי לקבוע מורפולוגיה לב.

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...

המטרה הכללית של בדיקה אקו-לבית זו בשילוב עם חקירות היסטולוגיות היא לבחון את תפקוד הלב והמורפולוגיה שלו במודלים שונים של עכברים טרנסגניים תחת תנאי בסיס ותנאים פתופיזיולוגיים. ראשית, תוך כדי החזקה קלה של העכבר בזנבו, השתמש במאזניים סטנדרטיים למעבדה כדי לקבוע את משקל הגוף של החיה. לאחר הרדמת העכבר בהתאם לפרוטוקול הכתוב, לחץ קלות על כף רגל אחורית ובדוק אם הרגל נסוגה.השתמשו במכונת גילוח מסחרית למכרסמים כדי לגלח את הצד השמאלי של בית החזה ואת בית השחי השמאלי. מקמו את בעל החיים על פד חימום המכוון ל-40 עד 42 °C בתנוחה שכיבה שמאלית רדודה, כאשר הראש נמצא בשעה 12 והזנב בשעה 6. לאחר מכן, השתמשו בסרט דביק כדי לקבע את הזרוע השמאלית, הרגל השמאלית והזנב.מרחו ג'ל לאקוקרדיוגרפיה שחומם מראש על החזה הגולח ועל ראש המתמר. לאחר מכן, הניחו את מתמר האקוקרדיוגרף במיקום פאראסטרנלי שמאלי (parasternal left), תוך כיוונו לצד ימין של הצוואר כדי לקבל תמונת חתך אורכי פאראסטרנלי דו-ממדי בגובה השריר הפפילרי. לאחר מכן, סובבו את המתמר 90 מעלות עם כיוון השעון כדי לקבל תמונת חתך רוחבי.קבעו הגדרה של עומק מינימלי וזום כדי למקסם את איכות התמונה ואת קצב הפריימים. הגדירו את מהירות הסריקה (sweep speed) למקסימום. הקליטו תמונות M-mode מודרכות בדו-ממד בתצוגת גישה קצרה (short axis view).הקליטו לפחות שלוש סדרות של שלושה חצאי-לולאות (semiloops) של פעימות לב עבור כל חיה. לאחר קבלת הקלטות מוצלחות, הסירו את הסרט מהגפיים ומהזנב. נגבו את ג'ל האקו-קרדיוגרפיה ממשטח החממה של בית החזה של העכבר ומהמתמר.השאירו את העכבר תחת תצפית על משטח החימום, כשהוא מכוסה ברקמה כדי למנוע חשיפה מיותרת לאור ואיבוד חום, עד שיתעורר. לאחר מכן, החזירו את החיה לכלוב. נתחו את תמונות ה-M-mode שהוקלטו מנקודת מבט של גישה קצרה (short access view) כדי לקבוע את ממדי ותפקוד החדר השמאלי (LV).באמצעות זיהוי הממשק בין הרקמה לדם בתמונות השמורות, מדדו את עובי הדופן הקדמית של ה-LV בסיסטולה ובדיאסטולה, את הקטרים הפנימיים של ה-LV בסוף הסיסטולה ובסוף הדיאסטולה, ואת עובי הדופן האחורית של ה-LV בסיסטולה ובדיאסטולה. מדדו את הממדים הדיאסטוליים בנקודת הזמן של הממדים הדיאסטוליים המקסימליים הנראים של ה-LV, ואת ממדי ה-LV בסוף הסיסטולה בסיום התנועה הסיסטולית הקדמית ביותר של הדופן האחורית של ה-LV. הקישו על מסך המגע על סמל הניתוח (analyze) ולאחר מכן על סמל ה-LVAWd.מקם את הקליפר האלקטרוני על הממשק שבין חלל החדר הימני לדופן הקדמית של ה-LV בדיאסטולה. לאחר מכן, מקם את הקליפר האלקטרוני על הממשק שבין הדופן הקדמית של ה-LV לחלל ה-LV כדי לקבל את עובי הדופן הקדמית של ה-LV בדיאסטולה. מקם את הקליפר על הממשק שבין חלל ה-LV לדופן האחורית של ה-LV כדי לקבל את הקוטר הפנימי והדיאסטולי של ה-LV.מקמו את המדיד על הממשק שבין הדופן האחורית של ה-LV לבין הפריקרדיום כדי לקבל את עובי הדופן האחורית של ה-LV בדיאסטולה. עבור מימדי ה-LV בסיסטולה, הקישו על מסך המגע על סמל ה-LVAWs ומקמו את המדיד האלקטרוני על הממשק שבין חלל החדר הימני לדופן הקדמית של ה-LV בסיסטולה. מקמו את המדיד האלקטרוני על הממשק שבין הדופן הקדמית של ה-LV לבין חלל ה-LV כדי לקבל את עובי הדופן הקדמית של ה-LV בסיסטולה.מקם את הסמן על הממשק שבין חלל ה-LV לבין הדופן האחורית של ה-LV כדי לקבל את הקוטר הפנימי והסיסטולי של ה-LV. מקם את הסמן על הממשק שבין הדופן האחורית של ה-LV לבין הפריקרדיום כדי לקבל את עובי הדופן האחורית הסיסטולית של ה-LV. לאחר הקרבת בעלי החיים בהתאם לפרוטוקול הכתוב, מדוד את משקל גופם.לאחר מכן, השתמשו במטבון אלכוהול 70% כדי לחטא את החזה והבטן. בצעו חיתוך רוחבי בעור, סנטימטר אחד דיסטלית לעצם הסטרנום. לאחר מכן, באמצעות פינצטה קהה, הסירו את העור מהבית חזה תוך תנועה בכיוון הראש.בעזרת פינצטה עדינה, החזיקו בעדינות את עצם החזה (sternum) ופתחו את הסרעוף על ידי הכנסת הקצה הקהה של מספריים עדינים. גזרו את כלוב הצלעות משני הצדדים במקביל לעצם החזה. לאחר מכן, הזיזו את עצם החזה לכיוון הראש.אתר את הלב בתוך בית החזה. בעזרת פינצטה עדינה, אחז את גזע כלי הדם של הלב והשתמש במספריים עדינים כדי לחתוך מתחת לאיבר. לאחר מכן, מדוד את משקל הלב וחשב את היחס בין משקל הלב למשקל הגוף.העבירו את הלב לשני מיליליטר של תמיסת פורמלין (Formalin) ניטרלית עם בופר בריכוז 10% בתוך מבחנה של 15 מיליליטר, וקבעו את האיבר בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס למשך לילה. לביצוע צביעה ב-Wheat Germ Agglutinin או WGA, הניחו את השקופיות שהוכנו מראש ב-WGA המשפיע עם Tetramethylrhodamine והדגירו את הדגימות בטמפרטורת החדר בתא לחות למשך שישים דקות. השתמשו ב-PBS כדי לשטוף את הדגימות שלוש פעמים למשך חמש דקות בכל פעם.לאחר מכן, השתמשו בתסבך למשטחי פלואורסצנציה המכיל DAPI כדי להכין את חיתוכי הרקמה על זכוכית. אחסנו אותם בטמפרטורה של ארבעה מעלות צלזיוס בחושך לפני הניתוח. הקלטות אקו-קרדיוגרפיות מייצגות אלו מדגימות את התועלת של אקו-קרדיוגרפיה בזיהוי פנוטיפים לבביים בעכברים שעברו שינוי גנטי.ניתן לזהות בקלות את ההבדל בין עכבר בעל תפקוד לבבי תקין לבין בעל חיים עם חדר שמאלי (LV) מורחב ותפקוד LV מופחת. מוצג כאן השוואה של מדידות קוטר קרדיומיוציטים בבעלי חיים ללא ובעם היפרטרופיה של הלב, תוך שימוש בחתכי לב מפראפין שנצבעו ב-H&E ומדידות של חתכים אורכיים של רקמת לב. איור זה מדגים את מדידת הקטרים הרוחביים של הקרדיומיוציטים באמצעות חתכי פראפין מהלבבות של עכברי ביקורת ובעלי חיים עם היפרטרופיה של הלב, שנצבעו ב-WGA.פאנלים אלו מדגימים את התועלת של צביעה אימונוהיסטוכימית ל-PECAM1 של חתכי לב לקביעת צפיפות כלי הדם ברקמת לב תקינה ובלבבות עם אנגיוגנזה מוגברת.

echocardiographic-histological-examination-cardiac-morphology

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אקו Transthoracic מציעה שיטה לא פולשנית להערכת תפקוד הלב בעכברים. שילוב של אולטראסאונד דופלר שיטות הדמיה ניתן להשתמש כדי להשיג מדידות ממדי של הלב ואת זרימת הדם intracardiac, אשר יחדיו מספקים הערכה של הסיסטולי והדיאסטולי לב וביצועים.

אקו Transthoracic ב עכברים

וידאו זה מדגים שימוש רכבת רכוב בתדירות גבוהה בדיקה אולטרסאונד לבצע אקו על העכבר בהרדמה. שיטות מתארים הן מדידות דו מימדי ו-M-mode קונבנציונלי של תפקוד הלב בנוסף, הכלים החדשים חזקים יותר כגון צבע דופלר, ניתוח המתח, כמו גם בניגוד הדמיה בכלל ממוקדות.

אקו Murine והדמיה אולטראסאונד

סרטון זה מתאר פרוטוקול לביצוע אקוקרדיוגרפיה על עכבר מעבדה.

אקוקרדיוגרפיה של עכבר: טכניקה לא פולשנית להערכת מורפולוגיה של הלב

מאמר זה מספק פרוטוקול להערכת אקו בגודל חדר ממני ויתר לחץ דם ריאתי בעכברים. יישומים כוללים קביעת הפנוטיפ והערכה סידורי במהונדס ומודלי עכבר מושרה רעל של קרדיומיופתיה ומחלת כלי דם ריאתי.

אקו הערכה של הלב הימני בעכברים

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך לב פולשנית לשינויים מבניים ותפקודיים במודל של עכברים של מחלת לב נוצר על ידי התכווצות רוחבי אבי העורקים, באמצעות B ו- M-mode אקוקרדיוגרפיה וצבע / הדמיה דופלר גל הדופק.

שינויים הערכה לב מורפולוגי תפקודי עכבר דגם של מועקה הרוחבית אב עורקים על ידי הדמית אקו

פרוטוקול זה מספק תיאור מפורט של הגישה האקו-קרדיוגרפית לפנוטיפ מקיף של תפקוד הלב ומסתמי הלב בעכברים.

גישות פרוטוקולים אקו לאפיון פנוטיפי מקיף של מסתמית מחלות לב בעכברים

הפרוטוקול הבא מתאר את המתודולוגיה לרכישה וניתוח תמונות אקו על מנת לקבל את נפח פרוזדורי שמאל (LAV), אב עורקי קוטר (Ao), ואת עורק ריאה (PA) בקוטר בעכברים. טכניקה זו היא הליך פולשני, שאינו מסוף המאפשר הערכה של תפקוד לב-ריאה.

אקו Murine של השמאל אטריום, אבי העורקים, ו עורק הריאה

כאן אנו מתארים ומשווים שתי עמדות לקבלת השקפה של ארבעה קאמריים בעכברים. תנוחות אלה מאפשרות את כימות התפקוד הימני של הפונקציה, לספק תוצאות דומות, ניתן להשתמש לסירוגין.

המדידה האקוקרדיוגרפית של פרמטרים של הימני החדרית בעכבר

בפרוטוקול זה, אנו מתארים הליכים באיכות ובכמת לנתח פנוטיפים התפתחותיים בעכברים הקשורים למומים מולדים לב.

ניתוח של פגמים לב מולדים בעוברי עכבר באמצעות שיטות היסטולוגית איכותית וכמותית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הערכה אקוקרדיוגרפית של מורפולוגיה של חדר שמאל, תפקוד וזרימת דם כלילית בעכברים בני 7 ימים.

אפיון אקוקרדיוגרפי של מבנה החדר השמאלי, תפקודו וזרימה כלילית בעכברים ילודים

מאמר זה מפרט את שיטות האבחון של מחלת לב מולדת (CHD) באמצעות אקוקרדיוגרפיה עוברית, נקרופסיה, ולכידת תמונה פלואורסצנטית אפיסקופית (EFIC) באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי אפיסקופי (ECM) ואחריו שחזור תלת ממדי (3D).

צינור לאפיון מומי לב מבניים בעכבר העוברי

למד הליך אקו-קרדיוגרפי משולב עם ניתוח היסטולוגי לבחינת מורפולוגיה ותפקוד לב בעכברים טרנסגניים. שיטה זו מציעה גישה חסכונית להערכת תפקוד הלב במודלים שונים.

בבדיקה היסטולוגית ו echocardiographic של מורפולוגיה לב העכבר

גלה סרטונים נוספים