Name: 4-כלי דגימה גישה ללימודים אינטגרטיביים של הפיזיולוגיה השליה האדם בויבו (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 17 s
Description: למדו שיטת דגימת ארבעה כלי דם לחקר הפיזיולוגיה השליתית האנושית בחיים. גישה זו משלבת דגימות דם, אולטרסאונד ודגימות רקמה לניתוח מטבוליזם והעברה של חומרים מזינים בין האם לעובר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

בראש ובראשונה, אנו מודים בכנות לאמהות שהשתתפו בפרויקט זה. לאחר מכן, אנו מכירים בכל הצוות אשר סייע ו להקל על הליך הדגימה, מרדים, אחות הרדמה אחיות כירורגית. הפרויקט לא היה אפשרי ללא מימון של דרום מזרח נורבגיה אזור הבריאות האזורי ואת היחידה המייעצת הנורבגית על בריאות האישה, אוניברסיטת אוסלו מימון מקומי המסופק על ידי בית החולים של אוניברסיטת אוסלו.

<ol><li>Jansson, T., Powell, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+placenta+in+fetal+programming%3A+underlying+mechanisms+and+potential+interventional+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches.</a> Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).</li>
<li>Hanson, M. A., Gluckman, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+developmental+conditioning+of+later+health+and+disease%3A+physiology+or+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Early developmental conditioning of later health and disease: physiology or pathophysiology.</a> Physiol Rev. 94 (4), 1027-1076 (2014).</li>
<li>Guttmacher, A. E., Spong, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+placenta+project%3A+it%27s+time+for+real+time%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">The human placenta project: it's time for real time.</a> Am J Obstet Gynecol. 213, 4 Suppl 3-5 (2015).</li>
<li>Battaglia, F. C., Regnault, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+transport+and+metabolism+of+amino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Placental transport and metabolism of amino acids.</a> Placenta. 22 (2-3), 145-161 (2001).</li>
<li>Hay, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental-fetal+glucose+exchange+and+fetal+glucose+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Trans+Am+Clin+Climatol+Assoc%22%5BJournal%5D)">Placental-fetal glucose exchange and fetal glucose metabolism.</a> Trans Am Clin Climatol Assoc. 117, 321-339 (2006).</li>
<li>Woollett, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Transport+of+maternal+cholesterol+to+the+fetal+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Review: Transport of maternal cholesterol to the fetal circulation.</a> Placenta. 32, Suppl 2 218-221 (2011).</li>
<li>Prenton, M. A., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Umbilical+vein-artery+and+uterine+arterio-venous+plasma+amino+acid+differences+%28in+the+human+subject%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Obstet+Gynaecol+Br+Commonw%22%5BJournal%5D)">Umbilical vein-artery and uterine arterio-venous plasma amino acid differences (in the human subject).</a> J Obstet Gynaecol Br Commonw. 76 (5), 404-411 (1969).</li>
<li>Cetin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+and+erythrocyte+amino+acids+in+mother+and+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Neonate%22%5BJournal%5D)">Plasma and erythrocyte amino acids in mother and fetus.</a> Biol Neonate. 60 (2), 83-91 (1991).</li>
<li>Filshie, G. M., Anstey, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distribution+of+arachidonic+acid+in+plasma+and+tissues+of+patients+near+term+undergoing+elective+or+emergency+Caesarean+section%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Obstet+Gynaecol%22%5BJournal%5D)">The distribution of arachidonic acid in plasma and tissues of patients near term undergoing elective or emergency Caesarean section.</a> Br J Obstet Gynaecol. 85 (2), 119-123 (1978).</li>
<li>Haberey, P. P., Schaefer, A., Nisand, I., Dellenbach, P. The fate and importance of fetal lactate in the human placenta -a new hypothesis. J Perinat Med. 10 (2), 127-129 (1982).</li>
<li>Prendergast, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+production+by+the+human+placenta+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Glucose production by the human placenta in vivo.</a> Placenta. 20 (7), 591-598 (1999).</li>
<li>Metzger, B. E., Rodeck, C., Freinkel, N., Price, J., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplacental+arteriovenous+gradients+for+glucose%2C+insulin%2C+glucagon+and+placental+lactogen+during+normoglycaemia+in+human+pregnancy+at+term%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Transplacental arteriovenous gradients for glucose, insulin, glucagon and placental lactogen during normoglycaemia in human pregnancy at term.</a> Placenta. 6 (4), 347-354 (1985).</li>
<li>Zamudio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoglycemia+and+the+origin+of+hypoxia-induced+reduction+in+human+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoglycemia and the origin of hypoxia-induced reduction in human fetal growth.</a> PLoS One. 5 (1), 8551(2010).</li>
<li>Holme, A. M., Roland, M. C., Lorentzen, B., Michelsen, T. M., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+glucose+transfer%3A+a+human+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Placental glucose transfer: a human in vivo study.</a> PLoS One. 10 (2), 0117084(2015).</li>
<li>Holme, A. M., Roland, M. C., Henriksen, T., Michelsen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+uteroplacental+release+of+placental+growth+factor+and+soluble+Fms-like+tyrosine+kinase-1+in+normal+and+preeclamptic+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">In vivo uteroplacental release of placental growth factor and soluble Fms-like tyrosine kinase-1 in normal and preeclamptic pregnancies.</a> Am J Obstet Gynecol. 215 (6), 781-782 (2016).</li>
<li>Paasche Roland, M. C., Lorentzen, B., Godang, K., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uteroplacental+arterio-venous+difference+in+soluble+VEGFR-1+%28sFlt-1%29%2C+but+not+in+soluble+endoglin+concentrations+in+preeclampsia%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Uteroplacental arterio-venous difference in soluble VEGFR-1 (sFlt-1), but not in soluble endoglin concentrations in preeclampsia.</a> Placenta. 33 (3), 224-226 (2012).</li>
<li>Brar, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uteroplacental+unit+as+a+source+of+elevated+circulating+prorenin+levels+in+normal+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Uteroplacental unit as a source of elevated circulating prorenin levels in normal pregnancy.</a> Am J Obstet Gynecol. 155 (6), 1223-1226 (1986).</li>
<li>Myatt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategy+for+standardization+of+preeclampsia+research+study+design%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Strategy for standardization of preeclampsia research study design.</a> Hypertension. 63 (6), 1293-1301 (2014).</li>
<li>Kiserud, T., Rasmussen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+repeat+measurements+affect+the+mean+diameter+of+the+umbilical+vein+and+the+ductus+venosus%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">How repeat measurements affect the mean diameter of the umbilical vein and the ductus venosus.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 11 (6), 419-425 (1998).</li>
<li>Burton, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+sample+collection+for+placental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Optimising sample collection for placental research.</a> Placenta. 35 (1), 9-22 (2014).</li>
<li>Illsley, N. P., Wang, Z. Q., Gray, A., Sellers, M. C., Jacobs, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+preparation+of+paired%2C+syncytial%2C+microvillous+and+basal+membranes+from+human+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Simultaneous preparation of paired, syncytial, microvillous and basal membranes from human placenta.</a> Biochim Biophys Acta. 1029 (2), 218-226 (1990).</li>
<li>Staff, A. C., Ranheim, T., Khoury, J., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+contents+of+phospholipids%2C+cholesterol%2C+and+lipid+peroxides+in+decidua+basalis+in+women+with+preeclampsia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Increased contents of phospholipids, cholesterol, and lipid peroxides in decidua basalis in women with preeclampsia.</a> Am J Obstet Gynecol. 180 (3), Pt 1 587-592 (1999).</li>
<li>Catalano, P. M., Thomas, A. J., Avallone, D. A., Amini, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthropometric+estimation+of+neonatal+body+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Anthropometric estimation of neonatal body composition.</a> Am J Obstet Gynecol. 173 (4), 1176-1181 (1995).</li>
<li>Ellis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body-composition+assessment+in+infancy%3A+air-displacement+plethysmography+compared+with+a+reference+4-compartment+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Body-composition assessment in infancy: air-displacement plethysmography compared with a reference 4-compartment model.</a> Am J Clin Nutr. 85 (1), 90-95 (2007).</li>
<li>Haugen, G., Kiserud, T., Godfrey, K., Crozier, S., Hanson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+and+umbilical+venous+blood+supply+to+the+liver+in+the+human+fetus+near+term%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Portal and umbilical venous blood supply to the liver in the human fetus near term.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 24 (6), 599-605 (2004).</li>
<li>Acharya, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+validation+of+uterine+artery+volume+blood+flow+measurement+by+Doppler+ultrasonography+in+pregnant+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Experimental validation of uterine artery volume blood flow measurement by Doppler ultrasonography in pregnant sheep.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 29 (4), 401-406 (2007).</li>
<li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate-glutamine+cycle+and+exchange+in+the+placenta-fetus+unit+during+late+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Amino+Acids%22%5BJournal%5D)">Glutamate-glutamine cycle and exchange in the placenta-fetus unit during late pregnancy.</a> Amino Acids. 47 (1), 45-53 (2015).</li>
<li>Tuckey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone+synthesis+by+the+human+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Progesterone synthesis by the human placenta.</a> Placenta. 26 (4), 273-281 (2005).</li>
<li>Simmons, M. A., Meschia, G., Makowski, E. L., Battaglia, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+metabolic+response+to+maternal+starvation%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Fetal metabolic response to maternal starvation.</a> Pediatr Res. 8 (10), 830-836 (1974).</li>
<li>Simmons, M. A., Jones, M. D., Battaglia, F. C., Meschia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+effect+on+fetal+glucose+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Insulin effect on fetal glucose utilization.</a> Pediatr Res. 12 (2), 90-92 (1978).</li>
<li>Bujold, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+supporting+that+the+excess+of+the+sVEGFR-1+concentration+in+maternal+plasma+in+preeclampsia+has+a+uterine+origin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Matern+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Evidence supporting that the excess of the sVEGFR-1 concentration in maternal plasma in preeclampsia has a uterine origin.</a> J Matern Fetal Neonatal Med. 18 (1), 9-16 (2005).</li>
<li>Jansson, T., Aye, I. L., Goberdhan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+mTORC1+signaling+in+placental+nutrient-sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">The emerging role of mTORC1 signaling in placental nutrient-sensing.</a> Placenta. 33, Suppl 2 23-29 (2012).</li>
<li>Cetin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+transport+of+amino+acids+in+normal+and+growth-restricted+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Obstet+Gynecol+Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">Placental transport of amino acids in normal and growth-restricted pregnancies.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110, Suppl 1 50-54 (2003).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

<html> שיטת הדגימה של 4 כלי השיט היא רלוונטית לשלוש מטרות עיקריות. ראשית, ניתן להשתמש בו כדי ללמוד כיצד חומרים ספציפיים נלקחים על ידי השליה בצד האימהי ואולי מועברים למחזור הטבור ולעובר, כפי שמוצג על ידי גלוקוז שלנו ומחקרים חומצות אמיניות. שנית, השיטה רלוונטית מאוד לחקר חומרים המיוצרים על ידי השליה ושוחררה להזרמת האם או העובר, כפי שמוכיחה תוצאות הפרוגסטרון. שלישית, זה עשוי להיות שימושי כדי ללמוד כיצד העובר in vivo מבטל פסולת מוצרים במהלך הצמיחה המהירה ואת שיפוץ רקמות. <...

על פי המכונים הלאומיים לבריאות, ארה&quot;ב, השליה היא האיבר הכי פחות מובן בגוף האדם 1 , 2 , 3 . קשה לגשת וללמוד את השליה האנושית in vivo ללא הטלת סיכונים לא מוסריים על ההריון המתמשך. מחקרים על תפקוד שליה אצל האדם מבוססים אפוא במידה רבה על מודלים במבחנה ובבדיקות ex vivo . רוב מחקרים קודמים vivo של תחבורה השליה ומטבוליזם בוצעו בבעלי חיים 4 , 5 , 6 . עם זאת, כמו מבנה השליה פונקציות להשתנות במידה ניכרת בין המינים, אקסטרפולציה של תוצאות מבעלי חיים לבני אדם חייב להיעשות בזהירות. רק מספר קטן יותר של בני אדם במחקרי vivo חקר ספיגת שליה ועובר ותחבורה תחת פיזיולוגיה נורמליתאל, ואף אחד מהם לא חקר את ההעברה המשולבת של מספר תרכובות 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 . מחקרים בסיסיים אלה מראים כי במחקרים של vivo של השליה האנושית הם ריאליים, וכי הם עשויים לשרת מטרות אחדות. ראשית, מושגים עכשוויים של פונקציות השליה הנובעים בעיקר ממחקרים במבחנה , בחיות לשעבר ובבעלי חיים עשויים להיות נבדקים בסביבה אנושית ובכך לספק תובנה חדשה וספציפית יותר לשיליה האנושית. שנית, המאפיינים של השליה התפקודית הקשורה לצמיחה עוברית חריגה, רעלת הריון, סוכרת אימהית, תסמונת מטבולית והפרעות מטבוליות אימהיות אחרות יכולות להיות מאופיינות יותר. שלישית, האדם במחקרים vivo לספק הזדמנות לפתח אבחוניםטיק כלי ניבוי של תפקוד השליה. על רקע זה התכוונו להקים אוסף מקיף של נתונים פיזיולוגיים כדי לחקור את תפקוד השליה האנושית in vivo. במהלך ניתוח קיסרי מתוכנן, אנו מנצלים את הגישה intraabdominal לוריד הרחם כדי לאסוף דגימות דם מן הכלים הנכנסים והיוצאים על צדדי האם והעובר של השליה (שיטת דגימת 4 כלי). דגימות אלה משמשים לחישוב ההפרשים ריכוז arteriovenous זוגיות של חומרים מזינים וחומרים אחרים 14 . בנוסף, אנו מודדים את זרימת הדם על שני צידי השליה על ידי אולטרסאונד. כתוצאה מכך, ספיגה שליה ועובר של כל מתחם ניתן לכמת. יתר על כן, ניתן לקבוע חומרים משוחררים על ידי השליה כדי מחזורי האם והעובר 15 , 16 , 17 . כאשר משלביםד עם פרמטרים קליניים של האם והילד, וכן ניתוחים של שליה ורקמות רלוונטיות אחרות, שיטה זו יש פוטנציאל מלהיב לשלב היבטים רבים של פונקציות השליה in vivo באותם זוגות העובר.

<table><tbody><tr><td><הרכב גוף אימהי חזק></חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סולם עכבה</td><td>טניטה</td><td></td><td>או מדידות</td></tr> <tr><td>אולטרסאונד דומות<חזקות>אולטרסאונד&nbsp; מכונת אולטרסאונד </חזקה></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סקויה 512</td><td>Acuson</td><td></td><td>מצוידת במתמר מעוקל עם דופלר צבע וגל דופק (רוחב פס תדרים 2 - 6 מגה-הרץ)</td></tr> <tr><td><דגימות דם חזקות></חזקות></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>צינורית עורית</td><td>BD Medical</td><td>682245</td><td>או דומה</td></tr><tr><td>20 סמ"ק מזרק קצה לואר אקסצנטרי ללא</td><td>טרמו</td> מחט<td>SS-20ES</td><td>או דומה. 3 נחוצים.</td></tr><tr><td>מזרק קצה לואר אקסצנטרי 10 סמ"ק ללא מחט</td><td>Termo</td><td>SS-10ES</td><td>או דומה. דרוש 9.</td></tr><tr><td>5 סמ"ק מזרק לואר 6% ללא מחט</td><td>Termo</td><td>SS-05S1</td><td>או דומה. 2 דרושים.</td></tr><tr><td>מזרק גז דם עורקי&nbsp;</td><td>רדיומטר רפואי</td><td></td><td>או דומה. 4 דרושים.</td></tr><tr><td>מחט מכונפת סטרילית המחוברת לצינורות גמישים, 21 מד</td><td>Greiner Bio-One</td><td>450081</td><td>(מיועד לשימוש חד פעמי).3 דרוש.</td></tr><tr><td>שפופרת ואקטיינר 6 מ"ל EDTA&nbsp;</td><td>גריינר ביו-וואן</td><td>456043</td><td>או דומה. תווית עם אתר לדוגמה. דרושים 10.</td></tr><tr><td>צינור ואקוטיינר 5 מ"ל LH מפריד ליתיום הפרין</td><td>גריינר ביו-וואן</td><td>456305</td><td>או דומה. תווית עם אתר לדוגמה. 5 דרושים.</td></tr><tr><td>שפופרת ואקטיינר 6 מ"ל מפעיל קרישי סרום&nbsp;</td><td>גריינר ביו-וואן</td><td>456089</td><td>או דומה. תווית עם אתר לדוגמה. 5 דרושים.</td></tr><tr><td>שפופרת ואקוטיינר 3 מ"ל&nbsp; 9NC קרישה נתרן ציטראט 3.2%</td> <td>גריינר ביו-וואן</td><td>454334</td><td>או דומה. תווית עם אתר לדוגמה. 5 דרושים.</td></tr><tr><td>בקבוקונים קריוגניים, 2.0 מ"ל</td><td>קורנינג</td><td>430488</td><td>או דומה. תווית עם אתר דגימה, סרום/סוג פלזמה ו-ID. דרוש 90.</td></tr><tr><td>מגשים מסומנים להובלת המזרקים</td><td></td><td></td><td>להובלת דגימות הדם בחדר הניתוח</td></tr><tr><td>נדנדה</td><td></td><td></td><td>לערבוב עדין של הדגימות</td></tr><tr><td>קרח</td><td></td><td></td><td>בקופסת קלקר</td></tr><tr><td>חנקן</td><td></td><td></td> נוזלי <td>במיכל מתאים</td></tr><tr><td><חזק>דגימות שליה</חזקות></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מתכת מגש</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קרח</td><td></td><td></td><td>בקופסת קלקר</td></tr><tr><td>בקנה מידה</td><td></td><td></td><td></td>מכויל</tr><tr><td>סרגל</td><td></td><td></td><td></td>מתכת</tr><tr><td>1 M פוספט חוצץ מלח</td><td>סיגמא</td><td>D1408</td><td>או דומה. לדלל 10 מ' ל&nbsp; 1 מ' לפני השימוש</td></tr><tr><td>בתמיסת ייצוב RNA</td><td>סיגמא</td><td>R0901-500ML&nbsp;</td><td>או דומה</td></tr><tr><td>טמפרטורת חיתוך אופטימלית (O.C.T.) תרכובת</td><td>vwr</td><td>361603E</td><td>או</td></tr><tr><td>בקבוקונים קריוגניים דומים, 2.0 מ"ל</td><td>קורנינג</td><td>430488</td><td>או דומה. תווית עם אתר לדוגמה. תוכן ומזהה 10 דרושים.</td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה, תחתית חרוטית 50 מ"ל</td><td>גריינר ביו-וואן</td><td>227,285</td><td>או דומה. תווית עם "RNA מאוחר יותר", אתר לדוגמה ותעודת זהות 2.</td></tr><tr><td>חנקן</td><td></td><td></td> נוזלי <td>במיכל מתאים</td></tr><tr><td><הרכב גוף חזק>עוברי </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מכויל</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>סרט</td><td></td><td></td><td></td> מדידה</tr></tbody></table>

4-כלי דגימה גישה ללימודים אינטגרטיביים של הפיזיולוגיה השליה האדם<em&gt; בויבו</em

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

השליה האנושית אינה נגישה במיוחד למחקר, בעוד שעדיין נמצא ברחם . ההבנה הנוכחית של הפיזיולוגיה השליה של האדם in vivo מבוססת אפוא במידה רבה על מחקרים בבעלי חיים, למרות המגוון הגבוה בין המינים באנטומיה שליה, המודינמיקה ומשך ההיריון. הרוב המכריע של מחקרים אנושיים השליה הם מחקרים vivo זלוף לשעבר או במבחנה מחקרים trophoblast. למרות במבחנה ומודלים של בעלי חיים חיוניים, אקסטרפולציה של תוצאות ממחקרים כאלה אל השליה האנושית in vivo אינו ברור. מטרתנו הייתה לחקור את הפיסיולוגיה של השליה האנושית ב- vivo , ולהציג פרוטוקול מפורט של השיטה. ניצול הגישה תוך intraabinal כדי הווריד הרחם ממש לפני החתך הרחם במהלך ניתוח קיסרי מתוכנן, אנו אוספים דגימות דם מן הכלים נכנסות ויוצאות על הצדדים האימהית והעובר של השליה. בעת שילוב conמידות מדידה מ דגימות דם עם נפח מדידות זרימת הדם, אנו יכולים לכמת שליה שליה ועובר ושחרור של כל המתחם. יתר על כן, דגימות רקמות שליה מן אותם זוגות העובר אותו יכול לספק מדידות של צפיפות טרנספורטר ופעילות היבטים אחרים של פונקציות השליה in vivo . באמצעות שימוש אינטגרטיבי זה בשיטת הדגימה של 4 כלי הדם אנו יכולים לבחון חלק מהמושגים הנוכחיים של העברת חומרים מזינים ושל חילוף החומרים ב vivo , הן בהריונות נורמליים ופתולוגיים. יתר על כן, שיטה זו מאפשרת זיהוי של חומרים מופרשים על ידי השליה כדי במחזור האם, אשר יכול להיות תרומה חשובה לחיפוש עבור סמנים ביולוגיים של תפקוד לקוי של השליה.

שיטת הדגימה של 4 כלי הדם מיושמת בקליניקה הקלינית וקיבלנו בהצלחה דגימות דם מ -209 זוגות אם / תינוקות. ב 128 של אלה השגנו גם למדוד את נפח הדם. דגימה מלאה של 4 כלי דם ומדידות זרימה באיכות טובה של כלי הדם האימהיים והעובריים התקבלו ב -70 זוגות של האם-עובר ( איור 3 ). בנוסף, עד כה אספנו דגימות דם ושליש מ -30 חולים טרום-דלקתיות. פרסמנו בעבר מאמרים על העברת השליה אנושית של חומרים מזינים, כמו גם שחרור שליה של גורמים vasoactive,...

אנו מציגים שיטה מפורטת ללמוד פיזיולוגיה שליה אנושית ב vivo בטווח. השיטה משלבת דגימת דם מן הכלים הנכנסים והיוצאים על צדדי האם והעובר של השליה עם מדידות אולטראסאונד של זרימת הדם בנפח ודגימת רקמת השליה.

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

המטרה הכללית של הליך זה היא לחקור את תפקוד השילייה האנושית in vivo באמצעות מספר שיטות, אשר יחד מבטיחות איסוף של נתונים מקיפים ואינטגרטיביים על פיזיולוגיית השילייה העוברית האנושית. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בנוגע לפיזיולוגיה של השילייה האנושית, כגון תפקיד השילייה בגומלין שבין האם לעובר. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת לבחון תפיסות עכשוויות של מעבר, ספיגה והפרשה בשילייה אנושית in vivo.הכללה של מחקרים ניסויים לבני אדם נתקלה בקשיים בשל ההבדלים הגדולים בין בעלי חיים לבני אדם באנטומיה של השילייה, במשך ההיריון ובסיבוכי היריון. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי חילוף חומרים בשילייה והעברת רכיבי תזונה, ניתן להחילה אותה גם כדי לחקור שחרור של תרכובות מהשילייה הן בהריונות בריאים והן בהריונות עם סיבוכים, כגון רעלת הריון (preeclampsia). שיטה זו דורשת שיתוף פעולה מתואם ביותר של מספר מומחים רפואיים, אחיות וחוקרים.המפתח להצלחה הוא תכנון קפדני תוך שמירה מתמדת על מיקוד באם ובעובה. תרשים זה ממחיש את לוח הזמנים ואת כוח האדם הנדרש להשגת הדגימות. כל אדם המסייע בדגימה מיוצג בצבע שונה.פרוטוקול זה מורכב מהשימוש המשולב בשלוש שיטות לחקר הפיזיולוגיה של השילייה האנושית. ראשית, מדידת נפח זרימת הדם בעורק הרחם ובווריד השפופת מבוצעת באמצעות אולטרסאונד. שנית, נדגמי דם נאספים מהכליים הנכנסים והיוצאים בצד האימהי והעוברי של השילייה האנושית במהלך ניתוח קיסרי.דגימות של רקמת שליה שלישית נאספות לצורך אנליזה. לתחילת הפעולה, סייע לאישה להגיע למצב חצי-שכיבה (semi-supine), עם נטייה קלה הצידה לכיוון ההפוך מאזור העניין, כדי למנוע דחיסה של האורטה והוריד הנבוב (vena cava). במהלך תקופה של שקט עוברי, הדמיין את הווריד הטבילי בחתך סגיטלי או אלכסוני של בטן העובר, ומדוד את הקוטר הפנימי של כלי הדם בחלק ישר של הווריד הטבילי התוך-בטני, לפני כל הסתעפויות נראות לעין.השתמשו במצב B-mode רגיל והדמיאו את כלי הדם בזווית הקרה (insonation angle) ניצבית לצורך מדידות קוטר, ושמרו מספר פריימים אופטימליים למדידות מאוחרות יותר כדי למזער את השפעת השינויים הפולסטיליים בקוטר. חזרו על המדידות חמש עד 10 פעמים. באותו מיקום, התאימו את המתמר והשתמשו באולטרסאונד דופלר כדי להשיג זווית הקרה נמוכה ככל האפשר, במטרה למדוד את המהירות המקסימלית הממוצעת בזמן, או TAMX.השיגו את המהירות לאורך תקופה של שלושה עד חמישה שניות. לאחר מכן, השתמשו באולטרסאונד דופלר כדי להמחיש את העורק הרחמי בנקודת החצייה שלו עם העורק האילי החיצוני, מיד לאחר התפצלותו מהעורק האילי הפנימי. כווןו את המתמר במיקום זה כדי להשיג זווית הקרה נמוכה ומדדו TAMX.חשבו את המהירות כערך הממוצע של שלושה מחזורי לב. עקבו אחר כלי הדם באופן דיסטלי כדי להשיג זווית נכונה למדידות קוטר, קרוב ככל האפשר לאתרים שבהם נמדדה ה-TAMX. מדידת נפח זרימת הדם בעורק הרחם היא מאתגרת, כיוון שסיכויים נמוכים להשיג זווית ניצבית באותו אתר שבו נמדדה ה-TAMX.כלי דם המסתעפים בין שני אתרי המדידה עשויים להוביל להחרגת מדידות הקוטר. לביצוע דגימת דם מארבעה כלים לפני תחילת הניתוח, הכינו את התמיסות, המבחנות והציוד. לאחר מכן, העבירו תדריך ומסרו את הציוד לכל אנשי הצוות שיסייעו בדגימה.הנח קו עורקי בעורק הרדיאלי בנוסף לגישה ורידית פריפריאלית סטנדרטית. הווריד האנטקוב tanggal (הווריד במרפק) מועדף מכיוון שקל יותר לשאוב ממנו דגימות. לאחר מכן, לאחר פתיחת חלל הבטן, השתמש במרחיב (retractor) כדי להרים את דופן הבטן ולחשוף את הענפים הראשיים של הוורידים הרחמיים בצדדים האנטרו-לטרליים של הרחם.זהה ענף של וריד הרחם באותו צד שבו נמצאה השליה במידת האפשר, או את רשת הוורידים הבולטת ביותר של השליה הממוקמת בקו האמצע של הרחם. לאחר זיהוי וריד רחם מתאים, הנחה את אנשי הסיוע לדגום דגימות דם מהעורק הרדיאלי ומהוריד האנטקובטלי. בו-זמנית, בזווית של 30 מעלות, הכנס מחט פרפר המחוברת למזרק גזי דם אל וריד הרחם ואסוף דם באמצעות שאיבה עדינה.תוך כדי קיבוע זהיר של מיקום ה-IV של מחט הפרפר, הרשע לסייע להחליף את מזרקת גזי הדם הממולאת במזרקה של 20 מיליליטר. מיד לאחר מכן השתמש במזרקה של 10 מיליליטר. מהעורק הרדיאלי או מהווריד האנטקובטלי, השלך את חמשת המיליליטרים הראשונים, ולאחר מכן שאב שלושה מיליליטרים למזרקת הפרין לצורך בדיקות גזי דם.לאחר מכן, שאבו 30 מיליליטר מכל אתר. עם לידת הילד, התחילו עם מזרק לניתוח גזי דם ושאבו מיד דם מהעורק הטבילי מבלי להדק את חבל הטבילה או להוציא את השילייה. המשיכו עם שלושה מזרקים של 10 מיליליטר במידת האפשר.לאחר הבטחת הדגימות העורקיות, יש לסגור בעזרת תסמיך (clamp) ולחתוך את השער, לפני הדגימה מהוריד השפואי, תוך השגת כל הדגימות השפואיות כאשר השילייה נמצאת במקומה (in situ). שיטת ארבעת כלי הדם דורשת דגימת דם מתואמת, בנוסף לטיפול מהיר בדגימות מחמישה אתרים שונים בו-זמנית. יש להקפיד על העורק השפואי, אשר רגיש להתכווצות, המוליזה וקרישה.בצעו בדיקה סופית של נקודת הדגימה בווריד הרחמי לפני תחילת סגירת הבטן. הניחו את כל מזרקי גזי הדם על קרח והשתמשו במנתח גזי דם כדי לנתח את הדגימות תוך חמש דקות. העבירו מיד את דגימות הדם ל-vacutainers ונערו את מבחנות הפלזמה במשך דקה עד שתי דקות לפני הנחתן על קרח.סבב את דגימות הפלזמה בצנטריפוגה בהקדם האפשרי ובתוך 30 דקות, ב-2,500 $\times$g ובטמפרטורה של 6 °C למשך 20 דקות. לאחר מכן, העבר בזהירות את העל-נוזלים (supernatants) לאליקוטים בתוך קריו-מבחנות של 2 mL. נתח את דגימות הדם לאיתור החומרים המבוקשים ובצע חישובים של מעבר שלייתי בהתאם לפרוטוקול הכתוב.הניחו את השילייה בצורה שטוחה על מגש ניתוחים מקורר בקרח בהקדם האפשרי לאחר השליות. רשמו את משקל הרקמה, כמו כן את הקוטר הארוך ביותר ואת הקוטר במזווית של 90 מעלות למדידה הראשונה. לאחר מכן, רשמו כל פתולוגיה גלויה למראה ואת מספר כלי הדם בחוט הטבור.הניחו את השילייה כאשר הפנייה האמיtowards למעלה וזהו ארבעה עד חמישה אתרי דגימה הממוקמים באופן אקראי בכל רבע של השילייה. השתמשו במספריים כדי להסיר את הדסידואה (decidua), על ידי גזירה של שלושה עד חמישה מילימטרים מהפנייה האמיtowards. לאחר מכן, אספו חתיכה של סמימטר מעוקב אחד עד שניים של רקמת וילוסי (villous tissue) מכל אתר.שטפו בעדינות את הרקמה שנאספה עם 50 מיליליטר של PBS קר בריכוז one molar. לאחר מכן, חלקו את הרקמה למספר חתיכות מכל אתר דגימה וחלקו אותן למשמרות (aliquots). הוסיפו דגימות רקמה בנפח של 0.1 עד 0.5 סנטימטרים מעוקב לחמישה קריו-טיובים והקפיאו את הדגימות באופן מהיר (snap freeze) בחנקן נוזלי.הוסיפו חתיכות קטנות, בגודל של 0.1 עד 0.2 סנטימטרים מעוקב, למבחנות שהוכנו מראש ומכילות 25 מיליליטר של תמיסה לייצוב RNA. עבור מחקרים היסטולוגיים, הוסיפו חתיכות בגודל 0.5 סנטימטרים מעוקב לחמש קריוטובים (cryotubes) המכילות 0.5 מיליליטר של OCT, מלאו עד הסוף ב-OCT, ולאחר מכן ערבבו את תכולת המבחנות. הקפיאו את הדגימות בטמפרטורה של 80- מעלות צלזיוס עד לניתוח המשך.דגימות דם מ-209 זוגות אם-עובר הושגו בהצלחה באמצעות שיטת דגימה מארבעה כלי דם. זרימת דם נפחית נמדדה ב-128 מהדגימות. דגימה מלאה מארבעה כלי דם ומדידות זרימה באיכות טובה של כלי הדם האימהיים והעובריים התקבלו ב-70 זוגות אם-עובר.גישת ארבעת כלי הדם שימשה למחקר של מעבר שילייתי, כפי שמוסבר כאן עבור גלוקוז. נמצאו הבדלים עורקיים-ורידיים משמעותיים של גלוקוז בשני צדי השילייה, המעידים על ספיגה בתוך הגוף (in vivo) של 0.29 millimoles per liter ברחם-שילייה וספיגה עוברית של 0.54 millimoles per liter. נמדד זרימה חציונית בווריד הטבילי של 196.2 milliliters per minute.באמצעות שימוש בעקרון פיק (Fick's Principle), חושב ספיגת גלוקוז עוברית חציונית מהסירקולציה השרונית של 0.10 millimoles לדקה. באמצעות שיטת ארבעת כלי הדם, נחקרה ספיגת חומצה גלוטמית בשיליה, החשובה כדלק במסלולים מטבוליים ובתהליך המרה הדדי של חומצות אמינו בין העובר לשיליה. נצפתה ספיגה של חומצה גלוטמית בשיליה הן מהסירקולציה השרונית והן מהסירקולציה האימהית.נמדדה גם שחרור של פרוגסטרון in vivo על ידי השילייה במועד הלידה, ונמצא שחרור משמעותי של פרוגסטרון למחזור הדם האימהי, מה שמדגים כיצד ניתן להשתמש בשיטת דגימת ארבעת כלי הדם השילייתיים כדי לזהות חומרים המשתחררים מהשילייה. בעת ביצוע הליך זה, חשוב להדגיש כי מדידות של נפח זרימת הדם צריכות להתבצע על ידי מומחה לרפואת עובר עם ניסיון בסוג זה של סונוגרפיה, וזאת על מנת להשיג מדידות מדויקות. לאחר הליך זה, ניתן לנתח את דגימות הדם כדי לחקור מעבר שילייתי, ספיגה או שחרור של החומר הנבדק, בין אם מדובר ברכיבי תזונה, מטבוליטים, מולקולות איתות, אקסוזומים, תרכובות פסולת, תרופות או רעלים.בנוסף, ניתוח של דגימות השליה יכול להשיב על שאלות נוספות הנוגעות לבקרת ההעברה ולמטבוליזם של השליה. לסיכום, פרוטוקול זה מדגים כיצד ניתן לבצע איסוף מתואם של מדידות זרימת דם נפחית, דם ודגימות רקמה, כדי להשיג מודל vivo שלם לחקר הפיזיולוגיה של השליה האנושית. לאחר צפייה בסרטון זה, על רופא מיילד להחזיק בהבנה טובה של האופן שבו ניתן לאסוף בבטחה דגימות דם עורקי-ורידי משני צדי השליה האנושית במהלך ניתוח קיסרי.

the-4-vessel-sampling-approach-to-integrative-studies-human-placental

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

זיהינו את השליה כגוף hematopoietic העיקריים במהלך ההתפתחות. מצאנו כי בתאי גזע hematopoietic (HSCs) הן שנוצר הרחיב בשליה בתוך נישות microenvironmental ייחודי. כאן אנו מתארים ניסיוני בטכניקות נדרש בידוד להדמיה של HSCs את השליה העכבר.

בידוד ניתוח בתאי גזע hematopoietic מן השליה

קביעת תעריף הובלת xenobiotics ו ננו מעבר לשליה באמצעות<em&gt; לשעבר vivo</em&gt; דגם זלוף שליה אנושי

שיטה פשוטה להקים השליה אדם מן המעלה הראשונה (villous) ותרבויות איבר decidual מתואר. תרבויות איבר Villous ו decidual הם כלי שלא יסולא בפז ללימוד בפתוגנזה בממשק האם והעובר האדם. זיהום עם חיידקים ליסטריה חיידק תאי פקולטטיבי מודגם.

שלית Decidual אדם תרבויות איברים ללמוד זיהומים בבית הממשק האם והעובר

מחקר זה מציג עבור הרקמה הפיך ניקוי, immunostaining, תלת-ממד עיבוד וניתוח רשתות כלי דם השליה האנושית הדגימות villi גודל 1-2 מ מ3פרוטוקול.

תלת מימדי עיבוד וניתוח של Immunolabeled, מובהר היפרדות villous חלקית וסקולרית הרשתות האנושיות

נתאר מערכת אשר מנצל שלוש שיטות כדי להעריך את הבטיחות והיעילות של תרופות ממוקדות השליה: ויוו הדמיה כדי לפקח nanoparticle הצטברות, אולטרסאונד בתדירות גבוהה כדי לעקוב אחר ההתפתחות העוברית של היפרדות , ו- HPLC לכמת משלוח סמים לרקמות.

הערכה מקיפה של היעילות והבטיחות של משלוח סמים, ממוקדות השליה באמצעות שלוש שיטות משלימות

הנה הציג פרוטוקול של לשעבר vivo אימהי-העוברי וסקולזיה העובר כדי לאפשר את הניהול של מאמר מבחן לתוך ואסילטורה אימהית וכלה להעריך העברה שלמה של חלקיקים xenoביוטיים או סוכני תרופתי בנוסף שינויים ב פיזיולוגיה של...

לשעבר Vivo Perfusion של השליה מכרסם

הנה פרוטוקול לגידול צמחי שליה בתנאי זרימה קבועים. גישה זו משפרת את מערכות התרביות הסטטיות המסורתיות בכך שהיא מאפשרת שכפול של סביבות פיזיולוגיות דינמיות.

אקס ויוו תרבית זרימת חציל שליה - חיקוי התנאים הדינמיים ברחם

פרוטוקול זה מתאר את הכנת שתירי רקמת השליה האנושיים שגודלו בממשק אוויר-נוזל לצורך חקר זיהומים ויראליים.

אקס ויבו תרבית של שליה אנושית לצורך חקר העברת וירוס בממשק אם-עובר

מחקרים רבים באמצעות קיבה עכברוש מודלים עוקפים נערכו לאחרונה לחשוף את המנגנונים הפיזיולוגיים הבסיסיים של Roux-en-Y פעולות מעקף קיבה. מאמר זה נועד להפגין לדון בפרטים הטכניים של מודל ניסיוני פרסם שלנו מעקף קיבה עכברוש להבין את היתרונות והמגבלות של כלי זה ניסיוני.

Roux-en-Y מבצע מעקף קיבה אצל חולדות

Xenografts הסרטני האנושי הוא vascularized ו הסתננו תאים ממוצא העכבר במהלך שלב צמיחת in vivo. כדי לעקוף את ההטיה הנגרמת על ידי תאי זיהום אלה במהלך ניתוח במורד זרם, פתחנו שיטה המאפשרת דלדול מקיף של כל תאי העכבר על ידי מיון תא מגנטי.

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

למדו שיטת דגימת ארבעה כלי דם לחקר הפיזיולוגיה השליתית האנושית בחיים. גישה זו משלבת דגימות דם, אולטרסאונד ודגימות רקמה לניתוח מטבוליזם והעברה של חומרים מזינים בין האם לעובר.

4-כלי דגימה גישה ללימודים אינטגרטיביים של הפיזיולוגיה השליה האדם

גלה סרטונים נוספים