פרוטוקול למדידת Cue תגובתיות במודל של עכברים של הפרעה לשימוש בקוקאין

בפרוטוקול זה, תגובתיות רמזים מודדת את המוטיבציה של בעל חיים לחפש קוקאין לאחר היעדרות ממתן עצמי של קוקאין. תגובתיות רמזים מתרחשת כאשר החולדה נחשפת מחדש להקשר ולרמזים שהיו קשורים בעבר למתן קוקאין תוך ורידי. תגובתיות רמזים היא מדד לסיכון להישנות.

פרוטוקול תגובתיות הרמז המתואר כאן הוא אמצעי פרה-קליני לבדיקת תרופות משנות הישנות וכן לחקור גורמים גנטיים וסביבתיים התורמים לסיכון להישנות. זוהי משימה אופרנטית להתנהגות של חיפוש סמים שמתיישבת עם מאפיינים רבים של נטילת סמים אנושיים והישנות שלהם. אופטימיזציה של פרמטרים מרכזיים כגון מינון קוקאין, נפח אספקה ומשך העירוי נעשתה כדי לבסס את תוקף הפאזה וכוח הייצור התרגומי.

לצורך פרוטוקול זה, השתמש בחולדות Sprague Dawley זכרות בנות שמונה עד תשעה שבועות שהתאקלמו בחדר המושבה במשך שבעה ימים לפחות. במהלך תקופת ההתאקלמות, יש לשכן את החולדות בזוגות ולטפל בהן מדי יום לאורך כל המחקר. לספק גישה בלתי מוגבלת למזון בכלובים הביתיים שלהם לאורך כל שלבי המחקר.

השתלת צנתרי ורידים צוואריים בשיטה שתוארה על ידי Kmiotek ומשתפי פעולה בסרטון JoVE שלהם, ולאחר מכן הקצו את החולדות באופן אקראי לקבוצות טיפול במי מלח או קוקאין. לאימונים, תוכניות לוחות זמנים לניהול עצמי של קוקאין כמתואר בפרוטוקול הטקסט. ציידו את תאי האימון בשני מנופי תגובה נשלפים, נורת גירוי מעל כל ידית תגובה ותאורת בית מול המנופים.

העבירו קוקאין או מי מלח ממשאבות עירוי מזרק מחוץ לתא. השתמש במחטים בגודל 23 המחוברים למזרקים ובצינורות פוליאתילן עטופים ברצועת קפיצי מתכת המחוברת לצנתרים של החולדה. קוקאין או מי מלח מועברים לאחר לחיצת ידית פעילה, אך לא לאחר לחיצת ידית לא פעילה.

שנה את הפתרונות מדי יום. השתמש בדילול קוקאין טרי ב-0.9% נתרן כלורי סטרילי המותאם למשקל של כל חולדה. טען לפחות שמונה מיליליטר תמיסה למזרק של כל חולדה.

התחל באימון החולדות על לוח זמנים של חיזוק FR1 והתקדם ללוח זמנים FR5 לאחר שלושה ימים רצופים של שבע עירויים לשעה עם פחות מ-10% שונות במספר העירויים הכולל לכל מפגש. הכרחי לנתח נתוני התנהגות בניהול עצמי על בסיס יומי כדי לקבוע מתי לקדם בעל חיים ל-FR5 ולבדוק אם יש אובדן סבלנות צנתר. אחד השלבים הקריטיים ביותר של הפרוטוקול הוא ניטור הניהול העצמי במהלך 14 הימים הראשונים של האילוף כדי להבטיח שהחיה תנהל את עצמה כרגיל.

אם הניהול העצמי יורד באופן דרמטי, סביר להניח שהצנתר של החולדה איבד את הסבלנות. בתחילת הפגישה יש לבדוק שאין בועות במזרק. חבר את המזרק לצינור הפוליאתילן והכנס אותו למשאבת העירוי.

כוונן בזהירות את המזרק כך שהתמיסה תתפזר באופן שווה ומלא בצינורות הפוליאתילן. לאחר מכן, חבר את החולדות למערכת האספקה והנח אותן בתאי מיזוג אופרנטיים סטנדרטיים הממוקמים בתאים מאווררים להנחתת רעש עם מאווררים. עקביות לאורך כל הניסוי היא חיונית.

הנח תמיד חולדה באותו תא ושמור את הידית הפעילה באותו צד בתוך אותו תא. במשך 14 מפגשים יומיים של 180 דקות, לחולדות יש גישה חופשית למנופים והן ילמדו בקלות איזה מנוף מספק גירוי בתנאי שהמערכת פועלת. כל טריגר של הידית האקטיבית בלוח זמנים ביחס קבוע של אחד משחרר 0.1 מיליליטר של תמיסה במשך שש שניות ומאיר בו זמנית את אור הכלוב ואת אור הגירוי מעל הידית הפעילה.

יש עיכוב של שנייה אחת לפני שחרור הפתרון. לאחר כל מתן קוקאין או מי מלח, נורית הגירוי ומשאבת העירוי מושבתים למשך 20 שניות שבמהלכן האור הביתי נשאר דולק ולחיצה על הידית לא עושה דבר מלבד נרשמת. כאשר האור נכבה, הידית מופעלת מחדש.

כל הפעלה של הידית הלא פעילה אינה מייצרת השלכות מתוזמנות. בסוף הפגישה בת 180 הדקות, השתמשו בתנועות זהירות איטיות כדי להוציא את החולדה שעלולה להיות תוקפנית מהתא. לאחר מכן שטוף את הקטטר שלו.

בין הפגישות יש לנקות בזהירות את החדרים. נגב כל משטח עם תמיסת אתנול של 70%. בתום מפגשי האימון, הכניסו את החולדות להתנזרות כפויה למשך 30 יום ללא גישה לתא האופרנט.

המשך לטפל בחולדות על בסיס יומיומי ולעקוב אחר הבריאות הכללית. לאחר תקופת ההתנזרות הארוכה, אפשר לחולדות 60 דקות בתא האופרנטי ומיד לאחר מכן קצירת המוח. עבור מפגש זה, הפעל את התוכנית המתוזמנת של תגובתיות רמזים.

סדר את זמני ההתחלה של המפגש כדי לאפשר זמן לקצור מוחות בין הפגישות. חשוב לציין, הפעל את המשאבה ללא המזרק מחובר כך שהרמז השמיעתי של המשאבה עדיין יהיה חלק מהגירוי ללא העברת החומר. התחילו את המפגש הזה כרגיל עם החולדה בחדר הניהול העצמי שבו היא אומנה.

בבדיקה זו, כאשר לוחצים על הידית הפעילה שסיפקה בעבר קוקאין או מי מלח, רק הרמזים מועברים בלוח זמנים FR1. הידית הלא פעילה עדיין לא עושה דבר. הקלט את כל מצגות הרמזים, לחיצות הידית שהיו פעילות בעבר ולחיצות הידית הלא פעילות, כמו גם את ההשהיה ללחיצת הידית הראשונה.

באמצעות הפרוטוקול המתואר, נערך מחקר והחולדות הועברו בנפרד מ-FR1 ל-FR5 כאשר הן עמדו בקריטריונים. בקבוצה שקיבלה קוקאין, החולדות הגדילו בהדרגה את מספר העירויים עד שהגיעו לקריטריון, ואז הן הועברו מ-FR1 ל-FR5. מדדי תפוקה מרובים נאספו ממבחן תגובתיות רמז הקוקאין.

לדוגמה, חולדות שבעבר נתנו קוקאין בעצמן לחצו על הידית הפעילה בעבר הרבה יותר מאשר חולדות שלקחו בעצמן מי מלח. מדד תפוקה חשוב נוסף הוא חביון לעיתונות ברמה הראשונה. כאשר נצפה שינוי בזה, בעל החיים עשוי להיות לחוץ פיזית או שיש לו מוטיבציה מופחתת לניהול עצמי של קוקאין.

ניתן להשתמש במשימות התנהגות תנועתית כדי להעריך שינויים בבריאות הגופנית ולהבדיל בין ליקוי מוטורי לשינויים מוטיבציוניים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לאמן חולדות לתת תרופה בעצמן, לשמור על סבלנות צנתר במהלך מתן עצמי ולהעריך את תגובתיות הרמזים לרמזים הקשורים לתרופה לאחר התנזרות כמדד לסיכון להישנות. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לתכנת בקפידה את התוכנה, לטפל כראוי בבעלי החיים ולשטוף באופן קבוע צנתרים תוך ורידיים.

בעקבות הליך זה, ניתן להעריך את המנגנונים התאיים והמולקולריים המניעים את תגובתיות הרמזים של קוקאין וכן לבדוק תרופות פוטנציאליות שמשנות את תגובתיות הרמזים של קוקאין.