טומוגרפיה אופטית קוהרנטית העכבר הרזולוציה על קוליים כדי לסייע הזרקה תוך-עיני במחקר ריפוי גנטי ברשתית

המטרה הכוללת של הליך הזרקה תת-רשתית זה היא לספק וקטור לרשתית באופן זעיר פולשני וניתן לשחזור שניתן לצפות בו בזמן אמת. שלום, שיטה זו יכולה לשמש כדי לענות על שאלות מפתח במחקר ריפוי גנטי על יעילות משלוח וקטור ורעילות סוכן טיפולי. כמה יתרונות של טכניקה זו כוללים נזק מינימלי לרשתית ומבני עיניים אחרים, מיפוי אתר הזרקה מדויק, ומדידות כמותיות קפדניות vivo המאפשרות מסקנה סטטיסטית מוצקה.

להזרקת טרנסג'ין תוך עינית, מקם תחילה עכבר הרדמה על שלב הצפייה במיקרוסקופ של מערכת הדמיה רשתית והצב את קצות מדחפי הקשתית הבוטה הסטריליים בתווי שבע ו -10 של העפעף תוך דחיפת המדפים פתוחים ומטה כדי לגרום בעדינות להנעה. השתמש במקלות כדי לפתות את העפעפיים מתחת לגלובוס העין ולכוון את קצה המחט לכ -1 עד 1.5 מילימטרים מתחת לקצה לימבוס הקרנית. לאחר מכן, להחיל טיפה של פתרון PBS סטרילי על העין לכסות את העין עם להחליק כיסוי סטרילי.

בזהירות לנהוג את המחט לתוך העין דרך הלחמית עד דיכאון scleral נוצר. השתמש במיקרו מניפולטור כדי לסובב את העין כלפי מעלה עד הדיכאון scleral הוא בפוקוס, ואז לנהוג את המחט קדימה כדי ליצור שיא חד ברשתית עם קצה המחט. באמצעות מחזיק המחט, לסובב את המחט רק עד קצה המחט משעמם דרך sclera ואת RPE, המאפשר את flourescein בקצה המחט להיות גלוי מתחת לרקמת הרשתית בסביבה הקרובה של החלל subretinal ואת monolayer תא אפיתל פיגמנט הרשתית.

כונן את קצה המחט כלפי מטה כך שהוא משיק לגלובוס, ולאחר מכן להפעיל את משאבת ההזרקה עם מתג דוושת כף הרגל. לאחר 0.5 כדי microliters אחד של פתרון המשדר נמסר לחלל subretinal, למשוך את המחט ולאשר כי הדם יציב כי הנוזל אינו דולף מתוך אתר דרכי ההזרקה. כדי לאשר את ההצלחה של הזריקה, להקליט נפח מלבני OCT ולהשוות את התמונות לתמונות של סוגים שונים של תוצאות הזרקה פוטנציאליות.

לאחר אישור של מיקום הזרקה נאותה, השתמש בתדמית OCT מלבנית זו כדי למפות את היקף הפעמוץ על תמונת הקרן. כדי למפות את היקף bleb subretinal, לפתוח תמונת OCT נפח מלבני של bleb כך ציון דרך לזיהוי בתוך העין נכלל בתמונה. הוסף calipers רבים ככל הדרוש כדי לזהות את המיקום של הקצוות השמאליים והימין של סריקת B, כמו גם את ראש עצב הראייה, ONH, אם קיים, ואת נקודת פיתול שבו הרשתית מתנתקת מן RPE ו choroid ולאחר מכן לשמור את הנתונים.

לאחר מכן בצע קומפילציה של הקבצים שנשמרו והתוות את הנתונים, ויצר ביעילות מפה של bleb ההזרקה על התמונה en face OCT. שכבת-על של הנתונים המותווים על תמונת fundus המכילה את אתר ההזרקה ושמור את התמונה הממוזגת. השתמש בתמונה זו כדי לאתר אזורים מעניינים במהלך דימות OCT להמשך מעקב.

כדי להעריך ניוון רשתית לאחר הזרקת, פתח תחילה דומיין ספקטרלי מוקלט ברזולוציה גבוהה OCT או HRSD OCT תמונת נפח מלבנית ובחר סריקת B שיש למדוד. הגדל את התמונה שנבחרה עד שתמלא את המסך ולחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על התמונה. לחץ על calipers כדי לבחור את המספר המתאים של calipers, ולאחר מכן להשתמש בתכונה caliper להגדיר להקצות את calipers כמו אנכי בעמודה בלוק זווית ולהדליק את מיקום caliper התצוגה כדי להקל על מיקום caliper אחיד על פני הרשתית.

לחץ על החל והזז כל caliper למיקום המתאים 0.1 כדי 0.2 מילימטרים זה מזה על פני סריקת B, דואג למקם caliper אחד למרכז ראש עצב הראייה בעת הצורך. כאשר כל calipers הוצבו, לחץ וגרור כל caliper לאורך של אזור העניין, באופן שרירותי הגדרת calipers לא כיסוי אזורים מדידים של סריקת B לאורך המרבי. כדי למדוד את עובי השכבה הגרעינית החיצונית, מניחים את החלק העליון של כל קליפר בממברנה המגבילה החיצונית ובתחתית כל קליפר בתחתית שכבת הפלקסיפורם החיצונית במרווחים של 0.1 עד 0.2 מילימטר לאורך הרשתית.

לאחר שכל calipers הוצבו והותאמו לגודל, לחץ לחיצה ימנית על התמונה ולחץ על לשמור נתוני caliper"ואז לחזור על המידות כפי שהוכח רק עבור כל סריקה B עשירית, שמירה על calipers פתוח באותו מיקום על ציר x ולהתאים את האורכים של calipers לפי הצורך, מבלי להזיז אותם בכיוון x. לאחר שנמדדו כל הסריקות, פתח את קבצי הנתונים שנשמרו ולחץ על תאריך השינוי" כדי לסדר את הקבצים בהתאם לזמן שנשמר. פתח את כל הקבצים עבור כל סריקת B שנמדדה והדר את הנתונים הגולמיים מכל סריקת B לקובץ יחיד ממספר המסגרות הנמוך ביותר לגבוה ביותר ובחר את עמודות הנתונים, כולל העמודות שם, אורך ומרכז X.

ודא שהמרכז X זהה עבור כל סריקות B שנמדדו עבור כל תמונת OCT של אמצעי אחסון מלבני המעובדת ומחק נתונים מהקאליפרים שלא שימשו לתיעוד מדידות. הגדר את הקליפר הממוקם במרכז ראש עצב הראייה לאפס והתוות את הנתונים עבור X לעומת ערכות נתונים מרובות של Y כדי לקבל פונקציית התוויה תלת-ממדית לעובי השכבה הגרעינית החיצונית או לכל שכבת רשתית נמדדת אחרת. לאחר מכן השווה את מדידות השכבה הגרעינית החיצונית בין הבקרה לבין בעלי החיים הניסיוניים עם הגילאים המתאימים כדי לקבוע את הקצב ואת האחידות של כל ניוון רשתית פוטנציאלי.

למיפוי תלת-ממדי של מדידות הרשתית, סקור את תמונות OCT שלאחר ההזרקה ושים לב לכל ציון דרך המאפשר זיהוי, ולאחר מכן מקם את החיה כדי לקבל תמונת SDO CT מעקב מאותו אזור, תוך טיפול לכלול את אותם ציוני דרך הניתנים לזיהוי, ולעבד את התמונות המוקלטות כפי שהודגם זהה. חשוב מאוד להשיג תמונות OCT באיכות גבוהה הכוללות ציוני דרך לזיהוי כדי להקל על reimaging של אזורי הרשתית שהוזרקו בעבר. על מנת למדוד את השינויים באורך מערכת ההפעלה, calipers הונחו מן הממברנה המגבילה החיצונית למברנה ברוקס, המאפשר מדידות אמינות מאז שכבות אלה מזוהים בקלות בתמונות OCT.

הבדלים במדידות בין שכבות אלה מקווי עכבר שונים יוחסו לאורכים קצרים יותר של מקטע חיצוני. אם הזרקת המשנה מבוצעת בהצלחה, פתיחת החלל התת-רשתית גורמת לייצור של פעמוץ שניתן לדמיין בבירור הן בתצוגת הפנים של הדמיין HRSD OCT והן בתמונות הסריקה B. על-פי מפת הגבול של אתר ההזרקה מאפשר פילוח של מדידות רקמת הרשתית וערכות נתונים מיקום caliper כדי לאפשר בדיקה סטטיסטית עוקבת של ההשפעות של סוכנים טיפוליים ספציפיים על ניוון הרשתית.

לאחר השליטה, טכניקה זו יכולה להסתיים בעשר דקות אם מבוצע כראוי. בעת ניסיון הליך זה חשוב לזכור לשמור על הסביבה הכירורגית נקייה וסטרילית. לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הריפוי הגנטי לפקח על כל תהליך ההזרקה התת-רטינאלי בזמן אמת ויצרה דרך לקבוע באופן מיידי הצלחה כירורגית ב- vivo.

בעקבות הליך הזרקה זה, OCT ושיטות אחרות כמו רטינוגרפיה אלקטרו יכול להתבצע כדי לענות על שאלות נוספות על הצלה תפקודית מהומר ו / או רעילות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך להבין כיצד לבצע זריקות subretinal transscleral ו transchoroidal, כיצד למפות את היקף ההזרקה bleb על OCT מתמונה זו, ולקבל מדידות קפדניות של שכבות הרשתית החיצונית. אל תשכח כי עבודה עם וקטורים ריפוי גנטי יכול להיות מסוכן, כי אמצעי זהירות, כגון לבישת ציוד מגן אישי המתאים תמיד יש להשתמש בעת ביצוע הליך זה.