Name: מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 44 s
Description: חקור את פתוגנזת נגיף השפעת A ויעילות חיסונים במודל עכברים C57B6. שיטה זו מאפשרת הערכת תגובות חיסוניות הומורליות ופיתוח טיפולים אנטי-ויראליים חדשים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר על וירוס שפעת במעבדה LM-S יסובסד בחלקו על ידי ה ניו יורק שפעת מרכז התמחות (NYICE), חבר של NIAID מרכזי מצוינות עבור שפעת מחקר, מעקב (CEIRS). אנו מודים וונדי בייטס על שאתמוך בה התיקונים של כתב היד.

<ol><li>Girard, M. P., Cherian, T., Pervikov, Y., Kieny, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+vaccine+research+and+development%3A+human+acute+respiratory+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A review of vaccine research and development: human acute respiratory infections.</a> Vaccine. 23 (50), 5708-5724 (2005).</li>
<li>Arnold, S., Monto, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+Virology+of+Influenza+Illness%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Manag+Care%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and Virology of Influenza Illness.</a> Am J Manag Care. 6, Suppl 5. 255-264 (2000).</li>
<li>Palese, P., Shaw, M. L. Orthomyxoviridae: The Viruses and Their Replication. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPalese%2C+P+%22Fields+Virology%22">Fields Virology</a>. Knipe, D. M., Howley, P. M., Griffin, D. E., Lamb, R. A., Martin, M. A. , 5th ed, Lippincott Williams and Wilkins. (2007).</li>
<li>Li, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genesis+of+a+highly+pathogenic+and+potentially+pandemic+H5N1+influenza+virus+in+eastern+Asia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia.</a> Nature. 430 (6996), 209-213 (2004).</li>
<li>Nogales, A., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+Genetics+Approaches+for+the+Development+of+Influenza+Vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Reverse Genetics Approaches for the Development of Influenza Vaccines.</a> Int J Mol Sci. 18 (20), (2017).</li>
<li>Kunisaki, K. M., Janoff, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+in+immunosuppressed+populations%3A+a+review+of+infection+frequency%2C+morbidity%2C+mortality%2C+and+vaccine+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Influenza in immunosuppressed populations: a review of infection frequency, morbidity, mortality, and vaccine responses.</a> Lancet Infect Dis. 9 (8), 493-504 (2009).</li>
<li>Belshe, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+attenuated+versus+inactivated+influenza+vaccine+in+infants+and+young+children%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Live attenuated versus inactivated influenza vaccine in infants and young children.</a> N Engl J Med. 356 (7), 685-696 (2007).</li>
<li>Cox, A., Baker, S. F., Nogales, A., Martinez-Sobrido, L., Dewhurst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse-adapted+live+attenuated+influenza+virus+that+permits+in+vivo+analysis+of+enhancements+to+the+safety+of+live+attenuated+influenza+virus+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse-adapted live attenuated influenza virus that permits in vivo analysis of enhancements to the safety of live attenuated influenza virus vaccine.</a> J Virol. 89 (6), 3421-3426 (2015).</li>
<li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+Virus+Attenuation+by+Codon+Deoptimization+of+the+NS+Gene+for+Vaccine+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Influenza A Virus Attenuation by Codon Deoptimization of the NS Gene for Vaccine Development.</a> J Virol. 88 (18), 10525-10540 (2014).</li>
<li>Nogales, A., DeDiego, M. L., Topham, D. J., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearrangement+of+Influenza+Virus+Spliced+Segments+for+the+Development+of+Live-Attenuated+Vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Rearrangement of Influenza Virus Spliced Segments for the Development of Live-Attenuated Vaccines.</a> J Virol. 90 (14), 6291-6302 (2016).</li>
<li>Nogales, A., Huang, K., Chauché, C., DeDiego, M. L., Murcia, P. R., Parrish, C. R., Martínez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+influenza+viruses+with+modified+NS1+proteins+for+the+development+of+live-attenuated+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Canine influenza viruses with modified NS1 proteins for the development of live-attenuated vaccines.</a> Virology. 500 (2017), 1-10 (2016).</li>
<li>Garcia-Sastre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+virus+lacking+the+NS1+gene+replicates+in+interferon-deficient+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Influenza A virus lacking the NS1 gene replicates in interferon-deficient systems.</a> Virology. 252 (2), 324-330 (1998).</li>
<li>Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blocking+interhost+transmission+of+influenza+virus+by+vaccination+in+the+guinea+pig+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Blocking interhost transmission of influenza virus by vaccination in the guinea pig model.</a> J Virol. 83 (7), 2803-2818 (2009).</li>
<li>Mubareka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+influenza+virus+via+aerosols+and+fomites+in+the+guinea+pig+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Transmission of influenza virus via aerosols and fomites in the guinea pig model.</a> J Infect Dis. 199 (6), 858-865 (2009).</li>
<li>Nogales, A., Baker, S. F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication-competent+influenza+A+viruses+expressing+a+red+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Replication-competent influenza A viruses expressing a red fluorescent protein.</a> Virology. 476C, 206-216 (2014).</li>
<li>Margine, I., Krammer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+for+Influenza+Viruses%3A+Implications+for+Universal+Vaccine+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Animal Models for Influenza Viruses: Implications for Universal Vaccine Development.</a> Pathogens. 3 (4), 845-874 (2014).</li>
<li>Bouvier, N., Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+for+Influenza+Virus+Pathogenesis+and+Transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Animal Models for Influenza Virus Pathogenesis and Transmission.</a> Viruses. 2 (8), 1530-1563 (2010).</li>
<li>Pica, N., Iyer, A., Ramos, I., Bouvier, N. M., Fernandez-Sesma, A., García-Sastre, A., Lowen, A. C., Palese, P., Steel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DBA.2+mouse+is+susceptible+to+disease+following+infection+with+a+broad%2C+but+limited%2C+range+of+influenza+A+and+B+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">The DBA.2 mouse is susceptible to disease following infection with a broad, but limited, range of influenza A and B viruses.</a> J Virol. 85 (23), 12825-12829 (2011).</li>
<li>Watanabe, H., Numata, K., Ito, T., Takagi, K., Matsukawa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immune+response+in+Th1-+and+Th2-dominant+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Innate immune response in Th1- and Th2-dominant mouse strains.</a> Shock. 22 (5), 460-466 (2004).</li>
<li>Srivastava, B., Blazejewska, P., Hessmann, M., Bruder, D., Geffers, R., Mauel, S., Gruber, A. D., Schughart, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+genetic+background+strongly+influences+the+response+to+influenza+a+virus+infections%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Host genetic background strongly influences the response to influenza a virus infections.</a> PLoS One. 4 (3), e4857(2009).</li>
<li>Lowen, A. C., Bouvier, N. M., Steel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+in+the+Guinea+Pig+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Transmission in the Guinea Pig Model.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 385, 157-183 (2014).</li>
<li>Schickli, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmid-only+rescue+of+influenza+A+virus+vaccine+candidates%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Plasmid-only rescue of influenza A virus vaccine candidates.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 356 (1416), 1965-1973 (2001).</li>
<li>Martinez-Sobrido, L., Garcia-Sastre, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+recombinant+influenza+virus+from+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of recombinant influenza virus from plasmid DNA.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li>
<li>National Research Council (U.S.) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals., Institute for Laboratory Animal Research (U.S.). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+care+and+use+of+laboratory+animals%22">Guide for the care and use of laboratory animals</a>. , 8th ed, National Academies Press (U.S.). (2011).</li>
<li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/aje/article-abstract/27/3/493/99616/A-SIMPLE-METHOD-OF-ESTIMATING-FIFTY-PER-CENT">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> The American Journal of Hygiene. 27 (3), 493-497 (1938).</li>
<li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+simple%2C+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li>
<li>Nogales, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+temperature+sensitive+live-attenuated+canine+influenza+virus+H3N8+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">A temperature sensitive live-attenuated canine influenza virus H3N8 vaccine.</a> J Virol. , (2016).</li>
<li>Eisfeld, A. J., Neumann, G., Kawaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+virus+isolation%2C+culture+and+identification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Influenza A virus isolation, culture and identification.</a> Nat Protoc. 9 (11), 2663-2681 (2014).</li>
<li>Guo, H., Baker, S. F., Martinez-Sobrido, L., Topham, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+CD8+T+cell+heterologous+protection+by+a+single+dose+of+single-cycle+infectious+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Induction of CD8 T cell heterologous protection by a single dose of single-cycle infectious influenza virus.</a> J Virol. 88, 12006-12016 (2014).</li>
<li>CDC: Centers for Disease Control and Prevention. Antigenic Characterization. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/flu/professionals/laboratory/antigenic.htm">http://www.cdc.gov/flu/professionals/laboratory/antigenic.htm</a> (2017).</li>
<li>He, W., Mullarkey, C. E., Miller, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+the+neutralization+potency+of+influenza+A+virus+hemagglutinin+stalk%2Fstem-binding+antibodies+in+polyclonal+preparations+by+microneutralization+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Measuring the neutralization potency of influenza A virus hemagglutinin stalk/stem-binding antibodies in polyclonal preparations by microneutralization assay.</a> Methods. , (2015).</li>
<li>Gulati, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+epitopes+on+the+neuraminidase+of+a+recent+H3N2+influenza+virus+%28A%2FMemphis%2F31%2F98%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Antibody epitopes on the neuraminidase of a recent H3N2 influenza virus (A/Memphis/31/98).</a> J Virol. 76 (23), 12274-12280 (2002).</li>
<li>Beare, A. S., Webster, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+avian+influenza+viruses+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Virol%22%5BJournal%5D)">Replication of avian influenza viruses in humans.</a> Arch Virol. 119, 37-42 (1991).</li>
<li>Rowe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+antibody+to+avian+influenza+A+%28H5N1%29+virus+in+human+serum+by+using+a+combination+of+serologic+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of antibody to avian influenza A (H5N1) virus in human serum by using a combination of serologic assays.</a> J Clin Microbiol. 37 (4), 937-943 (1999).</li>
<li>Stephenson, I., Wood, J. M., Nicholson, K. G., Zambon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialic+acid+receptor+specificity+on+erythrocytes+affects+detection+of+antibody+to+avian+influenza+haemagglutinin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Sialic acid receptor specificity on erythrocytes affects detection of antibody to avian influenza haemagglutinin.</a> J Med Virol. 70 (3), 391-398 (2003).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

העכבר בדגם iav ב נעשה שימוש נרחב ללימודי אין ויוו של יעילות iav ב פתוגנזה, immunogenicity והגנה. גודל קטן של עכברים גורם להם קל לתמרן ולאחסן לעומת דגמים בעלי חיים אחרים כגון חמוסים או שרקנים. יתר על כן, הקלות במונחים של בעל החיים עולה, דיור ורביה לאפשר את השימוש בהם בבדיקות החיסון קליניים בהם נדרשים מספר רב של בעלי חיים. ראוי לציין, מאז עכברים שימשו מחקר מרובים ממשמעת, מספר מולקולרית, אימונולוגיה ריאגנטים מאתר הינם זמינים להקל על השימוש שלהם ללימודי iav. יתר על כן, ההשתנות מינימלי מארח ואת נוכחותם של מערכת חיסונ...

IAVs הם וירוסים מעטפת מסווג של משפחה Orthomyxoviridae 3. הם מכילים מולקולות RNA חד-גדילי שמונה עם קוטביות שלילית3. בבני אדם, IAVs לגרום מגיפות עונתיים ומגפות מזדמנים של תוצאה חשובה כאשר הרומן הנגיפים מוחדרים את האוכלוסייה האנושית4. יתר על כן, IAVs עונתית מאוד, במהירות מועברים בין בני אדם בהפקת הפסד כלכלי גבוה ברחבי העולם בכל שנה2,5. Iav ב התסמינים כוללים שיעול, גודש באף, חום, חולשה, כאב ראש, אנורקסיה, myalgia, אבל הנגיף גם להפיק מחלה חמורה יותר חולים immunocompromised6. למעשה, ארגון הבריאות העולמי (WHO) מחשבת כי וירוסים שפעת עונתית לגרום 300,000-500,000 מקרי מוות ברחבי העולם בכל שנה1. ישנם רק שני סוגים של תרופות המאושרות כיום על ידי מינהל המזון והתרופות האמריקני (FDA) עבור טיפול מונע שפעת וטיפול בבני אדם: מעכבי neuraminidase (NA) (למשל, אוסלטמיביר), חוסמי של הערוץ יון M2 (למשל, amantadine); הופעתה של וירוסים עמידים לתרופות גרסאות זאת, דאגה גוברת. החיסון, לכן, נותרת האפשרות הרפואית הטובה ביותר כדי להגן על בני אדם מפני זיהומים IAVs. עד כה, שלושה סוגים של שפעת חיסונים מורשה ע י ה-FDA לשימוש בני אדם הינם זמינים: חיסונים חלבון רקומביננטי נגיפי hemagglutinin (HA), לא פעיל שפעת חיסונים (IIV), ו- live-הקלוש שפעת חיסונים (LAIV)5, 7. שלושת החיסונים נועדו לגרום תגובה חיסונית אדפטיבית כנגד החלבון HA ויראלי, היעד העיקרי של נטרול נוגדנים נגד IAVs.
דגם העכבר המאומת לימודים iav ב זיהום ויוו
היו בשימוש בבעלי חיים כדי ללמוד, בין היתר, iav ב פתוגנזה8,9,10,11, נגיפי גורמים שתורמים למחלות12 ו/או ויראלי שידור13 ,14, ולא כדי לבדוק את היעילות של חיסונים חדשים או נגיפים סמים9,10,15. עכברים (ס. מאסכאלאס). הם המודל בעלי חיים בשימוש נרחב ביותר לחקר iav ב מכמה סיבות: 1) המערכת החיסונית דומה אבולוציונית כדי להציג את זה בבני אדם; 2) בעלות נמוכה, כולל רכישה בעלי חיים, דיור, רבייה; 3) גודל קטן בקלות לתפעל ולאחסן; 4) השתנות מארח מינימלי כדי לקבל תגובות הומוגניות ותוצאות; 5) ידע רב בביולוגיה עכברים, כולל רצף הגנום; 6) רבים זמינים ביולוגיה מולקולרית ו/או אימונולוגיה ריאגנטים; 7) מדהימה זמין (KO) עכברים ללמוד את התרומה של חלבון נתון המארח על זיהום ויראלי; ו, 8) מספר זנים העכבר, שעלולים להיות מנוצלים לרעה כדי להעריך את בסיס גנטי של זיהומים.
ישנם מספר זנים העכבר זמין כרגע לימודים iav ויוו. גיל, מצב המערכת החיסונית, סקס, זן רקע ועכבר גנטית, כמו גם מסלולים של זיהום, מינון וללחצים ויראלי להשפיע על התוצאה של זיהום iav בעכברים. זנים עכבר הנפוץ ביותר בשימוש במחקר iav ב הם C57BL/6, BALB/C ועכברים, לאחרונה, DBA.2, שכן הם רגישים יותר למחלות iav ב מאשר שני זנים לשעבר16,17,18, 19 , 20. חשוב, התגובה החיסונית גם יכולה להיות שונה בהתאם העכבר זן18,19,20. לכן, חשוב מאוד לשחזר את כל המידע זמין על העכבר על iav ב להתאמץ כדי לבחור את האפשרות הטובה ביותר עבור הניסוי אמור להתנהל.
אמנם מודל בעלי חיים של זיהום ללימודי אין ויוו עם iav ב העכבר, יש להם מספר מגבלות, אשר צריך להיחשב בעיצוב ניסיוני. למשל, מגבלה עיקרית של שימוש בעכברים ללימודי אין ויוו הוא כי IAVs לא מעבירות בין עכברים. לכן, לצורך שידור מחקרים, מקובל יותר מודלים בעלי חיים (למשל, חמוסים או שרקנים) נמצאים בשימוש16,17,21. בנוסף, ישנם מספר הבדלים בין ביטויים iav בעכברים ובבני אדם. בניגוד לבני אדם, עכברים אינם מפתחים חום על זיהום iav; לעומת זאת הם מציגים עם היפותרמיה16,17. בעכברים, שכפול iav ב מרוכז במערכת הנשימה התחתונה (הריאות) ולא דרכי הנשימה העליונות. לפיכך, התקפה אלימה של iav בעכברים הוא לא תמיד מתואם כי ראיתי אצל בני אדם. כליל, בגלל היתרונות עולים על החסרונות מוגבל, העכבר מייצג את המודל החייתי הראשון המשמשים להערכת פתוגנזה נגיפי שפעת, immunogenicity, מגן יעילות במחקרים חיסון, אנטי-ויראלי. יתר על כן, זה לא יהיה קביל מבחינה מוסרית לבצע מחקרים עם iav ב באמצעות מודלים בעלי חיים גדולים ללא ראיות קודמות במודל בעלי חיים קטנים של זיהום iav. כתב יד זה, אנו נתאר כיצד להדביק עכברים intranasally (i.n.) עם iav ב, כיצד לפקח את חומרת והתקדמות של זיהום ויראלי, כיצד לבצע את הניסויים הנדרשים כדי להעריך את תגובות מערכת החיסון ההורמונאלית והיעילות הגנה.

<table><tbody><tr><td>תאי אפיתל של Madin-Darby כלבים (MDCK)</td><td>ATCC</td><td>CCL-34</td><td></td></tr><tr><td>נקבה בת שישה עד שמונה שבועות C57BL/6 עכברים</td><td>המכון הלאומי לסרטן (NCI)</td><td>01XBE</td><td></td></tr><tr><td>Turckey תאים בלודים אדומים</td><td>Biolink Inc</td><td></td><td>חנות ב-4 מעלות; סי</td></tr><tr><td>דולבקו s שונה Eagle' s בינוני (DMEM)</td> <td>Corning Cellgro</td><td>15-013-CV</td><td>חנות ב 4 מעלות; סרום</td></tr><tr><td>בקר עוברי C (FBS)</td><td>Seradigm</td><td>1500-050</td><td>יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות; C</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין/L-גלוטמין (PSG) 100x</td><td>Corning</td><td>30-009-CI</td><td>חנות ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין (PS) 100x</td><td>Corning</td><td>30-00-CI</td><td>חנות ב-20 מעלות; </td></tr><tr><td>תמיסת C Bovin Albumin (BA)</td><td>חנות Sigma-Aldrich</td><td>A7409</td><td>ב-4 מעלות; </td></tr><tr><td>C Bovin סרום אלבומין (BSA)</td><td>חנות Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td>ב-4 מעלות; C</td></tr><tr>טריפסין <td>Sigma-Aldrich</td><td>T8802</td><td>שטופל ב-Tosylsulfonyl phenylalanyl chloromethyl ketone (TPCK)</td><td>ב-20 מעלות; </td></tr><tr><td>C Neutral Buffered Formalin 10%</td> <td>EMD</td><td>65346-85</td><td>חנות ב-RT</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>J.T.Baker</td><td>X198-07</td><td>חנות ב-RT</td></tr><tr><td>נוגדן חד-שבטי אנטי-NP Influenza A Virus HB-65</td><td>ATTC</td><td>H16-L10-4R5</td><td>חנות ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>אימונוגלובולינים נגד עכברים של ארנב פוליקלונלי/FITC</td><td>Dako</td><td>F0261</td><td>חנות ב-4 מעלות; C</td></tr><tr><td>ECL Anti-mouse IgG, חזרת פרוקסידאז מקושר נוגדן שלם</td><td>GE Healthcare</td><td>LNA931V/AG</td><td>Store ב-4 מעלות; </td></tr><tr><td>סט מצעים C TMB</td><td>BioLegend</td><td>421101</td><td>Store בטמפרטורה של 4 מעלות; קורא</td></tr><tr><td>צלחות קינטיות C Vmax</td><td>מכשירים</td><td></td><td></td>מולקולריים</tr><tr><td>מטחנות רקמות Dounce</td><td>תומאס סיינטיפיק</td><td>7722-7</td><td></td></tr><tr><td>אנזים הורס קולטנים, RDE (II)</td> <td>Denka Seiken Co.</td><td>370013</td><td>חנות ב-20 מעלות; C</td></tr><tr><td>קריסטל סגול</td><td>פישר Scienctific</td><td>C581-100</td><td>חנות ב-RT</td></tr><tr><td>96-well צלחת תרבית תאים</td><td>Greiner Bio-one</td><td>655-180</td><td></td></tr><tr><td>כלי תרבית תאים 100 מ"מ</td><td>Greiner Bio-one</td><td>664-160</td><td></td></tr><tr><td>Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td><td>Thermo Fisher Scienctific</td><td>269620</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 96-Well פוליסטירן חרוטי תחתון MicroWell צלחות</td><td>Thermo Fisher Scienctific</td><td>249570</td><td></td></tr><tr><td>Puralub משחה וטרינרית</td><td>Dechra</td><td>9N-76855</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלורסנט</td><td>אולימפוס</td><td>אולימפוס IX81</td><td></td></tr></tbody></table>

מחקרים וירוס שפעת a במודל של עכברים של זיהום

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

וירוסים שפעת לגרום למותם over 500,000 ברחבי העולם1 והן משויכות תמורת עלות שנתית של 12-14 מיליארד דולר בארצות הברית לבד בהתחשב רפואי ישיר, הוצאות אשפוז, עבודה ההיעדרויות2. מודלים בעלי חיים חיוני בלימודי וירוס (iav ב) שפעת A כדי להעריך פתוגנזה ויראלי, אינטראקציות פתוגן-פונדקאי, תגובות מערכת החיסון, היעילות של החיסון הנוכחית ו/או רומן גישות כמו גם עלולות. עכברים הם מודל חיה קטנה יתרון כי המערכת החיסונית אבולוציונית דומה לזה נמצא אצל בני אדם, הם זמינים מספקי מסחרי כמו בנושאים זהים גנטית, ישנם זנים מרובים שעלולים להיות מנוצלים לרעה כדי להעריך בסיס גנטי של זיהומים, הם זולים יחסית, קל לתמרן. רוצה להתרכז iav ב זיהום בבני אדם באמצעות דרכי הנשימה, עכברים הם מרדימים קודם לפני חיסון תוך-אפי עם מדבקת IAVs תחת אבטחה נאותה הבלימה. לאחר ההדבקה, בפתוגנזה של IAVs נקבע על-ידי ניטור מדי יום התחלואה (ירידה במשקל הגוף) ושיעור התמותה (הישרדות). בנוסף, ניתן להעריך פתוגנזה ויראלי גם על-ידי הערכת שכפול וירוס העליון (רירית האף) או התחתון בדרכי הנשימה (ריאות) של עכברים נגועים. התגובות ההורמונאלית על זיהום iav ב ניתן להעריך במהירות על ידי דימום לא פולשנית וזיהוי נוגדן משני מבחני שמטרתו גילוי הנוכחות של סה כ או נטרול נוגדנים. כאן, אנו מתארים את שיטות נפוצות כדי להדביק עכברים intranasally (i.n) עם iav ב ולהעריך פתוגנזה, תגובות חיסוניות ההורמונאלית והיעילות הגנה.

אפיון נגיפי פתוגנזה בעכברים
בפתוגנזה של iav ב קשורה את התחלואה ואת התמותה הנגרמת על ידי הזיהום שלה. שני פרמטרים אלה ניתן להעריך בעכברים בקלות: iav ב תחלואה קשורה עם ירידה במשקל הגוף אצל עכברים נגועים, האחוז של הישרדות יציין שעור התמותה (איור 1). משקל הגוף של הישרדות ב עכברים נגועים iav ב בדרך כלל מנוטרים מדי יום במשך לפחות שבועיים לאחר זיהום8,9...

וירוסים שפעת A (IAVs) הם חשובים פתוגנים הנשימה האנושית. כדי להבין את פתוגניות של IAVs וכדי לבצע בדיקות פרה גישות חיסון הרומן, חייתיים מחקה פיזיולוגיה אנושית נדרשים. כאן, אנו מתארים שיטות להערכת iav ב פתוגנזה, התגובות ההורמונאלית, יעילות החיסון באמצעות מודל של העכבר של זיהום.

מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

המטרה הכוללת של הליך ניסיוני זה היא להעריך את הפתוגנזה, את התגובות ההומורליות ואת יעילות ההגנה המושרה על ידי נגיפי Influenza A מסוג wild-type או חיסוני Influenza באמצעות מודל זקיקי עכברים לזיהום. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות הנוגעות לביולוגיה של נגיפי Influenza A, כגון פתוגנזה נגיפית, תגובות חיסוניות ויעילות של חיסוני Influenza, כמו כן, תרופות אנטי-ויראליות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא לעכבר יש מערכת חיסונית הדומה לזו של בני אדם, וקיימים זנים מרובים שניתן לנצל כדי להעריך את הבסיס הגנטי של זיהומי נגיף Influenza A.מכיוון ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי היעילות של חיסונים חדשים נגד שפעת, ניתן להחיל אותה גם על מערכות ישנות יותר, כגון הערכת טיפולים אנטי-ויראליים פוטנציאליים, כולל שימוש בנוגדנים או תרופות. לאחר גידול וסימון של עכברי C57B6 בני שש עד שמונה שבועות בתנאים נטולי פתוגנים והכנת מהלעות של נגיף Influenza A או IAV בתנאים אספטיים, השתמשו במאזניים כדי לשקול את העכברים ורשמו את המשקל.לאחר הרדמת העכבר ואימות עומק ההרדמה בהתאם לפרוטוקול הכתוב, הנח את העכבר במצב שכיבה על הגב (dorsal recumbency). הכנס את קצה הפפילטה המכיל 30 microliters של תמיסת הנגיף לנחיר והזרק את התמיסה באיטיות אך באופן קבוע. כדי להעריך תחלואה ותמותה, הדבק שלוש עד ארבע קבוצות של עכברות עם 10 doses מלאים ש

influenza-a-virus-studies-in-a-mouse-model-of-infection

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

במקביל זיהום בנגיף שפעת היא אחד הגורמים המעורבים אינדוקציה של המחלה pneumococcal פולשנית במהלך...

באמצעות הדמיה Bioluminescent לחקור סינרגיזם בין Streptococcus pneumoniae ו שפעת וירוס עכברים תינוקות

מקור: לנהרד, א. ואחרים. מודל עכבר למעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן בעקבות זיהום נגיפי משחזר מחלה שהוחמרה על ידי הגיל. J. Vis. Exp. (2022)הסרטון הזה מדגים מודל זיהום משותף לעכברים, שבו נגיף השפעת מפעיל את המעבר של Streptococcus pneumoniae ממתיישב לפתוגן. הוא מפרט את השלבים המעורבים בהתיישבות חיידקית, זיהום ויראלי והתקדמות מחלה.

מודל עכבר לחקר המעבר הפתוגני של Streptococcus pneumoniae בעקבות זיהום נלווה ויראלי

Source: Wang, M., et al, Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates intranasal infection of a mouse with a pathogenic influenza virus to establish a respiratory tract infection. The procedure outlines the administration of the virus into the nasal cavity. The virus enters host cells, replicates, and activates the immune system.

Intranasal Infection of a Mouse with a Pathogenic Influenza Virus

סרטון זה מדגים שיטה למעקב אחר זיהומים נגיפיים במודלים של עכברים באמצעות וירוס רקומביננטי של לוציפראז וחלבון פלואורסצנטי המבטא חלבון פלואורסצנטי שפעת A. שיטה זו מאפשרת הן מחקרי in vivo והן מחקרי ex vivo, ומאפשרת לחוקרים לקבל תובנות לגבי דינמיקה נגיפית והשפעות של התערבויות.

וירוס שפעת של כתב לוציפראז-פלואורסצנטי למעקב אחר זיהומים ויראליים

יש חוסר ידע כללי על אופן פעולת החיסונים. כאן אנו מציעים שימוש משולב בגנטיקה הפוכה ועכברים כימריים של מח עצם כדי לקבל תובנה לגבי התגובות החיסוניות המוקדמות של המארח לחיסונים עם דגש מיוחד על תאים דנדריטיים וחסינות תאי T.

Intranasal המינהל של החיסונים שפעת רקומביננטי במודלי כימרי עכבר ללמוד חסינות רירית

מודלים מערכתיים ומקומיים של זיהום דג זברה לנגיף שפעת אנושי A. באמצעות מודל זיהום מערכתי, ניתן להשתמש בדג הזברה לבדיקת תרופות אנטי-ויראליות. באמצעות מודל זיהום מקומי, ניתן להשתמש בדג הזברה כדי לאפיין את תגובות תאי החיסון של המארח.

באמצעות מודלי דג זברה של נגיף שפעת A האדם למסך תרופות אנטי ולאפיין מארח תגובות תא חיסון

במחקר זה, אנו מציגים פרוטוקול לבצע שני הפוטונים intravital הדמיה ותא ניתוח אינטראקציות בין רירית והכו אותי מאתר לאחר ההדבקה בנגיף שפעת. פרוטוקול זה יהיה רלוונטי עבור החוקרים ללמוד את הדינמיקה תא החיסון במהלך זיהומים בדרכי הנשימה.

אינטראקציה תא הדמיה ב רירית והכו אותי במהלך זיהום בנגיף שפעת באמצעות מיקרוסקופ שני הפוטונים Intravital

שפעת וירוסים (IAVs) הם פתוגנים הנשימה מדבקת הגורמות מגיפה שנתית ומדי פעם גיפות. כאן, אנו מתארים פרוטוקול לעקוב אחר זיהומים ויראליים בvivo באמצעות רומן רקומביננטי לוציפראז והבעת הביטוי הדו-כתבת b IAV (בירפעת). גישה זו מספקת לחוקרים כלי מצוין כדי ללמוד IAV ב-vivo.

לוציפראז-כתבת פלורסנט וירוס שפעת עבור הדמיה חיה וכימות של זיהום נגיפי

מאמר זה מתאר פרוטוקולים של הערכת תגובת Tfh ו- GC B במודל העכבר של זיהום וירוס שפעת.

הערכה של תאי עוזר T זקיקים ותגובת מרכז חיידקים במהלך שפעת זיהום וירוס בעכברים

מאמר זה מתאר מודל עכברי חדשני למעבר של פנאומוקוק ממתיישב אסימפטומטי לפתוגן הגורם למחלה במהלך זיהום ויראלי. מודל זה יכול להיות מותאם בקלות לחקר אינטראקציות מיקרוביאליות ומארח-פתוגן במהלך השלבים השונים של התקדמות המחלה ועל פני מארחים שונים.

מודל עכברי למעבר של דלקת ריאות סטרפטוקוקוס מקולונייזר לפתוגן עם זיהום משותף ויראלי מחזיר מחלה המחמירה בגיל

פרוטוקול זה מספק הוראות למתן תוך-אף של IAV וניתוח במורד הזרם של נזק לריאות עכברים ושינויים שעתוק נלווים לסוגי תאי ריאה.

מידול תיקון דיספלסטי ותפקודי של מכתשית ריאות לאחר זיהום בשפעת

חקור את פתוגנזת נגיף השפעת A ויעילות חיסונים במודל עכברים C57B6. שיטה זו מאפשרת הערכת תגובות חיסוניות הומורליות ופיתוח טיפולים אנטי-ויראליים חדשים.

מחקרים וירוס שפעת A במודל של עכברים של זיהום

גלה סרטונים נוספים