Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA <em>In Situ</em> Hybridization

Xiao Xu; Yinwei You; Long Zhang

doi:10.3791/55924

לוקליזציה של גנים קולטן Odorant ב אנטנות ארבה על ידי RNA באתרו הכלאה

JoVE Journal
Neuroscience

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Neuroscience

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

לוקליזציה של גנים קולטן Odorant ב אנטנות ארבה על ידי RNA באתרו הכלאה

Full Text

8,648 Views

09:30 min

July 13, 2017

DOI: 10.3791/55924-v

Xiao Xu¹, Yinwei You^1,2, Long Zhang¹

¹Department of Entomology,China Agricultural University, ²Bio-tech Research Center,Shandong Academy of Agricultural Sciences

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

מאמר זה מתאר פרוטוקול RNA מפורט ויעיל בפרוטוקול הכלאה באתרו, במיוחד עבור גנים של קולטנים (OR), המופיעים ברמה נמוכה, וכן בגנים אחרים, באנטנות חרקים באמצעות בדיקות דיגוקיגנין (DIG) או תוויות ביוטין.

המטרה הכוללת של הליך זה היא למקם גנים של קולטני ריח מבוטאים ברמה נמוכה כמו גם גנים אחרים באנטנות החרקים באמצעות בדיקות עם תווית דיגוקסיגנין או ביוטין. כדי להתחיל בהליך זה, בחר את הארבה הבוגר החדש הפעיל ויש לו אנטנות שלמות, ואז חתוך את האנטנות לשניים עד שלושה מילימטרים באמצעות סכיני גילוח סטריליים. לאחר מכן, מרחו תרכובת OCT על מחזיק מיקרוטום מקפיא והניחו את הדגימות על התרכובת בצורה אופקית.

העבירו את המחזיק למיקרוטום המקפיא בטמפרטורה שלילית של 24 מעלות צלזיוס כדי לאזן עד שהתרכובת קופאת. לאחר מכן, הוציאו את המחזיק וכסו את הדגימות בתרכובת קטנה. העבירו את המחזיק למיקרוטום המקפיא בטמפרטורה שלילית של 24 מעלות צלזיוס שוב למשך 10 דקות לפחות, ואז חתכו את הדגימות הקפואות לפרוסות בעובי 12 מיקרומטר.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos