July 17th, 2017
כאן אנו מציגים פרוטוקול לבדיקת עכבר ספציפית של קוגניציה שאינה דורשת שחייה. בדיקה זו יכולה לשמש כדי להבדיל בהצלחה מבוקרת קליפת המוח המושרה עכברים פגיעה מוחית טראומטית מ שולטת בושה.
המטרה הכוללת של פרוטוקול מבוך דריכה רדיאלי זה היא לבחון זיכרון מרחבי במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית באמצעות מטלה קוגניטיבית ממוקדת עכבר שאינה דורשת שחייה. שיטה זו יכולה להיות שימושית במיוחד לבדיקת קוגניציה במודלים של עכברים, כאשר ליקויים מוטוריים או חוסר מוטיבציה הופכים פרוטוקולי בדיקה קוגניטיביים מבוססי שחייה כמו מבוך המים של מוריס לבלתי מעשיים. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי הבדלים קבוצתיים וקוגניציה במודל השפעה קליפת המוח המבוקר של פגיעה מוחית טראומטית בעכברים, היא יכולה להיות שימושית גם למדידת קוגניציה במודלים של עכברים מבוגרים וטרנסגניים הידועים כבעלי ביצועים גרועים במבחנים מבוססי שחייה.
בכל ימי הבדיקה, בצע את שלבי ההכנה הבאים. ראשית, אפשרו לעכברים להתאקלם בחדר הבדיקה, כשהם נמצאים בכלובים הביתיים שלהם למשך 30 דקות לפחות. המבוך העגול כולל רמזים חזותיים לאורך הקירות הפנימיים.
תיבת המילוט הניתנת להזזה ממוקמת באחד מתשעה חורי יציאה שונים. בזמן שהעכברים מתאקלמים, יש לחטא את היציאות ואת הקופסה באמצעות תרסיס אתנול 70%. לאחר מכן, מלאו את המבוך בערך בסנטימטר אחד של מים קרים.
שמירה על טמפרטורת המים עקבית בין הניסויים חשובה מאוד. אז מדוד במדויק, והתאם לפי הצורך. כעת, מקם את תיבת המילוט באחד מתשעת חורי היציאה.
שימוש במקור חימום כדי לשמור על חום הקופסה, באופן אידיאלי באמצעות כרית חימום. כמו כן, אטום את הקופסה מאור. תיבת המילוט צריכה להיות תמיד כהה, חמה וחסרת ריח יחסית.
סביר להניח שמקור האור יהיה גם רמז אז אל תשנה את מיקומו בין הניסויים. הסר את עכבר הבדיקה מהכלוב שלו בעדינות בזנב, והנח אותו במרכז המכשיר. לאחר מכן התחל מיד לתזמן כמה זמן לוקח לעכבר למצוא את היציאה.
אם עכבר מטפס לתוך חור מסיים, ואינו נכנס שוב למבוך באופן ספונטני לאחר 20 שניות, אל תפסיק את הניסוי. במקום זאת, הנח את העכבר בחזרה למרכז המבוך ביד, ותן לעכבר להשלים את הניסיון. אם לאחר שלוש דקות, העכבר לא יצא מהמבוך, ציין את הניסיון ככישלון ורשום את הזמן כשלוש דקות.
ואז ביד, הנח בזהירות את החיה לאורך השביל הישר ביותר ליציאה. ברגע שנכנסים לתיבת הבריחה, אפשר לעכבר להישאר שם למשך דקה אחת. לאחר מכן העבירו אותו בחזרה לכלוב הביתי שלו בזמן שהמבוך מתאפס.
בין הניסויים, יש לחטא היטב את תיבת המילוט והיציאות עם תרסיס אתנול של 70% כדי למנוע מהעכבר להשתמש ברמזים ישנים של המפעל כדי לאתר את נתיב המילוט הנכון. ניתן לעשות זאת די מהר. כעת, חזור על הניסוי על אותו עכבר פעמיים נוספות בסך הכל שלושה ניסיונות רצופים.
כל יום בדיקה מורכב משלושה ניסויים לכל עכבר. לא יותר ולא פחות. בנוסף לחיטוי, רוקנו את המבוך ורעננו את המים בין בדיקת עכברים שונים.
הקפידו לשמור על טמפרטורת המים בין 12 ל-14 מעלות צלזיוס. השתמש במיכלי קרח או מים חמים קרים יותר כדי להתאים את טמפרטורת מי הברז לטווח זה. בין ימי המבחן, חשוב לוודא שהרמזים הוויזואליים במבוך ובמרחב הסובב את המבוך יישארו עקביים.
משטר בדיקות מלא כולל חמישה ימי בדיקה רצופים שכולם מתנהלים באותו אופן. היום החמישי נחשב למדד לשימור זיכרון. בתנאי שלא מבוצעות בדיקות בין היום השישי ל-11, ניתן להשתמש במבחן ביום ה-12 למדידת זיכרון לטווח ארוך.
מבוך המים הרדיאלי שימש לחקירת תלות בפציעה, ליקויים בזיכרון מרחבי בעכברים שקיבלו פגיעה מבוקרת בקליפת המוח, פגיעה מוחית טראומטית או פגיעה מזויפת. ניתוח TBI מתואר בפירוט בפרוטוקול הטקסט ובמאמר JoVE מאת Romin, Gao ו-Chen מ-2014. בקצרה, הפציעה נוצרה באמצעות פגיעה בקליפת המוח המונעת על ידי סולנואיד עם קצה קמור של שלושה מילימטרים.
הזייפות נותחו אך הושפעו מהמכשיר. 35 יום לאחר הניתוח, בוצע משטר הבדיקות המתואר. כל העכברים עברו את מבחן הקריטריונים לרצון לברוח מהמבוך.
אז כולם נכללו בניתוח. התוצאות מראות הבדל ברור בין עכברי TBI לבין בקרות דמה. חביון הבריחה היה ארוך יותר באופן משמעותי עבור עכברים פצועים ביום הראשון של האימון, ובשני ימי מבחן הזיכרון.
לכן, ה-TBI המתוארת השפיעה על יכולת הלמידה של החיה לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע כראוי בדיקות קוגניציה באמצעות מבחן ספציפי לעכבר של קוגניציה מרחבית. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך פחות מ-15 דקות לכל בעל חיים אם היא מבוצעת כראוי.
בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור שמיקום הרמזים החזותיים וטמפרטורת המים חייבים להישאר עקביים בכל הניסויים.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
מאמר זה מציג פרוטוקול לבדיקת קוגניציה ספציפית לעכברים שאינה כוללת שחייה, שמטרתה להעריך זיכרון מרחבי בדגמי עכברים של פגיעה מוחית טראומטית. השיטה שימושית במיוחד להערכת קוגניציה בעכברים עם ליקויים מוטוריים או מוטיבציה נמוכה, שם בדיקות מסורתיות מבוססות שחייה אינן מעשיות.
Assessing spatial memory in mouse models of traumatic brain injury is critical for target validation and mechanistic de-risking in neurotherapeutic development. The Radial Water Tread maze provides a mouse-specific, non-swimming cognitive assay that enables reliable detection of injury-induced cognitive deficits, supporting early discovery decisions. This approach improves predictive confidence by overcoming limitations of swimming-based tests in models with motor impairments or low motivation.
The Radial Water Tread maze fits within the discovery continuum from target validation through preclinical efficacy testing, particularly for neuroscience programs targeting cognitive endpoints in TBI.