Name: לב-ריאה במודל של עכברים: גישה מוזרה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: חקור מנגנונים מולקולריים של נזק לב בניתוח לב-ריאה בעכברים באמצעות מודל חדשני לבייפס. שיטה זו מאפשרת חקירה מעמיקה של השפעות זמן קרדיופלגיה ממושך על תפקוד הלב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים לא תודות לך

כל הניסויים בוצעו בדרישות החוק להגנת בעלי חיים גרמנית (TierSchG), אושרו על ידי ועדת רווחת בעלי חיים מקומיים (התחתון סקסוניה המדינה משרד הגנת הצרכן ובטיחות מזון, פרוטוקול TSA 14/1556). משקל מינימלי של העכבר מתאים מודל זה הוא 25 ג
 1. הכנות ממושכות הערה: כל הפרוצדורות מתבצעות בתנאים נקי, שאינו סטרילי, עם מכשירים בלוק.
<ol><li>במקום 50-60 ס מ 8 ארוך פרופילן סיבים במקביל צינור חלול והתחבר עם מתאם T משני הצדדים. למלא את החלל בין הסיבים חלול הענף החיצוני של T-המתאם עם דבק.
	<ol><li>אפשר לפחות 24 h עבור הדבק להקשיח. תעצור את צינור סיליקון אל אתרי חיבור גזורה הסיבים חלול המשתרעת החוצה המתאם-T באמצעות מיקרוטום סטנדרטי של.</li>
	</ol></li> <li>להכניס מחט מתכת 27 G (מתוך branule 26 גרם) בצינורית פוליאוריתן 2 Fr. להשתמש בלהב כירורגי ולחזור מיקרו-מספריים תחת מיקרוסקופ (8-12 X הגדלה) כדי להפוך שלושה או ארבעה fenestrations של 0.15 סנטימטר כל בתוך השליש הדיסטלי של הצינורית כדי להבטיח אופטימלית ורידים זרימה.
	<ol><li>הסר הסמויה כאשר הושלמה. השתמש ספוגיות כותנה עמום, הכחשה של מבנים. להשתמש גזה מטליות (5 x 5 ס מ 2) כדי לספוג את עודפי הנוזלים כדי למנוע התייבשות רקמות.</li>
	</ol></li> <li>להכין את העוצמה לקרקע. להשלמת, להוסיף 30 IU של הפארין לכל mL הטרמה v פתרון ו- 2.5% / v של פתרון 8.4% של NaHCO 3 לאכסון. לאחסן את הפתרון הזה ב 4 ° C עד בשימוש.</li>
	<li>למלא את המעגל משטרת שיקאגו (קרי, משאבה, אוויר הצייד, צנור וקנולות שני) עם פתרון לקרקע µL 850 דרך בצינורית וורידית. מילא פעם אחת, לשמור את משטרת שיקאגו מחזורי עד החיה יהיה מוכן עבור תעלות.</li>
</ol> 2. הרדמה בעלי חיים <ol><li>כדי לנהל הרדמה, למקם את החיה תא אינדוקציה מתחת לגיל 2.5% v/v איזופלוריין/חמצן תערובת. לאשר הרדמה. ראויה על-ידי הערכת רפלקס הנסיגה פדלים הזנב קמצוץ רפלקס, רפלקס מצמוץ העין. החלת משחה בעין וטרינריים כדי למנוע יובש בעין.</li>
	<li>במקום החיה על כרית חימום עם תפקוד וויסות טמפרטורה. למדוד את חום הגוף עם מכשיר בדיקה רקטאלית ושדלת מחוברים למערכת רכישת נתונים.</li>
	<li>אחרי הרדמה מלאה מושגת, להנשים את orotracheally בעלי חיים באמצעות braunule פלסטיק של 20 גרם, הוספתו אורלית, דוחפים אותו לתוך קנה הנשימה תחת שליטה ויזואלית. התחל אוורור מכני באמצעות מכשיר אידוי של איזופלוריין מחובר העכבר מחובר. למכונת הנשמה. תלוי במשקל בעלי חיים, להתאים האיוורור כך מושגת בנפח של 250-350 µL.</li>
	<li>כדי להבטיח מלאה שיכוך כאבים, להזריק 5 מ"ג/ק"ג משקל גוף בעלי החיים carprofen subcutaneously. מומלץ כי ריכוז איזופלוריין להישמר בין 1.3-2.5% חמצן. ריכוז איזופלוריין עשוי להיות מותאם באופן ידני בהתאם השלב של ההליך-</li>
</ol> 3. ניתוחים <ol><li>לאחר צנרור והרדמה מלאה מושגת, לבצע חתך בעור קו האמצע בצוואר עם מספריים חדות בסדר להפריד בין השרירים בצורה בוטה, לחשוף את ומוחלף הנכון ואת העורק השמאלי. במהלך ההכנה, מצב של קרישת כלי שיט קטנים באמצעות של coagulator וטרינרי מחובר מלקחיים דו-קוטבי כדי להבטיח אובדן דם מזערית חסר.</li>
	<li>לאחר הכנה של כלי צוואר, cranially מאתרים ומפסיקים החלק הדיסטלי של העורק תרדמני נפוצות השמאלי כדי שלו נגע הסתעפות בעזרת תפרים משי 8-0-</li>
	<li>התחבר במהירות קשר לסוף דיסטלי בצינורית 27 G אל הצנרת תזרים העורקים באמצעות מחבר סיליקון (0.5 מ מ ID, 1 מ מ OD), מקום 8-0 בתפר משי להחליק על המקטע proximal של העורק, וכן הוספה קצה הצינורית לתוך העורק הראשי.</li>
	<li>לאחר מיקום נכון של קצה הצינורית, לקדם את הטיפ בצינורית כך זה מטילה 3-4 מ"מ הציר הקרוב עד לקשת אבי העורקים. לתקן את הטיפ בצינורית נאבטח עם קשרים משי 8-0-</li>
	<li>באמצעות השתלה מלקחיים ומספריים, לבצע ניתוח בוטה וחד, לחשוף ומוחלף על נכון על ידי הכנה בוטה של רוחבית לרקמת שריר שריר הצוואר, ליד עצם הבריח, ומניחים קשר ממשי של 8-0 בבית בקצה הדיסטלי של 8-0 לולאה בקצה הפרוקסימלית.</li>
	<li>לאחר מצדו של סוף דיסטלי של ומוחלף על, המקום קצה בצינורית וורידית ומוחלף נכון, התקדמות לקראת אטריום ימין ומאובטח באמצעות הקשר משי. על החזר ורידי אופטימלית, ייתכן צורך לקדם את הטיפ ורידים לתוך החדר הימני.</li>
	<li>פעם המיקום הנכון בצינורית מושגת, לבצע heparinization מערכתית על-ידי הוספת 2.5 IU של הפארין לגרם של bodyweight בבעלי חיים באמצעות הזרקה תוך ורידי ישירה לתוך ומוחלף על.</li>
	<li>לניטור לחץ פולשנית בזמן אמת, נקרר עורק הירך השמאלית. לחשוף את אזור המפשעה ולהפריד בעדינות עורק הירך משותפת מן הירך ווריד הירך עצב תחת הגדלה X 25.
	<ol><li>Ligate החלק הדיסטלי של עורק הירך. באופן זמני occlude החלק צינתור עם תגית-קשר, עושים חתך קטן בדופן הקדמי באמצעות מיקרו-מלקחיים.</li>
		<li>לאחר מכן, הכנס Fr 1 פוליאוריתן בצינורית לתוך עורק הירך ואבטח אותו עם משי 10-0 בתפר. בצינורית זה משמש כדי לחלץ דוגמיות דם עבור בדיקות גזים בדם.</li>
	</ol></li> <li>לאחר השמה מוצלחת של קנולות ובורידים, ליזום ריאה על-ידי הפעלת המשאבה. הזמן של צנרור ההתחלתי של משטרת שיקאגו הוא כ 45 דקות התחל באמצעות קצב זרימה של 0.5 mL/min, בהתאם ללחץ מערכתי מדידות להגביר זרימת הדם בתוך 2 דקות לזרימה מלאה (4-6 mL/min) על ידי הגדלת המהירות משאבת.</li>
	<li>תחת פיקוח מלא, לבצע sternotomy העליון באמצעות מספריים חדות החל מ. המנובריום והולכים 5 מ מ בכיוון סימטרית. מצב של קרישת חסר את הקצוות בחזה ובצלעות מיד כדי למנוע דימום. לחשוף את קשת אבי העורקים על ידי משיכת עורק התרדמה הימני לכיוון הגולגולת.</li>
	<li>בקרה אופטימלית, circumferentially בחינם את קשת אבי העורקים התימוס, הרקמה הסובבת כדי להקל על מחבר חובק למעקה. מקום 8-0 משי סיבובים סביב אבי העורקים. כדי למקם את המלחציים צלב על הלב, משוך הלולאה משי בכיוון הגולגולת כדי לחשוף יותר של אבי העורקים.</li>
</ol> 4. לב-ריאה וניתוח גז דם <ol><li>עבור בדיקות גזים בדם (הבי), השתמש זכוכית צינורות קפילר לאסוף דם עורקי µL 60-90 דרך הצנתר בעורק הירך.
	<ol><li>להשתמש במלחצת קטנים לאורך צינור סיליקון ולנתק את הצנרור של הקטטר. שחרור הלחץ לאט על המלחציים כדי לאפשר מילוי מבוקרת צינור קפילרי.</li>
		<li>לחבר צינור סיליקון כדי הצנתר. להכניס צינורות קפילר במנתח גז דם למדידות בנקודות זמן הבאים: 10 דקות לאחר החניכה של משטרת שיקאגו עם אוורור (BGA1) לאחר 25 דקות של משטרת שיקאגו, 15 דקות של דום נשימה (BGA2) לאחר 40 דקות של משטרת שיקאגו, 30 דקות של דום נשימה (BGA3) לאחר 55 דקות של משטרת שיקאגו, 45 דקות של נשימה ו- 20 דקות של דום (BGA4)</li></ol></li> <li>תחת זרם יציב משטרת שיקאגו, הקפד טה דום נשימה שעצרתם את האוורור.</li>
	<li>לאחר סיום של אוורור, משטח התחממות כדור הארץ מוגדר 28 ºC ולהתחיל את הגארדיאן קירור החיה לטמפרטורת הגוף ºC 28 במרחק 20 דקות הראשונות של דום נשימה באמצעות גזה ספוגה תמיסת מלח קר.</li>
	<li>ברגע טמפרטורת גוף של 28 ºC מושגת, ואחרי סך של 30 דקות של דום נשימה, לנהל mL 0.3 של 7.45% אשלגן כלורי פתרון לתוך המעגל משטרת שיקאגו ליזום הלב.</li>
	<li>עבור לחצות מחבר חובק למעקה של אבי העורקים, משוך את הלולאה משי הקודם שמוקם (שלב 3.10) בכיוון הגולגולת של חשיפה טובה יותר, במקום מלחציים מיקרו-serrefine על החלק העולה של אבי העורקים.</li>
	<li>לבצע סך של דום נשימה 60 דקות ו- 30 דקות של דום. הסר את המלחציים מיקרו-serrefine אבי העורקים ליזום פגיעה reperfusion של הלב. בו זמנית, מחדש לאוורר וחם החיה אל 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>לאחר פגיעה reperfusion הושלמה, החיה הגיעה normothermia, לסיים את משטרת שיקאגו על-ידי כיבוי המשאבה ולהמשיך לעקוב אחר מדידות פיזיולוגיות (למשל חום הגוף, אק ג, לחץ דם פולשנית) במשך 20 דקות</li>
	<li>בסוף הניסוי, תדמם החיה בהרדמה מלאה (5% איזופלוריין) ולאסוף דם ואיברים נוספים ניתוח 14.</li>
</ol>

<ol><li>Edmunds, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiopulmonary+Bypass+after+50+Years%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiopulmonary Bypass after 50 Years.</a> N. Engl. J. Med. 351 (16), 1601-1603 (2004).</li>
<li>Goto, T., Maekawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+dysfunction+after+coronary+artery+bypass+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anesth%22%5BJournal%5D)">Cerebral dysfunction after coronary artery bypass surgery.</a> J. Anesth. 28 (2), 242-248 (2014).</li>
<li>Uysal, S., Reich, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurocognitive+outcomes+of+cardiac+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cardiothorac.+Vasc.+Anesth%22%5BJournal%5D)">Neurocognitive outcomes of cardiac surgery.</a> J. Cardiothorac. Vasc. Anesth. 27 (5), 958-971 (2013).</li>
<li>Ballaux, P. K., Gourlay, T., Ratnatunga, C. P., Taylor, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+literature+review+of+cardiopulmonary+bypass+models+for+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Perfusion%22%5BJournal%5D)">A literature review of cardiopulmonary bypass models for rats.</a> Perfusion. 14 (6), 411-417 (1999).</li>
<li>Jungwirth, B., de Lange, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cardiopulmonary+bypass%3A+development%2C+applications%2C+and+impact%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cardiothorac.+Vasc.+Anesth%22%5BJournal%5D)">Animal models of cardiopulmonary bypass: development, applications, and impact.</a> Semin. Cardiothorac. Vasc. Anesth. 14 (2), 136-140 (2010).</li>
<li>Günzinger, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+cardiopulmonary+bypass+with+cardioplegic+arrest+and+hemodynamic+assessment+by+conductance+catheter+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">A rat model of cardiopulmonary bypass with cardioplegic arrest and hemodynamic assessment by conductance catheter technique.</a> Basic Res Cardiol. 102 (6), 508-517 (2007).</li>
<li>Waterbury, T., Clark, T. J., Niles, S., Farivar, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+cardiopulmonary+bypass+for+deep+hypothermic+circulatory+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thorac.+Cardiovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Rat model of cardiopulmonary bypass for deep hypothermic circulatory arrest.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (6), 1549-1551 (2011).</li>
<li>Schnoering, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+newly+developed+miniaturized+heart-lung+machine-expression+of+inflammation+in+a+small+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Artif.+Organs%22%5BJournal%5D)">A newly developed miniaturized heart-lung machine-expression of inflammation in a small animal model.</a> Artif. Organs. 34 (11), 911-917 (2010).</li>
<li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+responses+of+tissues+from+the+brain%2C+heart%2C+kidney%2C+and+liver+to+resuscitation+following+prolonged+cardiac+arrest+by+examining+mitochondrial+respiration+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid.+Med.+Cell.+Longev%22%5BJournal%5D)">The responses of tissues from the brain, heart, kidney, and liver to resuscitation following prolonged cardiac arrest by examining mitochondrial respiration in rats.</a> Oxid. Med. Cell. Longev. 2016, (2016).</li>
<li>Shappell, S. B., Gurpinar, T., Lechago, J., Suki, W. N., Truong, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+obstructive+uropathy+in+severe+combined+immunodeficient+%28SCID%29+mice%3A+lymphocyte+infiltration+is+not+required+for+progressive+tubulointerstitial+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Chronic obstructive uropathy in severe combined immunodeficient (SCID) mice: lymphocyte infiltration is not required for progressive tubulointerstitial injury.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 9 (6), 1008-1017 (1998).</li>
<li>Majzoub, J. A., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://web.mit.edu/hst.160/www/Knockout.pdf">Knockout mice.</a> N. Engl. J. Med. , 904-907 (1996).</li>
<li>Houser, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Heart+Failure+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Heart Failure A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Circ. Res. 111 (1), 131-150 (2012).</li>
<li>Russell, J. C., Proctor, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+cardiovascular+disease%3A+tools+for+the+study+of+the+roles+of+metabolic+syndrome%2C+dyslipidemia%2C+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Small animal models of cardiovascular disease: tools for the study of the roles of metabolic syndrome, dyslipidemia, and atherosclerosis.</a> Cardiovasc. Pathol. 15 (6), 318-330 (2006).</li>
<li>Iurascu-Gagea, M., Craig, S. Euthanasia and necropsy. <a target="_blank" href="https://books.google.com/books?id=HhEs-xsYp6IC&lpg=PP1&ots=kQsV14dfx9&dq=%22The%20laboratory%20rabbit%2C%20guinea%20pig%2C%20hamster%2C%20and%20other%20rodents%22&lr&pg=PP1#v=onepage&q=%22The%20laboratory%20rabbit,%20guinea%20pig,%20hamster,%20and%20other%20rodents%22&f=false">The laboratory rabbit, guinea pig, hamster, and other rodents</a>. Suckow, M. A., Stevens, K. A., Wilson, R. P. , Academic Press (Elsevier). 117-141 (2012).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

. פיתחנו תפקוד מלא הרלוונטית קלינית מודל של משטרת שיקאגו בעכבר... עם יותר משלושים זני עכברים שיש מחלות לב וכלי דם, המודל שלנו יכול להיות נקודת התחלה לפיתוח פרוטוקולים פוטנציאליים חדשים הקשורים משטרת שיקאגו. יתר על כן, בשל שפע של ריאגנטים ספציפיים העכבר ועכברים נוק-אאוט, מודל זה רק לא נחליף את הדגם חולדה הנוכחית של משטרת שיקאגו אבל יקל על ניתוח המנגנונים המולקולריים המעורבים נזק לאיבר הקשורות משטרת שיקאגו. עד כה, משטרת שיקאגו לא הוחל בעכברים בשל אתגרים המיקרוכירורגית בטכניקה תעלות, כמו גם אתגרים טכניים, כולל הפיתוח של מיק...

מאז כניסתה של לב-ריאה (משטרת שיקאגו) לתוך המרפאה, ומילא תפקיד חיוני כירורגיית1. בניתוח לב מודרני, זמן ממושך משטרת שיקאגו חיוני לבצע שחזורים נרחבים אבי העורקים ונהלים משולב. למרות ההתקדמות הטכנולוגית היה עצום, השימוש של מחזור extracorporal מקושרת עם אינטרה -, לאחר הניתוח מערכתית, איברים המקומי נזק2,3.
מודלים בעלי חיים גדולים פותחו כדי לחקור את התפקיד של משטרת שיקאגו על תהליכים פיזיולוגיים4,5. אף על פי מודלים אלה סיפקו תובנות חלק משטרת שיקאגו הקשורים סיבוכים, הם מאוד יקרים, כלים (למשל, נוגדנים) מוגבלים מאוד. חלופה חסכוני יותר פותחה בחיות קטנות. מאז הפיתוח שלהם, נערכו מחקרים רבים כדי למטב דגם משטרת שיקאגו חולדות וארנבות,5,6,7,8,9. מודלים אלה מספקים בסיס טוב עבור מדידות של תהליכי מחלה pathophysiological; עם זאת, הם עדיין לא מספיק לחקור אימונולוגיה תאית, ההורמונאלית בשל היעדר נוגדנים הרלוונטיים, ריאגנטים. זה מחליש את תפקידם בתחום זה של מחקר.
לאחרונה פיתחנו מודל העכבר של משטרת שיקאגו. בשל מגוון רחב של ריאגנטים ספציפיים העכבר ועכברים מהונדסים גנטית, העכבר מודלים הם באופן כללי המודל של בחירה עבור מחקר פיזיולוגי, מולקולרית, אימונולוגי10,11. לפיכך, המודל שלנו יקל המחקר של משטרת שיקאגו ביחס מחלות רקע שונות כמו ישנם זנים עכברים זמין עם מחלות רלוונטיות קלינית12,13. בהתאם לכך, מאמר זה מתאר, בפירוט כיצד לבצע משטרת שיקאגו בעכברים. חמצן ופרמטרים והמודינמיקה בפיקוח צמוד לאחר מעצר עמוק בדרכי הנשימה, מחזור הדם.

<table><tbody><tr><td>Sterofundin</td><td>B.Braun Petzold GmbH</td><td>PZN:8609189</td><td>נפח תחול, 1:1 עם Tetraspan</td></tr><tr><td>Tetraspan 6% תמיסת HES</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>PZN:</td><td>05565416 נפח תחול, 1:1 עם Sterofundin</td></tr><tr><td>Heparin Natrium 25.000</td><td>Ratiopharm GmbH</td><td>PZN: 3029843</td><td>2.5 IU למ"ל תמיסת תחול</td></tr><tr><td>NaHCO3 8,4% תמיסה</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>PZN: 1579775</td><td>3% בתמיסת תחול</td></tr><tr><td>KCL 7.45% תמיסה</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>PZN: 2418577</td><td>0.1 מ"ל לקרדיופלגיה</td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>Zoetis Inc., ארה"ב</td><td>PZN:00289615 08859153</td><td>5 מ"ג/ק"ג/BW</td></tr><tr><td>1 Fr PU קטטר</td><td>Instechlabs INC., ארה"ב</td><td>C10PU-MCA1301</td><td>עורק צוואר</td></tr><tr><td>2 Fr PU קטטר</td><td>Instechlabs INC., ארה"ב</td><td>C20PU-MJV1302</td><td>וריד הצוואר</td></tr><tr><td>Vasofix צנתר בטיחות 20G</td><td>B.Braun Medical</td><td>4268113S-01</td><td>אינטובציה orotracheal</td></tr><tr><td>8-0 תפר משי קלוע</td><td>Ashaway Line & Twine Mfg. Co., ארה"ב</td><td>75290</td><td>ליגטורה</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal טיפול קריטי Deutschland GmbH</td><td>PZN:9714675</td><td>נרקוזה</td></tr><tr><td>CLINITUBES נימי דם</td><td>Radiomed GmbH</td><td>51750132</td><td>דגימת דם 60 - 95 מיקרוליטר</td></tr><tr><td>מספריים קפיציים - 6 מ"מ להבים</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>15020-15</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>מספריים קפיציים - 2 מ"מ להבים</td><td>Fine Science כלים GmbH</td><td>15000-03</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito Hemostat</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>13009-12</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Dumont #55 מלקחיים</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>11295-51</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Castroviejo מחזיק מחט מיקרו - 9 ס"מ</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>12060-02</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Micro Serrefines</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>18555-01</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>בולדוג Serrefine</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>18050-28</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>מאוורר MiniVent לעכברים (דגם 845)</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>73-0044</td><td>אוורור מכני</td></tr><tr><td>Isoflurane Vaporizer Drager 19.1</td><td>Dr&auml; gerwerk AG & Co. KGaA</td><td></td><td>הרדמה 1.3 - 2.5%</td></tr> <tr><td>מכשיר לרכישת נתונים PowerLab 4/35</td><td>ADInstruments Ltd, ניו זילנד</td><td>PL3504</td><td>לחץ פולשני, א.ק.ג, טמפרטורה</td></tr><tr><td>ABL 800 Flex</td><td>Radiometer GmbH</td><td></td><td>ניתוח גזי דם</td></tr><tr><td>עכברי NMRI</td><td>מעבדות צ'ארלס ריבר</td><td>Crl:NMRI(Han)</td><td>זכר, 30 - 35 גרם, בן 12 שבועות, שוכן לפחות שבוע לפני הניסוי</td></tr></tbody></table>

לב-ריאה במודל של עכברים: גישה מוזרה

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

כפי ממושך לב-ריאה הופכת לחיונית יותר במהלך התערבויות הלב, קליניים לדרישה גוברת מתעוררת עבור תהליך אופטימיזציה, למזער נזק לאיבר וכתוצאה מכך מהמחזור extracorporal ממושך. מטרת מאמר זה היה להפגין מודל מתפקדת במלואה, הרלוונטית קלינית של ריאה של עכבר. אנחנו מדווחים על עיצוב המכשיר, אופטימיזציה מעגל זלוף, בטכניקה מיקרוכירורגית. מודל זה הוא מודל חריפה, אשר אינו תואם עם הישרדות בצורך לציורים דם מרובים. בגלל המגוון של כלים זמינים עבור עכברים (למשל, סמנים, הסתרה, וכו '), מודל זה יקל על חקירת המנגנון המולקולרי של נזק לאיברים ואת השפעת לב-ריאה ביחס לשני מחלות רקע.

פרוטוקול זה מתאר את מעגל זלוף, ניתוחים, וניטור של פרמטרים פיזיולוגיים במהלך משטרת שיקאגו של עכבר. כאשר מבוצעת על ידי microsurgeon מיומן בצורה הולמת, התוצאות בעקביות ובאופן reproducibly מתקבלים.
כדי לשמור על רקמות נאותה זלוף, הלחץ בעורקים רשע נשמרת תמיד בין 40 ל- 60 מ מ כספית על-ידי התאמת זרימת הדם משטרת שיקאגו והוספת נפח נוסף. בהתאם המשקל של החיה, מצב אמצעי האחסון, טמפרטורת הגוף, זרימת הדם extracorporal נשמר בין תיקון של אובדן נ...

מאמר זה מתאר כיצד לבצע ריאה בעכברים. מודל חדש זה יקל על החקירה של המנגנון המולקולרי מעורבת ועוגב נזק.

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לספק גישה חדשנית למעקף קרדיו-פולמונרי בעכבר, כדי לשפר את המחקר של המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס נזק ללב. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מרכזיות בניתוחים לבביים, ובמיוחד לאלו הקשורות למעקף קרדיו-פולמונרי ממושך וזמן קרדיופלגיה ממושך. היתרון המרכזי של מודל אקוטי חדשני זה, שאינו מיועד להישרדות, הוא שהוא מקל על חקר המנגנונים המולקולריים בניתוחים לבביים והקשר שלהם למחלות נלוות אחרות.ראשית, הכינו קנולה מפוליאוריתן במידה 2 French עבור הניתוח. הכניסו מחט מתכת במידה 27 gauge לתוך הקנולה, ותחת מיקרוסקופ, השתמשו בלהב כירורגי ובמספרי מיקרו כדי ליצור שלושה או ארבעה חורי ניקור (fenestrations) בשליש הדיסטלי של הקנולה. פעולה זו תבטיח זרימת חזור ורידית אופטימלית.הכינו את תמיסת ההחלה (priming solution) עבור מעגל ה-CPB. ראשית, הוסיפו Sterofundin ולאחר מכן Tetraspan אל המבחנה. לסיום, הוסיפו Heparin ולצורך שימור ה-pH הוסיפו sodium bicarbonate.יש לשמור את התמיסה בטמפרטורה של ארבע מעלות צלסיוס עד לשימוש. כדי להכין (prime) את מעגל ה-CPB, יש להוסיף 850 microliters של תמיסת priming דרך הקנולה הוורידית. לאחר ההכנה, יש להמשיך בהזרמת התמיסה עד שהבעל החיים יהיה מוכן לקנולציה.בצעו קניולציה של העורק הפמורלי השמאלי לצורך אנליזה של הדם. ראשית, חשפו את אזור המפשעה ולאחר מכן הפרידו בעדינות את העורק הפמורלי המשותף מהווריד הפמורלי ומהעצב הפמורלי. לאחר השגת הרדמה מלאה ואינטובציה, בצעו חתך עורי בקו האמצע של הצוואר באמצעות מספריים דקים וחדים.לאחר מכן, הפרידו את השרירים באופן עדין (blunt fashion) כדי לחשוף את הווריד הג'וגולרי הימני ואת העורק הקרוטידי השמאלי. במידת הצורך, קרישו כלי דם קטנים באמצעות קואגולטור וטרינרי המחובר לפינצטת ביפולרית. לאחר הכנת כלי הדם הג'וגולריים, קשרו קראניאלית את המקטע הדיסטלי של העורק הקרוטידי המשותף השמאלי עד לנקודת הפיצול שלו, באמצעות תפרי משי 8-0.בשלב הבא, באמצעות פינצטה ומספריים למיקרו-כירורגיה, בצעו הפרדה קהה של הרקמה לצד שריר הסטרנו-קליידו-מסטואיד (sternocleidomastoid) כדי לחשוף את הווריד הג'וגולרי הימני בקרבת הבדיקה (clavicle). לאחר מכן, קשרו את הקצוות הדיסטליים והפרוקסימליים של הווריד הג'וגולרי באמצעות משי silk 8-0. לאחר הקשירה, הכניסו את קצה הקנולה הוורידית אל הווריד הג'וגולרי הימני והקידמו אותה אל העלייה הימנית, ולאחר מכן קשרו את התפר כדי לקבע את הקנולה.בשלב הבא, הניחו קשרי מגלש (slip knots) של תפר משי 8-0 במקטע הפרוקסימלי של העורק והחדירו את קצה הקנולה לעורק התומי. להשגת החזר ורידי אופטימלי, ייתכן שיהיה צורך להקידם את קצה הווריד אל תוך החדר הימני. לאחר שהושג מיקום הקנולה הנכון, בצעו הפרינזציה סיסטמית על ידי הוספת 2.5 יחידות Heparin לכל גרם ממשקל גוף החיה באמצעות הזרקה תוורידית ישירה לווריד הג'וגולרי.בשלב הבא, קשרו את החלק הדיסטלי של הווריד הפמורלי (femoral vein) וחסמו זמנית את החלק הפרוקסימלי באמצעות קשר החלקה. לאחר מכן, בצעו חתך קטן בדופן הקדמית בעזרת פינצטת מיקרו כדי להתאימה לקנולה. כעת, הכניסו קנולת פוליאוריטן בגודל 1 French והדקו אותה באמצעות תפר משי 10-0.כדי להתחיל את ה-CPB, הפעילו את המשאבה בקצב של כ-0.5 milliliters per minute. בתוך שתי דקות, הגבירו את הזרימה ל-46 milliliters per minute. לאחר מכן, בצעו sternotomy עליונה תחת ניטור מלא.השתמשו במספריים חדים, התחילו מה-manubrium והמשיכו חמישה מילימטרים לכיוון caudal. קריאו מיד את קצוות העצם הסטרנלית וחשפו את קשת האורטה על ידי משיכת העורק הקרוטידי הימני לכיוון cranial. לשליטה מיטבית, שחררו את קשת האורטה היקפית מהתימוס ומרקמות סביבתו כדי להקל על התפסנית.לאחר מכן, הניחו לולאת משי 8-0 סביב האורטה העולה ומשכו את לולאת המשי לכיוון קרניאלי. צריכה להיות חשיפה מספקת של האורטה העולה כדי להניח את התסביך (cross clamp) לצורך קרדיופלגיה. עבור דגימות BGA, השתמשו בצינור קפילרי מזכוכית כדי לאסוף 60 עד 90 µL של דם עורקי באמצעות קטטר בעורק הפמורלי.כדי למלא מבחנה, שחררו באיטיות את התפסן על צינור הסיליקון ולאחר מכן העבירו דם מהמזרק אל הנימילי. תחת זרימה יציבה של CPB, התחילו את העצירה הנשימתית על ידי הפסקת ההנשמה. בתוך 20 הדקות הראשונות של העצירה הנשימתית, קררו את בעל החיים באופן מקומי באמצעות גזה ספוגה בתמיסת מלח קרה.ברגע שטמפרטורת הגוף מגיעה ל-28 °C ולאחר 30 דקות של דום נשימה, יש להחדיר 0.3 milliliters של 7.45% potassium chloride למעגל ה-CPB כדי להתחיל את הקרדיופלגיה. כדי לבצע תלישה (cross clamp) של האורטה, משכו את הלולאה שהוצבה קודם לכן לכיוון הקראניאל והניחו תליבת micro-serrefine על החלק העולה של האורטה. בצעו סך כולל של 60 דקות של דום נשימה ו-30 דקות של דום לב.כדי להתחיל את הפרפוזיה מחדש של הלב, הסירו את התסבוב ובמקביל החזירה את ההנשמה וחממו את בעל החיים ל-37 degrees Celsius. לאחר השלמת הפרפוזיה מחדש והגעה של בעל החיים לנורמותמיה, סיימו את ה-CPB על ידי כיבוי המשאבה. באמצעות הפרוטוקול המתואר, ניתן היה להשיג תוצאות עקביות הניתנות לשחזור.פרמטרים פיזיולוגיים הוערכו באמצעות BGA בארבע נקודות זמן שונות במהלך פרוצדורה מוצלחת. מדידות המטוקריט הראו המודיליציה (דילול דם) עקב הוספת נפח ה-priming למעגל. עם זאת, לא היה צורך בעיסוי דם מכיוון שרמות ההמוגלובין נשמרו ברמות מספיקות במהלך הניסוי.בדיקת גזים בדם עורקי (BGA) סיפקה גם מידע על המצב המטבולי של בעלי החיים. לאחר תחילת מעקף לב-ריאה (CPB) עם הרפאה, ה-pH העורקי עלה. כצפוי, נצפתה ירידה הדרגתית ב-pH העורקי במהלך הפסקת הנשימה.למרות מורכבותו, לאחר השליטה בשיטה, ניתן לבצע את כל השלבים בתוך שלוש עד ארבע שעות. בעת ביצוע הליך זה, חשוב מאוד לתרגל את טכניקת הקנולציה, ובמהלך הניסוי חשוב מאוד לנטר את הפרמטרים ההמודינמיים ומדדי החמצון. בסופו של דבר, מודל חדשני זה יכול לסייע בחקירת המנגנונים המולקולריים של פגיעה איברים חריפה במהלך מעקף לב-ריאה.השלב הבא שלנו הוא ביסוס מודל קליני של הישרדות לאחר מעקף לב-ריאה בעכברים, שעשוי לקדם טכניקה מיקרו-כירורגית חדשה במודלים של מכרסמים.

cardiopulmonary-bypass-in-a-mouse-model-a-novel-approach

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מודל השתלת לב בצוואר הרחם העכברי הוא גם מתאים חיסוני, כמו גם מחקרי פציעת reperfusion איסכמיה. שינינו את התהליך תוך שימוש בטכניקת שרוול שאינו תפר וביצעו יותר מ 1,000 השתלות מוצלחות עם גישה זו.  במסמך זה, אנו מספקים פרטים נוספים בטכניקה זו כדי להשלים את הווידאו.

עכברי צוואר הרחם לב השתלת דגם שימוש בטכניקת חפתים השתנה

טכניקה מודגמת עבור ההליך המיקרו-כירורגי להשתלה הטרוטופית של לבבות בעכברים, כולל שיטות פשוטות לקצירת תורם ואנסטומוזיס של כלי הדם המקבל.

שיטה שונה לHeterotopic מאוס לב Transplantion

כדי לחקור השתלה משולבת של איברים מוצקים וכלי דם, אנו מתארים מודל חדש של השתלת דופן חזה הטרוטופית, בלוטת התימוס ולב בעכברים באמצעות טכניקת שרוול צוואר הרחם ללא תפרים.

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לתיאור מודל ריאה שחזור פשוטה ללא עירוי או סוכנים inotropic חולדה. דגם זה מאפשר לימוד לטווח ארוך sequelae איברים מרובים של לב-ריאה.

מודל ריאה שחזור ללא עירוי או סוכנים Inotropic בחולדות

כאן אנו מציגים פרוטוקול המתאר את הטכניקה של חמצון ממברנה בעיות ורידים-veno (לאקמו) ב שאינם לצינורות, באופן ספונטני נשימה העכבר. מודל זה מאתר של לאקמו ניתן ליישם ביעילות מחקרים ניסיוניים של חריפה ומחלות ריאות בשלב הסופי.

ממברנה בעיות ורידים-Veno חמצון בעכבר

טכניקה חדשנית לשחזור מעגל הדם במודל הטרוטופי של השתלת לב עכבר בטן מודגמת.

שחזור מעגל הדם במודל השתלת לב של עכבר בטן

כאן אנו מתארים ניתוח לולאת לחץ לב תחת מינונים הולכים וגדלים של איזופרוטרנול תוך ורידי כדי לקבוע את תפקוד הלב המהותי ואת המילואים β-adrenergic בעכברים. אנו משתמשים בגישה שונה של חזה פתוח למדידות לולאת נפח הלחץ, שבה אנו כוללים אוורור עם לחץ חיובי של תפוגת קצה.

תגובת לב לגירוי β-אדנרגיות שנקבע על ידי ניתוח לולאת נפח לחץ

בפרוטוקול הנוכחי, מודל השתלת לב עכבר משמש לחקירת מנגנון דחיית אלוגרפט לבבי. במודל השתלת לב הטרוטופי זה, יעילות הניתוח משופרת, והישרדותם של שתלי לב מובטחת על ידי אנסטומוזה מקצה לקצה של צוואר הרחם של השתלת לב באמצעות טכניקת שרוול שונה.

טכניקת שרוול שונה למודל השתלת לב הטרוטופי של עכבר צוואר הרחם

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

פרוטוקול זה מתאר מודל חזירי בילוד של מעקף לב-ריאה (CPB), עם דום דם ודום לב ככלי לחקר נזק מוחי חמור וסיבוכים אחרים משניים ל-CPB.

מודל בעלי חיים ילדים של החייאה חוץ-גופית לב-ריאה לאחר דום דם ממושך

חקור מנגנונים מולקולריים של נזק לב בניתוח לב-ריאה בעכברים באמצעות מודל חדשני לבייפס. שיטה זו מאפשרת חקירה מעמיקה של השפעות זמן קרדיופלגיה ממושך על תפקוד הלב.

לב-ריאה במודל של עכברים: גישה מוזרה

גלה סרטונים נוספים