Name: השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 24 s
Description: למד השתלת תאי כבד תוך-טחולית לאחר כריתת כבד חלקית בעכברי NOD.SCID. פרוטוקול זה מדגים טכניקות ניתוחיות לחקר טיפולים מבוססי תאים בכשל כבדי חריף.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המענק הליבה קיבל את המחלקה לביוטכנולוגיה, ממשלת הודו על המכון הלאומי לאימונולוגיה, ניו דלהי. הכתובת הנוכחית של ד ר Bhattacharjee הוא חטיבת לגסטרואנטרולוגיה, Hepatology, תזונה, החולים בלוס אנג'לס לילדים.

נהלים הוצג פרוטוקול זה אושרו על ידי ועדת אתיקה מוסדית חיה של המכון הלאומי לאימונולוגיה, ניו דלהי. מספר האישור הפניה טורי הוא IAEC #319/13.
הערה: ישנם משאבים מעולה על נהלים כירורגיה כללית20 ופרוטוקולים ספציפיים עבור ניתוח מכרסמים21. אלה עושים את הניתוח בעלי חיים בפעם הראשונה, מומלץ לתרגל בהרחבה ניתוחים על בובות ההפעלה על בעלי חיים.
1. הכנה
<ol><li>לפני הניסוי, שמור תמיסת מלח סטרילית פוספט buffered (PBS) או מוכן מלוחים.</li>
	<li>להרכיב ערכה ניתוח המכיל מספריים מלקחיים משוננות, רקמות מלקחיים, כותנה, צמר גפן, חוטי ניילון, מחט מיקרו שונים. אוטוקלב ערכת ניתוח. טיפול מיוחד יש לנקוט אם הנהון החיסון-לסיכון. SCID העכבר נכלל בפרוטוקול.</li>
	<li>בצע את ההליך ניסיוני מלאה, משלב הכנת בסוף הניתוח, הביו-הבטיחות מחלקה אני ארון.</li>
	<li>שוקלים הנהון. SCID בעכבר של 6-8 שבועות לפני הניתוח. עכברים במשקל בין 14-18 גרם משמשים במחקר זה.</li>
	<li>לגלח העליון המרכזי, היפוכונדרית אזור הבטן של העכבר הקוצץ שיער. להחיל שיער הסרת קרם אחיד בכל רחבי האזור עם מרית כדי להסיר לחלוטין את השערות החתוך. להסיר את השיער בעדינות בעזרת פיסת צמר גפן סטרילי רטוב אחרי 2-5 דקות.</li>
	<li>הנח את העכבר בתא איזופלוריין ולפתוח את הברז של הגליל חמצן. לשמור על זרימת חמצן בשיעור של 4 L/דקה את אידוי איזופלוריין ב 4% כדי לגרום הרדמה.<ol>
<li>ודא כי העכבר יש כבר מורדם כראוי על ידי הבוהן עדין לצבוט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להציב לוח ניתוח בפנים אבטחה בארון. במקום החיה על ניתוח הלוח, כך פונה מעלה, בחלק הבטני של העכבר ואת החלק הקדמי של העכבר ממוקם בתוך אצטרובל האף מחובר את איזופלוריין ואת אספקת החמצן.</li>
	<li>להפחית את אידוי איזופלוריין ל- 2%, לשמור עליו לאורך כל הליך כירורגי.</li>
	<li>לחטא את העור של העכבר ולחטא אותו על ידי מנגב עם ספוג אתנול 70% כותנה סטרילי.</li>
</ol>2. ניתוח
<ol><li>
Hepatectomy חלקית
	<ol>
<li>לבצע חתך רוחבי של 1 ס מ של העור מתחת החזה, בניצב תהליך מצאתי ואת במקביל בית החזה, בעזרת מספריים הפעלה ישר.</li>
		<li>נפרדים בעדינות את העור המצורפת עם השכבה שריר הבטן בקרבת האזור חרות עם מלקחיים או ניתוח סטרילי כותנה בטעימת טיפים כדי להבחין בין העור לבין שכבת שריר הבטן. משרים את האזור intradermal עם PBS באמצעות צמר גפן סטרילי טיפים כדי להתחמק לייבוש.</li>
		<li>לחשוף את האזור של האונה השמאלית בצורה חלקה על ידי ביצוע חתך רוחבי דרך השכבה הצפק מתחת מצאתי. השתמש בעצות כותנה בטעימת שני לחשוף ולהרים האונה השמאלית של הכבד.</li>
		<li>מקום אחד הטיפים כותנה בצד הבטן של החתך, ולמקם עוד טיפ כותנה בצד הסרעפת. בעדינות את הטיפ להציב כלפי הסרעפת ואת לתת דחיפה הזזה. על ידי אחרים כדי להרים את האונה השמאלית של הכבד.</li>
		<li>להחליק חוט ניילון עם לולאה דרך האונה השמאלית המורמת והחלק הלולאה לעבר הבסיס של האונה השמאלית קרוב hilum בעזרת העצות מיקרו-מלקחיים או כותנה. לדחוף בעדינות את הלולאה בחוט ניילון בבסיס האונה השמאלית.</li>
		<li>לקשור שני קצוות של חוט ניילון מעל החלק העליון של האונה השמאלית באמצעות בעל מחט למיקרו המלקחיים מיקרו. לעשות שני קשרים נוספים בצד השני.</li>
		<li>שווייץ האונה קשור בעזרת מספריים. אל תנסו לחתוך מאוד קרוב החוט. למקרה ההליך נמשך יותר מ- 5 דקות, לשמור את חלל הצפק איברים לח עם PBS סטרילי כדי להימנע לייבוש בשל אובדן נוזלים.</li>
		<li>לתפור את הצפק באמצעות רציף הפתולוגיים בתפר לאללה 4-0. לאחר מכן, לסגור את העור על-ידי תפירת מקוטע מהר ככל האפשר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
השתלת תא הערה: hepatocytes מבטאים ה-GFP הם בודדו אותנו מהמתרחש העכברים הטרנסגניים GFP (6/C57BL-Tg (UBC-GFP) 30 Scha/J), על-פי ההליך המתואר על ידי Lee ואח. 22 , שן ואח. 23 תאים, כמו hepatocyte (NeoHep) ממוצא האנושי תריז ומונוציטים24 שימשו גם השתלת. עם זאת, תאים שמקורם מקורות אחרים עשוי לשמש גם בפרוטוקול.<ol>
<li>להשעות את התאים קיימא 0.2 מיליון ב בסביבות 50 µL של המדיום של Iscove שונה Dulbecco (IMDM), תשאף את זה בתוך מזרק אינסולין 1 מ"ל כתרים עם המחט 30 גרם. לשמור את המזרק קר על ידי הצבתו על קרח.</li>
		<li>הצב את העכבר בדרך בחלק הלטראלי השמאלי כלפי מעלה לכיוון האדם שמבצע ניתוח. לזהות את אזור הטחול ומנתחים באופן רוחבי על העור ליד האזור היפוכונדרית, ואחריו חתך קצר דרך השכבה הצפק רק כדי לחשוף את הטחול.</li>
		<li>בעדינות להרים את הטחול והחזק שאותו החוצה חלל הבטן בעזרת שני PBS לחלח טיפים כותנה.</li>
		<li>החזיקו הטחול בזהירות עם שתי עצות כותנה ביד אחת, ולמקם את המחט של המזרק בדיוק אנכית כדי הטחול. פירס הטחול ולדחוף את המחט בעדינות באיטיות פנימה; המחט לא צריך לקבל עמוקות יותר מ- 2 מ מ.</li>
		<li>לוחץ את הבוכנה של המזרק לאט כדי להזריק את התאים לתוך הטחול. לאחר ההשתלה, להשאיר את המחט של המזרק יציב ומסירים אותו לאט לאט הטחול כדי למנוע דימום או אובדן של תאים.</li>
		<li>לאחר הצבת הטחול בחזרה לתוך חלל הצפק עם העצות כותנה, לסגור את השכבה הצפק על ידי תפירת רציף 4-0 בתפר לאללה. לתפור את העור באורח מקוטע עם התפר אותו. הימנע משימוש הפצע קליפים לסגירת העור; במקום זאת, לסגור את זה על ידי בתפר 4-0. הקליפים הפצע להגביל את התנועה הטבעית של העכבר, לעיתים קרובות קליפים להיות משוחרר. וצא החוצה במהירות.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>לאחר סגירת העור, נגב את הסביבה של שני האתרים תפר עם יודיפלור תמיסה (betadine) באמצעות טיפ כותנה סטרילי.</li>
	<li>תזריק מנה של אנטיביוטיקה cefotaxime כמו 600 מ"ג/ק"ג משקל (בדרך כלל 12 מ"ג cefotaxime ב µL 100 של תמיסת מלח/עכבר) גוף intraperitoneally באמצעות מזרק 1 מ"ל.</li>
	<li>לתת במינון יומי של Meloxicam כאבים בתור 1 מ"ג/ק"ג משקל גוף (בדרך כלל 12 µg Meloxicam ב µL 100 של תמיסת מלח/עכבר) לחיה intraperitoneally, במשך שלושה ימים אחרי הניתוח.</li>
	<li>לאחר סיום הניתוח, מפסיקים את זרימת הגז איזופלוריין ומניחים את העכבר חזרה לכלוב מאוורר בנפרד.</li>
</ol>4. euthanization, אפיוני
<ol><li>לאחר ניסיוני והגישור (יום 1 ו- 10 ימים לאחר הניתוח), המתת חסד העכברים על פי הנחיות מוסדיים אתיקה בעלי חיים.</li>
	<li>לאסוף דם על ידי סופני דימום החיות, ניקב את מקלעת מסוף עינית.</li>
	<li>לבודד נסיוב מהדם.</li>
</ol>

<ol><li>Nussler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Present+status+and+perspectives+of+cell-based+therapies+for+liver+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases.</a> J. Hepatol. 45 (1), 144-159 (2006).</li>
<li>Ponder, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+hepatocytes+migrate+to+liver+parenchyma+and+function+indefinitely+after+intrasplenic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Mouse hepatocytes migrate to liver parenchyma and function indefinitely after intrasplenic transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (4), 1217-1221 (1991).</li>
<li>Kokudo, N., Horimoto, H., Ishida, K., Takahashi, S., Nozawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+hepatocyte+and+fetal+liver+transplantation+and+xenogeneic+hepatocyte+transplantation+for+Nagase%27s+analbuminemic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Allogeneic hepatocyte and fetal liver transplantation and xenogeneic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats.</a> Cell Transplant. 5 (5 Suppl 1), S21-S22 (1996).</li>
<li>Christ, B., Bruckner, S., Stock, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rodent+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Hepatic transplantation of mesenchymal stem cells in rodent animal models.</a> Methods Mol. Biol. 698, 315-330 (2011).</li>
<li>Fox, I. J., Roy-Chowdhury, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15158325">Hepatocyte transplantation.</a> J. Hepatol. 40 (6), 878-886 (2004).</li>
<li>Glanemann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+monocyte-derived+hepatocyte-like+cells+%28NeoHeps%29+improves+survival+in+a+model+of+acute+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Transplantation of monocyte-derived hepatocyte-like cells (NeoHeps) improves survival in a model of acute liver failure.</a> Ann. Surg. 249 (1), 149-154 (2009).</li>
<li>Rahman, T. M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Exp.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute hepatic failure.</a> Int. J. Exp. Pathol. 81 (2), 145-157 (2000).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte+colony-stimulating+factor+treatment+ameliorates+liver+injury+and+improves+survival+in+rats+with+D-galactosamine-induced+acute+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Granulocyte colony-stimulating factor treatment ameliorates liver injury and improves survival in rats with D-galactosamine-induced acute liver failure.</a> Toxicol. Lett. 204 (1), 92-99 (2011).</li>
<li>Gardner, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+nitric+oxide+in+acetaminophen-induced+hepatotoxicity+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Role of nitric oxide in acetaminophen-induced hepatotoxicity in the rat.</a> Hepatology. 27 (3), 748-754 (1998).</li>
<li>Nardo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+treatment+of+CCL4-induced+acute+liver+failure+with+portal+vein+arterialization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Successful treatment of CCL4-induced acute liver failure with portal vein arterialization in the rat.</a> Transplant Proc. 38 (4), 1187-1189 (2006).</li>
<li>Sathyasaikumar, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatic+failure+in+rats+induces+oxidative+stress+differentially+in+cerebral+cortex%2C+cerebellum+and+pons+medulla%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem.+Res%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatic failure in rats induces oxidative stress differentially in cerebral cortex, cerebellum and pons medulla.</a> Neurochem. Res. 32 (3), 517-524 (2007).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laennec+protects+murine+from+concanavalin+A-induced+liver+injury+through+inhibition+of+inflammatory+reactions+and+hepatocyte+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Pharm.+Bull%22%5BJournal%5D)">Laennec protects murine from concanavalin A-induced liver injury through inhibition of inflammatory reactions and hepatocyte apoptosis.</a> Biol. Pharm. Bull. 31 (11), 2040-2044 (2008).</li>
<li>Kaur, G., Tirkey, N., Chopra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effect+of+hesperidin+on+lipopolysaccharide-induced+hepatotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effect of hesperidin on lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity.</a> Toxicology. 226 (2-3), 152-160 (2006).</li>
<li>Rupertus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+but+not+minor+hepatectomy+accelerates+engraftment+of+extrahepatic+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Major but not minor hepatectomy accelerates engraftment of extrahepatic tumor cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 24 (1), 39-48 (2007).</li>
<li>Selden, C., Casbard, A., Themis, M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+long-term+survival+of+syngeneic+hepatocytes+in+rat+peritoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Characterization of long-term survival of syngeneic hepatocytes in rat peritoneum.</a> Cell Transplant. 12 (6), 569-578 (2003).</li>
<li>Tang, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+donor+hepatocytes+and%2For+splenocytes+pre-injection+in+reducing+islet+xenotransplantation+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatobiliary.+Pancreat.+Dis.+Int%22%5BJournal%5D)">The role of donor hepatocytes and/or splenocytes pre-injection in reducing islet xenotransplantation rejection.</a> Hepatobiliary. Pancreat. Dis. Int. 2 (3), 344-350 (2003).</li>
<li>Goto, Y., Ohashi, K., Utoh, R., Yamamoto, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte+transplantation+through+the+hepatic+vein%3A+a+new+route+of+cell+transplantation+to+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte transplantation through the hepatic vein: a new route of cell transplantation to the liver.</a> Cell Transplant. 20 (8), 1259-1270 (2011).</li>
<li>Gabelein, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrasplenic+or+subperitoneal+hepatocyte+transplantation+to+increase+survival+after+surgically+induced+hepatic+failure%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Intrasplenic or subperitoneal hepatocyte transplantation to increase survival after surgically induced hepatic failure?</a> Eur. Surg. Res. 41 (3), 253-259 (2008).</li>
<li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+NeoHep+Derived+From+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients%27+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+cMET+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous NeoHep Derived From Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of cMET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. , (2016).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.who.int/surgery/publications/s16383e.pdf">Basic surgical skills. Emergency and Essential Surgical Care (EESC) programme</a>. , http://www.who.int/surgery/publications/s16383e.pdf (2017).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li>
<li>Lee, S. M., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+hepatocytes+by+a+two-step+collagenase+perfusion+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of human hepatocytes by a two-step collagenase perfusion procedure.</a> J. Vis. Exp. (79), (2013).</li>
<li>Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+primary+culture+of+rat+hepatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and primary culture of rat hepatic cells.</a> J. Vis. Exp. (64), (2012).</li>
<li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+NeoHep+Derived+from+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients%27+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+c-MET+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous NeoHep Derived from Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of c-MET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. 6 (1), 174-186 (2017).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+sure+methodology+for+massive+hepatectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse.</a> Ann. Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+reproducible+hepatectomy+in+the+mouse+using+the+clip+technique%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique.</a> World J. Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).</li>
<li>Vidal, I., Richert, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nude+mouse+as+model+for+liver+deficiency+study+and+treatment+xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">The nude mouse as model for liver deficiency study and treatment xenotransplantation.</a> Int. J. Hepatol. , 1400147(2012).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat. Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).</li>
<li>Ahmed, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+subcutaneous+and+intrahepatic+human+hepatocellular+carcinoma+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice.</a> J. Vis. Exp. (79), e50544(2013).</li>
<li>Krikri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laparoscopic+vs.+open+abdominal+surgery+in+male+pigs%3A+marked+differences+in+cortisol+and+catecholamine+response+depending+on+the+size+of+surgical+incision%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+%28Athens%29%22%5BJournal%5D)">Laparoscopic vs. open abdominal surgery in male pigs: marked differences in cortisol and catecholamine response depending on the size of surgical incision.</a> Hormones (Athens). 12 (2), 283-291 (2013).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

Hepatectomy חלקית היא טכניקה הוקמה עבור החקירה התחדשות הכבד, hepatectomy מוגזמת הוא דיווח כדי לחקות את מודל AHF. בין מודלים חייתיים של AHF, מכרסמים, עכברים במיוחד, הם המודל הכי חקר. כדי להשיג פגיעה בכבד מודל בעכברים, עד hepatectomy 70% דווח עם הישרדות טוב שיעור25,26. עם זאת בעירום, עכבר immunodeficient אחר, hepatectomy 70% נמסר בשם קטלנית, חיות מתו בתוך 24 שעות27.
מיטשל ו Willenbring28 הפ...

כיום, השתלת hepatocyte מוצע כחלופה השתלת איברים כל בטיפול בחולים לאחר הפרעות כבד קשות. הוא האמין כי זה יכול לגשר בין חולים השתלת איברים כל1. בנוסף allogenic hepatocytes2, xenogenic hepatocytes3 ו hepatocytes שמקורם בתאי גזע4 גם נחקר במודלים של בעלי חיים. בהקשר זה, יונת, engraftment הפוטנציאל של התאים המושתלים של הנמען הוא קריטריון חשוב עבור טיפול בתאי מבוסס על כשל של הכבד חריפה (AHF).
עבור חוקרים את השתלת hepatocytes או תאים דמויי hepatocyte5, AHF נוצרת במודל חיה כירורגי6 או תרופתי7 נהלים, ואחריו משתילים תאים. כדי להפוך מודל חיה AHF על ידי ריאגנטים תרופתי, hepatotoxins רבים כגון d-galactosamine8, פרצטמול9, פחמן tetrachloride10, thioacetamide11, Concanavalin A12, ליפופוליסכריד13 , ועוד., היו בשימוש. מתוך רשימה זו, כל ריאגנט יוצר קבוצת תכונות ייחודיות עבור AHF, אך למרבה הצער לא מגיב יחיד מחקה את AHF האנושית. יתר על כן, AHF שנגזרות hepatotoxins אורכת זמן רב, אשר מעמידה חיות תחת מתח כרוני, ויש תוצאות לשחזור קשה להשיג.
מצד שני, ההליך הכירורגי של חלקי hepatectomy (PHx) היא מיומנות התלויים, תוצאות לשחזור קל להשיג לאחר פיתוח הכישורים הנדרשים. כדי לגרום AHF על ידי התערבות כירורגית לבד, נדרשת כריתה של יותר מ 70% של הכבד; עם זאת, פחות ממה hepatectomy 70% עדיין יכול להיות מנוצל כדי ללמוד engraftment והתפשטות של מושתלים תאי הכבד לניתוח יכולת טיפולית שלהם במהלך פגיעה בכבד14. ההשתלה של hepatocytes כבר hepatectomy פוסט שבוצעו דרך ה צפק15, וריד הזנב16, וריד הכבד17או את הטחול18. כיום, וריד הכבד אינפוזיה והשתלות intrasplenic של hepatocytes הן ההליכים מועדף, הם יותר קל להתרבות.
בנייר זה, תארנו הליך של hepatectomy חלקי 30% ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) שבו טוחנות האונה השמאלית של הכבד הוא עכברים. זה ואחריו השתלת hepatocytes העכבר (6/C57BL-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) לביטוי GFP 0.2 מיליון וכן מקור אנושי NeoHep19 של הטחול. הליך זה מוביל engraftment של התאים המושתלים בכבד. ההליך זה לפחות פולשני, טכניקה כואב מינימלית.

<table><tbody><tr><td>מערכת הרדמת גז</td><td>Ugo Basile; איטליה</td><td>211000</td><td></td></tr><tr><td>מכונת שקילה</td><td>Goldtech ; </td><td>רכש מקומי</td>בהודו <td></td></tr><tr><td>ארון בטיחות ביולוגי (Class I)</td><td>Kartos International; &nbsp; </td><td>גוזם שיער רכש מקומי</td>בהודו <td></td></tr><tr><td></td><td>פנסוניק ; &nbsp; יפן&nbsp;</td><td>ER-GY10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מספריים הפעלה ישרים עם להבים חדים / חדים</td><td>כירורגיות גדולות; הודו</td><td></td> מלקחיים <td>לרכש מקומי</td></tr><tr><td>עם שיניים</td><td>כירורגיות גדולות; רכש</td><td>מקומי</td>בהודו <td></td></tr><tr><td>מחזיקי מחטים מיקרו&nbsp; ישר ומעוקל&nbsp;</td><td>מרסיאן ; &nbsp; אנגליה&nbsp;</td><td>BS-13-8</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין 1 מ"ל עם 30 גרם *5/16 מחטים&nbsp;</td><td>דיספו ואן; מזרק הודו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל עם 26 גרם * 1/2 מחט</td><td>BD; ארה"ב&nbsp;</td><td>REF 303060</td><td></td></tr><tr><td>חוטי ניילון&nbsp; &nbsp;</td><td>אדיר; הודו(</td><td></td><td>1-0) רכש מקומי</td></tr><tr><td>MERSUTURES 4-0 תפר מחט כירורגי מעוקר</td><td>Ethicon, Johnson & ג'ונסון, הודו</td><td>NW 5047</td><td></td></tr><tr><td>TRUGUT 76 ס"מ 4-0 תפר כירורגי נספג</td><td>תפרים הודו Pvt. בע"מ; הודו</td><td>SN 5048</td><td>תפר מחט כירורגי מעוקר catgut</td></tr><tr><td>ניצני כותנה</td> כרומיים <td>Pure Swabs Pvt Ltd ; &nbsp; הודו</td><td></td><td>רכש מקומי</td></tr><tr><td>קלטת כירורגית</td><td>3M הודו ; הודו</td><td>1530-1</td><td>מיקרופור קלטת כירורגית</td></tr><tr><td>מיקרו-טום</td><td>מעבדות היסטו-ליין, איטליה</td><td>MRS3500</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cryotome e Cryostat</td><td>Thermo Electron Corporation ; </td> מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי בארה"ב <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>קארל זייס ; גרמניה&nbsp;</td><td>LSM 510 META</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שדה בהיר</td><td>אולימפוס, יפן</td><td>LX51</td><td></td></tr><tr><td>מנתח אוטומטי</td><td>טוליפ, אלטו סנטרקרוז, הודו</td> מנתח ביוכימי Screen <td>Maaster 3000</td><td>לבדיקת תפקודי כבד</td></tr><tr><td>ציטומטר זרימה</td><td>BD ; ארה"ב&nbsp;</td><td>BD FACSverse</td><td>הערכת נוכחות תאים לאחר ההשתלה</td></tr><tr><td>קרם להסרת שיער Veet&nbsp;</td><td>רקיט בנקיזר , הודו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פוראן</td><td>אבוט ; איזופלורן בארה"ב</td><td></td><td>USP 99.9%&nbsp;</td></tr><tr><td>טקסים</td><td>אלקם ; הזרקת</td><td>נתרן cefotaxime</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פובידון-יוד&nbsp;</td><td>Win-Medicare; &nbsp; הודו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>בטדין פרפורמלדהיד</td><td>הימדיה; הודו</td><td>GRM 3660</td><td></td></tr><tr>טכנולוגיות החיים<td>של Dulbecco's Modified Dulbecco (IMDM)</td><td>Life, Thermo Fisher Scientific ; ארה"ב</td><td>12200-036</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>סיגמא ; ארה"ב</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek</td><td>Sakura; ארה"ב</td><td>25608-930</td><td>O.C.T מתחם</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Himedia; הודו</td><td>MB 097</td><td></td></tr><tr><td>עז אנטי-אלבומין Polyclonal</td><td>Thermo Scientific, פירס, ארה"ב</td><td>PA126081</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-קונקסין 32/GJB1 פוליקלונל</td><td>אבקאם, בריטניה</td><td>ab64609-500</td><td></td></tr><tr><td>antiGFP ארנב פוליקלונל&nbsp;</td><td>ביוטכנולוגיה של סנטה קרוז; ארה"ב</td><td>SC 8334</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 חמור נגד עזים</td><td>&nbsp; בדיקות מולקולריות , תרמו פישר סיינטיפיק ; &nbsp; ארה"ב</td><td>A11058</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 חמור נגד כבשים</td><td>&nbsp; בדיקות מולקולריות , תרמו פישר סיינטיפיק ; &nbsp; ארה"ב</td><td>A11015</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 עוף נגד ארנב</td><td>&nbsp; בדיקות מולקולריות , תרמו פישר סיינטיפיק ; &nbsp; ארה"ב</td><td>A21442</td><td></td></tr><tr><td>עז נגד ארנב IgG HRP</td><td>Invitrogen, תרמו פישר מדעי; ארה"ב&nbsp;</td><td>65-6120</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן נגד Ki67</td><td>abcam, בריטניה</td><td>ab15580</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת חשיפת אנטיגן, בסיס חומצת לימון</td><td>מעבדות וקטור, ארה"ב</td><td>H-3300</td><td></td></tr><tr><td>ProLong יהלום נוגדן הרכבה</td> טכנולוגיות <td>חיים, תרמו פישר מדעי; ערכת</td> SGOT (ASAT) ארה"ב <td>P36966</td><td></td></tr><tr><td>מערכת</td><td>קלינית אלמוגים, הודו</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ערכת SGPT (ALAT)</td><td>מערכת קלינית אלמוגים, ערכת</td> פוספטאז אלקליין בהודו <td></td><td></td></tr> (<tr><td>DEA)</td> <td>מערכת קלינית אלמוגים,</td> תמיסת המטוקסילין בהודו<td></td><td></td></tr>, <tr>סיגמא<td>של מאייר</td><td>; תמיסת</td><td>US MHS16</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y, סיגמא אלכוהולית</td><td>; </td> תושבת DPX <td>HT110132</td><td></td>בארה"ב</tr><tr><td>&nbsp;</td><td>סיגמא; ארה"ב</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>מלונקס (משכך כאבים)</td> <td>אינטס פרמצבטיקה בע"מ; </td><td>הזרקת מלוקסיקם</td> בהודו<td></td>&nbsp;</tr><tr><td>מערכת מצע נוזלי משופרת DAB טטרה-הידרוכלוריד</td><td>סיגמא; ארה"ב</td><td>D3939</td><td></td></tr></tbody></table>

השתלת intrasplenic של hepatocytes לאחר hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. scid עכברים

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Hepatectomy חלקית היא שיטה לשחזור רב-תכליתי ללמוד התחדשות הכבד ואת השפעת התא מבוסס הרפוי בתנאים פתולוגיים שונים. Hepatectomy חלקית מקלה גם engraftment מוגבר של התפשטות התאים המושתלים על ידי מאיץ כורוידאלית ואת נדידת תאים לכיוון הכבד. כאן, אנו מתארים פרוטוקול פשוט עבור מבצע 30% hepatectomy והשתלת תאי הטחול של שאינו שמנים סוכרת/חמור בשילוב הנד immunodeficient. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) העכבר.
בהליך זה, מתבצעים שני חתכים קטנים. החתך הראשוני היא לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, והוא חתך קטן אחר עשוי לחשוף את הטחול כבר intrasplenic של תאים. הליך זה אינו דורש כל כישורים מיוחדים, ניתן להשלים אותו תוך 5-7 דקות עם פחות לחץ, כאב, התאוששות מהירה יותר של הישרדות טוב יותר. הראו את השתלת של hepatocytes מבודד של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) המבטאת העכבר (הטרנסגניים C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), כמו גם hepatocyte כמו תאים ממקור אנושי (NeoHep) ב חלקית hepatectomized במנוד ראש. SCID עכברים.

Hepatocyte התפשטות לאחר hepatectomy חלקי 30%: התפשטות hepatocytes הנותרים הכבד לאחר 30% hepatectomy נבדק על ידי immunohistochemical (IHC) צביעת עבור סמן התפשטות תאים, Ki-67. פוסט יום אחד hepatectomy, העכברים היו מורדמים, האונות הכבד הנותרים היו טוחנות, פרפין מקטעים התקבלו. הסעיפים היו מוכתמים נוגדן Ki-67, ואחריו labelling עם חזרת peroxidase (HRP) נוגדנים משניים מצומדת. אמינו Di Benzidine (DAB) שימש המצע HRP לפיתוח של צבע חום כדי לזהות תאים מוכתם. הגרעין היה מונה מוכתם hematoxylin, מתחת למיקרוסקופ אובייקט...

תארנו פרוטוקול לביצוע חלקי hepatectomy (PHx), השתלת תא באמצעות הטחול ב במנוד ראש. SCID (הנהון. CB17-Prkdcscid/J) עכברים. ב פרוטוקול זה, חתך לחשוף ולאחר נכרות האונה השמאלית של הכבד, ואחריו עוד חתך השתלת intrasplenic של תאים.

השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

עבור טיפול בחולים הסובלים מכשיל כבדי חריף, השתקת תאי כבד (הפטוציטים) מהווה חלופה להשתלת איבר שלם. כריתה חלקית של הכבד משמשת כטכניקה ליצירת AHF. בנוסף, היא מנוצלת גם כדי לחקור השתקעות ות proliferation של תאים במהלך טיפול מבוסס תאים.העכבר הוא אחד הדגמים הנחקרים ביותר לביצוע כריתת כבד למטרות אלו. בסרטון זה נציג פרוצדורה של כריתה חלקית של הכבד, ולאחריה השתלה של הפטוציטים בטחול של עכבר NOD. SCID.לפני שתתחילו, ודאו כי קיבלתם את האישור הדרוש מוועדת אתיקה לבעלי חיים המתאימה לביצוע הניסוי. בהליך זה נבצע שתי חתכים קטנים. החתך הראשון הוא לצורך כריתה חלקית של הכבד (partial liver hepatectomy), אשר יהיה באורך של כסנטימטר אחד ויבוצע ממש מתחת לחרב הסטרינום (xiphoid) כדי לחשוף את הכבד.להשתלת תאים, נבצע חתך קטן נוסף בחלק הלטראלי השמאלי כדי לחשוף את הטחול של בעל החיים. היתרונות בשיטה זו הם טראומה וכאב מופחתים עבור בעל החיים, התאוששות מהירה ושיעור הישרדות של כמעט מאה אחוזים. יתרה מכך, הליך זה אינו דורש מיומנויות כירורגיות מיוחדות וניתן להשלימו במהירות, תוך חמישה עד שבעה דקות.בסרטון זה נדגים את השתלת תאים דמויי הפטוציטים הנקראים NeoHep והפטוציטים שבודדו מעכבר טרנסגני GFP, אל תוך עכבר NOD.SCID שעבר כריתת כבד חלקית. הפרוצדורה אינה מגבילה את סוג התאים להשתלה.כל כלי הניתוח וה-PBS עברו סטריליזציה באוטוקלאב כנדרש והוכנו לפני הניתוח. שקלו את העכבר. בניסוי זה נעשה שימוש בעכברי NOD. SCID בני שבועיים עד שמונה שבועות, השוקלים בין 14 ל-18 גרם.גזרו את הפרווה מהחלק המרכזי, העליון והשמאלי של בטן העכבר. כדי להסיר את השיער הגזוז, מרחו קרם להסרת שיער על האזור שגוזר. המתינו ארבע עד חמש דקות והסירו בעדינות את השיער.שחררו את שסתום בלון החמצן. הכניסו את העכבר לתא האיסופלורן (Isoflurane). כוון את זרימת החמצן ל-four liter per minute.כוון את אידוי האיסופלורן לארבעה אחוזים לצורך השראת ההרדמה. ודא שהעכבר הורדם כראוי על ידי צביטה עדינה של בהונות הרגליים. הנח לוח ניתוח בתוך קבינה לבטיחות ביולוגית.הניחו את בעל החיים על לוח הניתוח כך שחלקו הגחוני של העכבר פונה כלפי מעלה והחלק הקדמי של העכבר ממוקם בתוך קונוף האף המחובר לאספקת ה-Isoflurane והחמצן. הפחיתו את אידוי ה-Isoflurane לשני אחוזים כדי לשמור על ההרדמה. חטאו את העור על ידי ניגוב עם צמר גפן סטרילי טבול ב-70% ethanol.בצעו חתך רוחבי של כסנטימטר אחד בעור, ממש מתחת לעצם הסטרנום (sternum), בניצב לעצם הזיפואיד (xiphoid) ובמקביל לכלוב הצלעות. הפרידו בעדינות את העור ואת הפריטונאום (peritoneum) בקרבת החתך. בצעו חתך רוחבי דרך שכבת הפריטונאום, ממש מתחת לעצם הזיפואיד, כדי לחשוף את האונה השמאלית של הכבד.ייעשה שימוש בשני מקלוני צמר לחים. הנח מקל צמר אחד בצד הבטני של החתך והנח מקל צמר שני בצד הסרעפת. כעת לחץ בעדינות על המקל שהונח לכיוון הסרעפת ובצע דחיפה מחליקה בעזרת המקל השני כדי להרים את האונה השמאלית של הכבד.הניחו לולאה של חוט משי בבסיס האונה הלטרלית השמאלית קרוב לקולון הכבדי (liver hilum) באמצעות פינצטות מיקרו-דיסקציה. לאחר הידוק קל של הקשר, החליקו את חוט המשי ככל האפשר לעבר בסיס אונת הכבד. הדקו את הקשר והניחו שני קשרים נוספים בצד השני.גזרו את האונה הקשורה באמצעות מספרי מיקרו-כירורגיה. תמונה זו מראה את החלק הנותר של האונה השמאלית לאחר הכריתה. תפרו את הפריטונאום בתפר רציף באמצעות סuture נספג מסוג Catgut במידה 4/0.סגרו את העור באמצעות תפרים מקטעים או רצופים תוך שימוש באותם חוטי תפר נספגים מסוג Catgut 4-0. מרחו Betadine בסביבת התפרים. שמרו את ההפטוציטים או את ה-NeoHep תלויים ב-50 µL של IMDM, מוכנים במזרק אינסולין של 1 mL עם מחט בקוטר 29 gauge.הניחו את העכבר כך שהחלק הצדדי השמאלי פונה כלפי מעלה. זהו את אזור הטחול ובצעו דיסקציה רוחבית של העור. בצעו חתך של שני עד שלושה מילימטרים בשכבת הפריטונאום כדי לחשוף את הטחול.הניחו את הטחול בין שני מקלוני צמר רטובים והרימו אותו בעדינות. החדירו את המחט לקליפת הטחול (cortex) בעדינות והזריקו אל תוכה את תמיסת התאים. סגרו את הפריטונאום באמצעות תפר רציף בחוט תפר במידה 4-0, וסגרו את העור באמצעות תפריה מקוטעת.מרחו Betadine על התפרים. מזריקו תוך-פעטונית 100 µL תמיסת סלין המכילה 12 mg מהאנטיביוטיקה Cefotaxime. מזריקו תוך-פעטונית 100 µL תמיסת סלין המכילה 12 µg מהמשכך Meloxicam.יש להעניק זאת מדי יום במשך שלושה ימים לאחר הניתוח. סגרו את מאייד האיזופלורן והניחו את העכבר בכלוב. בעל החיים יחזור להכרה בתוך שניות.נבדקה השגשוג (proliferation) של תאי כבד (hepatocytes) בכבד לאחר 24 שעות של כריתה חלקית של 30% מהכבד (hepatectomy), וזאת באמצעות צביעה אימונוהיסטוכימית של חתכי כבד עם Ki-67, המשמש כסמן לשגשוג תאים. לאחר צביעת החתכים, נעשה שימוש בנוגדן שני המצומד ל-horseradish peroxidase נגד Ki-67 לצורך זיהוי, ונעשה שימוש ב-Di-Amino Benzadine כתשתיות לפיתוח צבע חום. הגרעין נצבע בצביעה נגדית באמצעות המטוקסילן.בתמונה זו, תאים בצבע חום הם הפאטוציטים proliferators חיוביים ל-Ki-67. עשרה ימים לאחר השתלה, העכבר הורד ומספרה והכבד נבדק. כאן מוצגת תמונה מייצגת.מהכבד המשוחזר נכרתו האונה הצידית הימנית, האונה המדיאלית הימנית והאונות המדיאליות השמאליות, ונלקחו חתכים בעובי של חמישה מיקרון. חתכים אלו נצבעו עם נוגדנים ראשוניים של rabbit polyclonal anti-GFP ונוגדנים משניים של anti-rabbit Alexa Fluor 594. הגרעין נצבע בצביעה נגדית עם DAPI.תמונה זו מראה הגירה (homing) של הפטוציטים המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק, הנראה כאן בצבע אדום. כאשר תאים דמויי הפטוציטים ממקור אנושי הנקראים NeoHep הושתלו, צפינו בביטוי של Albumin אנושי ושל Connexin 32 אנושי בחתכי כבד של עכבר רקפי שעבר כריתת כבד (hepatectomized). עשרה ימים לאחר הניתוח, ניתוח ביוכימי של אנזימי כבד מופרשים בסרום אישר כי רמות ה-aspartate aminotransferase, ה-alanine amintransferase וה-alkaline phosphatase חזרו לרמה נורמלית.בדומה לכך, בדיקה היסטולוגית של חתכי כבד באמצעות צביעת haematoxylin and eosin לא הראתה חריגות עשרה ימים לאחר הניתוח, מה שמעיד על התאוששות תקינה של הכבד. חשוב לנקוט בכמה אמצעי זהירות. נסו למקם את הקשר של חוט הניילון בבסיס של אונה הכבד.אל תשכחו לקשור שני קשרים הדוקים נוספים בצד הנגדי, ואל תנסו לחתוך קרוב מדי לחוט. להשתלת תאים בטחול, החדירו את המחט בצורה אנכית בדיוק, והיא לא צריכה לחדור לעומק של יותר משני מילימטרים. לסגירת העור, הימנעו משימוש בסריגי סגירה (wound clips).במקום זאת, סגרו את הפצע באמצעות תפר בגודל 4-0. סגורי פצע (Wound clips) מגבילים את תנועת העכבר הטבעית, ולעתים קרובות הם משתחררים ונושריים תוך זמן קצר. לאחר החזרת בעל החיים לכלוב, ניתן להניח בכלוב מספר פתיתי תירס סטריליים ולספק מים סטריליים עם 5% גלוקוז.אם לא הייתם חשופים בעבר לניתוחים בבעלי חיים, התאמנו בנפרד על כריתה חלקית של הכבד (partial liver hepatectomy) והשתלה בעכברים תקינים בעלי מערכת חיסון פעילה, ולאחר מכן בצעו את שני ההליכים בבעל חיים אחד. בצעו את ההליכים בעכברי NOD.SCID deficient-immune רק לאחר שהשגתם שיעור הישרדות של מאה אחוזים בעכברים בעלי מערכת חיסון פעילה.

intrasplenic-transplantation-hepatocytes-after-partial-hepatectomy

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השתלה של תאים העכבר גזע עצביים (NSCs) לתוך מיתרי השדרה של עכברים עם demyelination הוקמה מפורט. הכנה של NSCs, laminectomy של החוליה החזי 9 (T9), וכן השתלת NSCs מתוארת יחד עם הטיפול לפני ואחרי הניתוח של העכברים.

כירורגי של השתלת תאים עכבר גזע עצביים לתוך מיתרי השדרה של עכברים נגועים בנגיף הפטיטיס עכבר Neurotropic

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת מודל עכבר כפול אנושי עם מערכת חיסון אנושית ותאי כבד. היא כרוכה בהשתלת תאי כבד אנושיים ותאי גזע ואב המטופויטיים בעכבר מהונדס מדוכאי חיסון באמצעות הזרקה תוך ספלנית, מה שמוביל לקליטת תאי כבד והתפתחות תאי חיסון אנושיים.

פיתוח מודל עכבר אנושי עם תאי כבד אנושיים ותאי חיסון

xenografts גידול האנושי בעכברים עם מערכת חיסון חלשים הם כלים רבי ערך כדי ללמוד ביולוגיה בסרטן. פרוטוקולים ספציפיים כדי ליצור xenografts תת עורי וintrahepatic מתאי אנושיים hepatocellular קרצינומה או שברי גידול מתוארים. התחדשות כבד הנגרמת על ידי כריתה חלקית בעכברי נמען מוצגת כאסטרטגיה כדי להקל על קליטתם intrahepatic.

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

כאן, אנו מציגים מודל כבד עכבר אנושי חדש שנוצר בעכברי נוקאאוט של תאים מתווכים של קולטן רעלן Alb (TRECK)/SCID לאחר השתלת תאי גזע כבד אנושיים לא בשלים וניתנים להרחבה.

דור של כבד עכבר אנושי באמצעות תאי גזע אנושי כבדיה

כאן, אנו מציגים שיטה חדשה עבור כריתה חלקית של האונה השמאלית הכבד בעכברים neonatal (יום 0). פרוטוקול חדש זה מתאים ללמוד פציעת כבד חריפה ותגובה פציעה בהגדרת neonatal.

Hepatectomy Lobular חלקית: מודל ניתוח עבור התחדשות הכבד מורפולוגיות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת מודל אנושי העכבר chimeric הכבד של היפרכולסטרולמיה משפחתית באמצעות hepatocytes נגזר תאי גזע pluripotent המושרה אנושי. זהו מודל ערך בדיקה טיפולים חדשים עבור היפרכולסטרולמיה.

מודל אנושי העכבר Chimeric הכבד היפרכולסטרולמיה משפחתית באמצעות Hepatocytes נגזר תאי גזע Pluripotent המושרה

פרוטוקול זה מספק שיטה אמינה להקמת עכברים הומניזציה עם מערכת החיסון האנושית ותאי הכבד. השני עכברים לקויה מחדש השיגה באמצעות הזרקה התוך הטחול של האדם hepatocytes ו CD34+ תאי גזע המטרופאיות רגישים לנגיף הכשל החיסוני האנושי-1 זיהום ונזק הכבד לכידה כפי שנצפתה ב . חולים נגועים...

הקמתה של הומניזציה Dual-TK-חעוגה מודל העכבר עבור הנגיף הקשור HIV פתוגנזה

כאן, אנו מתארים את ההתפתחות של מודל מורטין רלוונטי קלינית של סרטן הכבד לכידה של תכונות החיסונית אופייני של סרטן hepatocellular (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

הפטוציטים עמוסי שומנים טבועים בהתחדשות הכבד, אך בדרך כלל הולכים לאיבוד עם צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול בידוד תאים אופטימלי השומר על הפטוציטים סטאטוטיים, ומניב אוכלוסיות מייצגות של הפטוציטים מתחדשים לאחר כריתת כבד חלקית בעכברים.

בידוד של הפטוציטים מתחדשים לאחר כריתת כבד חלקית בעכברים

בפרוטוקול זה נדון ביישום מודל של השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת (OLT) בעכברים. בנוסף, נדונים גם אדג'ובנטים לניתוח נוסף של פטנטיות אלוגרפט לאחר OLT מוצלח בעכבר, במיוחד באמצעות סריקות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (microCT).

השתלת כבד אורתוטופית מוצלחת בעכברים באמצעות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת אנגיוגרפיה

מודל העכבר של כריתת כבד חלקית 2/3 (66%) מתואר היטב בספרות, אך לעתים רחוקות נעשה שימוש בכריתת כבד ממושכת יותר המחקה תסמונת קטנה לגודל לאחר השתלת כבד. אנו מתארים הליך מורחב של 78% כריתת כבד במודל עכבר שמביא לכ-50% קטלניות לאחר הניתוח בעכברים בריאים.

כריתת כבד מורחבת של 78% במודל כירורגי עכבר

למד השתלת תאי כבד תוך-טחולית לאחר כריתת כבד חלקית בעכברי NOD.SCID. פרוטוקול זה מדגים טכניקות ניתוחיות לחקר טיפולים מבוססי תאים בכשל כבדי חריף.

השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים

גלה סרטונים נוספים