לייזר דופלר: כלי למדידת הלבלב איון Microvascular Vasomotion In Vivo

המטרה הכוללת של הליך זה היא לקבוע את המצב התפקודי של תנועת כלי דם מיקרו-וסקולרית באי הלבלב in vivo כדי להעריך את השפעתו על מחלות קשורות. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות המפתח בתחום מחזור הדם הרפואי כגון האם תנועת כלי הדם המיקרו-וסקולריים של אי הלבלב משתנה במצב פתולוגי. היה לנו רעיון לראשונה לשיטה זו כאשר הראינו שיש זרימת דם מכנית פונקציונלית שהתפתחה בהתפתחות הסוכרת.

היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יכולה להעריך את המצב התפקודי של תנועת כלי דם מיקרו-וסקולרית של רקמות ואיברים הן במסגרות קליניות והן במעבדה. שיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי מחלות הקשורות לאיי הלבלב. ניתן ליישם אותו גם על מערכות אחרות, כגון מחלות מיקרו-וסקולריות הקשורות לכליות ולרשתית.

היישומים של טכניקה זו מתרחבים גם להבנת אופי המגמות במצב התפקודי של תנועת כלי דם מיקרו-וסקולריים. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו מכיוון שיש כמויות עצומות של נתונים אקדמיים מיקרו-וסקולריים שמקורם בדופלר לייזר במהלך הניסויים. ודא שהדגמה של שיטה זו היא קריטית מכיוון שגורמים רבים יכולים להשפיע לרעה על איסוף מדויק של נתוני מיקרו-סירקולציה.

פרוטוקול זה מתחיל במתן זריקה יומית לעכברים של STZ במשך חמישה ימים רצופים. ממיסים את ה-STZ במאגר נתרן ציטראט לריכוז עבודה של חמישה מיליגרם למיליליטר. לאחר מכן, תן זריקות תוך צפקיות באמצעות מזרק מיליליטר אחד ומחט 25 מד

העכברים חייבים לצום ארבע שעות לפני ההזרקה, אך אין להסיר את הגישה שלהם למים. הזרקו לעכברי הבקרה את אותו נפח של מאגר נתרן ציטראט טהור. לאחר הזריקות יש לספק לעכברים מזון רגיל ומי סוכרוז 10%.

לאחר היום החמישי של הזרקת STZ, החלף את מי הסוכרוז 10% במים רגילים. תשעה ימים לאחר מכן, בדקו את רמת הגלוקוז בדם. ראשית, צמו את העכברים במשך שש שעות עם גישה חופשית למים.

לאחר מכן, קחו דם מוורידי הזנב שלהם והשתמשו בגלוקומטר ידני סטנדרטי כדי למדוד את הדם. שקול כל עכבר עם רמות גלוקוז בדם מעל 200 מיליגרם לדציליטר סוכרתי. לפני השימוש במנגנון דופלר הלייזר, נקה תחילה את המשטחים האופטיים של קצה הבדיקה ומחבר הבדיקה עם מטלית רכה ולא שוחקת, ולאחר מכן חבר את הכבל ליציאת המכשיר.

לאחר מכן, הרכיבו את מעמד הכיול. ראשית, תן לתקן השטף המאוחסן להגיע לטמפרטורת החדר. זה לוקח כחצי שעה.

לאחר מכן, נער את תקן השטף בעדינות למשך 10 שניות ותן לו לנוח על בסיס הכיול למשך שתי דקות. לאחר מכן, הרם את המהדק גבוה ככל האפשר ואבטח את הגשושית לתוך המהדק. כעת טבלו לאט את הגשושית בתקן השטף ואבטחו את הגשושית באמצעות מחזיקי הבדיקה.

כדי להמשיך, עמעם את אורות החדר ולחץ על כיול במכשיר דופלר הלייזר. כעת בחר את ערוץ העבודה שאליו מחוברת הגשושית והפעל את תוכנית הכיול. מקם עכבר מורדם בשכיבה על משטח עבודה ואבטח אותו באמצעות סרט כירורגי.

לאחר מכן, יש לעקר את עור הבטן באתנול של 75% מאזור צוואר הרחם לזנב, ואז לכסות את פריפריה של האזור בספוג גזה יבש שבמרכזו חור ברוחב שלושה סנטימטרים. לאחר מכן, הרם את עור הבטן בעזרת מלקחיים ובצע חתך אנכי ראשוני לאורך קו האמצע של הבטן בעזרת אזמל או מספריים לעור. ואז תפוס את השריר הבסיסי בעזרת מלקחיים וחתך כדי להיכנס לחלל הבטן.

אין לפגוע באיברים. כדי לחשוף את חלל הבטן, קפלו את העור ואת השריר שמתחתיו מעל החזה, ולאחר מכן חשפו בעדינות את גוף הלבלב והטחול באמצעות זוג מלקחיים קהי אף. כעת, בתוכנת הבקרה של מכשיר דופלר הלייזר, צור קובץ מדידה חדש ולאחר מכן הגדר את המסכים המחוברים.

תחת הכרטיסייה כללי, הגדר את משך הניטור להפעלה חופשית והשתמש בברירת המחדל של היצרן עבור הכרטיסייה צג LDF. לאחר מכן, פתח את תיבת הדו-שיח של הגדרת התצוגה ובחר את הערוצים המתאימים. לאחר מכן, החלף את הפרמטרים הבאים:מקור נתונים לערוץ ולתווית, יחידות וצבע, ולאחר מכן לחץ על הבא.

לאחר מכן, הזן מידע מזהה על הנושא והמדידה בתיבת הדו-שיח של פרטי הקובץ והמשך בלחיצה על הבא שוב. כעת, התצורה הושלמה וחלון מדידה יופיע. לאחר מכן, קדם ידנית את האלקטרודה לטווח של מילימטר אחד מהלבלב.

דיוק המדידה קשור למרחק בין הגשושית לרקמת אי הלבלב. קריאת זרימת הדם לא תהיה מדויקת אלא אם כן מקפידים על מרווחים של מילימטר אחד בין הרקמות לבדיקה. כדי להתחיל בהקלטה, לחץ על סמל ההתחלה ונתוני ה-PU בדם המיקרו-וסקולרי יתחילו להישמר.

עשה זאת למשך דקה שלמה והשתמש בלחצני הדחיסה וההרחבה של התצוגה ובלחצני ההגדלה או הקטנה של גובה עקבות הגרף כדי להתאים את האפקט המוצג במהלך ההקלטה ולאחר מכן להפסיק את ההקלטה. לאחר מכן, שמור את הקובץ בשם מתאים. כעת, מקם מחדש את הגשושית באופן ידני כדי למנוע השפעות תוספות ותשישות מקומית של יכולת ההתכווצות וההרפיה.

בסך הכל, אסוף נתוני PU משלוש נקודות אקראיות בלבלב עבור כל עכבר. בשלב מסוים במהלך הניסוי, מדוד את נתוני ה-PU מפלטה לא רפלקטיבית כדי לקבל ערך בקרה בסיסי. לאחר ביצוע שלוש המדידות, השתמש בתפרים של שלושה או כדי לסגור את שכבות השריר ולאחר מכן בתפרים של ארבעה או כדי לסגור את שכבת העור.

כעת עקוב אחר העכבר בכלוב התאוששות עד שהוא מוכן להעברה לכלוב ביתי נקי. באופן כללי, המצב המיקרו-סירקולטורי של אי הלבלב מיוצג על ידי שלבי התכווצות והרפיה תקופתיים. התופעה ההמודינמית הכוללת יוצרת דפוס של זלוף זרימת הדם.

באמצעות מכשיר דופלר הלייזר, נאספו נתוני PU כדי להראות את דפוס ההתפלגות של זלוף דם מיקרו-וסקולרי בעכברים שאינם סוכרתיים וסוכרתיים. התוצאות היו שונות לחלוטין. קצב ההתכווצויות וההרפיה של כלי הדם המיקרו-וסקולריים באי הלבלב היה כאוטי ולא סדיר בעכברים סוכרתיים המושרים על ידי STZ, בעוד שלבקרות שאינן סוכרתיות היו תנודות קצביות.

לאחר מכן, כלי הדם כומתו באמצעות פרופילי PU. בהשוואה לביקורת, זלוף הדם הממוצע של מיקרו-סירקולציה של אי הלבלב ירד בעכברים סוכרתיים המושרים על ידי STZ. עכברים אלה הראו גם ירידה משמעותית במשרעת ובתדירות של תנועת כלי דם זו, כמו גם במהירות היחסית של זלוף הדם לאי הלבלב.

לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 30 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לוודא שהמרחק בין הגשושית לרקמת הלבלב הוא בטווח של מילימטר אחד. מרחק לא מתאים נותן קריאת זרימת דם מוגברת או מופחתת באופן מלאכותי.

לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון כתמי לייזר והעברת חמצן על מנת לענות על שאלות נוספות כמו הדמיה איסכמית, הערכת זרימת דם, מצב תפקודי של הערכת כלי דם מיקרו-וסקולריים. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים וקלינאים בתחום האנדוקרינולוגיה והמטבוליזם לחקור את מנגנוני המיקרו-סירקולציה המסתתרים מאחורי מחלות הקשורות לאיי הלבלב. אל תשכח שעבודה עם מכשיר לייזר עלולה להיות מסוכנת ביותר עקב חשיפה לקרינה ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות כגון צד הסביבה הוא לפחות 200 מילימטר מהעין בעת ביצוע הליך זה.