במבחנה אפיון של המאפיינים אלקטרופיזיולוגיות של סיבי מביא שטיפת המעי הגס בחולדות

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להדגים את המתודולוגיה לרישום אלקטרופיזיולוגי של עצבים תחושתיים של המעי הגס במבחנה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום עט מבחנה כגון תרומת רגישות האביזרים ההיקפים החיצוניים להיפרלגזיה נכונה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת הבחנה של המעי הגס באופן דומה לביצוע הבחנת הצוואר in vivo, בבעלי חיים או בחולים.

הדגמה ויזואלית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שאיתור הגרעינים וניתוח העצבים קשים יחסית. כדי להתחיל בהליך זה, חשוף את חלל הבטן של חולדה מורדמת עמוק על ידי ביצוע חתך בקו האמצע בדופן הבטן באמצעות אזמל. לאחר מכן, משוך את המזנטריה ורקמות אחרות הצידה כדי לחשוף את המעי הגס.

לאחר מכן, הניחו את החיה מתחת למיקרוסקופ הניתוח. באמצעות דיסקציה זהירה, אתר את גנגליון האגן השמאלי וזהה את עצבי האגן ואת העצבים המותניים המצטרפים אליו. לאחר מכן, חתכו את העצבים הללו במרחק של כמה מילימטרים מהגנגליון של האגן.

איתור גנגליון האגן וניתוח עצבים הוא השלב הקריטי והקשה ביותר בהליך זה. לאחר מכן, חותכים את עצם הסימפיזה כדי לחשוף את פי הטבעת. הסר את הרקמות מעל המעי הגס והקפד להשאיר את גנגליון האגן שלם.

לאחר הקרבת החולדה על ידי הזרקה תוך ורידית של מנת יתר של פנטוברביטל, יש לחצות את המעי הגס כשלושה סנטימטרים מעל גנגליון האגן ולהוציא את המעי הגס מהחיה באמצעות מלקחיים. לאחר מכן, העבירו את המעי הגס לצלחת פטרי מלאה בתמיסת קרבס מקוררת מראש. הסר את הצואה על ידי שטיפה עדינה של המעי הגס.

לאחר מכן, הסר את שאריות שלפוחית השתן ורקמות אחרות בזהירות, מבלי לפגוע בגנגליון האגן. בהליך זה, הנח את המעי הגס בתא הקלטה והעשיר את הרקמה ברציפות בתמיסת קרבס קרבוגן. לאחר מכן, קנול את המעי הגס הן בקצה הפה והן בקצה פי הטבעת, ואז התחל את העירוי התוך-לומינלי של המעי הגס עם מי מלח בכיוון הפה עד פי הטבעת, לאחר מכן, אתר את גנגליון האגן העיקרי מתחת למיקרוסקופ הניתוח והשתמש בסיכות חרקים כדי לחשוף את הגנגליון.

בדיסקציה זהירה, מצא ענף דק של עצב הנובע מהגנגליון ורץ לכיוון המעי הגס, ואז חתוך את העצב קרוב לגנגליון. לפני השלב הבא, הפעל את אמבט החימום ושמור את תמיסת קרבס על 34 מעלות צלזיוס. כעת, בדוק פיפטת זכוכית שנמשכה מראש מתחת למיקרוסקופ הניתוח.

שברו את קצה האלקטרודה בעזרת זוג מלקחיים כך שיהיה בגודל התואם את קוטר העצב שיש לרשום. לאחר מכן, שפעו את הקצה על ידי הנחתו קרוב להתלקחות קלה יותר. חדש במתודולוגיה זו עשוי גם למצוא את זה מסובך לשיפוע קצה האלקטרודה התואם לגודל העצב.

לאחר מכן, הנח את האלקטרודה המשופעת במחזיק האלקטרודה, ולאחר מכן חבר מזרק של 10 מיליליטר ליציאת הצד של המחזיק להפעלת לחץ שלילי או חיובי על האלקטרודה. לאחר מכן, חבר את המחזיק לשלב הראש של המגבר הביולוגי, והרכיב את שלב הראש על מניפולטור. לאחר מכן, העבירו את האלקטרודה לאמבט הרקמות ומלאו את האלקטרודה בתמיסת קרבס על ידי הפעלת שאיבה עדינה עד שהיא נוגעת בחוט הכסף של המחזיק.

לאחר מכן, הניחו את קצה האלקטרודה קרוב לקצה החתוך של העצב והפעילו לחץ שלילי כדי לשאוב את העצב לתוך האלקטרודה. לאחר מכן, הפעל לחץ שלילי יותר, כך שכמילימטר אחד מהעצב נמשך לאלקטרודה ויוצר אטימה הדוקה. כעת, הפעל את מגבר הביו והגדר את המסנן ל -300 עד שלושת אלפים הרץ.

עקוב אחר האות באוסילוסקופ ורשום את אות העצב ואת אות הלחץ התוך-לומינלי בתוכנת עיבוד נתוני הספייק. לאחר מכן, יש למרוח את התרחבות הרמפה של המעי הגס על ידי סגירת הברז התלת-כיווני על צינורית היציאה תוך הזרקה רציפה. עקוב אחר הלחץ התוך-לומינלי עד שהוא מגיע ל-60 מילימטר כספית, ולאחר מכן פתח את הברז התלת-כיווני על צינורית הניקוז.

חזור על הליך זה במרווחי זמן קבועים של רבע שעה והחל תרופות נוספות או תוך לומינליות כדי לבדוק את הרגישות הכימית של העצבים הנכנסים. להלן האיור הסכמטי של המערך הניסיוני להכנת המעי הגס של צינור ex vivo עם הקלטה מייצגת מעצב דיסטלי לגנגליון האגן. בתכשירים מחולדות רגילות, לעצבים הנכנסים של המעי הגס יש בדרך כלל רמה נמוכה של פעילות ספונטנית קבועה.

התרחבות רמפה של המעי הגס גורמת לעלייה הדרגתית בקצב הירי. המאפיין המכנו-סנסורי של כל עצב מיוצג על ידי התוויית עקומת התגובה העצבית התוך-לומינלית. לחלופין, ניתן לבצע רישום מענף של עצבי האגן הפרוקסימליים לגנגליון האגן.

פרופיל הפעילות המכנו-סנסורית של עצבי האגן הפרוקסימליים דומה בדרך כלל לזה הנראה בעצב הדיסטלי לגנגליון האגן. ניתן לבצע ניתוח רכיבים עיקריים של צורות הגל של פוטנציאל הפעולה מההקלטה הרב-יחידה כדי להבחין בפעילות יחידה אחת. להלן צורות הגל המונחות על גבי שני פרנים בודדים באגן.

לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך שעתיים אם היא מבוצעת כראוי. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב את האנטומיה של גרעיני האגן העיקריים והעצבים האחרים ולהיות מסוגל לאתר את הגרעינים כדי לנתח את העצבים ולתעד את הפעילות הנכנסת. יתרונו של פרוטוקול זה הוא בכך שהוא עשוי לאפשר השוואה בין התכונות האלקטרופיזיולוגיות והפרופילים הפרמקולוגיים של האגן והעצבים האפרנטיים הספלנצ'ניים.