Name: הערכה stereological של דופאמין נוירון במספר העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד אופטי Fractionator (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: למדו הערכה סטריאולוגית של נוירונים דופמינרגיים בעכברים בחלק הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל. שיטה זו מאפשרת מחקר קדם-קליני במחלת פרקינסון בלי ציוד סטריאולוגי ייעודי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים Keali רוהם, לואיזה Frieß של הייקה מנזל לסיוע טכני מומחה שלהם; כדי הלגה Brünner על הטיפול בבעלי חיים; וכדי Chistopher וורד ס הדור והפצה של התוסף רשת disector אופטי עבור התוכנה ImageJ.

<ol><li>Ip, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV1%2F2-induced+overexpression+of+A53T-alpha-synuclein+in+the+substantia+nigra+results+in+degeneration+of+the+nigrostriatal+system+with+Lewy-like+pathology+and+motor+impairment%3A+a+new+mouse+model+for+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">AAV1/2-induced overexpression of A53T-alpha-synuclein in the substantia nigra results in degeneration of the nigrostriatal system with Lewy-like pathology and motor impairment: a new mouse model for Parkinson's disease.</a> Acta Neuropathol Commun. 5 (1), 11(2017).</li>
<li>Ip, C. W., Beck, S. K., Volkmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocytes+reduce+nigrostriatal+deficits+in+the+6-hydroxydopamine+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Lymphocytes reduce nigrostriatal deficits in the 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease.</a> J Neural Transm (Vienna). 122 (12), 1633-1643 (2015).</li>
<li>West, M. J., Slomianka, L., Gundersen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+thesubdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in thesubdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Anat Rec. 231 (4), 482-497 (1991).</li>
<li>Schmitz, C., Hof, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design-based+stereology+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Design-based stereology in neuroscience.</a> Neuroscience. 130 (4), 813-831 (2005).</li>
<li>Tieu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+neurotoxic+animal+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">A guide to neurotoxic animal models of Parkinson's disease.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 1 (1), e009316(2011).</li>
<li>Abercrombie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+nuclear+population+from+microtome+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Estimation of nuclear population from microtome sections.</a> Anat Rec. 94, 239-247 (1946).</li>
<li>Rose, R. D., Rohrlich, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+sectioned+cells+via+mathematical+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Counting sectioned cells via mathematical reconstruction.</a> J Comp Neurol. 263 (3), 365-386 (1987).</li>
<li>Weibel, E. R., Gomez, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+principle+for+counting+tissue+structures+on+random+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">A principle for counting tissue structures on random sections.</a> J Appl Physiol. 17, 343-348 (1962).</li>
<li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design-based+stereological+methods+for+counting+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Design-based stereological methods for counting neurons.</a> Prog Brain Res. 135, 43-51 (2002).</li>
<li>Keuker, J. I., Vollmann-Honsdorf, G. K., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+use+the+optical+fractionator%3A+an+example+based+on+the+estimation+of+neurons+in+the+hippocampal+CA1+and+CA3+regions+of+tree+shrews%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">How to use the optical fractionator: an example based on the estimation of neurons in the hippocampal CA1 and CA3 regions of tree shrews.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 7 (3), 211-221 (2001).</li>
<li>Mouton, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+age+and+lipopolysaccharide+%28LPS%29-mediated+peripheral+inflammation+on+numbers+of+central+catecholaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">The effects of age and lipopolysaccharide (LPS)-mediated peripheral inflammation on numbers of central catecholaminergic neurons.</a> Neurobiol Aging. 33 (2), e427-e436 (2012).</li>
<li>Barreto, G. E., Sun, X., Xu, L., Giffard, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+proliferation+following+stroke+in+the+mouse+depends+on+distance+from+the+infarct%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Astrocyte proliferation following stroke in the mouse depends on distance from the infarct.</a> PLoS One. 6 (11), e27881(2011).</li>
<li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> J Neurosci Res. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , Academic Press. (2001).</li>
<li>Rasband, W. Grid_Overlay.java. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/graphic-overlay.html">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/graphic-overlay.html</a> (2010).</li>
<li>De Vos, K. cell_counter.jar. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html</a> (2010).</li>
<li>Baquet, Z. C., Williams, D., Brody, J., Smeyne, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+model-based+%282D%29+and+design-based+%283D%29+stereological+methods+for+estimating+cell+number+in+the+substantia+nigra+pars+compacta+%28SNpc%29+of+the+C57BL%2F6J+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A comparison of model-based (2D) and design-based (3D) stereological methods for estimating cell number in the substantia nigra pars compacta (SNpc) of the C57BL/6J mouse.</a> Neuroscience. 161 (4), 1082-1090 (2009).</li>
<li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cytoarchitectonic+and+chemoarchitectonic+analysis+of+the+dopamine+cell+groups+in+the+substantia+nigra%2C+ventral+tegmental+area%2C+and+retrorubral+field+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">A cytoarchitectonic and chemoarchitectonic analysis of the dopamine cell groups in the substantia nigra, ventral tegmental area, and retrorubral field in the mouse.</a> Brain Struct Funct. 217 (2), 591-612 (2012).</li>
<li>German, D. C., Manaye, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Midbrain+dopaminergic+neurons+%28nuclei+A8%2C+A9%2C+and+A10%29%3A+three-dimensional+reconstruction+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Midbrain dopaminergic neurons (nuclei A8, A9, and A10): three-dimensional reconstruction in the rat.</a> J Comp Neurol. 331 (3), 297-309 (1993).</li>
<li>Smeyne, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+Effects+of+MPTP+and+Paraquat+on+Dopaminergic+Neurons+and+Microglia+in+the+Substantia+Nigra+Pars+Compacta+of+C57BL%2F6+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Assessment of the Effects of MPTP and Paraquat on Dopaminergic Neurons and Microglia in the Substantia Nigra Pars Compacta of C57BL/6 Mice.</a> PLoS One. 11 (10), e0164094(2016).</li>
</ol>

וו. מודיע שימש על לוחות מדעי Merz תרופות, LLC, טבע; קיבל מימון עבור נסיעות Ipsen, Merz תרופות, LLC, Allergan, inc.; קיבלה רמקול honoraria Merz, טבע, Allergan, inc. מחוץ העבודות שהוגשו. הספר שימש כיועץ עבור בוסטון סיינטיפיק, מדטרוניק AbbVie, קיבלה honoraria של מדטרוניק בוסטון סיינטיפיק, AbbVie, Bial, Allergan, GlobalKinetics מחוץ העבודות שהוגשו.

Stereology מתחיל עם עיבוד רקמות. חיתוך סדרתי של SN רקמה יש לבצע בזהירות כדי למנוע האובדן של מקטעים במהלך ניתוח stereological. בנוסף, הוא צעד חיוני כדי לסמן והזיז חצי אחד על מנת לבדל את הזכות מן השמאל SN בעת ביצוע stereology. הצבת לחור קטן בחלק העליון של גזע המוח להפיק את התוצאות הטובות ביותר במחקר הציג. יתר על כן, מאז עובד עם הדרישות שיטת fractionator אופטי הרקמה היא לחתוך בסעיפים בעובי של בערך 30-40 µm, יותר מאשר של 5-10 מיקרומטר יותר נפוץ אימונוהיסטוכימיה, נוגדנים, אחרים חדירה של נוזלים ברקמות הדגירה במהלך נוגדן והקפדה...

כימות של מספר דופאמינרגיים הוא מרכזי במחקר פרקינסון קליניים כדי לקבוע את מידת הקשורים ניוון מוחיים בתוך הסובסטנציה ניגרה (SN)1,2. הערכת stereological מוטים ממספר תאים באזור של הריבית נחשבת4,3,5תקן הזהב.
לפני כניסתו של stereology מוטים, המספר של נוירונים בחלקים הוערך על-ידי מניפולציה תא שנספרו פרופילים לתיקון ההסתברויות משתנה כי נוירונים נכנס מראה במקטע. אחת השיטות הנפוצות ביותר היה התיקון של כימות ספירת מתוארת על ידי אברקרומבי6. שיטה זו ניסה לקחת בחשבון כי התאים ניתן לכמת יותר מפעם אחת אם נמצאו שברי באותו התא בסעיפים דק סמוכים. לכן, אברקרומבי, מחברים אחרים שנוצרו משוואות נדרש הנחות לגבי הצורה, הגודל והכיוון של תאים ספרתי7,8. עם זאת, בהנחות אלו היו בדרך כלל לא הבין והוביל לכן שגיאות שיטתית של התפצלות ממספר התא בפועל (קרי, הטיה). יתר על כן, הטיה לא יופחת ע י דגימה נוספות3.
עבור הערכת stereological של מספרי הטלפון הנייד באמצעות את fractionator אופטי, עקרונות מתמטיים חלות ישירות מעריכים את מספרי הטלפון הנייד ישירות באמצעי אחסון מוגדרים, תלת-ממדי. היתרון של שיטה זו הוא כי זה אינו כרוך הנחות לגבי הצורה, הגודל והכיוון של התאים התפקדות. לפיכך, מספרי הטלפון הנייד המשוער קרובים יותר ערכי אמת, להתקרב ככל גודל המדגם (קרי, לא משוחד)3. כי רבים לציית לכללים בעת שימוש stereology כדי לשמור את השיטה לא משוחד, פותחו מערכות מוכנות לשימוש מסחרי stereology (לסקירה, ראה שמיץ והוף, 20054). Stereology מתמחה במערכות ליישם מבוססי עיצוב stereological שיטות עם אפריורי שהוגדרו הגששים וערכות דגימה עבור הערכות stereological להוביל העצמאות צורה, גודל, התפוצה המרחבית, כיוון תאים להיות שנותחה4,9. עם זאת, מערכות stereology זמינים מסחרית יקרים; זה עלול להגביל יישום במחקר חדש.
מטרת מחקר זה הייתה לפתח טכניקה שמיש עבור הערכת stereological מבוסס על עיצוב של דופאמין תא ספירת העכבר SN, כשנוקטים בשיטה fractionator אופטי והשימוש בציוד מיקרוסקופ רגיל (קרי, אור מיקרוסקופ תוכנה מיקרוסקופ רגיל, ממונע x, y, z הבמה). בשביל זה, מוצג מדריך צעד אחר צעד על כיצד לעבד רקמת מוח העכבר וכיצד להעריך את מספרי הטלפון הנייד SN באמצעות מבוססי עיצוב stereology לא משוחדת. יתר על כן, תבניות עבור חישוב המספרים תא המשוער ואת המקדמים של שגיאה (CE) הינם מסופקים.
השיטה המתוארת כאן אינה מוגבלת לניתוח של SN, אך ניתן להתאים לשימוש באזורים שהוגדרו מבחינה אנטומית אחרים של המוח עכבר או חולדה. למשל, stereology מוטים שימש כדי להעריך את מספרי הטלפון הנייד עצביים בהיפוקמפוס10 , לוקוס coeruleus11. בנוסף, סוגי תאים שאינם הנוירונים, כגון האסטרוציטים12 ו מיקרוגלייה13, יכול להיות מוערך גם כן. לכן שיטה זו יכולה להיות שימושית למדענים מי מתכוון ליישם stereology מוטים במחקר שלהם אבל הם לא מוכנים להשקיע הרבה כסף כדי לרכוש מערכת stereology.

<table><tbody><tr>אטלס <td></td><td></td><td>עכבר פקסינוס</td><td>מוח העכבר ג'ורג' פקסינוס קית' ב.ג'יי.פרנקליןCopyright @2001 על ידי Academic Press CD Rom designet & נוצר על ידי פול הלאס</td></tr><tr><td>עכבר פורס מטריצת מוח</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS 001-1</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldehyde</td><td>Merck</td><td>1040051000</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז /D(+) Saccharose</td><td>Roth</td><td>4621.1</td><td></td></tr><tr><td>איזופנטן</td><td>רוט</td><td>3927.1</td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>Merck</td><td>1040931000</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>32205-1L</td><td></td></tr><tr><td>שם</td><td>חברה</strong</td><td>>מספר קטלוגי</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>phosphate מרכיבי מלח חומציים: </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>31434-1KG-R</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן דימימן פוספט</td><td>Merck</td><td>1048731000</td><td></td></tr><tr><td>די-נתרן מימן פוספט דיהידרט</td><td>Merck</td><td>1065801000</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>Merck</td><td>1049360500</td><td></td></tr><tr><td>סרום עיזים רגיל</td><td>Dako</td><td>X0907</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין</td><td>סיגמא</td><td>A4503-100G</td><td></td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>X100-100 מ"ל</td><td>חומר ניקוי</td></tr><tr><td>3,3-Diaminobenzidine-tetrahydrochlorid/DAB טבליות 10 מ"ג pH 7.0</td><td>Kem En Tec</td><td>4170</td><td></td></tr><tr><td>H2O2/ מי חמצן 30%</td> <td>Merck</td><td>1072090250</td><td></td></tr><tr><td>אבידין/ביוטין מגיב</td><td>Thermo Scientific</td><td>32050</td><td>ערכת צביעה ABC רגישה במיוחד סטנדרטית, 1:100</td></tr><tr><td>ארנב אנטי עכבר טירוזין הידרוקסילאז נוגדן</td><td>ABCam</td><td>Ab112</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>ביוטינילציה עז-אנטי-ארנב IgG H+L</td><td>מעבדות וקטור</td><td>BA-1000</td><td>1:100</td></tr><tr><td>StereoInvestigator גרסה 11.07</td><td>MBF</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BX53 מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Visiview</td><td>Visitron Systems GmbH</td><td>3.3.0.2</td><td></td></tr><tr><td>Axiophot2</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ תוכנה</td><td>NIH</td><td>גרסה 4.7</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-TEK OCT</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr> תוסף שכבת <tr><td>רשת קרח</td><td></td><td></td><td></td>יבש</tr><tr><td></td><td>וויין רסבנד</td><td></td><td></td></tr><tr><td>https://imagej.nih.gov/ij/plugins/graphic-overlay.html תוסף מונה תאים</td><td>קורט דה ווס</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html).&nbsp;</td></tr><tr><td>מאקרו דיסקטור אופטי</td><td>כריסטופר וורד</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6N עכברים זכרים</td><td>צ'ארלס ריבר, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SuperFrost Plus שקופיות אובייקט מצופה</td><td>Langenbrinck, גרמניה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>25G מחט Microlance 3</td><td>BD</td><td>300400</td><td></td></tr><tr><td>REGLO משאבת עירוי אנלוגית</td><td>Ismatec</td><td>ISM 829</td><td></td></tr><tr><td>מערכת StereoInvestigator</td><td></td><td></td><td>StereoInvestigator גרסה 11.07</td></tr><tr><td>BX53 מיקרוסקופ</td><td></td><td></td><td>BX53 מיקרוסקופ</td></tr><tr>סטריאולוגיה <td></td><td></td><td>מגוונת עצמית</td><td>Visiview</td></tr><tr><td>Axiophot2</td><td></td><td></td><td>Axiophot2</td></tr></tbody></table>

הערכה stereological של דופאמין נוירון במספר העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד אופטי fractionator

Stereological Estimation of Dopaminergic Neuron Number in the Mouse Substantia Nigra Using the Optical Fractionator and Standard Microscopy Equipment

במחקר פרקינסון ניסויים פרה-קליניים, ניתוח של דרכי nigrostriatal, לרבות כימות של דופאמין אובדן נוירון בתוך הסובסטנציה ניגרה, חיוני. להעריך את מספר נוירון וכולינרגיים הכולל, לא משוחד stereology בשיטת fractionator אופטי הוא נחשב כיום תקן הזהב. בגלל התיאוריה מאחורי השיטה fractionator אופטי מורכבת, וגם בגלל stereology קשה להשגת ללא ציוד מיוחד, מספר מערכות זמינים מסחרית stereology מלאה הכוללים את התוכנה הדרושה קיימות גרידא תא לספור את הסיבות. מאז רכישת מלכודת stereology המקצועית אינה תמיד אפשרית, מסיבות רבות, דו ח זה מתאר שיטה עבור הערכת stereological של תאים עצביים דופאמין שנחשב שימוש בציוד מיקרוסקופ רגיל, כולל מיקרוסקופ אור, מוטורי בטבלת האובייקטים (x, y, z המטוס) עם תוכנת הדמיה, מחשב לצורך ניתוח. הסבר צעד אחר צעד כיצד לבצע כמת stereological בשיטת fractionator אופטי, ונשאר ניתנים הקבצים מחיישנים לחישוב משוער תא ספירת. כדי להעריך את הדיוק של שיטה זו, בוצעה השוואה לנתונים המתקבלים מנגנון stereology זמינים מסחרית. מספרי הטלפון הנייד דומות נמצאו באמצעות פרוטוקול זה המכשיר stereology, ובכך הממחיש את מידת הדיוק של פרוטוקול זה עבור stereology לא משוחדת.

באמצעות שיטת שהוצגו, המספר המשוער של תאנון + וכולינרגיים נוירונים הזכות SN נע בין תאים 7,363 ו- 7,987 ו, ב שמאל SN, בין תאים 7,446 ו 7,904. לפיכך, המספר הממוצע של נוירונים דופאמין (± SEM) היה ± 7,647 83 תאים עבור הזכות SN ± 7,675 66 בעד השמאל SN. לסה נ מחושבת עבור כל חיה שנמוך מ 0.08 (טווח: 0.073-0.079) (איור 7). כדי לברר את comparability של שיטה זו עם מערכות stereology מסחרית זמינים ממוקצעות, מספרי הטלפון הנייד SN היו גם לכמת באמצעות הגדרת stereology (<stron...

עבודה זו מציג עבור הערכת stereological לא משוחדת של מספרים דופאמינרגיים וכולינרגיים פרוטוקול צעד אחר צעד העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד (קרי, מיקרוסקופ אור, טבלה אובייקט ממונע (x, y, z המטוס), ותוכנה הציבור לניתוח תמונה דיגיטלית.

הערכה stereological של דופאמין נוירון במספר העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד אופטי Fractionator

In pre-clinical Parkinson&#39;s disease research, analysis of the nigrostriatal tract, including quantification of dopaminergic neuron loss within the ...

המטרה הכללית של פרוטוקול זה היא לתאר את ההערכה הסטריאולוגית מבוססת-עיצוב (design-based) של מספר התאים הדופמינרגים ב-SN של עכבר, תוך שימוש בציוד מיקרוסקופיה סטנדרטי. שיטה זו שימושית להערכת מספר הנוירונים הדופמינרגים ב-substantia nigra של עכבר לצורך מחקר פרה-קליני של מחלת פרקינסון, תוך שימוש בסטריאולוגיה בלתי מוטה מבוססת-עיצוב. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לבצעה עם ציוד מיקרוסקופיה סטנדרטי, ללא צורך במערך סטריאולוגי מלא הזמין מסחרית.את הפרוצדורה תדגים לואיזה פריז, טכנאית מהמעבדה שלי. התחילו בהנחת מוח של עכבר מקובע ב-paraformaldehyde לתוך brain matrix וביצוע חיתוך במרחק של 0.74 millimeters מה-bregma. העבירו את החלק הזנבי של המוח, כולל ה-SN, ל-4%PFA ב-0.1 molar וקבעו למשך לילה בטמפרטורה של 4 °C.ביום למחרת, החליפו את ה-PFA ב-30% sucrose ב-0.1 molar PBS והדגירו למשך יומיים נוספים בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס כדי להגן על הדגימה מהקפאה. לאחר יומיים, כאשר המוח שקע בסוכרוז, מקמו את הרקמה ב-Cryomold מלא ב-optimal cutting temperature compound והקפיאו את הרקמה לאט ב-isopentane מקורר בקרח יבש נוזלי. השתמשו בקריוסטט כדי לחתוך נתחים קפואים בעובי 30 micron באופן סדרתי במישור הקורונלי.סמנו את ההמיספרה הימנית על ידי דקיקת חור קטן באזור העליון של גזע המוח. אספו ארבע סדרות של חתכים, החל מ-2.4

stereological-estimation-dopaminergic-neuron-number-mouse-substantia

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

דופאמין הוא מוסדר בבירור בגרעין המוח התיכון, אשר מכילים תאים הגופות דנדריטים של נוירונים דופאמין. כאן נתאר את הגישה לנתיחה ו מדגם הטיפול על מנת למקסם את התוצאות, ולכן מסקנות ותובנות, על ויסות הדופמין בגרעין המוח התיכון של nigra substantia (SN) ואזור tegmental הגחוני (VTA) במכרסמים.

פרופיל מקיף של הסדרת substantia nigra הדופמין ואזור Tegmental הגחון

סרטון זה מדגים את תהליך כימות הצטברות אלפא-סינוקלאין בנוירונים עובריים של עכברי דופמין שטופלו מראש בסיבי אלפא-סינוקלאין שנוצרו מראש. הוא מתאר את השלבים לתיקון, צביעה וכימות של נוירוני הדופמין המכילים אגרגטים אלפא-סינוקלאין באמצעות immunofluorescence.

חקר הצטברות אלפא-סינוקלאין בתאי עצב דופמין עובריים ראשוניים

מקור: Olesen, M. V.,  et al. טכניקת המפרק האופטי להערכת מספרי תאים במודל חולדה של טיפול בנזעי חשמל. {{}}J. Vis. exp. (2017).  הסרטון מדגים את הטכניקה לכימות נוירונים חדשים שנוצרו ברקמת המוח. פרוסות רקמת ההיפוקמפוס המכילות נוירונים המסומנים בברומודוקסיורידין (BrdU) נצבעו באמצעות אימונוהיסטוכימיה ולאחר מכן כומתו על פני עובי הרקמה באמצעות טכניקת המפרק האופטי.

כימות נוירונים חדשים שנוצרו ברקמת מוח של חולדה באמצעות טכניקת המפרק האופטי

פרוטוקול זה מתאר שתי מניפולציות סביבתיות שונות ופרוטוקול עירוי מוחי במקביל לחקר שינויים מוחיים המושרים על ידי הסביבה העומדים בבסיס התנהגות הסתגלות ותיקון מוח בעכברים בוגרים.

אפנון סביבתי של מספר המוח התיכון דופמין נוירונים בעכברים בוגרים

במחלת פרקינסון (PD), חומר שחור (SNC) נוירונים דופאמינרגיים להתנוון, שמובילים מוטורי. כאן אנו מדווחים פרוטוקול נוירונים culturing מוח תיכון גחון של עכבר להביע eGFP מונע על ידי hydroxylase טירוזין (TH) רצף אמרגן, קצירת נוירונים ניאון פרט מן התרבויות, ומדידת transcriptome שלהם באמצעות-seq RNA.

זיהוי אמין של חיים דופאמין נוירונים תרבויות המוח התיכון באמצעות רצף RNA ו- TH-מונחה האמרגן ביטוי eGFP

כאן, אנו מציגים שיטה סטריאולוגית, fractionator אופטי, המשמש לכימות היווצרות של נוירונים חדשים, ואת ההישרדות שלהם, בהיפוקמפוס חולדה בעקבות גירוי electroconvulsive. כאשר מיושמים כראוי, את הרגישות והיעילות של שיטות stereological מבטיח הערכות מדויקות עם קבוע מראש קבוע מראש.

טכניקת Fractator אופטי להעריך מספרים תאים במודל עכברוש של תרפיה אלקטרו-פולית

זיהוי של דופמין קולטן D1-אלפא גרעין האקומבנס חיוני שהבהרת בתפקוד קולטן D1 בזמן מחלה במערכת העצבים המרכזית. ביצענו את הרומן RNA בחיי עיר הכלאה assay להמחיש מולקולות RNA יחיד באזור ספציפי במוח.

זיהוי של דופמין קולטן D1-אלפא בתוך מכרסמים גרעין האקומבנס על ידי טכנולוגיה חדשנית RNA בחיי עיר זיהוי

כאן, אנו מתארים גישה כמותית לקביעת ההתפלגות של חלבון סינפטית יחסית חלבון סמן באמצעות צביעת immunofluorescence ', ' מיקרוסקופיה קונפוקלית, וניתוח מבוססת מחשב.

לכימות ההתפלגות הטרוגנית של חלבון סינפטיים במוח העכבר בעזרת Immunofluorescence

אורך סיבים עצביים בתוך מבנה תלת מימדי של אזור המוח הוא פרמטר אמין כדי לכמת שלמות מבנית נוירואליות ספציפית או ניוון. מאמר זה מפרט שיטת כימות סטריאוולוגית למדידת אורך סיבים cholinergic בתוך הגרעין של מיינרט בעכברים כדוגמה.

הערכה סטריאוולוגית של אורך סיבים Cholinergic בגרעין באסליס של מיינרט של המוח עכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט כדי ללמוד על הצטברות עצבי-מערכת בהצטברות נוירונים לעכבר הראשי דופמין. מערכת זרחזת-מצרפים לאגרגטים בנוירונים מושרה במבנה טרום-ביצוע. הדמיה אוטומטית של תאים אימונוofluor, וניתוח תמונה משוחדת להפוך את הפרוטוקול הזה חזק מתאים הקרנת תפוקה בינונית עד גבוהה של תרופות המעזות α-הצטברות.

לימוד טרום בנוי Fibril ריל המושרה α-Synuclein הצטברות בעכבר עובריים העיקרי מיילדופאמין דופמין המוח

כאן אנו מציגים שיטה אוטומטית לקביעה כמותית למחצה של מספר נוירון דופאמין בסובסטנציה חולדה nigra pars compacta.

קביעה כמותית למחצה של צפיפות נוירון דופאמין בסבסטנציה ניגרה של מודלים מכרסמים באמצעות ניתוח תמונה אוטומטי

למדו הערכה סטריאולוגית של נוירונים דופמינרגיים בעכברים בחלק הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל. שיטה זו מאפשרת מחקר קדם-קליני במחלת פרקינסון בלי ציוד סטריאולוגי ייעודי.

הערכה stereological של דופאמין נוירון במספר העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד אופטי Fractionator

גלה סרטונים נוספים