שיטה מתוקננת למדידת שטח הפנים של הריאות הפנימיות באמצעות דלקת ריאות של עכבר והשתלת תותב

המטרה הכוללת של הליך זה היא למדוד במדויק את שטח הפנים הפנימי של ריאת עכבר לאחר כריתת ריאות והשתלת תותבת. שיטה זו מסייעת לנתח את התפקודים המורפולוגיים והפיזיולוגיים של הריאה בהתחדשות ריאות בוגרות המושרה על ידי כוח מכני. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא לכמת במדויק את שטח הפנים הפנימי של הריאות, מה שמבטיח להגביר את האמינות ואת יכולת השחזור של מצב תפקודי הריאות.

הכן את העכבר לניתוח על משטח אינטובציה כשצד הגחון שלו נגיש. לאחר מכן משוך את הלשון ובדוק את מיתרי הקול עם לרינגוסקופ של בעלי חיים קטן התואם לצנתרים מנחים. לאחר מכן הכנס בעדינות צינורית אינטובציה תוך ורידית בגודל 20 לקנה הנשימה בזווית פנימית.

לאחר מכן, הכניסו את העכבר למצב שכיבה רוחבי ימני וחברו את הצינורית למאוורר מכני. התבונן בחזה כדי לשפוט את החדרת הצינורית לקנה הנשימה. הגדר את לחץ השאיבה ל -12 סנטימטרים של מים והגדר את קצב הנשימה ל -120 נשימות לדקה.

כעת, נקו את העור החשוף עם לפחות שלושה קרצוף לסירוגין של בטדין ו-70% אתנול. לאחר מכן התחל את הניתוח עם חתך של בית החזה האחורי של שניים עד שלושה סנטימטרים לתוך החלל הבין-צלעי החמישי. חודרים לשרירים באמצעות מספריים קפיציים של נויס.

לאחר מכן, בצע חתך של 1.5 סנטימטר כדי לחשוף את הריאה השמאלית. לפי הצורך לאורך כל הניתוח, השתמש בצריבה בטמפרטורה גבוהה כדי לעצור את הדימום. לאחר מכן, הרם 1/3 מאונת הריאה השמאלית מהחזה בעזרת מלקחיים קהים, והשתמש במקלון צמר גפן כדי לשלוף את כל הריאה השמאלית.

כעת, זהה את עורק הריאה והסמפונות של אונת הריאה השמאלית, וקשר בחוזקה את הסמפונות וכלי הדם בהילום עם תפר כירורגי ספוג. לאחר מכן, חתכו את אונת הריאה השמאלית שלושה עד ארבעה מילימטרים מהקשירה, והקפידו לא לחתוך את התפר, מה שעלול לגרום לפנאומוטורקס. לאחר מכן, סגור את דופן החזה בתפר אחד.

לאחר מכן, תפר את שכבת השריר ואת שכבת העור ברצף, באמצעות חמישה עד שישה תפרים קטועים עם מרווחים של שלושה עד ארבעה מילימטרים. הקפד להרחיק את מחט התפר הניתוחי מהלב. ניקור לב הוא קטלני.

לבסוף, יש לחטא את אזור הניתוח עם פובידון-יוד. לאחר מכן, הנח את העכבר על כרית תרמית של 38 מעלות צלזיוס. המשך להשתמש במכונת ההנשמה עד שהנשימה הספונטנית תחזור.

בצע את הפעולה שתוארה קודם לכן, אך מיד לאחר הסרת הריאה, התכוננו להכניס את התותבת. בעזרת מלקחיים קהים, אחזו במרכז תותבת הסיליקון האליפסואידית. לאחר מכן, תוך כדי החזקת הצלע במלקחיים כדי לחשוף את חלל בית החזה, הכנס בעדינות רבה את התותבת.

היכנסו בזווית של 45 מעלות בין המישור הקדמי של התותבת למשטח בית החזה. בעזרת מלקחיים קהים, ודא שהתותבת נמצאת במלואה בתוך חלל בית החזה הריק השמאלי. כעת, סגור את החזה ופקח על העכבר כפי שתואר קודם לכן.

עבור הליך זה, הרכיבו צינור ניפוח מותאם אישית המורכב מבוכנה שהוסרה מפיפטה סרולוגית של 10 מיליליטר, צינור גמיש באורך 40 ס"מ עם מתאם מחט, שסתום בקרת קצב זרימה ומחט בגודל 18. לאחר ההרכבה, אבטח את הפיפטה למזנון בעזרת סרט. המרחק בין החלק העליון של הפיפטה לספסל חייב להיות לפחות 30 סנטימטרים.

לאחר המתת חסד של העכבר בהזרקת הרדמה, הצמידו אותו ללוח מעוקר ופתחו בזהירות את בית החזה כדי לחתוך את עצם החזה ולחשוף את אונות הריאה. לאחר מכן, חשוף את קנה הנשימה. לאחר מכן, מלאו את צינור הניפוח ב-4% PFA טרי והוציאו את כל הבועות מהצינור.

לאחר מכן, הכנס את המחט לקנה הנשימה. כדי למנוע דליפה, מהדקים את קנה הנשימה עם קליפסים לכלי. כעת, נפחו את הריאה עם קיבוע בלחץ טרנס-ריאתי קבוע של 25 סנטימטרים של מים.

דגרו את הריאות בטמפרטורת החדר למשך שעתיים להתרחבות מלאה. לאחר האינפלציה, שימו לב לתזוזה הנפחית של הקיבוע. כעת, קשרו את קנה הנשימה ונתחו בעדינות את הריאות שלמות מרקמות החיבור שמסביב.

השתמש במספריים והיה עדין מאוד. לאחר מכן, דגרו את הריאות בצינור חרוטי של 50 מיליליטר מלא ב-4% PFA למשך 12 שעות בארבע מעלות צלזיוס עם ניעור עדין על שייקר. לאחר מכן המשך בעיבוד וצביעה כמתואר בפרוטוקול הטקסט.

כדי לכמת את ה-MLI, השתמש בתמונות של החומר המשמש בקטעים שנאספו בשדה בהיר בהגדלה של פי 20. משלושה קטעי ריאות שונים, בחר באופן אקראי בסך הכל 15 תצוגות לא חופפות, כל אחת בערך מילימטר רבוע אחד, ולאחר מכן אוורר אותן. השתמש רק באזורים ללא עורקים וורידים, דרכי נשימה ראשיות או צינורות מכתשית.

לצורך הניתוח, צייר רשת של 10 על 10 על כל אזור שנבחר באמצעות כלי סרגל. קווי הרשת נמצאים אפוא במרחק של כ-100 מיקרון זה מזה. לאחר מכן, כדי למצוא יירוט לאורך הקו כאורך בין שני אפיתל מכתשית סמוכים.

לדוגמה, החצים הדו-ראשיים ממחישים את האורכים. ספרו את כל האורכים הללו לאורך כל קו רשת, וה-MLI הוא הערך הממוצע של אורכי היירוט. באמצעות הפרוטוקולים המתוארים, עכברים שטופלו ב-PNX הושוו לעכברים מושתלים תותבים.

העכברים ששימשו היו זכרים בני שמונה שבועות CD-1, ואונות הריאה השמאליות שלהם נכרתו. התותבת מחקה את הגודל והצורה של אונת הריאה השמאלית והוחדרה לחזה לאחר הסרת אונת הריאה השמאלית. 14 יום לאחר הניתוח, נעשה שימוש בצינור ניפוח מותאם אישית כדי לקבוע את הנפח הפנימי של הריאה הימנית שנותרה.

הנפח הממוצע של הריאה הימנית בחמשת העכברים שטופלו ב-PNX היה כ-1.4 מיליליטר, שהיה גדול משמעותית, 1.05 מיליליטר עבור חמשת העכברים שהושתלו בתותבת. ערכי ה-MLI בריאות הימנית הנותרות היו גבוהים משמעותית גם כן. באמצעות פרמטרים אלה, חושב שטח הפנים הפנימי של הריאה ונמצא קטן משמעותית בעכברים שהושתלו בתותבת.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לחשב את שטח הפנים הפנימי של הריאה עבור מודל עכבר ההתחדשות המכתשית המושרה על ידי כוח מכני.