RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
he_IL
Menu
Menu
Menu
Menu
DOI: 10.3791/56128-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a cost-effective method for inducing mechanical injury to segmental nerves in Drosophila larvae, allowing for visualization and quantification of neurodegeneration at the neuromuscular junction (NMJ). By utilizing this approach, researchers can investigate the cellular events associated with neurodegeneration, providing crucial insights into the underlying mechanisms of neuronal injury.
כאן אנו מתארים שיטה פשוטה ונגישה באופן נרחב לפגוע עצבים סגמנטליים בזחלים תסיסנית לדמיין לכמת neurodegeneration של נוירונים המנוע בצומת neuromuscular (NMJ) של הזחלים instar השלישי.
המטרה הכוללת של הליך זה היא לגרום לפגיעה מכנית של נוירונים מוטוריים בזחלי דרוזופילה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר הנוירודגנרטיבי כגון הרצף הזמני של אירועים תאיים המובילים לניוון עצבי. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא זולה ומשתמשת בציוד שכבר יש ברוב מעבדות הדרוזופילה.
ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על הבנת המנגנונים המולקולריים המניעים ניוון עצבי. כדי להתחיל את הפרוטוקול, בחר 10 זחלי כוכב שני או שלישי מבקבוקון או בקבוק של דרוזופילה המכילים זחלי כוכב שלישי נודדים שגודלו ב-25 מעלות צלזיוס. השתמש במלקחיים כדי לאסוף בזהירות זחלים בודדים באמצעות מלקחיים או מכחול מבלי לדחוס אותם.
הנח ישירות את 10 הזחלים בכלי זכוכית המכיל 1x PBS קר כדי להסיר שאריות מזון ולהאט את תנועתיות הזחלים. זהה את זחלי הכוכב השלישי לפי ספירקולות הענף הקדמיות שלהם ואת זחלי הכוכב השני לפי גודלם הקטן יותר והספירקלים הקדמיים דמויי המועדון. הניחו כל זחל על מכשיר הרדמה CO2.
תחת מיקרוסקופ מנתח, גלגלו בזהירות כל זחל על הצד הגבי שלו כדי לדמיין את העצבים הסגמנטליים לאורך הציפורן. חיוני לגלגל בזהירות כל זחל על הצד הגבי שלו על מנת לדמיין את העצבים הסגמנטליים דרך הציפורן לפני הפציעה. החל מווי הפה, מקם מלקחיים בגודל 5 כחצי עד שני שליש מהדרך לאורך הזחל.
לאחר המיקום, צבט כשליש מהציפורן הגחונית המכילה את העצבים הסגמנטליים בגודל 5. כדי להבטיח שהעצבים הסגמנטליים של הזחל ייפגעו, הפעילו מספיק כוח כדי לרסק את העצבים הסגמנטליים אך השאירו את הקוטיקולה שלמה. כדי לקבוע את כמות הכוח הנכונה, יש לרסק 10 זחלים ולהבטיח ששיעור התמותה לאחר חמש שעות יהיה מתחת ל -50%לאחר הפציעה, העבירו בזהירות את הזחלים לצלחת אגר מיץ פירות המכילה כ -0.5 גרם רסק שמרים.
מניחים כל זחל כך שהקצה הקדמי שלו יהיה על משחת השמרים להמשך האכלה. מניחים צלחות אגר המכילות רסק שמרים ו -10 זחלים פצועים על תחתית צלחת פטרי ריקה בגודל 100 על 15 מילימטר. מכסים את צלחת הפטרי במגבת נייר לחה, ומוודאים שמגבת הנייר לא תיגע בזחלים או בצלחות האגר.
לאחר מכן מניחים את צלחת הפטרי בכלי אטום בטמפרטורת החדר. לבסוף, אחזר זחלים לדיסקציה לאחר תקופות מוגדרות לאחר הפציעה. לפני הפציעה, צמתים עצביים-שריריים מסוג פרא, או NMJs, מראים את סמן האזור הפעיל הפרה-סינפטי Brp במיקום לסמן הפוסט-סינפטי Dlg לאורך כל ה-NMJ.
פגיעה מכנית של עצבים סגמנטליים עלולה לגרום לניוון עצבי בינוני עד חמור שבו בוטונים המוכתמים ב-Dlg חסרים כעת את חלבון האזור הפעיל הפרה-סינפטי Brp. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים החוקרים פגיעה עצבית לחקור את הרצף הטמפורלי של אירועים תאיים המובילים לניוון עצבי בצומת העצבי-שרירי בדרוזופילה.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Related Videos
04:49
Related Videos
2.6K Views
02:57
Related Videos
466 Views
04:04
Related Videos
487 Views
10:49
Related Videos
13.8K Views
11:46
Related Videos
15.9K Views
10:13
Related Videos
20.5K Views
09:55
Related Videos
10.2K Views
08:25
Related Videos
6.6K Views
10:29
Related Videos
8.4K Views
06:10
Related Videos
6.7K Views