Name: מסיסות של תרכובות הידרופוביות בתמיסה המימית באמצעות שילובים של הרכבה עצמית פפטיד ושל חומצות אמינו (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: למד שיטה לשיפור מסיסות תרכובות הידרופוביות בתמיסה מימית באמצעות הרכבה עצמית של פפטידים וחומצות אמינו. הטכניקה מאפשרת שימוש קליני בתרופות הידרופוביות מבלי להשתמש בממסים רעילים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי מוסדות הקנדי למחקר בריאות, הפועלים מעניק מגב-42546 ומגב-119514.

1. הכנה של חומצת אמינו פתרונות <ol><li>הכן ותווית שני 50 מ ל צנטריפוגה חרוט צינורות עבור כל חומצה אמינית (אחד עבור שניהם &#34; נמוכה &#34;, &#34; גבוהה &#34; ריכוזים).</li>
	<li>להכין בקבוקון 2 ל' גדול המכיל מים מטוהרים (18.2 MΩ·cm 25 ° c).</li>
	<li>לחשב את סכום כל חומצה אמינית (בגרמים) כדי להגיע הריכוזים הרצוי, ולשקול את הכמות המתאימה של חומצת אמינו לתוך צינורות צנטריפוגה שלהם בהתאמה 50 מ ל באמצעות מרית. 
	: הערה &#34; גבוהה &#34; ריכוז של השני אניון חומצות אמינו, PBS משמש במקום מים. אנחנו לא יכולים להגדיל ריכוזים שלהם עקב מסיסות נמוכה במים שלהם, באמצעות PBS במקום מים מסייעת לשמור על רמת ה-pH נמוך. יתר על כן, החישובים ריכוז התקבלו באמצעות אמצעי אחסון הסופי של 40 מ עבור כל הפתרונות חומצת אמינו. כל ריכוזי חומצת אמינו מתוארים בטבלה 3. הקפידו לשטוף את המרית בין חומצות אמינו כדי למנוע זיהום. אנו ממליצים לשטוף במים, ואחריו לקנח עם אתנול 70%-</li>
	<li>להוסיף 40 מ"ל של מים מטוהרים (או PBS) לתוך כל שפופרת 50 מ ל באמצעות פיפטה סרולוגית. קאפ צינורות, מערבולת או לנער נמרצות עד התפרקה. Sonication אמבט מים (טמפרטורת החדר, 130 W, 40 קילו-הרץ) יכול לשמש גם כדי לסייע בתהליך מסיסות. 
	הערה: הפתרונות הבאים של חומצת אמינו רגישות לאור, שאמור להיות מכוסה ברדיד אלומיניום: טריפטופן, פנילאלנין, ואת טירוזין (אשר מורכב מבנים דמויי טבעת ארומטית) ציסטאין (תגובתי - SH לקבץ).</li>
</ol> 2. אופן ההכנה של פתרונות SAP-AA <ol><li>להכין 20 מ"ל נצנוץ בקבוקונים להרכבת עצמית פפטידים. עבור פפטיד וההספק עצמי נתון, להכין בקבוקון אחד לכל פתרון מוכן חומצת אמינו (כל שילוב יבוצעו במטבע בקבוקון נפרדות).</li>
	<li>באמצעות איזון האנליטי בעל ביצועים גבוהים (עם הקריאות עד 0.1 מ ג או פחות), שוקל כ 1 ± 0.2 מ ג של פפטיד לתוך החלק התחתון של כל מבחנה. קאפ לאחר שקילה ולהקליט את משקל מדויק פפטיד על הצוואה</li>
	<li>Pipette נפח מתאים של פתרון חומצה אמינית (להכין בסעיף 1) לתוך כל בקבוקון המכיל פפטיד, כדי להגיע לריכוז הרצוי עצמית בהרכבת פפטיד (0.1 mg/mL עבור פפטידים ארוכים באורך של 16 חומצות אמינו, או 0.2 מ"ג/מ"ל עבור פפטידים קצרים באורך של 8 חומצות אמינו).</li>
	<li>Sonicate 10 דקות ב מים באמבטיה sonicator (130 W, 40 קילו-הרץ) בטמפרטורת החדר, המבטיח הפתרונות בתוך המבחנות שקועים לחלוטין באמבט מים.</li>
</ol> 3. הכנה של סמים-דימתיל סולפוקסיד או סמים-אתנול מלאי פתרונות <ol><li>לשלב 1 מ ג של התרופה (במקרה זה, כורכומין עם 100% דימתיל סולפוקסיד) ולאחר עוד 1 מ ג עם 100% אתנול ליצירת שני פתרונות מניות. 
	הערה: הוספנו µL 200 של דימתיל סולפוקסיד ואתנול 400 µL כדי להפוך דימתיל סולפוקסיד-כורכומין אתנול-כורכומין מניות היו 5 מ"ג/מ"ל ו- 2.5 מ"ג/מ"ל, בהתאמה, עקב מסיסות בדרגות שונות של הממס כל; עם זאת, חשוב לציין כי הריכוז של המניה צריך להיות מותאם בהתאם הסם הידרופובי עניין. גורמים כגון סמים מסיסות וריכוז ביולוגי יעיל חשובים בקביעת ערך זה. כמו כן, זכור כי המניה להיות מדולל 100-fold ו 50-fold ניסוחים דימתיל סולפוקסיד אתנול, בהתאמה, בשילוב עם פתרונות SAP-AA (ראה סעיף 4). זה עשוי להיות מועדף להכין נפח גדול יותר של מניות בהתאם למספר ניסוחים נדרש &#8211; במקרה זה, ישמש יותר מ 1 מ ג של התרופה. ניתן לאחסן את המניה ב-20 ° C; הפשרת הקרח ו מערבולת לפני השימוש.</li>
	<li>מערבולת שבקבוקי 15 s כדי נמסים לחלוטין את התרופה.</li>
</ol> 4. הכנת פורמולציות התרופות <ol><li>הכן 1.5 mL ברורה, microcentrifuge צינורות עבור כל ניסוח. הקפד צינורות בתווית עם המלצותיה הרכבה עצמית פפטיד, חומצת אמינו (וריכוז), ואת שיתוף הממס.</li>
	<li>להוסיף 10 µL של סמים-דימתיל סולפוקסיד מלאי או המניה סמים-אתנול µL 20 microcentrifuge המתאים צינורות.</li>
	<li>להוסיף 990 µL של פתרונות SAP-AA חומצה להקציב תוויות צינורות microcentrifuge המכיל סמים-דימתיל סולפוקסיד המניות, 980 µL לאלה המכילים מלאי הסמים-אתנול. זה מייצר 1 מ"ל ניסוחים סמים עם אתנול דימתיל סולפוקסיד או 2%-1%. 
	הערה: הריכוז הסופי של כל כורכומין ניסוחים היה 0.5 מ"ג/מ"ל לפי הפרוטוקול. שוב, זה ישתנה כאשר באמצעות תרכובות הידרופוביות אחרות ו/או מתחיל עם ריכוז מניות שונות (ראה שלב 3.1)</li> <li>מערבולת נמרצות במשך 30 s ולאפשר ניסוחים לנוח 30 דקות</li></ol>
 5. מסיסות בדיקות <ol><li>לאחר תקופת מנוחה, מערבולת נמרצות שוב ל 30 ס</li>
	<li>Centrifuge על ניסוחים ב g x 14,220 עבור מינימלית 1</li>
	<li>לנתח את תחתית הצינורות microcentrifuge עבור משקעים (על-ידי החזותיים).</li>
</ol>

<ol><li>Holmes, T. C., de Lacalle, S., Su, X., Liu, G., Rich, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+neurite+outgrowth+and+active+synapse+formation+on+self-assembling+peptide+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Extensive neurite outgrowth and active synapse formation on self-assembling peptide scaffolds.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97 (12), 6728-6733 (2000).</li>
<li>Davis, M. E., Motion, J. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+self-assembling+peptide+nanofibers+create+intramyocardial+microenvironments+for+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Injectable self-assembling peptide nanofibers create intramyocardial microenvironments for endothelial cells.</a> Circulation. 111 (4), 442-450 (2005).</li>
<li>Matson, J. B., Stupp, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide+scaffolds+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide scaffolds for regenerative medicine.</a> Chem. Commun. 48 (1), 26-33 (2012).</li>
<li>Tatman, P. D., Muhonen, E. G., Wickers, S. T., Gee, A. O., Kim, E., Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptides+for+stem+cell+and+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater.+Sci%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptides for stem cell and tissue engineering.</a> Biomater. Sci. 4 (4), 543-554 (2016).</li>
<li>Keyes-Baig, C., Duhamel, J., Fung, S. -Y., Bezaire, J., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide+as+a+potential+carrier+of+hydrophobic+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide as a potential carrier of hydrophobic compounds.</a> J. Am. Chem. Soc. 126 (24), 7522-7532 (2004).</li>
<li>Kumar, P., Pillay, V., Modi, G., Choonara, Y. E., du Toit, L. C., Naidoo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptides%3A+implications+for+patenting+in+drug+delivery+and+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Pat.+Drug+Deliv.+Formul%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptides: implications for patenting in drug delivery and tissue engineering.</a> Recent Pat. Drug Deliv. Formul. 5 (1), 24-51 (2011).</li>
<li>Wang, H., Yang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-peptide-based+molecular+hydrogels%3A+novel+gelation+strategies+and+applications+for+tissue+engineering+and+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Short-peptide-based molecular hydrogels: novel gelation strategies and applications for tissue engineering and drug delivery.</a> Nanoscale. 4, 5259-5267 (2012).</li>
<li>French, K. M., Somasuntharam, I., Davis, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+delivery+of+therapeutics+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based delivery of therapeutics for myocardial infarction.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 96, 40-53 (2016).</li>
<li>Zhang, S., Holmes, T., Lockshin, C., Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+assembly+of+a+self-complementary+oligopeptide+to+form+a+stable+macroscopic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Spontaneous assembly of a self-complementary oligopeptide to form a stable macroscopic membrane.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90 (8), 3334-3338 (1993).</li>
<li>Bowerman, C. J., Nilsson, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+of+amphipathic+%CE%B2-sheet+peptides%3A+insights+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Self-assembly of amphipathic β-sheet peptides: insights and applications.</a> Biopolymers. 98 (3), 169-184 (2012).</li>
<li>Amidon, G., Lennernäs, H., Shah, V., Crison, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+theoretical+basis+for+a+biopharmaceutic+drug+classification%3A+the+correlation+of+in+vitro+drug+product+dissolution+and+in+vivo+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">A theoretical basis for a biopharmaceutic drug classification: the correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo bioavailability.</a> Pharm. Res. 12 (3), 413-420 (1995).</li>
<li>Shi, Y., Porter, W., Merdan, T., Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+intravenous+delivery+of+poorly+water-soluble+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Recent advances in intravenous delivery of poorly water-soluble compounds.</a> Expert Opin. Drug Deliv. 6 (12), 1261-1282 (2009).</li>
<li>Bawa, R., Fung, S. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+nanoparticles+enhance+cellular+delivery+of+the+hydrophobic+anticancer+drug+ellipticine+through+caveolae-dependent+endocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based nanoparticles enhance cellular delivery of the hydrophobic anticancer drug ellipticine through caveolae-dependent endocytosis.</a> Nanomedicine. 8 (5), 647-654 (2012).</li>
<li>Liu, J., Zhang, L., Yang, Z., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+release+of+paclitaxel+from+a+self-assembling+peptide+hydrogel+formed+in+situ+and+antitumor+study+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Controlled release of paclitaxel from a self-assembling peptide hydrogel formed in situ and antitumor study in vitro.</a> Int. J. Nanomed. 6, 2143-2153 (2011).</li>
<li>Wu, Y., Sadatmousavi, P., Wang, R., Lu, S., Yuan, Y., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+nanoparticles+enhance+anticancer+effect+of+ellipticine+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based nanoparticles enhance anticancer effect of ellipticine in vitro and in vivo.</a> Int. J. Nanomed. 7, 3221-3233 (2012).</li>
<li>Fung, S. Y., Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adfm.200800860/abstract">Self-Assembling Peptide as a Potential Carrier for Hydrophobic Anticancer Drug Ellipticine: Complexation, Release and In Vitro Delivery.</a> Adv. Funct. Mater. 19 (1), 74-83 (2009).</li>
<li>Fung, S. -Y., Oyaizu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+nanoscale+combinations+of+self-assembling+peptides+and+amino+acids+of+the+Src+tyrosine+kinase+inhibitor+in+acute+lung+injury+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The potential of nanoscale combinations of self-assembling peptides and amino acids of the Src tyrosine kinase inhibitor in acute lung injury therapy.</a> Biomaterials. 32 (16), 4000-4008 (2011).</li>
<li>Pacheco, S., Kanou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formulation+of+hydrophobic+therapeutics+with+self-assembling+peptide+and+amino+acid%3A+A+new+platform+for+intravenous+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Formulation of hydrophobic therapeutics with self-assembling peptide and amino acid: A new platform for intravenous drug delivery.</a> J. Control. Release. 239, 211-222 (2016).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

בהליך ניסוח, ישנם שלבים קריטיים ונקודות שונות לשקול בפתרון. ראשית, כפי שאנחנו עובדים עם רכיבים שונים ריכוזים, מרובי שלבים מערבולת לאורך כל הפרוטוקול להבטיח כי כל ריכוזי אחידה ונכונה. חלק מהפתרונות חומצת אמינו הידרופוביות, ריכוז גבוה עשוי עדיין לא להיות התפרקה לחלוטין לאחר vortexing, במקרה זה, הם יכולים להיות מזועזע נמרצות יד כדי לסייע בתהליך. כמו כן, חיוני כי פתרונות SAP-AA עוברים את השלב sonication המתוארים שלב 2.4 כמו אידיוטים באופן טבעי נוטים צבירה ולאחר sonication יסייע מזימות אשכולות SAP, ובעקבותיה פתרון אחיד. שנית,...

אידיוטים הם סוג של biomaterials זה נחקרו בהרחבה ככל פיגומים 3D רפואה רגנרטיבית1,2,3,4. לאחרונה אולם הם נוצלה כמו כלי רכב למסירה של הרפוי עקב שלהם תכונות ביולוגיות ייחודיות5,6,7,8. לטמבלים להרכיב באופן טבעי לתוך nanostructures יציב9, ובכך לספק אמצעי סמים עיטוף והגנה. אידיוטים הם amphipathic, המורכב דפוס מסוים של חומצת אמינו הידרופוביות, הידרופילית חזרה, הנהיגה שלהם הרכבה עצמית9,10 ומאפשר להם לשרת כמדיום בין הידרופובי הידרופילית סביבות. כתוצאה מכך, למסירה קליניים של תרופות הידרופוביות – אשר יש הזמינות הביולוגית נמוכה ביותר וספיגה בגוף עקב חוסר מסיסות סביבות מימית11,12 – לטמבלים מבטיחים כמו משלוח הרכב. יתר על כן, דפוס רצף שלהם מרמז גם כי לטמבלים יכול להיות רציונלי מעוצבים ומתוכננים להגדיל את התאימות עם כל תרופה מסוימת או מורכבים (כלומר, בהתבסס על קבוצות פונקציונליות) ולסייע נוסף מסיסות.
לטמבלים הוחלו כמו רכב משלוח סמים רבים במבחנה ועוד ויוו הגדרות13,14,15,16. הם גם הראו הביו ובטיחות נהדר. עם זאת, בשל osmolarity נמוכה של תכשירים תרופתיים SAP, הם אינם יכולים לשמש עבור זריקות תוך ורידי כמו הגדרות קליניים13. בהתחשב באיפוק זה, פיתחנו לאחרונה אסטרטגיה המשלבת לטמבלים עם חומצת אמינו פתרונות על מנת לצמצם את השימוש ממיסים שיתוף רעילים ולהגדיל את ניסוח osmolarity, ולכן, הרלוונטיות הקלינית. אנחנו בחרה להשתמש חומצות אמינו כפי שהן אבני הבניין של אידיוטים, הן כבר מקובלים מבחינה רפואית, בשילוב עם אידיוטים, הם מגבירים סמים הידרופובי מסיסות תוך הפחתת כמות SAP חובה17,18.
כבר בחנו מקרוב את SAP-AA שילובים כפלטפורמה כללית סמים הידרופובי מסיסות ואספקה הבאים על ידי יצירת צינור רב שלבי סינון, החלתו על החומר המדכא Src, PP2, כמו תרכובת הידרופובי מודל. בתהליך זה, בדקנו את האפקט של שינוי הרכיבים של ניסוח – בסופו של דבר בדיקות 6 לטמבלים שונים, כל 20 חומצות האמינו בריכוזים שונים 2 (נמוך ולא גבוה; נמוך מבוסס על ריכוזים ב קיימים יישומים קליניים, וגבוה ריכוזי היו 2 x, 3 x או 5 x ריכוז קלינית המבוסס על המסיסות המרבי לכל חומצה אמינית במים), 2 ממיסים שיתוף שונים – ואת השילובים שנבחרו solubilized PP2 לצורך ניתוח נוסף. זה ניסוח הסמים הוכיח כיעיל כרכב משלוח סמים תרבית תאים, כמו גם ב- vivo מודלים המשתמשים הממשלים הן intratracheal והן תוך ורידית. כמו כן, העבודה שלנו נגע על צדדיות של SAP-AA צירופי מרובה solubilizing, תרכובות הידרופוביות שונות מבנית בסביבה מימית; באופן ספציפי, תרופות rottlerin, כורכומין18. כתב יד זה מתאר את שיטת ניסוח SAP-AA וניתוח של כורכומין מסיסות כדוגמה הצעד העיקרי בצבר ההקרנה שלנו. פרוטוקול זה מספק דרך פשוטה לשחזור למסך השילובים SAP-AA אופטימלית, אשר להמיס כל המתחם הידרופובי נתון.

<table><tbody><tr><td>EAK16-I</td><td>CanPeptide Inc.</td>רצף <td>פפטידים מותאם אישית</td><td>: AEAKAEAKAEAKAEAK, אצטילציה N-terminus ו-C-terminus amidation, >95% טהור על ידי HPLC</td></tr><tr><td>EAK16-II</td><td>CanPeptide Inc.</td>רצף <td>פפטידים מותאם אישית</td><td>: AEAEAKAEAEAKAK, אצטילציה N-terminus ו-C-terminus amidation, >95% טהור על ידי HPLC</td></tr><tr><td>EAK16-IV</td><td>CanPeptide Inc.</td>רצף <td>פפטידים מותאם אישית</td><td>: AEAEAEAEAKAKAK, אצטילציה N-terminus ו-C-terminus amidation, >95% טהור על ידי HPLC</td></tr><tr><td>EFK8-II</td><td>CanPeptide Inc.</td>רצף <td>פפטידים מותאם אישית</td><td>: FEFEFKFK, אצטילציה N-terminus ו-C-terminus amidation, >95% טהור על ידי HPLC</td></tr><tr><td>A6KE</td><td>CanPeptide Inc.</td>רצף <td>פפטידים מותאם אישית</td><td>: AAAAAAKE, אצטילציה N-terminus ו-C-terminus amidation, >95% טהור על ידי HPLC</td></tr><tr><td>P6KE</td><td>CanPeptide Inc.</td>רצף <td>פפטידים מותאם אישית</td><td>: PPPPPPPKE, אצטילציה N-terminus ואמידציה C-terminus, >95% טהור על ידי HPLC</td></tr><tr><td>Alanine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7469-100G</td><td>L-Alanine</td></tr><tr><td>Isoleucine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I7403-100G</td><td>L-Isoleucine</td></tr><tr><td>Leucine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L8912-100G</td><td>L-Leucine</td></tr><tr><td>Methionine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5308-100G</td><td>L-מתיונין</td></tr><tr><td>פרולין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P5607-100G</td><td>L-פרולין</td></tr><tr><td>ולין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>V0513-100G</td><td>L-ולין</td></tr><tr><td>פנילאלנין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P5482-100G</td><td>L-פנילאלנין</td></tr><tr><td>טריפטופן</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T8941-100G</td><td>L-טריפטופן</td></tr><tr><td>טירוזין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T8566-100G</td><td>L-טירוזין</td></tr><tr><td>גליצין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G8790-100 גרם</td><td>ל-גליצין</td></tr><tr><td>אספרגין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A4159-100 גרם</td><td>ל-אספרגין</td></tr><tr><td>גלוטמין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G8540-100 גרם</td><td>ל-גלוטמין</td></tr><tr><td>סרין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A7219-100G</td><td>ל-סרין</td></tr><tr><td>תראונין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T8441-100 גרם</td><td>ל-תראונין</td></tr><tr><td>היסטידין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H6034-100 גרם</td><td>ל-היסטידין</td></tr><tr><td>ליזין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>L5501-100 גרם</td><td>ל-ליזין</td></tr><tr><td>ארגינין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A8094-100 גרם</td><td>ל-ארגינין</td></tr><tr><td>חומצה אספרטית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A7219-100 גרם</td><td>חומצה אספרטית</td></tr><tr><td>חומצה גלוטמית</td><td>סיגמא-אולדריץ</td>' <td>G8415-100 גרם</td><td>חומצה</td></tr> <tr><td>גלוטמיתציסטאין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C7352-100G</td><td>L-ציסטאין</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D4540-500 מ"ל</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>אתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>277649-100 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>כורכומין</td> נטול מים <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>08511-10MG</td><td>תרופה הידרופובית, כורכומין</td></tr><tr><td>רוטלרין</td><td>EMD Millipore</td><td>557370-10MG</td><td>תרופה הידרופובית, רוטלרין</td></tr><tr><td>PP2</td><td>אנזו&nbsp;</td><td>BML-EI297-0001</td><td>תרופה הידרופובית,</td></tr><tr><td>בקבוקוני נצנוץ</td> PP2 <td>VWR</td><td>2650-66022-081</td><td>זכוכית בורוסיליקט, עם מכסה בורג, 20 מ"ל. בקבוקונים לשקילת פפטיד.</td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה חרוטית Falcon 50 מ"ל</td><td>VWR</td><td>352070</td><td>פוליפרופילן, סטרילי, 50 מ"ל. לתמיסות חומצות אמינו.</td></tr></tbody></table>

מסיסות של תרכובות הידרופוביות בתמיסה המימית באמצעות שילובים של הרכבה עצמית פפטיד ושל חומצות אמינו

Solubility of Hydrophobic Compounds in Aqueous Solution Using Combinations of Self-assembling Peptide and Amino Acid

פפטידים וההספק עצמית (לטמבלים) הם מבטיחים רכב למסירה של הרפוי הידרופובי ליישומים קליניים; תכונותיהם amphipathic מאפשרים להם להתמוסס תרכובות הידרופוביות בסביבה מימית של הגוף האנושי. עם זאת, פתרונות פפטיד וההספק עצמית יש תאימות דם לקויה (למשל, osmolarity נמוך), הפרעה היישום הקליני שלהם באמצעות מינהלות תוך ורידי. לאחרונה פיתחנו פלטפורמה מוכללת עבור משלוח סמים הידרופוביות, המשלב לטמבלים עם חומצת אמינו פתרונות (SAP-AA) כדי לשפר את מסיסות סמים ולהגביר ניסוח osmolarity להשיג את הדרישות עבור שימושים קליניים. אסטרטגיה זו ניסוח נבחנה ביסודיות בהקשר של שלוש תרכובות הידרופוביות שונות מבנית – PP2, rottlerin, ו כורכומין – כדי להדגים צדדיות שלה. יתר על כן, נבחנו ההשפעות של שינוי ניסוח מרכיבים על-ידי ניתוח לטמבלים שונים 6, 20 חומצות אמינו הקיימת באופן טבעי בריכוזים נמוכים וגבוהים, ואת שני ממיסים שיתוף שונים דימתיל סולפוקסיד (דימתיל סולפוקסיד) אתנול. האסטרטגיה שלנו הוכיח כיעיל אופטימיזציה של רכיבים עבור סמים הידרופובי נתון ו פונקציה טיפולית של המדכא ניסח, PP2, נצפתה גם בתוך vitro וגם ויוו. כתב יד זה מתאר שיטת ניסוח מוכללת שלנו באמצעות שילובים SAP-AA עבור תרכובות הידרופוביות, וניתוח של מסיסות כצעד ראשון לקראת להשתמש הפוטנציאל של ניסוחים אלה במחקרים יותר פונקציונלי. אנו כוללים נציג מסיסות תוצאות ניסוח הכורכומין במתחם, הידרופובי, ולדון כמה המתודולוגיה שלנו משמש כפלטפורמה עבור מחקרים ביולוגיים עתידיים ומודלים המחלה.

עבור התרופה הידרופוביות, כורכומין, שהפקנו ניסוחים באמצעות כל 20 באופן טבעי קיימות חומצות אמינו בריכוזים נמוכים, בשילוב עם SAP אחד בלבד, EAK16-II, בתור הוכחה-של-עיקרון. בדקנו גם ניסוחים באמצעות דימתיל סולפוקסיד והן אתנול כמו ממיסים משותף. בסך הכל, זה הפיק 40 ניסוחים כורכומין, שכל אחד מהם מכיל מרכיבים שונים. חשוב לציין כי במחקרים קודמים שלנו באמצעות החומר המדכא Src, PP2, כללנו יותר אפשרויות עבור SAP (סה כ 6) וריכוז חומצת אמינו (קליני, כמו גם ריכוז גבוה יותר), אשר הופק סכום כולל של 480 ניסוח...

פרוטוקול זה מתאר אמצעי ישים קלינית המסת תרכובות הידרופוביות סביבה מימית באמצעות שילובים של הרכבה עצמית פפטיד ופתרונות חומצת אמינו. השיטה שלנו פותר מגבלה עיקרית של הרפוי הידרופוביות, שחסרה אמצעי בטוחה ויעילה, המסיסות ושיטות משלוח לתוך הגדרות קליניים.

Self-assembling peptides (SAPs) are promising vehicles for the delivery of hydrophobic therapeutics for clinical applications; their amphipathic ...

המטרה הכוללת של שיטה זו היא להגביר את המסיסות של תרכובות הידרופוביות בתמיסה מימית לצורך הובלה פוטנציאלית למסגרות קליניות. שיטה זו נותנת מענה למגבלה מרכזית בתחום הרפואה, שהיא חוסר השימוש בתרכובות הידרופוביות במסגרות קליניות עקב מסיסותיהן הדלה במערכות מימיות כגון הדם. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן להמיס תרכובות הידרופוביות בתמיסות מימיות ללא שימוש משמעותי בממסים שיתופים רעילים.ראשית, סמנו שני מבחנות צנטריפוגה קוניות בנפח 50 ליטר עבור כל חומצת אמינו. הכינו בקתה גדולה בנפח שני ליטר המכילה מים מזוקקים. לאחר חישוב הכמות של כל חומצת אמינו עבור הריכוזים הרצויים, שקלו בעזרת שפכטל את הכמויות המתאימות של חומצות האמינו לתוך מבחנות הצנטריפוגה המתאימות.באמצעות פיפט סרולוגית, הוסיפו 40 milliliters של מים מזוקקים לכל מבחנה לצנטריפוגה. לאחר סגירת המבחנות, ערבבו את הדגימות במיקסר וורטקס עד להמסה מלאה. באמצעות מאזניים אנליטיים בעלי ביצועים גבוהים, שקלו כ-1 פלוס או מינוס 0.2 milligrams של פפטיד לתחתיתו של בקבוק סינטינציה בנפח 20 milliliters.רשום את המשקל המדויק של הפפטיד על הפקק והברג את הפקק על המבחנה. לאחר מכן, העבר בפיפטה את הנפח המתאים של תמיסת חומצות האמינו לכל מבחנה כדי להגיע לריכוז הרצוי של הפפטיד המעצב את עצמו. בצע סוניקציה לדגימות למשך 10 דקות במכשיר סוניקציה בתוך אמבט מים בטמפרטורת החדר, תוך הבטחה שהתמיסות במבחנות טבולות לחלוטין באמבט המים. הכן שני תמיסות מלאי של התרופה על ידי ערבוב של מיליגרם אחד של התרופה הרצויה עם הכמות המתאימה של DMSO, ומיליגרם אחד נוסף של התרופה עם אתנול.לאחר מכן, ערבבו את שני התמיסות במערבל Vortex למשך 15 שניות כדי להמיס את התרופה באופן מלא. לאחר מכן, סמנו מבחנות מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר עבור כל פורמולציה עם הפפטיד המרכיב את עצמו, חומצת האמינו והקו-סולבנט. הוסיפו 10 µL של תמיסת המלאי של התרופה ב-DMSO או 20 µL של תמיסת המלאי של התרופה באתנול למבחנות המיקרו-צנטריפוגה המתאימות.בשלב הבא, הוסיפו 990 µL של תמיסות חומצות האמינו של הפפטיד המרכיב את עצמו למבחנות המיקרו-צנטריפוגה המכילות את תמיסת המלאי של התרופה ב-DMSO. הוסיפו 980 µL של תמיסות חומצות האמינו של הפפטיד למבחנות המיקרו-צנטריפוגה המכילות את תמיסת המלאי של התרופה באתנול. ערבלו את כל פורמולציות התרופה במיקסר Vortex בעוצמה למשך 30 שניות.לאחר מכן, כסו בנייר אלומיניום והמתינו 30 דקות לפני בדיקת המסיסות. לאחר 30 דקות, ערבבו את התמיסות ב-vortex בעוצמה למשך 30 שניות. לאחר מכן, סובבו את התמיסות בצנטריפוגה במהירות של 14,220 ×g למשך דקה אחת.לאחר הצנטריפוגציה, בצעו בדיקה ויזואלית של תחתית מבחנות המיקרו-צנטריפוגה כדי לאתר משקעים. מתוך 40 הפורמולציות שנבדקו במחקר זה, שבע הצליחו להמיס את התרופה ההידרופובית, curcumin. שתי מגמות מרכזיות זוהו באמצעות קיבוץ הפורמולציות לפי רכיבים.נראה כי אתנול הוא ממס עזר טוב יותר להמסת 커큐מין, וחומצות אמינו טעונות חיובית, ליזין וארגינין, נראות כמרכיבים אופטימליים להמסת 커큐מין. מעניין לציין את שינוי הצבע בפורמולציות המכילות ארגינין וליזין, המעיד על כך שה커큐מין מומס בתנאים בסיסיים. לאחר שילתקו את הטכניקה, ניתן לבצע אותה תוך שעתיים עד שלוש שעות עם הציוד המתאים ואם תמיסות חומצות האמינו הוכנו מראש.בעקבות הליך זה, ניתן לבחון פורמולציות של תרופות מסיסות באופן נוסף in vitro ו-in vivo, על מנת להעריך ולהשוות באופן ישיר את היעילות הביולוגית או את הבטיחות של התרופה המומסת. לאחר פיתוחה, שיטה זו לפורמולציה סללה את הדרך להחדרה in vivo של מעכב הידרופובי במלאי הנקרא PP@ למניעת פגיעה ריאתית חריפה. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשתמש בשילוב של פפטיד בעל הרכבה עצמית וחומצה אמינו כדי להמיס כל תרופה הידרופובית נתונה.

solubility-hydrophobic-compounds-aqueous-solution-using-combinations

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

Peptoid פשוטה בכלל ידנית סינתזה שיטה מעורבים ציוד בסיסי ריאגנטים זמינים מסחרית הוא התווה, המאפשר peptoids להיות מסונתז בקלות ברוב המעבדות. סינתזה, טיהור ואפיון של 36mer peptoid amphiphilic מתואר, כמו גם הרכבה עצמית שלה לתוך הפערים הורה nanosheets.

מוצק שלב Submonomer סינתזה של פולימרים Peptoid שלהם ואת הרכבה עצמית לתוך מאוד מסודרים Nanosheets

מאמר זה מתאר את היווצרותם של מבנים מבוססי פפטיד הורה מאוד על ידי התהליך הספונטני של הרכבה עצמית. השיטה מנצלת פפטידים זמינים מסחרי וציוד מעבדה משותפת. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת על מגוון רחב של פפטידים ועשויה להוביל לגילוי של מכלולים המבוסס על פפטיד חדשים.

היווצרות של מבני Biomolecular הוזמנו על ידי ההרכבה העצמית של פפטידים קצרים

הסינתזה של חומרים פעילי שטח פפטיד מבוססי פוליאמין (PPAs) הוא אתגר משמעותי בשל נוכחותם של nitrogens אמין מרובים, אשר דורשת שימוש מושכל של הגנה על קבוצות כדי להסוות את תגובתי פונקציות אלה. בנייר זה, אנו מתארים שיטה נתיישב עבור הכנת אלה סוג חדש של מולקולות וההספק עצמית.

פרוטוקול נתיישב לסינתזה של הרכבה עצמית מבוסס פוליאמין פפטיד חומרים פעילי שטח (PPAs), Biomaterials קשורים

פרוטוקול לסינתזה של 1, 2-dithiolane ששינה פפטיד ואפיון המבנים סופרא מולקולרית הנובע פפטיד הרכבה עצמית.

סינתזה ואפיון של 1, 2-Dithiolane ששינה פפטידים וההספק עצמית

פרוטוקול זה מתאר שיטה יעילה לסנתז את nanoemulsion של המספר המשלים acids-platinum(II) האולאית התייצב עם tripeptide ליזין-טירוזין-פנילאלנין (KYF). הצורות nanoemulsion בתנאים סינתטי קלה באמצעות הרכבה עצמית של KYF, לחשב את המשלים שלו.

Nanoemulsion מיוצב Tripeptide של חומצה אולאית

פרוטוקול מוצג לסינתזה של תרופות מקודד מידע ועבור הרכבה עצמית מכוונת של הפטואידים האלה לתוך סולמות מולקולריים באמצעות אמינים ו-aldehydes כזוגות דינמיים בעלי הקשר הדינמי, לואיס חומצי נדיר-אדמה triflates מתכת כריאגנטים רב תפקידים.

סינתזה של מידע-מיסב פטואידים והרכבה עצמית בימוי דינמי

אנו מדווחים על פרוטוקול לייצור קרום שומנים היברידי בממשק המים/אוויר על ידי סימום ביטל השימנים עם נחושת (II) 2,9,16,23-טטרה-אטרה-butyl-29H,31H-phthalocyanine (CuPc) מולקולות. קרום שומנים היברידית וכתוצאה מכך יש מבנה כריך שומנים/CuPc/שומנים. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם גם על היווצרות של ננו-חומרים פונקציונליים אחרים.

הרכבה עצמית של קרום שומנים היברידי מסוממים עם מולקולות אורגניות הידרופוביות בממשק מים/אוויר

מאמר זה מספק פרוטוקולים עבור תכנון והרכבה עצמית של nanostructures מ אוליגומרים חומצת פפטיד שונה גמא תערובות ממיסים אורגניים.

הרכבה עצמית של חומצות פפטידיות פפטיד שעברו שינוי גמא לתוך ננו-מבנים מורכבים בתערובות ממס אורגניות

פרוטוקול זה מציג שלוש שיטות הכנה מהירות ופשוטות המשתמשות בתנאי הסביבה כדי להפעיל הרכבה עצמית של פפטידים להידרוג'לים. בנוסף, מתואר אפיון של הידרוג'לים פפטידיים, המדגים כי הידרוג'לים פפטידים יציבים מכנית יכולים להיווצר בתנאים פשוטים אלה.

הכנת פפטידים הידרוג'לים יציבים מכנית בהרכבה עצמית

קביעת ריקון קיבה עם לא פולשנית...

הערכה של ריקון קיבה בעכברים סוכרתיים ללא שימוש בשמנים [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanoic בדיקת נשימת חומצה

למד שיטה לשיפור מסיסות תרכובות הידרופוביות בתמיסה מימית באמצעות הרכבה עצמית של פפטידים וחומצות אמינו. הטכניקה מאפשרת שימוש קליני בתרופות הידרופוביות מבלי להשתמש בממסים רעילים.

מסיסות של תרכובות הידרופוביות בתמיסה המימית באמצעות שילובים של הרכבה עצמית פפטיד ושל חומצות אמינו

גלה סרטונים נוספים