Name: אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: למד הדמיה אין ויוו עם SD-OCT ואנגיוגרפיית פלואורסצאין לניטור ניאווסקולריזציה כורואידאלית בעכברים. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של התקדמות CNV ורגרסיה שלה לאורך זמן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצה להודות Yuliya Naumchuk (אוניברסיטת לויולה שיקגו), כוכבה משעלי Žiniauskaitė (Experimentica בע מ) עבור תמיכה טכנית, videographic מצוינת. תכנית המחקר של ד ר Kaja נתמך על ידי ד ר ג'ון עמ' תרז אי Mulcahy ניחן כפרופסור במכון עיניים ב אוניברסיטת לויולה שיקגו.

כל החיות טופלו לפי המשפט ארוו עבור שימוש של חיות לרפואת עיניים, ומחקר החזון של EC Directive 86/609/EEC לניסויים בבעלי חיים, באמצעות פרוטוקולים אישרה, בפיקוח של חיות ניסוי לוח של פינלנד.
1. לייזר המושרה העכבר CNV דגם 5
<ol><li>לבדוק את העיניים של החיה בעין בלתי מזוינת על חריגות.</li>
	<li>שוקלים את העכבר.</li>
	<li>לחשב ולהכין כמות מספקת של חומרי הרדמה לשימוש, בהתבסס על המשקל של החיה, למשל תערובת של medetomidine (1 מ"ג/ק"ג), קטמין (75 מ"ג/ק"ג), מים מזוקקים (0.9% NaCl פתרון) ביחס של 1:1.5:2.5, או קטמין (40-75 מ"ג/ק"ג), חריגות השירותים הווטרינריים (5 מ"ג/ק"ג), מים מזוקקים (0.9% NaCl פתרון) ביחס של 1:2. 5:1; עכבר 20 גרם, מזריקים 0.1 מ"ל של תערובת.</li>
	<li>להזריק הרדמה intraperitoneally.</li>
	<li>הנח את העכבר בחזרה לתוך הכלוב. חכה עד חיה. הוא מורדם. לאשר שהעכבר הוא מורדם כראוי על ידי חוסר רפלקס פדלים.</li>
	<li>להבטיח את השימוש בלייזר בטיחות ציוד מגן אישי.</li>
	<li>הפעל מנורה שסע ואת 532 ננומטר דיודת לייזר.</li>
	<li>הסר את העכבר הכלוב ואת המקום על כרית חימום.</li>
	<li>החל טיפה אחת של Tropicamide עבור התרחבות האישון. המתן 3-5 דקות על התרחבות האישון מלא (3 מ"מ).</li>
	<li>הנח את העכבר על הבמה מנורת סדק.</li>
	<li>במקום טיפה אחת של ג'ל נוזלי עיניים על coverslip כדי applanate הקרנית.</li>
	<li>אוריינט את העין העכבר עם ראש עצב הראייה במרכז.</li>
	<li>להגדיר את עוצמת הלייזר עד 100 מגה-וואט, המשך ל-100 מילישניות, והגודל ספוט 50 מיקרומטר.</li>
	<li>מתמקדים קרן הלייזר אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE).</li>
	<li>עושים שלוש יריות לייזר לתוך עין אחת על ידי הימנעות כלי הדם ברשתית ממוקם באופן אידיאלי ב- 4, 8 ו 12 o ' שעון עמדות סביב עצב הראייה, בהתאמה. בדוק את הפונדוס של העין לאחר כל לייזר יריות להיעדרות מדימום ברשתית. העין contralateral משמש פקד ללא lasered.</li>
	<li>למחוק את העכבר coverslip ומקום חזרה על כרית החימום.</li>
	<li>החל טיפה אחת של פג ג'ל טיפות על שתי העיניים.</li>
</ol>2. SD-אוקטובר 6,7
<ol><li>למקם את העכבר הבמה יישור מכרסמים, לשתק את הראש.</li>
	<li>יישר את העדשה של מערכת SD-אוקטובר (למשל, Envisu R2200 Bioptigen/Leica) להתמודד עם העין עבור ויוו הדמיה באמצעות בקרי X ו- Y-שלב.</li>
	<li>לבצע סריקות SD-OCT כדי לוודא הפסקות של הממברנה של ברוך: לאחר ה-SD-OCT סריקות לעין כל, להעביר באופן ידני את קו הפניה באתרים lasered. הפסקות של הממברנה של ברוך צריך להיות בבירור באזורים lasered (ראה איור 1).</li>
</ol>3. fluorescein מסתמים 7,8,9
<ol><li>להסיר את העכבר עם בעל, ומניחים אותו על מערכת ה-FA (למשל, היידלברג Spectralis HRA2).</li>
	<li>ההתמקדות ב לייזר לצרוב תחומי הפונדוס של העין באמצעות מצב השתקפות אינפרא-אדום עם ראש עצב הראייה באמצע החלון הצפייה.</li>
	<li>מזריקים 0.1 מ"ל של 5% fluorescein מלח נתרן עכבר 20 גרם subcutaneously או intraperitoneally.</li>
	<li>מתמקדים רמת חיבור.</li>
	<li>קחו תמונה רמת המיקוד חיבור.</li>
	<li>מחדש להתמקד ברמת הרשתית, לקחת תמונה.</li>
	<li>המתן 30 s וחזור על צעדים 3.4-3.6.</li>
	<li>להסיר את העכבר ממחזיק והנח אותו על משטח חימום.</li>
	<li>הפוך הרדמה על ידי α2-אנטגוניסט עבור medetomidine, atipamezole (0.5 מ"ג/ק"ג, i.p.) או לחכות בעלי חיים ההתאוששות מן ההרדמה.</li>
	<li>חזור ב vivo SD-אוקטובר ו- FA הדמיה בבעלי חיים ומורדמת בימים מעקב 5, 10 ו- 14.</li>
</ol>4. CNV לדירוג
<ol><li>כיתה הנזק של הממברנה של ברוך OCT תמונות ותמונות פא חיבור נלקח מיד לאחר lasering ביום 0 כדלקמן: 0 - הממברנה של ברוך לא נפגע 1 - נזק מוצלח של הממברנה של ברוך</li>
	<li>ציון הנוכחות של CNV מאתרי lasered שהיה זליגת כפי שנצפה על ידי השוואת הדינמיקה של האות fluorescein בסדרה של תמונות פא ברשתית להלן: 0 - מראה נורמלי של הרשתית 0.5 - להתעלף מכתים של דליפה 1.0 - אזורים CNV דולפים הערה: השתמש ההדמיה OCT לאישור נוסף של CNV או בספק פא היכן הנוכחות של נוזל intraretinal בתמונות OCT מציע CNV לדירוג.</li>
</ol>5. מדידות עובי הרשתית
<ol><li>השתמש תוכנה פילוח אוטומטיות עבור מדידות עובי הרשתית. להבטיח כי נחשב את עובי הרשתית הכולל, כמו העובי של כל השכבות משכבת סיבי עצב RPE (מידה בריאה אתרים), או קו דמיוני המחבר RPE סביב האתר של נזק (אתרים lasered) (ראה גם איור 7).</li>
</ol>

<ol><li>Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+experimental+choroidal+neovascularization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol.+Chic.+Ill+1960%22%5BJournal%5D)">A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat.</a> Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).</li>
<li>Tobe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+neovascularization+in+mice+with+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).</li>
<li>Seo, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+inhibition+of+retinal+and+choroidal+neovascularization+by+oral+administration+of+a+kinase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor.</a> Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).</li>
<li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li>
<li>Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+for+Laser-induced+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization.</a> J Vis Exp. (106), e53502(2015).</li>
<li>Giani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).</li>
<li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+an+Image-Guided+Laser-Induced+Choroidal+Neovascularization+Model+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice.</a> PloS One. 10, e0132643(2015).</li>
<li>Sheets, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotectin+D1+attenuates+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse.</a> Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).</li>
<li>Hoerster, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vivo+and+ex-vivo+characterization+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+variability+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol.+Albrecht+Von+Graefes+Arch.+Klin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).</li>
<li>Sulaiman, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Optical+Coherence+Tomography+Quantification+Method+for+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ocul.+Pharmacol.+Ther.+Off.+J.+Assoc.+Ocul.+Pharmacol.+Ther.+Off.+J.+Assoc.+Ocul.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization.</a> J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).</li>
</ol>

המחבר, Symantas Ragauskas, Ph.d. הוא עובד (מדען מחקר) מניות של Experimentica בע מ מציע החוזה שירותי מחקר העסקת המודל CNV פרה להשתמש במאמר זה.
הסופר אווה Kielczewski הוא עובד (מהנדס מחקר יישומי, OCT) של Microsystems לייקה מפיקה מערכות SD-אוקטובר להשתמש במאמר זה.
הסופר ג'וזף ונס הוא עובד (OCT נה מנהל מכירות) של Microsystems לייקה מפיקה מערכות SD-אוקטובר להשתמש במאמר זה. ג'וזף ונס היא גם נשיא, מנכ של Spective, LLC.
הסופר סיימון Kaja, Ph.d. הוא יועץ והמדען הראשי ובעל מניות של Experimentica בע מ, פרה חוזה מחקר ארגון אשר מציע חוזה שירותי מחקר, כולל דגם CNV פרה להשתמש במאמר זה. סיימון Kaja, Ph.d. הוא גם מנכ של K & מדעי P, LLC, מדעי החיים לייעוץ, ומשמש ד ר ג'ון פ ואת תרז אי Mulcahy ניחן פרופסור ברפואת עיניים Stritch הספר לרפואה, אוניברסיטת לויולה שיקגו. תנאי ההסדר הזה יש כבר נבדקו ואושרו על-ידי אוניברסיטת לויולה שיקגו בהתאם למדיניות שלה ניגוד אינטרסים.
המחבר, Giedrius Kalesnykas, Ph.d. הוא עובד (מנכ"ל) מניות של Experimentica בע מ מציע החוזה שירותי מחקר העסקת המודל CNV פרה להשתמש במאמר זה.

הדמיה עם מודאלים מרובים מציע כלי רב ערך עבור הערכה פתולוגיה CNV. כאן הצגנו פרוטוקול הדמיה המורכב של הפא, SD-אוקטובר, פילוח אוטומטית על הערכה מהירה, לשחזור ואמין של הפתולוגיה CNV. הפסקה של הממברנה של ברוך לאחר לייזר הניהול אושר. בנוסף, השימוש SD-אוקטובר בשלב זה מותר גם מיידית החזיית אפשרי שטפי intraretinal ו subretinal, אשר עשויים לבלבל את הפרשנות של תוצאות. דליפות ברשתית דורגו בהתבסס על האות fluorescein מתמונות הפא. השימוש SD-אוקטובר מספק תיאור מפורט יותר של הפתולוגיה CNV. יתר על כן, ניתוח SD-אוקטובר האורך בנקודות זמן שו...

הניסיון המוצלח הראשון לחקות הפתולוגיה של האדם CNV בחולדות הודגם לפני כמעט שלושה עשורים עם לייזר קריפטון לונג-אוונס חולדות1. לאחר מכן, שימש לייזר קריפטון לפרוץ קרום של ברוך המתח העכבר הפופולרי ביותר,3,2,C57BL/6J4. שיעור ההצלחה של אינדוקציה CNV אומתה עם הפא וכתמים היסטולוגית. התפתחות מהירה של שיטות הדמיה לא פולשנית, כגון OCT, תמכה את הצמיחה של השדה של מכרסמים במודלים פרה. היכולת לעקוב אחרי שינויים מורפולוגיים הרשתית בנקודות זמן מרובים בעיניים אותו משמעותית תורם צמצום הניצול של בעלי החיים ומגביר את יעילות במחקרים ניסיוני. הערכה היסטולוגית של נגעים CNV הוא די פשוט, ודורש תיוג צמיחת כלי דם נורמלי סביב האתר של המינהל לייזר, ייבוא תמונות/שטח בנפח הערכה באמצעות תוכנת ניתוח של התמונה. לעומת זאת, אין ויוו שיטות הדמיה להציג ניתוחים מורכבים יותר של פתולוגיה CNV והפרשנות שלה.
כאן אנו מציגים שיטה פשוטה ומהירה יחסית כיתה אינדוקציה, התקדמות של רגרסיה של CNV באמצעות הפא, SD-אוקטובר, ואת שיטת פילוח אוטומטית העכבר לייזר המושרה CNV מודל.

<table><tbody><tr><td>Medetomidine (שם מסחרי Domitor)</td><td>Orion</td><td>Vnr 01 56 02</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>קטמין</td><td>Intervet</td><td>Vnr 51 14 85</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>0,9% NaCl</td><td>B בראון</td><td>357 0340</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>קסילזין (שם מסחרי Rompun vet)</td><td>באייר</td><td>vnr 14 89 99</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>טרופיקמיד</td><td>Santen</td><td>Vnr 04 12 36</td><td>Mydriatic סוכן</td></tr><tr><td>Viscotears</td><td>Alcon</td><td>Vnr 44 54 81</td><td>חומר סיכה</td></tr><tr><td>Systane</td><td>Alcon</td><td>&nbsp;-</td><td>חומר סיכה</td></tr><tr><td>5% פלואורסצאין מלח נתרן</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>F6377-100G</td><td>חומר פלואורסנט</td></tr>, <tr><td>Atipamezole (שם מסחרי אנטיסדאן)</td><td>Orion</td><td>Vnr 47 19 53</td><td>הרדמה</td></tr></tbody></table>

אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

לייזר המושרה neovascularization כורוידאלית (CNV) היא דוגמנית ומבוססת לחקות את צורת רטוב הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD). ב פרוטוקול זה, אנו שואפים מדריך את הקורא לא פשוט על-ידי השיקולים הטכניים של יצירת נגעים לייזר המושרה להנעת תהליכים neovascular, אבל מעדיף להתמקד במידע רב עוצמה ניתן להשיג יחידנית או משולבת האורך אין ויוו הדמיה לאורך כל תקופת המעקב.
עכבר לייזר המושרה CNV המודל נוצר על ידי המינהל לייזר דיודה. עם מודאלים מרובים ויוו טכניקות הדמיה שימשו כדי לפקח CNV אינדוקציה, התקדמות, רגרסיה. ראשית, תחום ספקטרלי טומוגרפיה אופטית קוהרנטית (SD-אוקטובר) בוצע מיד לאחר lasering כדי לוודא הפסקה של הממברנה של ברוך. לאחר מכן ויוו הדמיה באמצעות fluorescein מסתמים (FA) אישר נזק מוצלחת של הממברנה של ברוך מתמונות טורי רכשה באותה רמת חיבור. מעקב האורך של התפשטות CNV ו רגרסיה בימים 5, 10 ו- 14 לאחר lasering בוצעה באמצעות הפא ו- SD-אוקטובר. פשוטה ואמינה לדירוג של דולף leasions CNV מתמונות פא מוצג. פילוח אוטומטיים למדידת עובי הרשתית הכולל, בשילוב עם קליבר ידנית יישום למדידת עובי הרשתית באתרים CNV, לאפשר הערכה לא משוחדת של הנוכחות של בצקת. לבסוף, אימות היסטולוגית של CNV מתבצעת באמצעות isolectin GS-IB4 מכתים על flatmounts חיבור. ההכתמה היא thresholded, אזור isolectin-חיוביות מחושבת עם ImageJ.
פרוטוקול זה שימושי במיוחד לימודי הרפוי הדורשים דמויי תפוקה גבוהה הקרנת CNV פתולוגיה, שכן היא מאפשרת מהר, עם מודאלים מרובים, סיווג אמין של בצקת רשתית לפתולוגיה CNV. בנוסף, רזולוציה גבוהה SD-OCT מאפשר ההקלטה של המחפשים פתולוגיים אחרים, כגון הצטברות נוזלים subretinal או intraretinal. עם זאת, שיטה זו אינה מספקת אפשרות להפיכת ניתוח אמצעי האחסון CNV מתמונות SD-אוקטובר, אשר חייב להתבצע באופן ידני.

בועה או subretinal דימום מיד לאחר lasering אינו תמיד גלוי. לכן, SD-אוקטובר חשוב במיוחד לוודא נזק של הממברנה של ברוך. איור 1 מראה דוגמה של OCT הדמיה בנקודות זמן שונות לאחר לייזר המינהל.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig1.jpg"> איור 1 : OCT en הפנים תצוגה של העין הפונדוס (VIP תמונה) מציגה שלושה אזורים lasered המתוארים במע...

כאן, אנו מציגים את התועלת של האורך ויוו הדמיה מעקב אחר שינויים מורפולוגיים של לייזר המושרה neovascularization כורוידאלית בעכברים.

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

תהליכי נאווסקולריזציה (יצירת כלי דם חדשים) הם מאפיין בולט של מספר פתולוגיות עיניות נפוצות. הבולטות שבהן הן ניוון רשתית רב-גילאי עם נזילה (exudative age-related macular degeneration), או בקיצור Wet AMD, רטינופתיה סוכרת פרוליפרטיבית, ורטינופתיה של פגים. יחד, הפרעות אלו מהוות את מרבית מקרי העיוורון המשפטי ברחבי העולם והן קשורות לסיבוכים עיניים נוספים, כגון דימום בוויטריאוס (זגוגית העין) וגלאוקומה נאווסקולרית.עם זאת, למרות שכיחותם, האפשרויות הטיפוליות להפרעות ניאובסקולריות (צמיחת כלי דם חדשים) בעינית הן מוגבלות. הטיפול הסטנדרטי הנוכחי עבור ניאובסקולריזציה הקשורה ל-AMD ולרטינופתיה סוכרתית פרוליפרטיבית הוא הזרקה לוויטריאום של נוגדנים אנושיים המופנים נגד מתווך קריטי של אנגיוגנזה וניאובסקולריזציה, הגורם לצמיחת כלי דם אנדותליים, VEGF. עם זאת, למרות היעילות בעצירת התקדמות המחלה ובשיפור הראייה התפקודית, הזרקות לוויטריאום הן יקרות ואינן חסרות סיכונים.סיבוכים עשויים לכלול זיהומים, אנדופתלמיטיס (endophthalmitis), היפרדות רשתית ודימום עיני. לכן, קיים צורך דחוף בפיתוח אפשרויות טיפול חדשניות שהן יעילות, בטוחות ופחות יקרות. על מנת לקדם את פיתוח התרופות להפרעות ניאובסקולריות (neovascular disorders), למודלים של בעלי חיים קטנים יש חשיבות קריטית.מודלים כאלה צריכים להיות ניתנים לשחזור, בעלי מדדים ותוצאות סופיות מבוססים ומתוקפים, ובאופן אידיאלי להשתמש בתרכובת ייחוס רלוונטית מבחינה קלינית שתשמש כביקורת חיובית. בפרוטוקול זה, נציג את מודל הנאובסקולריזציה הכורואידית בעכבר, או מודל CNV, שהוא אחד המודלים הנפוצים ביותר הן לחקר המנגנונים הפתופיזיולוגיים התורמים ל-CNV והן לפיתוח סוכני אנטי-נאובסקולריזציה חדשניים. במודל CNV, קרוע ממברנת ברוך (Bruch's membrane) באמצעות לייזר ארגון.בכך יופעלו תהליכי נאו-וסקולריזציה (יצירת כלי דם חדשים) שמקורם בכורואיד. שימוש בדימוי לאורך זמן in vivo באמצעות טומוגרפיה קואורנטיבית אופטית בתחום הספקטרלי, או SD-OCT בקיצור, ובפלואורסצאין-אנגיוגרפיה, מספק אמצעי למעקב אחר השגשוג והנסיגה של CNV. ובכך, להערכת היעילות ומהלך הזמן של התערבויות פרמצבטיות חדשניות.התקדמויות אחרונות בעיבוד תמונות מאפשרות בנוסף סגמנטציה אוטומטית למדידת עובי הרשתית, ובכך מספקות מתודולוגיה חופשייה מהטיית החוקר להערכת נוכחות של בצקת. במסגרת זו, נדון בתועלת של התוכנה החדשה InVivoVue Diver מבית Leica Microsystems לסגמנטציה אוטומטית של שכבות הרשתית במודל CNV בעכברים. לבסוף, נדון באופן שבו ניתוח היסטולוגי של דגימות רשתית שלמות (whole mounts) יכול להשלים דימות longitudinal in vivo במודל זה.טיפה אחת של tropicamide מוחלת על כל עין לצורך הרחבת האישונים. לאחר מכן, בעל החיים מונח בעדינות בבמה ליישור מכרסמים (rodent alignment stage). העכבר מכוון כך שהעין תהיה חשופה ומאובטח באמצעות מחזיק אף ופיסת סרט הדבקה למעבדה המוצמדת בעדינות לגב.בשלב הבא, טיפה של חומר סיכוך נמרחת על העין כדי להלחיות אותה, וכל עודף נוזל מוסר בזהירות באמצעות מקלוני נייר סינון. לבסוף, הבמה מיושרת לפני מכשיר ה-OCT לצורך דימות OCT בסיסי. דימות optical coherence tomography במישור ספקטרלי in vivo מבוצע בנקודת הבסיס, לפני יישום הלייזר, כדי לוודא היעדר חריגות רטינליות.הוצא בעדינות את העכבר מהמחזיק. הנח טיפה אחת של Viscotears Gel על זכוכית כיסוי כדי לבצע אפלנציה (השטחה) של הקרנית. כוון את העכבר כך שראש העצב האופטי יהיה במרכז, ומקד את קרן הלייזר על האפיתל של הרשתית (retinal pigment epithelium).בצעו שלושה פולסי לייזר תוך הימנעות מכלי דם רטינליים במיקומים של השעה ארבע, שמונה ו-12 סביב העצב האופטי. בדקו את מוצקות העין לאחר כל פולסי הלייזר כדי לוודא שאין דימום רטינלי. כפי שנעשה קודם לכן, יישרו את העכבר במחזיק ובצעו פלואורסצאין-אנגיוגרפיה והדמיית OCT כדי לאשש את הנזק לממברנת ברוך (Bruch's membrane).עבור אנגיוגרפיה של פלואורסצאין, התמקד תחילה באזורי כוויות הלייזר באמצעות מצב השתקפות באינפרא-אדום, המאפשר לדייק את מיקומי מתן הלייזר. הזרק בזהירות 0.1 milliliters של 5% fluorescein sodium salt, עבור כ-20 grams של משקל גוף של עכבר, מבלי לשנות את מיקום עינו של העכבר. התחל בצילום תמונות אנגיוגרפיה של פלואורסצאין בגובה הכורואיד ובגובה הרשתית, בערך כל 30 seconds.יישרו את העין לצילום OCT כפי שבוצע קודם לכן והתחילו בצילום. מיצוע של אות ה-SD-OCT מסייע להדמיה טובה יותר של מורפולוגיית הרשתית המפורטת, כפי שמוצג ברצף זה. ברגע שהצילום ב-SD-OCT הושלם, הוציאו בזהירות את העכבר מהמחזיק.מרחו חומר סיכוך לשתי העיניים. בשלב זה, ניתן לבחור להפסיק את ההרדמה באמצעות הזרקה תת-עורית של האטיפמזול (atipamezole), אנטגוניסט alpha-2 למדטומדין, או להמתין להתעוררות בעל החיים מההרדמה. חזרו על בדיקות ה-SD-OCT וה-FA in vivo בבעלי חיים מורדמים בימי המעקב החמישי, העשירי והארבע-עשרי.השתמשו בתכונת הסגמנטציה האוטומטית של תוכנת ה-InVivoVue Diver למדידות עובי הרשתית. עבור רשתית בריאה, עובי הרשתית הכולל נחשב כעובי כל השכבות, משכבת סיבי העצב ועד ל-RPE. ברשתית בריאה, סגמנטציה אוטומטית יכולה לזהות במדויק שכבות רשתית בודדות, כפי שניתן לראות בדוגמה זו.ראוי לציין כי במקומות שבהם קיימת CNV, יש לבצע מדידה ידנית של עובי הרשתית עבור כל אתר נגעי CNV בנפרד, משכבת סיבי העצב ועד לקו דמיוני העובר דרך שכבת ה-RPE. רצף זה מציג את תהליך העבודה למדידות עובי ידניות באתרים שבהם קיימים נגעי CNV.שכבת סיבי העצב ממוקמת בחלק העליון, והכורואיד בחלק התחתון של התמונה. באמצעות העכבר או משטח המגע, נקבעים ידנית הגבולות של שכבת סיבי העצב והכורואיד, והתוכנה מחשבת באופן אוטומטי את עובי הרשתית הכולל בהתבסס על קואורדינטות אלו. איור זה מציג תמונות סדרתיות שצולמו מדי 20 שניות ברמת הכורואיד.תמונה אחת נרכשה במצב השתקפות באינפרא-אדום. השאר נרכשו לאחר הזרקה תוך-peritoneal של fluorescein. חצים לבנים בתמונה אחת מצביעים על אתרים שעברו לייזר, אשר מראים דליפה של fluorescein בנקודות זמן מאוחרות יותר, כפי שסומן בחצים הלבנים בתמונה 18.תמונה זו מציגה דימויים סדרתיים של FA שנקלטו ברמת הרשתית. החץ הלבן בתמונה 18 מצביע על אתר שעבר לייזר, אשר מראה דליפה של פלואורסצאין המופיעה מהר יותר משני האתרים האחרים, המסומנים במעגלים בתמונה 18. איור סיכום זה מציג מהלך זמן של תמונות SD-OCT.בנקודת הבסיס, מיד לאחר הטיפול בלייזר, ובנקודות הזמן למעקב ביום החמישי, העשירי והרביעי עשר. לסיכום, הפרוטוקול לדימוי in vivo אורכי של נגעי CNV באמצעות SD-OCT ודימוי FA מאפשר סיווג מהיר, מולטי-מודאלי ואמין של פתולוגיית CNV ושל נוכחות בצקת רשתית. תודה על התעניינותכם.

in-vivo-multimodal-imaging-analysis-mouse-laser-induced-choroidal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מאמר זה מתאר רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal של שתלי הסלולר מכרסם במוח באמצעות: (i) ביולומינציה vivo ו הדמיה באמצעות תהודה מגנטית, ו (ב) הודעה מורטם ניתוח היסטולוגית. השילוב בין שיטות הדמיה על חיה אחת מאפשר הערכה שתל נייד עם רגישות גבוהה רזולוציה, וספציפיות.

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

מקור: בוסקו, א., .  In vivo דינמיקה של הפעלת מיקרוגליה ברשתית במהלך ניוון עצבי: הדמיה אופטלמוסקופית קונפוקלית ומורפומטריית תאים בגלאוקומה של עכברים. J. Vis. Exp. (2015)} סרטון זה מדגים הדמיה in vivo של מיקרוגליה ברשתית במודל עכבר של גלאוקומה. עכבר טרנסגני עם מיקרוגליה ברשתית המבטאת חלבון פלואורסצנטי ממוקם מתחת לאופטלמוסקופ. תאורת אינפרא אדום משמשת לאיתור ראש עצב הראייה (ONH), ומישור המוקד נוצר באמצעות כלי דם ברשתית כציוני דרך. לאחר מכן משתמשים בהדמיה פלואורסצנטית כדי להמחיש את המיקרוגליה...

הדמיה in vivo של מיקרוגליה ברשתית במודל עכבר של גלאוקומה

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול הניאו-וסקולריזציה הכורואידלית (CNV) המושרה על ידי לייזר עכבר, מודל ניסיוני המשחזר את סימני ההיכר של כלי הדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל ניאו-וסקולרי (AMD). לאחר שליטה, הוא יכול לגרום באופן אמין ויעיל ל-CNV כמערכת מודל לבדיקת אמצעים ניסיוניים שונים.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

פרוטוקול זה מתאר איך ברזולוציה גבוהה טכניקות הדמיה כגון טומוגרפיה אופטית קוהרנטית בתחום ספקטרלי, סריקת לייזר ophthalmoscopy יכול להיות מנוצל מכרסמים קטנים, באמצעות מערכת פלטפורמה אופטלמולוגיות הדמיה, כדי לקבל מידע על עובי רשתית, microglial תא הפצה, בהתאמה.

אין ויוו הדמיה של עכברים כתב Cx3cr1gfp/gfp עם תחומים הספקטרום טומוגרפיה אופטית קוהרנטית, סריקת לייזר Ophthalmoscopy

מוצג כאן היא פלטפורמה מיקרוסקופית multiphoton עבור הדמיית פני השטח עינית עכבר חי. עכבר טרנסגני פלורסנט מאפשר הדמיה של גרעין התא, קרום התא, סיבי עצב ונימים בתוך פני השטח עינית. אותות לא ליניאריים של הדור ההרמוני השני הנגזרים ממבנים קולגניים מספקים הדמיה ללא תוויות עבור ארכיטקטורות סטרומה.

פלטפורמת מיקרוסקופי מרובה-פוטונים מותאמת אישית להדמיה חיה של קרנית עכבר ולחמית

הדמיית in vivo היא כלי רב עוצמה לחקר הביולוגיה בבריאות ובמחלות. פרוטוקול זה מתאר הדמיה טרנס-אימונית של רשתית העכבר באמצעות מיקרוסקופ סטנדרטי של שני פוטונים. הוא גם מדגים שיטות שונות של הדמיה חיה כדי לתייג פלואורסצנטיות קבוצות תאים מרובות של הרשתית.

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

כאן, אנו מתארים פרוטוקול אופטימלי לחסימת ורידים ברשתית באמצעות ורד בנגלי ומערכת מיקרוסקופ הדמיית רשתית מונחה לייזר עם המלצות למקסם את יכולת השחזור שלה בזנים מהונדסים גנטית.

אופטימיזציה של מודל העכבר לחסימת ורידים ברשתית כדי להגביל את השונות

כאן אנו מתארים טכניקת הדמיה in vivo באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית כדי להקל על האבחון והמדידה הכמותית של רטינופתיה בעכברים.

יישום טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית למודל עכבר של רטינופתיה

כאן אנו מציגים שלושה פרוטוקולי ניתוח נתונים עבור אנגיוגרפיה פלואורסצנטית (FA) וטומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית (OCT) במחקר של חסימת ורידים ברשתית (RVO).

In vivo קריאות פגיעה בכלי דם ברשתית העכבר כדי לקדם את יכולת השחזור

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את ההשתלה וההערכה של מלנומה בכורואיד מורין תוך שימוש בטומוגרפיה קוהרנטית אופטית.

השתלה והערכה של מלנומה בכורואיד מורין באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

למד הדמיה אין ויוו עם SD-OCT ואנגיוגרפיית פלואורסצאין לניטור ניאווסקולריזציה כורואידאלית בעכברים. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של התקדמות CNV ורגרסיה שלה לאורך זמן.

אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

גלה סרטונים נוספים