אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

כאן, אנו מציגים את התועלת של האורך ויוו הדמיה מעקב אחר שינויים מורפולוגיים של לייזר המושרה neovascularization כורוידאלית בעכברים.

תהליכים ניאו-וסקולריים הם מאפיין אופייני למספר פתולוגיות עיניים נפוצות. הבולט ביותר, ניוון מקולרי אקסודטיבי הקשור לגיל או AMD רטוב לרטינופתיה סוכרתית קצרה, פרוליפרטיבית ורטינופתיה של פגות. יחד, הפרעות אלו מהוות את רוב המקרים של עיוורון חוקי ברחבי העולם וקשורות לסיבוכים עיניים נוספים, כגון דימום בזגוגית וגלאוקומה ניאו-וסקולרית.

עם זאת, למרות שכיחותם, האפשרויות הטיפוליות להפרעות ניאו-וסקולריות בעיניים מוגבלות. סטנדרט הטיפול הנוכחי בניאו-וסקולריזציה הקשור ל-AMD ורטינופתיה סוכרתית פרוליפרטיבית הוא הזרקה תוך-זגוגית של נוגדנים אנושיים המכוונים כנגד מתווך קריטי של אנגיוגנזה וניאו-וסקולריזציה, גורם גדילה אנדותל כלי דם או VEGF. עם זאת, למרות היעילות בעצירת התקדמות המחלה ושיפור הראייה התפקודית, זריקות תוך זגוגיות הן יקרות ורחוקות מלהיות נטולות סיכון.

סיבוכים יכולים לכלול זיהומים, אנדופתלמיטיס, היפרדות רשתית ודימום בעיניים. לכן, יש צורך דחוף בפיתוח אפשרויות טיפול חדשניות שהן יעילות, בטוחות ופחות יקרות. על מנת לקדם פיתוח תרופות להפרעות ניאו-וסקולריות, מודלים של בעלי חיים קטנים הם בעלי חשיבות קריטית.

מודלים כאלה צריכים להיות ניתנים לשחזור, לבסס ולאמת קריאות ונקודות קצה, ובאופן אידיאלי להשתמש בתרכובת ייחוס רלוונטית מבחינה קלינית כדי לשמש כבקרה חיובית. בפרוטוקול זה, נציג את הניאו-וסקולריזציה הכורואידית של העכבר, או מודל CNV, שהוא אחד המודלים הנפוצים ביותר הן לחקר מנגנונים פתופיזיולוגיים התורמים ל-CNV והן לפיתוח חומרים אנטי-ווסקולריים חדשים. במודל ה-CNV, הממברנה של ברוך נקרעת באמצעות לייזר ארגון.

ובכך מתחילים תהליכים ניאו-וסקולריים שמקורם בכורואיד. שימוש בהדמיה אורכית in vivo על ידי טומוגרפיה קוהרנטית אופטית בתחום ספקטרלי, או בקיצור SD-OCT, ואנגיוגרפיה פלואורסצאין, מספקת אמצעי לעקוב אחר ההתפשטות והרגרסיה של CNV. וכך, להעריך את היעילות ואת מהלך הזמן של התערבויות תרופתיות חדשות.

ההתקדמות האחרונה בעיבוד תמונה מאפשרת בנוסף את הפילוח האוטומטי למדידת עובי הרשתית, ומספקת מתודולוגיה נטולת הטיית חוקר להערכת נוכחות בצקת. כאן, נדון בשימושיות של תוכנת InVivoVue Diver החדשה של Leica Microsystems לפילוח אוטומטי של שכבות רשתית במודל CNV של העכבר. לבסוף, נדון כיצד הניתוח ההיסטולוגי של תושבות שלמות ברשתית יכול להשלים הדמיה אורכית in vivo במודל זה.

טיפה אחת של טרופיקמיד נמרחת על כל עין להרחבת האישונים. לאחר מכן, החיה מונחת בעדינות לשלב יישור המכרסמים. העכבר מותאם לחשיפת העין ומאובטח באמצעות מחזיק האף ופיסת סרט מעבדה המונחת בעדינות על הגב.

לאחר מכן, מורחים טיפת חומר סיכה על העין כדי להעניק לחות, וכל נוזל עודף מוסר בזהירות באמצעות ספוגיות נייר פילטר. לבסוף, ה-stage מיושר מול מכשיר ה-OCT להדמיית OCT בסיסית. הדמיית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית בתחום הספקטרלי In vivo מבוצעת בנקודת ההתחלה, לפני יישום הלייזר, על מנת לוודא היעדר חריגות ברשתית.

הסר בעדינות את העכבר מהמחזיק. יש להניח טיפה אחת של ג'ל ויסקוטירס על גבי כיסוי כדי לחזק את הקרנית. כוון את העכבר עם ראש עצב הראייה במרכז, ומקד את קרן הלייזר על אפיתל פיגמנט הרשתית.

בצע שלוש זריקות לייזר על ידי הימנעות מכלי דם ברשתית במיקומים של ארבע, שמונה ו-12 סביב עצב הראייה. בדוק את מוצקות העין לאחר כל זריקות הלייזר בהיעדר דימום ברשתית. כמו קודם, יישר את העכבר במחזיק ובצע אנגיוגרפיה פלואורסצאין והדמיית OCT כדי לאשר נזק לקרום של ברוך.

עבור אנגיוגרפיה פלואורסצאין, התמקדות ראשונה באזורי כוויות לייזר באמצעות מצב החזרת אינפרא אדום, המאפשר לדמיין את האתרים שניתן לייזר. הזרקו בזהירות 0.1 מיליליטר של מלח נתרן פלואורסצאין 5%, עבור כ-20 גרם ממשקל גוף העכבר מבלי לשנות את תנוחת עין העכבר. התחל לצלם תמונות אנגיוגרפיה פלואורסצאין ברמת הכורואיד וברמת הרשתית, בערך כל 30 שניות.

יישר את העין להדמיית OCT כמו קודם והתחל לצלם. חישוב ממוצע של אות SD-OCT עוזר לדמיין טוב יותר את מורפולוגיה הרשתית המפורטת, כפי שמוצג ברצף זה. לאחר ביצוע הדמיית SD-OCT, הסר בזהירות את העכבר מהמחזיק.

יש למרוח חומר סיכה על שתי העיניים. בשלב זה, אתה יכול לבחור להפוך את ההרדמה על ידי הזרקה תת עורית של אנטגוניסט אלפא-2 למדטומידין, אטיפמזול, או להמתין להתאוששות בעל החיים מההרדמה. חזור על הדמיית SD-OCT ו-FA in vivo בבעלי חיים מורדמים בימי המעקב 5, 10 ו-14.

השתמש בתכונת הפילוח האוטומטי של תוכנת InVivoVue Diver למדידות עובי הרשתית. עבור הרשתית הבריאה, עובי הרשתית הכולל נחשב לעובי של כל השכבות, משכבת סיבי העצב ועד ל-RPE. ברשתית הבריאה, פילוח אוטומטי יכול לזהות במדויק שכבות רשתית בודדות, כפי שניתן לראות בדוגמה זו.

ראוי להזכיר, כי במקומות בהם קיים CNV, יש לבצע מדידה ידנית של עובי הרשתית עבור כל אתר נגע CNV בנפרד. משכבת סיבי העצב לקו דמיוני העובר בשכבת ה-RPE. רצף זה מציג את זרימת העבודה למדידות עובי ידניות באתרים שבהם קיימים נגעי CNV.

שכבת סיבי העצב ממוקמת בחלק העליון, הכורואיד בתחתית התמונה. באמצעות העכבר או משטח המגע, גבולות שכבת סיבי העצב והכורואיד נקבעים באופן ידני, והתוכנה מחשבת אוטומטית את עובי הרשתית הכולל על סמך קואורדינטות אלו. איור זה מציג תמונות סדרתיות שצולמו כל 20 שניות ברמת הכורואיד.

תמונה ראשונה נרכשה במצב השתקפות אינפרא אדום. ואילו האחרים, לאחר הזרקת פלואורסצאין תוך צפקית. חיצים לבנים בתמונה מצביעים על אתרים בלייזר, המראים דליפת פלואורסצאין בנקודות זמן מאוחרות יותר, המודגשות על ידי החצים הלבנים בתמונה 18.

תמונה זו מציגה הדמיה טורית FA שנרכשה ברמת הרשתית. החץ הלבן בתמונה 18 מצביע על אתר לייזר, המראה דליפת פלואורסצאין המופיעה מהר יותר מהשניים האחרים, המתוארים בעיגולים בתמונה 18. איור סיכום זה מציג מהלך זמן של תמונות SD-OCT.

בנקודת ההתחלה, מיד לאחר הלייזר, ונקודות זמן המעקב בימים 5, 10 ו-14. לסיכום, הפרוטוקול להדמיה אורכית in vivo של נגעי CNV באמצעות הדמיית SD-OCT ו-FA מאפשר סיווג מהיר, רב-מודאלי ואמין של פתולוגיה של CNV ונוכחות של בצקת רשתית. תודה על התעניינותך.