הכישלון של ניקוי אימות בתעשיית התרופות בשל חוסר ניקיון משטח נירוסטה

המטרה הכוללת של עבודה זו היא להשיג התאוששות גבוהה וניתנת לשחזור של שאריות תרופות מפני השטח של קופונים מנירוסטה על ידי יישום שיטות העבודה המומלצות לפיתוח שיטות ניקוי אנליטיות עבור מולקולות קטנות, חלבונים טיפוליים ונוגדנים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום אימות הניקיון בתעשיית התרופות, כגון מדוע אימות ניקוי של ציוד ייצור נכשל. היתרון העיקרי של מחקר זה הוא בכך שהוא מציג את ההליך לניקוי נכון של פני השטח של קופוני הנירוסטה המשמשים לאימות שיטה אנליטית.

כדי להתחיל בניסוי זה, הכינו תמיסות לדוגמה של התרופה המומסת בדילול הבחירה לאחר חישוב מגבלת הניקוי לתרופה. נקו את קופוני הנירוסטה על ידי שטיפה במים וניגוב המשטח פעמיים למשך 10 עד 15 שניות. לאחר מכן, חזור על שלב השטיפה והניגוב הזה עם מתנול כדי לחסל כל משקע שנותר.

כדי לבצע את גישת הניקוי המתקדמת באמצעות פתרונות נקיים במקום, טבלו את הקופונים בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים או במים וסוניקט בדרגת HPLC למשך שתי דקות. טבלו את הקופונים בתמיסת ניקוי אלקליין של 0.1% במים בדרגת HPLC וסוניקט למשך שתי דקות. טבלו שוב את הקופונים במי HPLC וחזרו על סוניקציה של שתי דקות.

לאחר מכן, טבלו אותם בתמיסת ניקוי חומצה של 0.1% במי HPLC וסוניקציה למשך שתי דקות. סיים עם סוניקציה של שתי דקות במי HPLC. לאחר מכן, בעזרת סרט דו צדדי, הרכיבו את קופוני הנירוסטה בתחתית פלסטיק של 250 מיליליטר.

החזק את הכוס במהלך ההליך כדי להקל על הזינוק והדגימה וכדי למנוע תאונות. השתמש בפיפטה תזוזה חיובית כדי להחדיר נפח תרופה מוגדר, בריכוז ובניסוח הרצויים, בתבנית מערבולת על משטח הקופון. לאחר שמשטח הקופון יבש, טבלו ספוגית יבשה בבקבוקון עם שני מיליליטר מדלל.

לחץ את הספוגית על החלק הפנימי של הבקבוקון כדי להסיר עודפי ממס. השתמש במשיכות אחידות וחופפות מצד לצד כדי לנגב היטב את משטח הקופון עם צד אחד של הספוגית הרטובה, עד למחיקת שטח הבדיקה הכולל של 50 סנטימטרים רבועים. השתמש באותו צד של הספוגית כדי לחזור על תהליך הניגוב.

ספוגי כל אחד מארבעת הקצוות של הקופון פעמיים. סובב את הקופון ב-90 מעלות והשתמש בצד השני של הספוגית, וכעת סובב את כיוון הניגוב ב-90 מעלות. חזור על הניקוי באמצעות צד זה של הספוגית באותו אופן, הקפד לנגב את כל ארבעת קצוות הקופון פעמיים.

לאחר ניגוב פני השטח, השתמש במספריים כדי לחתוך את ראש הספוגית לתוך בקבוקון הממס. לאחר מכן, חזור על כל הליך הדגימה באמצעות ספוגית שנייה, תוך סיבוב הקופון 90 מעלות לכיוון שנבחר קודם. לאחר מכן, סוניקציה של הבקבוקון המכיל שני ראשי ספוגית למשך חמש דקות.

לאחר מכן, מערבב את הבקבוקון למשך 10 שניות. לבסוף, העבירו את התמיסה לבקבוקון HPLC ותייגו אותה כפתרון העבודה. כדי לשחזר את הדגימה, הכינו את תמיסות הבקרה על ידי ערבוב של 200 מיקרוליטר מכל קופון או תמיסת דגימה עם 1,800 מיקרוליטר של מדלל.

השתמש בפתרונות אלה כדי להריץ כרומטוגרפיה בהתאם לפרוטוקול הטקסט. חשב את ההתאוששות של פתרון העבודה של המקלון על סמך השטח היחסי מתחת לשיאים של פתרונות העבודה והבקרה. חזור על תהליך זה עבור שלושה קופונים כדי לחשב את ההתאוששות הממוצעת ואת סטיית התקן היחסית.

לפני ניקוי הקופונים, תוצאות ההתאוששות עבור רמות זינוק שונות לא היו עקביות, ללא קשר למרכיב התרופתי הפעיל או יחס עזר ה-API, אנליסטים שונים, או אפילו יום שונה עבור אותו אנליסט. לרוב תוצאות השחזור הייתה סטיית תקן יחסית גבוהה. השונות שנצפתה בהתאוששות לא בוטלה כאשר הותאמו מספר פרמטרים שונים, כולל טכניקת הדגימה, המדלל, הממס הזורם, ה-pH של הספייק והמדלל, טכניקת הזינוק וטכניקת המיצוי.

ההבדל בין השחזור האישי בכל משטח קופון לבין ההתאוששות הממוצעת מראה שההתאוששות הממוצעת שונה ממשטח קופון אחד למשנהו, לכן סביר מאוד שהשונות הנצפית נובעת מההבדלים בין משטחי הקופון. לאחר ביצוע ניקוי הקופונים המתואר בפרוטוקול זה, תוצאות השחזור היו ניתנות לשחזור מניסוי אחד למשנהו, עם הבדל מינימלי בשחזור בין הקופונים. ניקוי הקופונים שבוצע כאן הביא לכך שההתאוששות הייתה גבוהה מ-90%יתר על כן, ערכי סטיית התקן היחסיים עבור כל רמת זינוק היו מקובלים וקטנים יותר מהתוצאות שהתקבלו לפני הניקוי.

לאחר השליטה, ניתן לבצע את ניקוי הקופונים תוך פחות מ-30 דקות, אם הוא מבוצע כראוי. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כיצד לזנק ולהתאושש כראוי מבלי לאבד את ניתוח העניין. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב עד כמה משטחי נירוסטה נקיים כראוי כדי להשיג התאוששות גבוהה וניתנת לשחזור של השאריות.

לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתעשיית התרופות לספק נתוני ניקוי אמינים לתהליכי ייצור.