Name: הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: למדו טכניקת פולשנית מינימלית להטלת התרחבות אבי העורקים הרוחבית בעכברים ללא צורך בהנשמה. שיטה זו מפשטת את ההליך, מפחיתה מתח בבעלי החיים ומאפשרת מחקר יעיל יותר בתחום מחלות לב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק (N ° 32016) של קרן לב וכלי דם שוויצרי כדי RT.

C57BL זכר/6J עכברים (10 שבועות, 25-30 גרם, n = 60) נמצאים בשימוש בפרוטוקול זה. בעלי החיים מקבלים טיפול אנושי תואם ההנחיות שגובשו על ידי משרד הצרפתי של החקלאות ושל ההשכלה הגבוהה והמחקר, כל הפרוצדורות מתבצעות לפי ההנחיה מועצת הקהילה האירופית של 24 בנובמבר 1986 ( 86/609/EEC) ואת החוקים צרפתי. הפרוטוקול שאושר על ידי &#34; הוועדה המחוזית אתיקה CREMEAS ניסויים בבעלי חיים &#34; (#2016092816207606).
 1. הכנה לניתוח <ol><li>לשמור על העכברים במשך שבוע לאחר ההגעה במתקן בעל חיים על מחזור/כהה h 12h 12, בכלובים רגילים, עם מזון (לפרטים ראה טבלה של החומרים) ומים זמינים ad libitum.</li>
	<li>ביום של המבצע, להציב העכברים בכלובים בודדים כמה דקות לפני אינדוקציה של הרדמה, כדי למנוע כל מתח נוסף לחיה. לחטא כלי ניתוח כל יום לפני הניתוח.</li>
	<li>Intra-peritoneally מזריקים מנה אחת של תערובת של קטאמין (51.4 מ"ג/ק"ג) חריגות השירותים הווטרינריים (3.3 מ"ג/ק"ג) מדולל בתמיסת (0.9% NaCl).</li>
	<li>לוודא עומק ההרדמה בגלל היעדר רפלקס הבוהן-retreat.</li>
	<li>לגלח בצוואר ובחזה של החיה עם תער זמינים מסחרית ולחטא את האזור מגולח עם אלכוהול 70%-</li>
	<li>למקם את החיה פרקדן על משטח עבודה נקי הפקק ולתקן את כפות רגליו עם דבק.</li>
</ol> 2. ניתוח <ol><li>סטרילי טכניקה כירורגית משמש לאורך כל ההליכים. בנושם באופן ספונטני חיה, לבצע חתך בצוואר הרחם אורכי קו האמצע מעל 10 מ מ בסכין. סכין מספר 11 מן הרמה העל-בחזה ובצלעות בחזה האמצעי על מנת לחשוף את עצם החזה ( איור 1).</li>
	<li>משכי בלוטת התריס ע י העברת בתפר פוליפרופילן השהייה ב 4/0 monofilament עם Crile-עץ המחט והדבק על משטח עבודה.</li>
	<li>נפרדים שמותחת את שרירי הנשימה מראש עם מלקחיים מיקרו-כירורגי לחשוף את קנה הנשימה.</li>
	<li>שקופית בעדינות חלקה שקצהו מעוקל מיקרו-כירורגי מלקחיים עם הלסתות סגור מעל קנה הנשימה, מאחורי עצם החזה.</li>
	<li>על ידי בקפידה פתיחה וסגירה מלתעות שקצהו חלקה מעוקל המיקרוכירורגית המלקחיים לבצע עמום תחת שרירי הנשימה מראש, מאחורי עצם החזה להרחיק את קרום הריאות.</li>
	<li>את השרירים נכון העל-בריחי עם המלקחיים ישר מיקרו-כירורגי שקצהו חלקה ומשוך בעדינות החזה של החיה למעלה.</li>
	<li>שקופית בלסת נחות של אוחז העצם מתחת לעצם החזה ולבצע של 3-4 מ מ העליון חלקית sternotomy ( איור 2). לכוון את החלק התחתון של המיני-sternotomy מעט לכיוון צד שמאל.</li>
	<li>עוברים monofilament 7/0 פוליפרופילן השהייה בתפר מ פנימה אל מחוץ לחלל הבין-צלעי השני בכל צד של המיני-sternotomy באמצעות בעל מחט מיקרו-כירורגי. . הישאר קרוב costo-פצע כדי למנוע פציעות הבין-צלעי וספינות בית החזה הפנימי או קרום הריאות.</li>
	<li>להפיץ את הקצוות בחזה ובצלעות באמצעות 7/0 monofilament פוליפרופילן התפרים בכל צד ולפתור אותן על משטח עבודה עם דבק.</li>
	<li>בעדינות להזיז הצידה את השרירים מראש בקנה הנשימה, שומן mediastinal, התימוס באמצעות שקצהו חלקה מעוקל מלקחיים המיקרוכירורגית להמחיש את קשת אבי העורקים תחת הגדלה צריכת חשמל נמוכה (2-3 X) ( איור 3). . שמור על עצמך מסוים לא כדי לגעת או נזק אדר הקודקוד כדי למנוע התפתחות חזה אוויר.</li>
	<li>לחשוף את הרקמות הרכות מתחת לקשת אבי העורקים על ידי קשירת מלקחיים ( איור 4 א), מורחים בעדינות לסתותיו. להכין מנהרה ברקמות הרכות מתחת לקשת אבי העורקים עם מלקחיים קשירת השני על ידי פתיחה וסגירה של הלסתות ברקמות הרכות בעדינות.</li>
	<li>לעבור קטע של 6/0 קשירה משי מושחל דרך עינו של מכשיר מצדו ( איור 4 B) החזיק ביד שמאל מתחת לקשת אבי העורקים ולאחזר אותה על ידי קשירת מלקחיים החזיק ביד ימין בין מקור נכון innominate ושמאלה נפוצות עורק ( איור 5).</li>
	<li>לחתוך מחט 27-מד באורך של 5 מ מ, קהה בשני הקצוות על ידי לחיצה על אותם עם בעל מחט Crile. למקם את מחט בקוטר 27 קהות בסמוך לקשת אבי העורקים ( איור 6) עם מלקחיים ישר מיקרו-כירורגי שקצהו חלקה, לקשור את התפר בנוחות סביב המחט העורקים בין שמאלה וימינה innominate שחתך את עורק הצוואר העורקים עם המלקחיים שני קשירה ( איור 7). כדי לקשור בקלות לכף את התפר, מבצעים של קשר כפול הראשונית ולאחריה ארבעה קשרים נוספים. ודא כי כל הקשרים הם שטוחים.</li>
	<li>לאחר מצדו, להסיר במהירות אבל בעדינות את המחט כדי להשיג 0.4 מ מ קוטר היצרות כיווץ העורקים לשחזור רוחבי 65-70%-</li>
	<li>בדוק hemostasis של הרקמות הרכות סביב הקימור אבי העורקים, של קצוות בחזה ובצלעות, שרירי הנשימה מראש. לשים גזה hemostatic resorbable בכל מקום נוטף דם נצפית. הסר פוליפרופילן monofilament 7/0 להישאר התפרים בשימוש להפצת הקצוות בחזה ובצלעות.</li>
	<li>לעבור פשוט 6/0 monofilament בתפר פוליפרופילן עם בעל מחט מיקרו-כירורגי מ מחוץ ל בתוך המרחב הבין-צלעי השני השמאלי ולאחר מכן מ בתוך מחוץ הרווח הבין-צלעי השני נכון. . הישאר קרוב costo-פצע כדי למנוע פציעות הבין-צלעי וספינות בית החזה הפנימי או קרום הריאות.</li>
	<li>להפגיש הקצוות בחזה ובצלעות על ידי קשירת monofilament 6/0 בתפר פוליפרופילן עם Crile-עץ המחט.</li>
	<li>לסגור את העור עם פוליפרופילן 5/0 monofilament פועל תפר בשכבה אחת עם Crile-עץ המחט.</li>
	<li>ביצוע ההליך דמה זהה לפעולת הכיווץ אך ללא קשירה בתפר סביב העורקים.</li>
</ol> 3. ההחלמה לאחר הניתוח <ol><li>לפקח מקרוב מאוד את החיות. להעביר את העכבר לכלוב הפרט ולמקם אותו במצב של שכיבה-</li>
	<li>אפשר בעכבר כדי לשחזר מתחת לאור התחממות כדור הארץ עד מלא ער (פחות מ 1 h לאחר גרימת הרדמה).</li>
	<li>על שיכוך כאבים לאחר הניתוח, מזריקים 0.1 מ"ג/ק"ג של הבופרנורפין intraperitoneally. חזור על זריקות תת עורית של 0.1 mg/kg של הבופרנורפין כל 8 שעות עבור שלושת הימים הראשונים, כפי שמצוין.</li>
	<li>מקום העכברים המופעלים בכלובים רגילים (מקסימום 3 עכברים לכל כלוב) ועכברים 2 מינימלי לכל כלוב.</li>
</ol> 4. לב קציר <ol><li>ביום של ניתוח, המתת חסד את העכבר עם פתרון של קטמין 300 מ"ג/ק"ג, חריגות השירותים הווטרינריים 20 מ"ג/ק"ג בתוך תמיסת מלח על ידי זריקה בקרום הבטן.</li>
	<li>לקצור קודם כל הדם הכלילי התחתון, ולאחר מכן דרך באותה השורה הוסף 5 מ של תמיסת 2.6 מ מ EDTA בתוך תמיסת מלח.</li>
	<li>לקצור את הלב, להסיר את אטריה, משקל הלב (החדרים ימינה ושמאלה בלי אטריה).</li>
	<li>השמאל להפריד ventr נכוןקפואה עם מחצה הנותרים את החלק השמאלי. שוקלת שתי דגימות רקמה ולהקפיא אותן בחנקן נוזלי.</li>
</ol>

<ol><li>Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cardiac+cachexia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of cardiac cachexia.</a> Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).</li>
<li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).</li>
<li>Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVerma%2C+SK+%22Manual+of+Research+Techniques+in+Cardiovascular+Medicine%22">Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine</a>. Ardehali, H. , Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure.+Development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present.</a> Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).</li>
<li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).</li>
<li>Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+response+to+pressure+overload+in+129S1%2FSvImJ+and+C57BL%2F6J+mice%3A+temporal-+and+background-dependent+development+of+concentric+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).</li>
<li>Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+blood+pressure+and+morphological+traits+in+cardiovascular-related+organs+in+13+different+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains.</a> J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).</li>
<li>Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3164086/">Transverse aortic constriction in mice.</a> J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).</li>
<li>Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+aortic+banding+in+mice%3A+effects+of+altered+cardiomyocyte+insulin+signaling+during+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).</li>
<li>Faerber, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20447656">Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).</li>
<li>Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. <a target="_blank" href="http://pubmedcentralcanada.ca/pmcc/articles/PMC3402700/">IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).</li>
<li>Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+mRNA+profiling+in+a+rat+model+of+left+ventricular+hypertrophy+reveals+early+expression+of+chemokines+and+their+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors.</a> PLoS ONE. 11 (8), 0161273(2016).</li>
<li>Liao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+assessment+of+LV+hypertrophy+and+function+in+aortic-banded+mice%3A+necropsy+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).</li>
<li>Stansfield, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+model+to+independently+study+regression+of+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).</li>
<li>Beetz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+biglycan+attenuates+cardiac+hypertrophy+and+fibrosis+after+left+ventricular+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).</li>
</ol>

המחברים יש אין ניגוד אינטרסים לחשוף.

המטרה של פרוטוקול זה היא להציג דוגמה צעד אחר צעד של טכניקה כירורגית פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים. תיאור טכני מפורט של התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים דווחה על-ידי סופרים אחרים,2,8. עם זאת, חוקרים אלה לבצע ניתוח בעקבות צנרור ואוורור של בעלי חיים. השימוש צעד נוסף של צנרור-איוורור מגביר את המורכבות ואת משך הזמן של כל התהליך ואת הלחץ העולמי החיה הוא חשוף. מסיבות אלו, קיבלה המושג פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי קצת תשומת לב. הכיווץ של אבי העורקים רוחב...

במהלך השנים האחרונות, המחקר של אי ספיקת לב נערכה ב קיימא החיה מודלים1. מודלים בעלי חיים קטנים לעומת מודלים בעלי חיים גדולים של אי ספיקת לב, יש יתרונות פוטנציאליים רבים. לצד העלויות הנמוכות של דיור ואחזקה, מודלים בעלי חיים קטנים נגישים לחוקרים יותר בשל המתקנים הדרושים פחות מורכב2.
העכבר אי ספיקת לב דגמים מציעים את היתרונות אותו כמו הדגמים עכברוש. בנוסף דיור מוזל עד עולה3, העכבר מודלים להפיק תועלת הזמינות של זנים (KO) רלוונטי מהונדס, נוק אאוט. האפשרות של תאים ייחודיים לסוג, inducible KO או אסטרטגיות הטרנסגניים הפוך את העכבר כלי יקר ערך ללמוד בפתוגנזה של אי ספיקת לב ולנסות לזהות את הרומן משטרי טיפולית3.
בין העכבר מודלים של אי ספיקת לב בשימוש כיום4, התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) אשר תוארה לראשונה על ידי יובל בנאי-ג'וליה5 הוא הדגם המועדף כדי ליצור לחץ יתר-induced גדילת (LVH)1 , 3. היתרון הגדול ביותר של מודל זה הוא היכולת לאפשר ריבוד של LVH2, למרות עזב חדרית שיפוץ בתגובה טק הוא משתנה בין זנים שונים בעכבר. בפרט, עכברים C57BL/6 לפתח התרחבות מהירה LV לאחר עיגול זה עלולים להופיע עם אחרים זנים4,6,7.
התפרצות פתאומית של יתר לחץ דם מושגת עם טק גורם כ 50% עלייה במסה LV בתוך 2 שבועות, ומאפשר לבחון את הפעילות של התערבויות תרופתי או המולקולריות מכוון להתכוונן על התפתחות LVH4במהירות. תנאי הגיוס חריפה של יתר לחץ דם חמור על ידי טק לא בדיוק לשחזר את גדילת מתקדמת, שיפוץ שנמדדו בסביבה קלינית של באבי העורקים או יתר לחץ דם. עם זאת, מודל זה משמש על ידי חוקרים רבים כדי לזהות ולשנות את הרומן מטרות טיפולית אי ספיקת לב4.
ביצוע טק בעכברים דורש למומחיות הכירורגית גדול יותר מהנדרש לקבלה אחרים טכניקות המשמשות לזירוז LVH ואי ספיקת לב לאחר מכן2. הסופרים לבצע הליך זה באמצעות נלוקסון ואוורור של בעלי חיים2,8, אשר גורם בהליך זה יותר תובעניים ולגזול ומוסיף הנטל כירורגי לבעל החיים. רק כמה חוקרים השתמשו טק פולשנית במחקר שלהם עם התייחסות קצרה הליך כירורגי9,10,11.
המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד טכניקה פשוטה וידידותית של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים, הדגשת השלבים הקריטיים של ההליך. על-ידי ביצוע השלבים הבאים מפתח, באפשרותך לבצע בקלות בטכניקה זו.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי</td><td>Olympus</td><td>SZX2-TR30</td><td></td></tr><tr><td>סכין גילוח</td><td>Rowenta</td><td>Nomad TN3650FO</td><td></td></tr><tr><td><חזק>תפרים: </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פוליפרופילן 7/0</td><td>Ethicon</td><td>BV-1X</td><td></td></tr><tr><td>פוליפרופילן 6/0</td><td>BBraun</td><td>C0862061</td><td></td></tr><tr><td>משי 6/0 קשירה&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>פוליפרופילן 4/0</td><td>Ethicon</td><td>8683</td><td></td></tr><tr><td>פוליפרופילן 5/0</td><td>Ethicon</td><td>Z303</td><td></td></tr> <tr><td><חזק>תרופות: < / חזק ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>קטמין</td><td>מריאל</td><td>Imalg&egrave; ne 1000, LBM154AD</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer</td><td>Rompun 2%, KP09PPC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Ceva</td><td>Vetergesic, 072013</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מכשירים:&nbsp; </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ציפורני עצם</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>16101-10</td><td></td></tr><tr><td>עזר קשירה</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>18062-12</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים קשירת</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>18026-10</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>מעץ קרייל 12003-15</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו-כירורגיים&nbsp;</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו-כירורגיים&nbsp;</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים לרקמות</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט מיקרוכירורגיה</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מיקרוכירורגיה</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>91501-09</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מאיו</td><td>כלים כירורגיים עדינים</td><td>14511-15</td><td></td></tr><tr><td>סכין 11 להבים</td><td>כירורגית עדינה כלים</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מיצוי RNA ו-qPCR:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TriReagent</td><td>Euromedex</td><td>TR-118-200</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy Mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74704</td><td></td></tr><tr><td>Qubit בדיקת RNA פלואורמטרית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>10034622</td><td></td></tr><tr><td>RNA 6000 ערכת ננו</td><td>Agilent</td><td>5067-1511</td><td></td></tr><tr><td>ערכת cDNA בקיבולת גבוהה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>10400745</td><td></td></tr><tr><td>טקמן מאסטר מיקס</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>10157154</td><td></td></tr><tr><td>טקמן BNP פריימרים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>Mm01255770_g1</td><td></td></tr><tr><td>תקמן ANP</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>Mm01255747_g1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>פריימרים Taqman ACE</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00802048_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Col1a1 פריימרים&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>Mm00801666_g1</td><td></td></tr><tr><td>טקמן TGFb פריימרים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>Mm01178820_m1</td><td></td></tr><tr><td>טקמן גפד פישר</td><td>סיינטיפיק</td><td>Mm99999915_g1</td><td></td></tr><tr><td>ABIPrism&nbsp; Thermocycler</td><td>Applied Biosystems</td><td>7000</td><td></td></tr><tr><td><חזק>תוכנה: </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad פריזמה</td><td>GraphPad</td><td>פריזמה 7</td><td></td></tr><tr><td><חזק>מזון מן החי</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>תזונה מלאה לחולדות/עכברים בוגרים</td><td>בטוח</td><td>UB220610R</td><td></td></tr></tbody></table>

הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) בעכברים הוא אחד של טכניקות כירורגיות הנפוץ ביותר עבור חקירה נסיונית של לחץ יתר-induced עזב חדרית היפרטרופיה (LVH) והתקדמות שלה כדי אי ספיקת לב. ברוב המכריע של החקירות שדווחה, הליך זה מבוצע עם צנרור ואוורור של החיה אשר הופך את תובעניים ולגזול ומוסיף הנטל כירורגי לחיה. המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר טכניקה פשוטה של טק פולשנית ללא צנרור ואוורור של עכברים. שלבים קריטיים של הטכניקה מודגשים על מנת להשיג התמותה נמוכה ויעילות גבוהה תוך גרימת LVH.
זכר עכברים C57BL/6 (בן שבוע 10, 25-30 g, n = 60) היו מרדימים עם זריקה אחת בקרום הבטן של תערובת של קטמין חריגות השירותים הווטרינריים. ב נושם באופן ספונטני בעלי חיים לאחר 3-4 מ מ העליון חלקית sternotomy, קטע 6/0 בתפר משי מושחל דרך עינו של מכשיר מצדו היה עבר מתחת לקשת אבי העורקים וקשר על מחט 27-מד קהות. חיות המופעלים המזויפים עברה הכנת כירורגי אותו אך ללא התרחבות אבי העורקים. היעילות של ההליך ב גרימת LVH כתביהם לעליה משמעותית יחס המשקל גוף/לב. יחס זה מתקבל ימים 3, 7, 14, ו- 28 לאחר הניתוח (n = 6-10 בכל קבוצה, בכל נקודת זמן). באמצעות הטכניקה שלנו, LVH נצפית בטק לעומת בעלי החיים המזויפים מיום 7 עד 28 יום. פעיל. ומאחר (מעל 28 ימים) בהירושימה הם שניהם מאוד נמוכה ב- 1.7%.
לסיכום, הטכניקה שלנו חסכונית של טק פולשנית בעכברים נושאת בהירושימה פעיל ואחרי הניתוח נמוך מאוד, יעיל ביותר ב גרימת LVH. זה ומפשט את תהליך פעיל, ומפחיתה את המתח על החיה. זה ניתן בקלות לבצע על-ידי ביצוע השלבים הקריטיים המתוארים פרוטוקול זה.

פעיל. ומאחר הישרדות פעיל ההישרדות היה גבוה מאוד, 98.3% (59 מתוך 60) של הסידרה כולה (טק ובעלי המופעלים דמה). פעיל רק מותו היה בגלל סיבוך דימום בעכבר מהוקצע לפעולה המזויפים. הישרדות לאחר הניתוח במהלך התצפית של 28 ימים גם היה מצוין, ב 98.3% (58 מתוך 59). רק לאחר מותו לאחר הניתוח אירע עכבר טק ביום (D) 16, ואולי של מקור לבבי.
אימות של הטכניקה הטכניקה הציג הוא אמין מאוד לשחזור. המיקום הנכון של ה...

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

המטרה הכללית של פרוטוקול זה היא לבצע היצרות של אבי העורקים בחתך רוחבי (transverse aortic constriction) באופן זעיר-פולשני בעכברים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בנוגע לביצוע היצרה של אבי העורקים בעכברים, כגון כיצד ליצור מעבר מתחת לקשת אבי העורקים. היתרונות המרכזיים של טכניקה זו הם שהיא פשוטה, ידידותית למשתמש, ומבטלת את הצורך בהנשמה ובהחדרת תבנורט לעכברים.אדגים את הפרוצדורה יחד עם הפוסט-דוקטורנטית שלנו, סימונה נמסקה, שתבצע את שלבי ההכנה הפרה-כירורגית של בעל החיים ואת שלבי המעקב הפוסט-אופרטיבי. ביום הפרוצדורה, גלחו את הצוואר והחזה של עכבר תחת הרדמה וחטאו את העור החשוף באמצעות 70% ethanol. לאחר אישור רמת הסדציה המתאימה באמצעות צביטה בבהונות, קבעו את בעל החיים בתנוחה גבית (supine) על גבי משטח עבודה נקי משעם.בשלב הבא, השתמש בלהב סכין מספר 11 כדי לבצע חתך צווארי אורכי של 10 מילימטר במרכז, מהשקע על-הסטרנלי (suprasternal notch) ועד למרכז החזה, כדי לחשוף את עצם החזה (sternum). באמצעות מחזיק מחטים מסוג Crile-Wood, העבר תפר קיבוע (stay suture) של פוליפרופילן מונופילימנט 4-0 כדי להסיט את הבלוטה המגן (thyroid). הדבק את התפר למשטח העבודה.לאחר מכן, העבירו את משטח העבודה תחת מיקרוסקופ כירורגי והשתמשו בפינצטה למיקרוכירורגיה כדי להפריד בעדינות את השרירים הפרה-טרכאליים (pretracheal muscles) כדי לחשוף את הקנה. החליקו בעדינות את הקצוות הסגורים של זוג פינצטות מיקרוכירורגיות מעוקלות מעל הקנה ומאחורי העצם הסטרנום (sternum), ופתחו וסגרו בזהירות את הפינצטות המעוקלות כדי לבצע דיסקציה עמומה של הפלורה. השתמשו בפינצטה מיקרוכירורגית ישרה כדי לתפוס את השרירים הסופראקלוויקולריים (supraclavicular muscles) הימניים ומשכו בעדינות את בית החזה כלפי מעלה.החלק את הקצה התחתון של קוצץ העצם תחת עצם החזה, ובצע סטרנוטומיה חלקית עליונה של שלושה עד ארבעה מילימטרים, תוך הכוונת החלק התחתון של המיני-סטרנוטומיה מעט שמאלה. באמצעות מחזיק מחטים למיקרו-כירורגיה, העבר תפר קיבוע של polypropylene מונופילמנט 7-0 מהפנים אל החוץ של המרווח הבין-צלעי השני בכל צד של המיני-סטרנוטומיה. השתמש בתפרי קיבוע של polypropylene מונופילמנט 7-0 כדי להרחיב את קצוות עצם החזה בכל צד.השתמשו בפינצטה קמורה כדי להזיז בעדינות את השרירים הפרה-טרכאליים, את השומן המדיאסטינלי ואת הטימוס הצידה, כדי לדמיין את קשת האורטה תחת הגדלה נמוכה. כדי לחשוף את הרקמה הרכה מתחת לקשת האורטה, הכניסו פינצטת קשירה מתחת לקשת כאשר הקצוות סגורים, ופתחו בעדינות את הפינצטה. השתמשו בפינצטת קשירה שנייה כדי ליצור מנהרה ברקמה הרכה מתחת לקשת האורטה, על ידי פתיחה וסגירה עדינה של הפינצטה בתוך הרקמה הרכה.לאחר מכן, העבירו קטע של ליגטורה ממשי 6-0 שהושחלה דרך העין של עזר לליגציה מתחת לקשת האורטה, תוך שימוש בפינצטת קשירה כדי לשלוף את התפר מבין המקור של העורק האינומינאט הימני והעורק התרדמי המשותף השמאלי. השלב המאתגר ביותר בפרוצדורה הוא השחלת התפר מתחת לקשת האורטה. הקפדה מספקת בעת יצירת התעלה מתחת לקשת תקל על מיקום התפר בשלב הבא.כעת השתמשו בפינצטה ישרה כדי למקם מחט בעלת קצה קהה במידה 27 gauge לצד קשת האביס (aortic arch), והשתמשו בשתי פינצטות קשירה כדי לקשור את התפר באופן הדוק סביב המחט והאביס, בין העורק האינומינאט (innominate artery) הימני לבין העורק התרדמי המשותף (common carotid artery) השמאלי. לאחר שהתפר הוקשרו, הסירו את המחט במהירות אך בעדינות כדי להשיג היצרות בקוטר של 0.4 millimeter וconstriction של האביס ברוחב של 65% עד 70% הניתן לשחזור. לאחר וידוא של המוסטזיס (hemostasis), הסירו את תפרי הקיבוע (stay sutures) מ-polypropylene monofilament במידה 7-0 ששימשו להרחבת קצוות העצם הסטרנום.השתמש במחזיק מחט למיקרו-כירורגיה כדי להעביר תפר פוליפרופילן מונופילמנט פשוט 6-0 מהחוץ פנימה אל תוך המרווח הבין-צלעי השני השמאלי, ומהפנים החוצה מהמרווח הבין-צלעי השני הימני. השתמש במחזיק מחט Crile-Wood כדי לקרב את קצוות העצם הסטרנום באמצעות תפר פוליפרופילן מונופילמנט 6-0. סגור את העור בשכבה אחת באמצעות תפר רץ של פוליפרופילן מונופילמנט 5-0 בעזרת מחזיק מחט Crile-Wood.לאחר מכן, החזירו את החיה לכלוב במצב שכיבה על הבטן תחת חימום ובניטור עד להחלמה מלאה. ניתן לתקף את יעילות השראת ההיפרטרופיה של החדר השמאלי על ידי השוואת היחסים בין משקל הלב למשקל הגוף של חיות השם (sham) לאלו של החיות הניסיוניות ביום השלישי, השביעי, ה-14 וה-28 לאחר הניתוח. היחס עולה באופן משמעותי בחיות שעברו קשירה (banded) בהשוואה לקבוצות השם החל מהיום השביעי לאחר הניתוח, ונשאר גבוה באופן משמעותי בחיות עם ההצרות עד היום ה-28 לאחר הניתוח.העלייה שנצפתה ביחסים בין משקל הלב למשקל הגוף נובעת אך ורק מעלייה ביחס משקל הגוף של החדר השמאלי, שכן יחס משקל הגוף של החדר הימני נותר דומה בין החיות שעברו היצרות אאורטלית רוחבית (transverse aortic constriction) לבין החיות שעברו ניתוח דמה (sham) לאורך כל תקופת התצפית. בנוסף, ביטוי ה-mRNA של הפפטיד הנתרטיקה המוחי (brain natriuretic peptide), המשמש כביקורת חיובית להיפרטרופיה של הלב בחדרים השמאליים, גבוה משמעותית בחיות עם חסימת האאורטה בהשוואה לחיות הביקורת שעברו ניתוח דמה ביום ה-14, מה שמהווה תיקוף נוסף ליעילות הטכניקה. לאחר רכישת המיומנות, ניתן להשלים טכניקה זו בתוך 20 דקות אם היא מבוצעת כראוי.בעת ביצוע הליך זה, חשוב להשתמש בעזר לליגציה ובפינצטות קשירה דומות לאלו המשמשות בפרוטוקול שלנו. לאחר פיתוחה, סיפקה טכניקה זו מודל אמין ומפושט לחקר המנגנונים המעורבים בהיווצרות של היפרטרופיה של החדר השמאלי המושרית על ידי עומס לחץ. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה של אופן ביצוע היצרות רוחבית של אבי העורקים (transverse aortic constriction) בגישה זעיר-פולשנית בעכברים, תוך דגש מיוחד על המעבר תחת קשת אבי העורקים.אל תשכחו כי יצירת המעבר תחת קשת האורטה היא השלב הקריטי ביותר בפרוצדורה, ושימוש בעזר לקישור (ligation aid) ובפינצטות לקשירה מפחיתים באופן ניכר את הסיכון לפגיעה בקשת.

technique-minimally-invasive-transverse-aortic-constriction-mice-for

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללמוד המנגנונים היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב הפיתוח. כאן אנו מתארים נהלים להתכווץ אבי העורקים כדי ליצור תואר לשחזור של היפרטרופיה לב בעכברים.

אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

בסרטון זה אנו מדגימים פרוטוקול ניסיוני להתכווצות זעיר פולשנית של אבי העורקים הרוחבי בעכברים כדי לבחון אי ספיקת לב הנגרמת כתוצאה מעומס יתר.

פסים רוחביים של קשת אבי העורקים במודל עכבר: טכניקה זעיר פולשנית בעכברים להשראת לחץ גבוה בחדר השמאלי

אנו מתארים הליך בשלבים ליצירת עומס יתר לחץ והיפרטרופיה של חדר שמאלי בחולדות Wistar ידי התכווצות של אב העורקים עולים באמצעות קליפ מתכתי קטן. דגם זה נעשה שימוש נרחב ללימוד שינויי שיפוץ במהלך היפרטרופיה לבבית ולזיהוי והערכה של אסטרטגיות לנסיגה של שינויים כאלה.

עולה אבי העורקים תעוקה בחולדות ליצירת עומס יתר לחץ לב היפרטרופיה הדגם

מתואר מודל בעל יכולת שחזור גבוהה לאוטם שריר הלב בעכברים עם מניפולציות פולשניות מינימליות. ניתן לבצע את המודל בקלות, וכתוצאה מכך יכולת שחזור ושיעור הישרדות גבוהים. לפיכך, המודל המתואר יפחית את מספר בעלי החיים הנדרשים כמתבקש על ידי עקרון 3R (החלפה, עידון והפחתה).

נוהל כירורגי זעיר פולשנית של גרימת אוטם שריר הלב בעכברים

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך לב פולשנית לשינויים מבניים ותפקודיים במודל של עכברים של מחלת לב נוצר על ידי התכווצות רוחבי אבי העורקים, באמצעות B ו- M-mode אקוקרדיוגרפיה וצבע / הדמיה דופלר גל הדופק.

שינויים הערכה לב מורפולוגי תפקודי עכבר דגם של מועקה הרוחבית אב עורקים על ידי הדמית אקו

התכווצות העורקים רוחבי פולשנית (MTAC) חוסך את עיקרי התכווצות העורקים רוחבי רגיל (TAC) תוך ביטול השימוש מאוורר עם אינטובציה לקנה הנשימה. זה מוכיח להיות שיטה רצויה מאוד ללימודי תפוקה גבוהה על עומס של חדר שמאלי, בעיקר חקר תרגום.

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של אבי העורקים רוחבי הכיווץ (טק) באמצעות ניקור לרוחב. טכניקה זו היא הליך ניתוחי החזה פולשנית, סגור במטרה לדמות עומס ואי ספיקת לב בעכברים ניצול ההגדרות הרגילות של מעבדה טק.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

כאן, אנו מספקים גישה שימושית לחקר המנגנון של כשל המוח הימני. גישה נוחה יותר ויעילה יותר לכווץ עורק הריאתי מוקמת באמצעות כלים כירורגיים שנעשו. בנוסף, מסופקים שיטות להערכת איכות הגישה הזאת באמצעות האקו-לב והצנתור.

אינדוקציה של כישלון חדרית הנכון על ידי מכווץ עורק ריאתי והערכה של תפקוד המוח הימני בעכברים

כאן אנו מתארים פרוטוקול צעד אחר צעד של פירוק אבי העורקים הכירורגי במודל העכברים המבוסס היטב של התכווצות אבי העורקים. הליך זה לא רק מאפשר ללמוד את המנגנונים שבבסיס שיפוץ הפוך החדר השמאלי ורגרסיה של היפרטרופיה, אלא גם כדי לבדוק אפשרויות טיפוליות חדשניות שעשויות להאיץ את ההתאוששות שריר הלב.

לימוד שיפוץ הפוך חדרי שמאלי על ידי ניתוק האבניים במכרסמים

פרוטוקול זה מציג שיטה משופרת להשגת היפרטרופיה שריר הלב חולפת עם תפר נספג, המדמה ירידה היפרטרופיה חדרית שמאל לאחר הסרת עומס לחץ. זה יכול להיות בעל ערך עבור המחקרים על תנאי היפרטרופי שריר הלב.

הפעלת התכווצות אבי העורקים רוחבית עם תפר נספג להשגת היפרטרופיה שריר הלב ארעית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה שונה ופשוטה עם הליך היצרות אבי העורקים הרוחבי (TAC) זעיר פולשני באמצעות retractor מתוצרת עצמית. הליך זה יכול להתבצע ללא מכונת הנשמה או מיקרוסקופ ומציג עומס לחץ, המוביל בסופו של דבר היפרטרופיה לבבית או אי ספיקת לב.

טכניקה שונה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים

למדו טכניקת פולשנית מינימלית להטלת התרחבות אבי העורקים הרוחבית בעכברים ללא צורך בהנשמה. שיטה זו מפשטת את ההליך, מפחיתה מתח בבעלי החיים ומאפשרת מחקר יעיל יותר בתחום מחלות לב.

הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת

גלה סרטונים נוספים