Pooled shRNA Screen for Reactivation of MeCP2 on the Inactive X Chromosome

Vid Leko; Smitha Sripathy; Robin L. Adrianse; Taylor Loe; Angela Park; Uyen Lao; Eric J. Foss; Marisa S. Bartolomei; Antonio Bedalov

doi:10.3791/56398

במאגר shRNA מסך עבור הפעלה מחדש של MeCP2 על כרומוזום X לא פעיל

JoVE Journal
Genetics

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Genetics

Pooled shRNA Screen for Reactivation of MeCP2 on the Inactive X Chromosome

במאגר shRNA מסך עבור הפעלה מחדש של MeCP2 על כרומוזום X לא פעיל

Full Text

7,691 Views

11:15 min

March 2, 2018

DOI: 10.3791/56398-v

Vid Leko^1,2, Smitha Sripathy¹, Robin L. Adrianse¹, Taylor Loe¹, Angela Park¹, Uyen Lao¹, Eric J. Foss¹, Marisa S. Bartolomei³, Antonio Bedalov^1,4

¹Clinical Research Division,Fred Hutchinson Cancer Research Center, ²Hematology Branch, National Heart, Lung and Blood Institute,National Institutes of Health, ³Epigenetics Program, Department of Cell and Developmental Biology,University of Pennsylvania Perelman School of Medicine, ⁴Departments of Medicine and Biochemistry,University of Washington

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

אנחנו ניצור קשר עם סיכת ראש קטנה RNA (shRNA) ופרוטוקול הבא הדור המבוססת על רצף לזיהוי הרגולטורים האינקטיבציה שמושרש בקו תא מאתר עם גחלילית לוציפראז ומאוחדים. גנים עמידות hygromycin עם איזה CpG מחייב חלבון 2 ( MeCP2) גנים על כרומוזום ה-X לא פעיל.

התחל הליך זה בהכנת פיברובלסטים של גיד העכבר, כמתואר בפרוטוקול הטקסט. קצרו את התאים מצלחת של 10 סנטימטר על ידי שאיבת המדיה תחילה. לאחר מכן הוסיפו מיליליטר אחד של 0.05% טריפסין EDTA ודגרו במשך שתיים עד חמש דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.

לאחר הדגירה, הרוו את הטריפסין עם תשעה מיליליטר של DMEM-10, ואספו את התאים המרחפים בצינור חרוטי של 15 מיליליטר. לדלל את התאים עם DMEM-10 לריכוז סופי של תא אחד לכל 100 מיקרוליטר. לאחר מכן העבירו את התאים לצלחות באר 96 על ידי פיפטינג של 100 מיקרוליטר מהמתלה לכל באר.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos