Name: אוטומטיות והרצתי ניתוח אצל עכברים עם פציעה כרונית הכיווץ (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: למדו ניתוח אוטומטי של הליכה לבחינת אלודיניה מכנית בעכברים עם פציעת עצב כרונית. שיטה זו מאפשרת הערכה אובייקטיבית של תפקוד תחושתי ומנגנוני כאב במודל נוירופתי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי Chungnam האוניברסיטה, קוריאה המכון הלאומי של מזרחי הרפואה (KIOM), מענק של ה-טכנולוגיית R בריאות קוריאה &#38; פרויקט דרך קוריאה בריאות תעשיית פיתוח המכון (KHIDI), במימון משרד הבריאות &#38; רווחה, הרפובליקה של קוריאה (להעניק את המספר: HI15C0007).

כל הניסויים נערכו בהתאם להנחיות האתי של האגודה הבינלאומית על חקר הכאב ולא אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה ב (האוניברסיטה הלאומית Chungnam טג'אן, דרום קוריאה).
 1. אינדוקציה של CCI בעצב <ol><li>בית זכר ICR עכברים במשקל 20-25 גרם תחת מחזור/כהה 12 שעות בטמפרטורת החדר מבוקר (ומתוחזק על 20-25 ° C), לחות (40-60%), עם גישה לאוכל חינם, . מים. לאפשר תקופה להתאקלמות עבור עכברים בחדר טיפול בבעלי חיים לפחות שבוע אחד לפני הניתוח.
	<ol><li>במהלך דיור, להתבונן במראה ובאופן הפעולה של העכברים, אל תשתמש עכברים מראה פעילות מוחית חריגה גינקולוגיות. 
		הערה: יום אחד לפני הניתוח CCI, למדוד את רגישות מכני הכפה האחוריות על-ידי החלת פון פריי חוטים ולבצע ניתוח הילוך אוטומטי כדי להשיג ערכי בסיס נורמלי. לאחר מכן, להקצות באופן אקראי עכברים שליטה ולקבוצות ניסיוני.</li>
	</ol></li> <li>ביום של הניתוח, עזים ומתנגד עכברים באמצעות הזרקת 2,2,2-tribromoethanol (250 מ"ג/ק"ג, בקרום הבטן (IP)). 
	הערה: ללבוש ציוד מגן אישי כגון הניתוחים, כפפות, מסיכה.
	<ol><li>שוקל 2.5 גר' 2,2,2-tribromoethanol ומוסיפים 2-מתיל-2-buthanol הנפח הסופי של 5 מ"ל. לשמור את הפתרון מן האור (למשל להשתמש במיכל חשוך או לעטוף בנייר).</li>
		<li>אפשר ריאגנטים להתמוסס לחלוטין על ידי חימום ב 40 מעלות צלזיוס, תוך ערבוב במשך 10-30 דק...</li>
		<li>להוסיף לנפח סופי של 200 מ ל מים מזוקקים ומערבבים עד מעורבבים טוב.</li>
		<li>אחסן aliquots ב 4 ° C ולשמור באפלה. אחרי שבועיים, ההרדמה צריך להיות מוחלף עם aliquots החדש.</li>
		<li>להזריק נפח של 20 µL לכל 1 גרם משקל. לדוגמה, אם משקל הגוף של העכבר 25 גרם, לתת 500 µL של פתרון. משך ההרדמה הזה אופייני הוא ח' 1 
		הערה: פתרון זה יהיה רעיל כאשר הם נחשפים לאור ו/או חום כדי להיות זהיר להימנע מחשיפה אור וחום. נתיב הזרקת IP מומלץ בחום.</li>
	</ol></li> <li>כאשר העכבר נופל לתוך הרדמה עמוקה, להניחה על שולחן הניתוחים עם הצד הגבי למעלה (כלומר, שכיבה), לחטא את האזור אמצע הירך החיצונית של הצד הנכון עם מקלון אלכוהול 70%- 
	הערה: לאשר הרדמה עמוקה על-ידי בדיקת חוסר התגובה לצבוט או לחץ גירוי כפות הרגליים האחוריות או זנב.</li>
	<li>לגרום את CCI בעצב נכון של העכבר.
	<ol><li>אעשה חתך על העור מסביב לאזור אמצע הירך של 1.0-1.5 ס מ אורך עם להב אזמל.</li>
		<li>בוטה לנתח את שרירי הירך עם עוצר דימום מיקרו-יתושים כדי לחשוף בעצב.</li>
		<li>מאתרים ומפסיקים בעצב חשוף 3 פעמים עם מרווחי 1.0-1.5 מ"מ באמצעות בתפר כרום 4-0- 
		הערה: להפוך ligations משוחרר על-ידי קשירת בעצב עד טלטול עדין מופיע על חולשת הכפה האחוריות. הקבוצה המזויפים של עכברים התקבל הפתח כירורגית אותה בתנאים דומים למעט בלי עצב מצדו.</li>
	</ol></li> <li>לסגור את הפתח כירורגית עם 3-4 תפרים קטע פשוט בעזרת חוט משי 5-0 ולחטא עם povidone יוד לחיטוי של האזור החיצוני של ניתוח.</li>
	<li>לאחר הניתוח, מקם את העכבר בתוך כלוב נקי על כרית החימום. כאשר בעלי חיים הם התאוששה מן ההרדמה, להחזיר אותם לכלוב שלהם הביתה. 
	הערה: במחקר זה, אנטיביוטיקה לא שימשו. CCI + GBP קבוצה קיבל IP gabapentin (GBP) במינון של 50 מ"ג/ק"ג מדי יום כפקד חיובי.</li>
</ol> 2. מדידה של Allodynia מכני (מבחן פון פריי) הערה: להעריך את תדירות התגובה נסיגה לגירויים מכני באמצעות 1g של פון פריי פילמנט השטח plantar של חולשת הכפה האחוריות.
<ol><li>בכל יום המבחן, להביא עכברים לחדר בדיקה התנהגותית, להתאקלם העכברים בכלוב בבית שלהם במשך לפחות 30 דקות לפני ילדי 
	הערה: ללבוש ציוד מגן אישי כגון הניתוחים, כפפות, מסיכה.</li>
	<li>לשים את העכבר בתוך קופסה אקרילי שקוף על הרצפה מתכת רשת שינוי, להתאקלם העכבר במשך 30 דקות</li>
	<li>בעדינות להחיל 1g של פון פריי פילמנט השטח plantar של הכפה האחוריות עד נימה מתכופף.</li>
	<li>החל פילמנט גירוי האחוריות חולשת כף של 10 פעמים לפחות 10 s מרווחי ולהקליט את התוצאה. 
	הערה: במחקר זה, מספר התגובות נסיגה כפת מניסויים 10 מוצגות כאחוזים של תדר נסיגה כפת (PWF, %). פריי פון הבדיקה בוצעה בכל יומיים לאחר הניתוח CCI.</li>
</ol> 3. ביצוע ניתוח הילוך אוטומטי הערה: מערכת ניתוח הילוך מדמיין כל טביעת כף הרגל בזמן החיה הולך ומנתח פרמטרים שונים הילוך באופן אוטומטי, כגון כמו כף של הדפסה, כף של עוצמה, אורך צעד, עמידה שלב שלב הרצף, סווינג, סווינג, מהירות וכו במחקר זה, הראנו אזור הדפסה כפת העמידה יחיד לאחר המרת הנתונים האחוז שינוי בין contralateral שמאל לעומת חולשת כפת ממש האחוריות. לפיכך, תוצאה של 50% מצביע על כך גודל הדפסה הכפה ומשך באזור כף היד במגע עם הרצפה, בין הצד הימני והשמאלי הן אותו. בנוסף, ערכי נתונים התחתון מתקרב 0% מציינים כי גודל והן משך הקשר ירד ביד האחוריות חולשת לעומת הצד contralateral (ראה לוח ב' של איור 2, איור 3).
<ol><li>עבור והפיזיולוגי, לשמור העכברים בתוך המכשיר ניתוח הילוך 10 דקות פעם ביום תחילת 5 ימים לפני הניתוח CCI. 
	הערה: והרצתי ניתוח כולל להתאקלמות לבצע בדיקת בחושך.</li>
	<li>העכברים לחדר הבדיקה והרצתי ניתוח ומביא להתאקלם בכלוב בבית שלהם במשך לפחות 30 דקות לפני ילדי
	<ol><li>בכרטיסיה התקנה של התפריט של התוכנית, הגדר &#34; אורך שביל &#34; עד 30 ס מ, והינו ממוקם &#34; המקסימום לפעול משך &#34; 5 s ו &#34; המקסימום לפעול וריאציה &#34; ל- 50%.</li>
		<li>בחר מצלמה רשום מ &#39; ההתקנה &#39; על כרטיסיית &#39; תוכנית &#39; תפריט.</li>
		<li>בחר &#34; לפתוח את רכישת &#34; מ &#39; לרכוש &#39; לשונית של &#39; תוכנית &#39; תפריט.</li>
		<li>בעקבות הודעת המצב, לחץ &#39; הצמד רקע &#39; הלחצן כדי לצלם תמונת רקע של שביל ריק (קרי, ריק).</li>
	</ol></li> <li>לחץ &#39; להתחיל רכישת &#39; כפתור ומניחים עכבר על השביל; ההקלטה מופעלת באופן אוטומטי בהתאם לתנועת העכבר. 
	הערה: כאשר העכבר הולך בבירור לאורך השביל, התוכנית באופן אוטומטי מסווג את הצעד הזה כמו &#34; תואם להפעיל &#34; עם סמל ירוק. אם התוכנה לא הצליחו לזהות את טביעת הרגל, הנסיין תראה סמל אדום, עליך לחזור על ההקלטה. לפחות חמישה מסלולי תואם מוצלח יש צורך בניתוח.</li>
	<li>שאחרי הבדיקה, בחר &#39; לסווג את הרצפים &#39; מהכרטיסיה רכוש של &#39; תוכנית &#39; תפריט.</li>
	<li>בחר למסלולי עבור ניתוח ולחץ &#39; אוטומטי לסווג &#39; כפתור. 
	הערה: לאחר סיווג, כל הפרמטרים של סטטיסטיקות יישמר באופן אוטומטי הנסיין יכול למצוא את התוצאות על-ידי לחיצה על &#34; תצוגה להפעיל את הסטטיסטיקה &#34; בתפריט נתח.</li>
</ol>

<ol><li>Loeser, J. D., Treede, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Kyoto+protocol+of+IASP+Basic+Pain+Terminology%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The Kyoto protocol of IASP Basic Pain Terminology.</a> Pain. 137 (3), 473-477 (2008).</li>
<li>Colloca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17002(2017).</li>
<li>Vranken, J. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20021340">Mechanisms and treatment of neuropathic pain.</a> Cent Nerv Syst Agents Med Chem. 9 (1), 71-78 (2009).</li>
<li>DeLeo, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+neuropathic+pain+model%3A+sciatic+cryoneurolysis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of a neuropathic pain model: sciatic cryoneurolysis in the rat.</a> Pain. 56 (1), 9-16 (1994).</li>
<li>Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+segmental+spinal+nerve+ligation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat.</a> Pain. 50 (3), 355-363 (1992).</li>
<li>Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+behavioral+model+of+neuropathic+pain+disorders+produced+in+rats+by+partial+sciatic+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury.</a> Pain. 43 (2), 205-218 (1990).</li>
<li>Bennett, G. J., Xie, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peripheral+mononeuropathy+in+rat+that+produces+disorders+of+pain+sensation+like+those+seen+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man.</a> Pain. 33 (1), 87-107 (1988).</li>
<li>Dixon, W. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7387124">Efficient analysis of experimental observations.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 20, 441-462 (1980).</li>
<li>Bonin, R. P., Bories, C., De Koninck, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+up-down+method+%28SUDO%29+for+measuring+mechanical+nociception+in+rodents+using+von+Frey+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">A simplified up-down method (SUDO) for measuring mechanical nociception in rodents using von Frey filaments.</a> Mol Pain. 10, 26(2014).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J Neurosci Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Chen, H., Du, J., Zhang, Y., Barnes, K., Jia, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+Reliable+Gait+Evaluation+Method+for+Rodent+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishing a Reliable Gait Evaluation Method for Rodent Studies.</a> J Neurosci Methods. , (2017).</li>
<li>Kang, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinociceptive+Profile+of+Levo-tetrahydropalmatine+in+Acute+and+Chronic+Pain+Mice+Models%3A+Role+of+spinal+sigma-1+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antinociceptive Profile of Levo-tetrahydropalmatine in Acute and Chronic Pain Mice Models: Role of spinal sigma-1 receptor.</a> Sci Rep. 6, 37850(2016).</li>
<li>Huehnchen, P., Boehmerle, W., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+paclitaxel+induced+sensory+polyneuropathy+with+%26%2334%3BCatwalk%26%2334%3B+automated+gait+analysis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Assessment of paclitaxel induced sensory polyneuropathy with &#34;Catwalk&#34; automated gait analysis in mice.</a> PLoS One. 8 (10), e76772(2013).</li>
<li>Vrinten, D. H., Hamers, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27CatWalk%27+automated+quantitative+gait+analysis+as+a+novel+method+to+assess+mechanical+allodynia+in+the+rat%3B+a+comparison+with+von+Frey+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">'CatWalk' automated quantitative gait analysis as a novel method to assess mechanical allodynia in the rat; a comparison with von Frey testing.</a> Pain. 102 (1-2), 203-209 (2003).</li>
<li>Martinov, T., Mack, M., Sykes, A., Chatterjea, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+changes+in+tactile+sensitivity+in+the+hind+paw+of+mice+using+an+electronic+von+Frey+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring changes in tactile sensitivity in the hind paw of mice using an electronic von Frey apparatus.</a> J Vis Exp. (82), e51212(2013).</li>
<li>Ferland, C. E., Laverty, S., Beaudry, F., Vachon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gait+analysis+and+pain+response+of+two+rodent+models+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Gait analysis and pain response of two rodent models of osteoarthritis.</a> Pharmacol Biochem Behav. 97 (3), 603-610 (2011).</li>
<li>Mogil, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypolocomotion%2C+asymmetrically+directed+behaviors+%28licking%2C+lifting%2C+flinching%2C+and+shaking%29+and+dynamic+weight+bearing+%28gait%29+changes+are+not+measures+of+neuropathic+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">Hypolocomotion, asymmetrically directed behaviors (licking, lifting, flinching, and shaking) and dynamic weight bearing (gait) changes are not measures of neuropathic pain in mice.</a> Mol Pain. 6, 34(2010).</li>
<li>Ferreira-Gomes, J., Adaes, S., Castro-Lopes, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+movement-evoked+pain+in+osteoarthritis+by+the+knee-bend+and+CatWalk+tests%3A+a+clinically+relevant+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">Assessment of movement-evoked pain in osteoarthritis by the knee-bend and CatWalk tests: a clinically relevant study.</a> J Pain. 9 (10), 945-954 (2008).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

כיום, מדידה של allodynia מכני באמצעות חוטים פון פריי הוא הנפוצים ביותר בשיטה במודלים חייתיים כאב להפגין רגישות יתר חוש המישוש. כפי חייתיים כאב נאורופתיות המשיכו להיות מפותח, המתודולוגיה של הערכה לתפקוד חושי היה גם משופר8,9,10,15. בדוחות אלה, זה כבר הציע שלבצע שינויים אלה יכולים לספק תחליף שיטות בוגרים יותר מדויק, מהיר, ידידותי למשתמש. עם זאת, נתונים בשיטות אלה עדיין עלולים להגביל את הסובייקטיבי...

שינויים פתולוגיים של מערכת העצבים הנגרם על ידי הטראומה, תפקוד מטבולי, דלקת, זיהום, איסכמיה, או מחלות אוטואימוניות מדי פעם לגרום כאב נוירופטי, אשר מוגדר כאבים הנובעים כתוצאה ישירה של פגיעה או מחלה להשפיע על מערכת המגע1. כאב נוירופטי הוא בדרך כלל בלתי נסבל, למרבה הצער, משככי כאבים רגילים בדרך כלל אינם מייצרים מספיק כאב הקלה2. תכונה מרכזית של כאב נוירופתי מכיל ספונטנית ועוררו על-ידי גירוי כאבים (קרי, allodynia ו- hyperalgesia). Allodynia היא תגובה nociceptive המתרחשת לגירויים שאינם כואבים בדרך כלל, כגון במגע קל או גירוי חמים. Hyperalgesia מציין מענה כאב משופרת יתמודד גירויים מכניים ו/או תרמי3. למרות שתי תופעות אלה הן לפגוע אנושות איכות החיים של המטופל, allodynia מכני עורר על ידי גירוי חוש המישוש עדין הוא בתופעה הכי מרגיז כי מגע רך, קשה להימנע בחיי היומיום.
כדי לחקור את המנגנון הבסיסי ואת משככי כאבים חדשים לטיפול בכאב נוירופטי, המדידה המדויקת של התגובה לכאב הוא חיוני. מודלים בעלי חיים רבים של כאב נוירופתי פיתחו תגובות nociceptive באחוריים כף של האזור בגלל שלה נגישות גבוהה4,5,6,7. לכן, רוב הערכות תגובת כאב בוצעו על-פני plantar או הגבי הכפה האחוריות על-ידי החלת גירויים מכני באמצעות מכשירים מיוחדים, כגון חוטים פון פריי. אחת של השיטה השכיחה היא הלמעלה ולשנות את השיטה המתוארת על ידי דיקסון8 ו מאוחר יותר גירסאות9,10. עם זאת, ניסויים מאוד מיומנים, מנוסים הנדרשים לביצוע הבדיקה פון פריי, התוצאות עלולות להיות סובייקטיבי.
מערכת ניתוח הילוך אוטומטי לחקור והפרעות נוירולוגיות neuromuscular על ידי מדידת פרמטרים שונים להסתובב בחופשיות הזזת מכרסמים. במגוון של עצב פציעה חייתיים, מידת nociception ואת השפעת antinociceptive מספר טיפולים שניתן להעריכו ללא הוספת של כאב גירוי11,12,13, 14. מערכת ניתוח זו ניתן לזהות פרמטרים הילוך סטטיים ודינמיים, כגון: כף של אזור הדפסה (האזור של טביעת כף מלאה כי המגעים עם הרצפה), כף של אינטנסיביות (עוצמת הממוצע של אזור כף הרגל קשר איתם), סטרייד פיאנו (את אורך המרחק בין מיקומי רצופים של הכפה אותו), עמידת שלב (משך הזמן של הקרקע קשר עבור כפה האחוריות יחיד), רצף שלב (הסדר שבו ארבע הכפות מונחות על הרצפה), סווינג (משך השלב המכריע), וסובב מהירות (מחושב מ סטרייד פיאנו אורך משך סווינג והביע פיקסלים לשנייה). הנייר הזה מדגים את השימוש מערכת ניתוח ומספקת השוואה קצרה של נתוני הבדיקה פון פריי באמצעות כיווץ כרונית פגיעה (CCI) נוירופטי עכברים.

<table><tbody><tr><td>0.9% מלח</td><td>JW Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td>רכב לתרופות</td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק</td><td>BD Plastipak</td><td>300013</td><td>מכשיר הזרקה</td></tr><tr><td>2, 2, 2-tribromoethanol (97% טוהר)</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td>חומר הרדמה</td></tr><tr><td>2-מתיל-2-בוטנול (99% טוהר)</td><td>Sigma</td><td>152463</td><td>Solvent for 2, 2, 2-tribromoethanol</td></tr><tr><td>Catwalk מערכת ניתוח הליכה אוטומטית</td><td>Noldus</td><td>N / A</td><td>תוכנת ניתוח אוטומטית של הליכה אניאמל</td></tr><tr><td>Chromic catgut (עובי 4-0)</td> <td>AILEE</td><td>C442</td><td>Ligature לביצוע פגיעה כרונית בהיצרות בעצב הסיאטי</td></tr><tr><td>Gabapentin</td><td>Sigma</td><td>Y0001280</td><td>Analgeisc, משמש כתרופת בקרה חיובית במחקר זה</td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>F.S.T</td><td>11051-10</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>DAESHIN ELECTRONICS</td><td>M-303AT</td><td>ויסות טמפרטורת הגוף</td></tr><tr><td>עכבר ICR</td><td>Samtaco</td><td>N/A</td><td>חיית ניסוי</td></tr><tr><td>Mersilk (עובי 3-0)</td> <td>ETHICON</td><td>W598H</td><td>חומר תפר לסגירה כירורגית של העור</td></tr><tr><td>מיקרו-יתוש</td><td>FST</td><td>13010-12</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>מיקרו-מספריים</td><td>FST</td><td>14090-09</td><td>כירורגי מכשיר</td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>FST</td><td>12002-12</td><td>מכשיר כירורגי</td></tr><tr><td>Povidone Iodine</td><td>Firson</td><td>N/A</td><td>חומר חיטוי למניעת זיהום לאחר ניתוח</td></tr><tr><td>להב אזמל</td><td>FST</td><td>10010-00 (#10)</td> <td>מכשיר כירורגי לביצוע חתך</td></tr><tr><td>ידית אזמל</td><td>FST</td><td>10003-12</td> (# 3<td>) מכשיר כירורגי לביצוע חתך</td></tr><tr><td>חוטי פון-פריי</td> החוף <td>הצפוני</td><td>NC12775-99</td><td>מכשיר מדידה לבדיקת תפקוד חושי לגירוי מכני</td></tr></tbody></table>

אוטומטיות והרצתי ניתוח אצל עכברים עם פציעה כרונית הכיווץ

Automated Gait Analysis in Mice with Chronic Constriction Injury

הבדיקה פון פריי הוא שיטה קלאסית זה כבר בשימוש נרחב כדי לבחון את תפקוד חושי כאב נוירופתי חיות. עם זאת, יש כמה חסרונות כגון נתונים סובייקטיבית לבין הדרישה הנסיין מיומנים, מנוסים. עד כה, מגוון של שינויים שיפרו את שיטת פון פריי, אבל עדיין יש כמה מגבלות. דיווחים אחרונים הראו כי והרצתי ניתוח מייצרת נתונים אובייקטיביים ומדויקים יותר מהחיות נוירופתי. פרוטוקול זה מדגים כיצד לבצע ניתוח הילוך אוטומטי כדי לקבוע את מידת כאב נוירופתי בעכברים. אחרי כמה ימים של והפיזיולוגי, העכברים הורשו ללכת בחופשיות על רצפת זכוכית כדי להאיר את העקבות. לאחר מכן, כימות של עקבות של דהירה בוצעו באמצעות סרטוני וידאו עם ניתוח אוטומטי של פרמטרים הליכה שונים, כגון אזור כפת בזמן ההדפסה, להתנדנד, זווית כף היד, וכו '.
המטרה העיקרית של מחקר זה היא לתאר את המתודולוגיה של ניתוח הילוך אוטומטי ולהשוות אותם בקצרה עם נתוני הבדיקה חושית קלאסית באמצעות פילמנט פון פריי.

יש לבצע את הבדיקה פון פריי ואנו אוטומטית והרצתי ניתוח בעכברים CCI עד 10 ימים לאחר הניתוח CCI. לשם ניתוח סטטיסטי, מידות החוזרות ונשנות של דו כיוונית השונות (ANOVA) קובע הכולל אפקטים ולאחר ניתוח פוסט-הוק של Dunnett בוצע כדי לקבוע ערך p בין הקבוצות ניסיוני.
התוצאות המוצגות באיור 1 מצביעות על מסלול הזמן של נתוני מבחן פון פריי קלאסית. PWF (%) של עכברים CCI היה מוגבר 2 ימים לאחר הניתוח CCI ומתמשכ...

ההערכה המדויקת של תגובת כאב במודל בעלי חיים נוירופתי חיוני לחקור הפתופיזיולוגיה של כאב מחלות ולפתח משככי כאבים חדשים. אנו מציגים שיטה אובייקטיבית רגיש כדי לקבוע את תפקוד חושי למכרסמים הינד כף של מערכת ניתוח הילוך אוטומטי.

The von Frey test is a classical method that has been widely used to examine the sensory function of neuropathic pain animals. However, it has some ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לנתח אלודיניה מכנית של עכברים עם פגיעת התכווצות כרונית באמצעות מערכת ניתוח הליכה אוטומטית. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום חקר הכאב על ידי מדידת תפקוד חושי לאחר פגיעה עצבית היקפית במכרסמים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שמערכת הניתוח מהירה וקלה לשימוש והיא גם מעניקה אוטומטית פרמטרי הליכה שונים.לצורך מחקר זה, עכברי ICR זכרים במשקל 20 עד 25 גרם בתנאים סטנדרטיים למשך שבוע אחד לפחות. בחר עכברים על סמך המראה וההתנהגות שלהם. אין להשתמש בעכברים המציגים מראה או התנהגות חריגים כגון נשירת שיער, צלקות ופחות תנועה.באמצעות העכברים שנבחרו, החל מחמישה ימים לפני הניתוח, אוספים נתוני הליכה אוטומטיים על בסיס יומי כדי לקבל מדידה בסיסית. יום אחד לפני הניתוח בצע את בדיקת פון פריי עם חוט של גרם אחד על כפה אחורית כדי לקבל תגובה בסיסית. איזון התגובות בין קבוצת הפציעות לקבוצת הדמה.בכל יום מבחן הביאו עכברים לחדר הבדיקות ההתנהגותיות והתאקלמו בכלוב הביתי שלהם לפחות 30 דקות לפני הבדיקה. אחת ליומיים לאחר הניתוח, מדדו אלודיניה מכנית באמצעות מבחן פון פריי. הכניסו את העכבר לקופסת אקריליק שקופה ונקייה על רצפת רשת מתכת ותנו לו להתאקלם בקופסה למשך 30 דקות.לאחר מכן, יש למרוח בעדינות נימה של פון פריי במשקל גרם אחד על פני השטח של הכף האחורית המקבילה עד שהחוט מתכופף. חזור על דפוס גירוי זה 10 פעמים תוך התבוננות בנסיגת כפות. המתן לפחות 10 שניות בין גירוי.רשום את מספר המשיכות וציין את תדירותן לניתוח. כל יומיים, בצע גם את מבחן ניתוח ההליכה שיש לבצע בחושך. שוב, התאקלמו העכברים בחדר הבדיקה בכלוב הביתי שלהם למשך 30 דקות לפחות.כדי להגדיר את מכשיר ניתוח ההליכה, עבור אל בקרת התוכנה. תחת לשונית ההגדרה הגדר את אורך השביל ל-30 סנטימטרים, הגדר את משך הריצה המרבי לחמש שניות והגדר את וריאציית הריצה המקסימלית ל-50%לאחר מכן, בחר מצלמה רשומה מלשונית ההגדרה של תפריט התוכנית ולאחר מכן בחר רכישה פתוחה מלשונית הרכישה. לאחר הודעת המצב, לחץ על לחצן הצמד רקע כדי לצלם תמונת רקע של השביל הריק.כעת הניחו עכבר על השביל ואפשרו לו להתאקלם למכשיר למשך 10 דקות. יש לשטוף את המכשיר תמיד באלכוהול בין עכברים. לאחר שהעכבר הסתגל למכשיר, לחץ על כפתור התחל רכישה.ההקלטה מתחילה אוטומטית בהתאם לתנועת העכבר. כאשר העכבר עובר בבירור על פני השביל, התוכנית תסווג אוטומטית את הריצות התואמות עם סמל ירוק. אם התוכנה לא מצליחה לזהות את טביעות הרגליים, יידלק סמל אדום.לאחר איסוף לפחות חמש ריצות תואמות, בחר באפשרות סיווג הפעלות מהכרטיסייה רכישה בתפריט התוכנית. בחר איזו ריצה יש לנתח ולחץ על כפתור הסיווג האוטומטי. התוצאות נשמרות אוטומטית.לצפייה בתוצאות לחץ על הצג סטטיסטיקות הפעלה מתפריט הניתוח. מבחן פון פריי וניתוח הליכה אוטומטי שימשו להערכת עכברים שעברו את ניתוח CCI 10 ימים רצופים לאחר הניתוח. תדירות נסיגת הכפות עלתה יומיים לאחר הניתוח ונמשכה 10 ימים.ניתן להפחית השפעה זו באופן משמעותי על ידי זריקות יומיות של גבאפנטין לאחר הניתוח. באמצעות תוכנת ניתוח ההליכה ניתן להשוות את גודל טביעות הכפות האחוריות השמאלית והימנית. בדרך כלל האזורים זהים, מה שמסומן על ידי ערך של 50%.לניתוח CCI הייתה השפעה משמעותית על טביעת כפות הרגליים וניתן היה להפחית את ההשפעה הזו באופן משמעותי באמצעות גבאפנטין. תוכנת ניתוח ההליכה מסוגלת גם לקלוט את השינוי של משכי עמידה בודדים כאשר העכבר נושא משקל על כפה אחורית אחת בלבד. זה מחושב ומוצג כאחוז שינוי.מדד זה מראה את אותה השפעה עבור ניתוח CCI וטיפולי גבאפנטין. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להפעיל ולנתח מערכות ניתוח הליכה אוטומטיות כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של כאב נוירופתי במודלים של בעלי חיים כמו פגיעה כרונית בהתכווצות.

automated-gait-analysis-in-mice-with-chronic-constriction-injury

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

קנטית והרצתי ניתוח הליכה במישור sagittal התשואות מידע מאוד מדויק על איך מתבצעת התנועה. אנו מתארים את היישום של טכניקות אלה כדי לזהות הילוך חסרונות עבור עכברים נתון demyelination אוטואימונית בתיווך. שיטות אלה עשוי לשמש גם לאפיין הילוך גירעונות למודלים אחרים העכבר שמציעות ומכניקה לקוי.

המטוס Sagittal קנטית והרצתי ניתוח בעכברים C57BL/6 נתון MOG35-55 המושרה חיסון ניסיוני של דלקת המוח וחוט השדרה

במחקר זה, נדגים את השימוש קנטית והרצתי ניתוח המבוסס על הגחון המטוס הדמיה לעקוב אחר שינויים עדינים קואורדינציה, כמו גם את ההתקדמות של הקשורים ניוון מוחיים עם הגיל במודלים של העכבר (למשל, endophilin מוטציה קווים העכבר).

והרצתי ניתוח של ליקויים מוטוריים תלויי-גיל בעכברים עם הקשורים ניוון מוחיים

מוצג כאן הוא פרוטוקול לאסוף ולנתח הקינטיקה תלת ממדית של התנועה במכרסמים למחקרים פרה-קליניים.

3D ניתוח הילוך קימטי למחקרים פרה-קליניים במכרסמים

ניתוח טביעת רגל הוא חלופה בעלות נמוכה לניתוח הילוך ההילוך הדיגיטלי עבור החוקרים הפרעות בתנועה של עכברים. בשל המהירות שלה, פשטות, ופוטנציאל האורך, הוא אידיאלי עבור פנוטיפים התנהגותיים של מודלים של העכבר.

בעלות נמוכה ניתוח הילוך עבור פנוטיפים התנהגותיים של מודלים של עכבר של מחלות נוירוסקולריות

ניתוח הליכה אוטומטי הוא כלי אפשרי להערכת התאוששות תפקודית במודלים של מכרסמים של פגיעה בעצב היקפי ופגיעה בחוט השדרה. אמנם זה דורש רק התקנה אחת כדי להעריך את תפקוד הקטר במודלים ניסיוניים שונים, התאמה קפדנית קשה ורכה והכשרה של בעלי החיים הוא חשוב מאוד.

ניתוח הליכה אוטומטי כדי להעריך התאוששות תפקודית מכרסמים עם פגיעה בעצב היקפי או חבלה בחוט השדרה

אנו מספקים פרוטוקול להערכת התנהגות מוטורית באמצעות סוללת בדיקה התנהגותית בחולדות לאחר פציעת ריסוק עצבים סיאטית.

הערכה רב-גורמית של התנהגות מוטורית בחולדות לאחר פציעת ריסוק עצבית סיאטית חד-צדדית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מעקב/הערכה תלת-ממדיים של תנועה כדי לתאר שינוי בתנועת ההליכה של חולדות לאחר חשיפה לסביבה מדומה.

הבנה מקיפה של שינוי הליכה הנגרם על ידי חוסר פעילות במכרסמים

צינור ניסיוני לתיאור כמותי של דפוס הלוקומוטור של עכברים ההולכים בחופשיות באמצעות ארגז הכלים MouseWalker (MW) מסופק, החל מהקלטות וידאו ראשוניות ומעקב ועד ניתוח לאחר כימות. מודל פגיעה בחוט השדרה בעכברים משמש כדי להדגים את התועלת של מערכת MW.

שימוש בהליכון עכבר לכימות תפקוד לקוי של מנוע עכבר במודל עכבר של פגיעה בחוט השדרה

פרוטוקול זה מקים צינור הערכה קינמטי של עכברוש אחורי באמצעות בדיקת הליכון ללא סימן עם תיוג אוטומטי רב-מפרקי מונע למידה עמוקה, המאפשר כימות תנועה שניתן לשחזר.

מעקב סינכרוני רב-מפרקי מבוסס למידה עמוקה לכימות אובייקטיבי של קינמטיקה של תנועת גפיים אחוריות בעכברים

פיתחנו תוכנת מחשב לנתח מורפולוגיה עצביים. בשילוב עם שני כלים הקיימים ניתוח קוד פתוח, התוכנית שלנו מבצעת ניתוח Sholl וקובע את מספר neurites, נקודות הסניף, וטיפים neurite. הניתוחים מבוצעים כך שינויים מקומיים במורפולוגיה neurite ניתן לצפות.

ניתוח אוטומטי של מורפולוגיה Sholl העצבית סרוקים בקני מידה מרובים

למדו ניתוח אוטומטי של הליכה לבחינת אלודיניה מכנית בעכברים עם פציעת עצב כרונית. שיטה זו מאפשרת הערכה אובייקטיבית של תפקוד תחושתי ומנגנוני כאב במודל נוירופתי.

אוטומטיות והרצתי ניתוח אצל עכברים עם פציעה כרונית הכיווץ

גלה סרטונים נוספים