Stereotactically מונחה אבלציה של קליפת השמיעה עכברוש, וכן לוקליזציה של הנגע במוח

המטרה הכוללת של הליך זה היא לתאר את האבלציה הסטריאוטקטית של קליפת המוח השמיעתית והשימוש במפת קואורדינטות כדי למקם את הנגע על פני השטח של המוח. שיטה זו יכולה לעזור לחוקרי מדעי המוח השמיעתיים להתייחס לתפקיד קליפת המוח במסלול בתפיסת הצליל. כמו גם המנגנונים והפלסטיות של מיקום הקו.

היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת חשיפה כירורגית ואבלציה של קליפת המוח השמיעתית באמצעות שיטות בסיסיות הניתנות להתאמה על ידי כל חוקר. אז השיטה הזו יכולה להיות שימושית בתחום מדעי המוח השמיעתי, היא יכולה להיות מיושמת גם במערכות אחרות כמו הראייה והסומטוסנסורי. ניתן להשתמש בשיטה זו גם כדי לחקור פגמים שאבלציה חד צדדית של קליפת המוח השמיעתית מפעילה באזורים אחרים בקליפת המוח.

הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שזיהוי ותרגום נכון של הקואורדינטות הסטריאוטקסיות לעצם הטמפורלית חיוני לאיתור מדויק של קליפת המוח השמיעתית. כדי להתחיל בהליך זה, הנח את החולדה המורדמת על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת גופה. לאחר מכן ייצב את ראש החיה במסגרת סטריאוטקסית באמצעות שני מוטות אוזניים ומוט נשיכה.

לגלח את הקרקפת ולחטא את אזור הניתוח עם פובידון-יוד. בעזרת אזמל, בצע חתך לאורך קו האמצע כדי לחשוף את הגולגולת ולהחזיר את הפריאוסטאום המכסה את פני הגולגולת. לאחר מכן, השתמש בקצה כותנה סטרילי כדי להסיר בעדינות את כל הדם המכסה את פני הגולגולת.

על מנת לדמיין את ברגמה, למבדה ואת הקו הבין-אוזני, בצע חתך בשריר הטמפורלי ליד החדרתו הגבית על הגולגולת בעזרת אזמל. לאחר מכן, משוך את השריר החוצה באמצעות מחט וחומר תפר וקבע את חומר התפר למסגרת הסטריאוטקטית על מנת לחשוף את העצם הטמפורלית. הורד לאט לאט מחט ישרה סטרילית עד שהיא נמצאת ממש מעל פני הגולגולת, כך שקצה המחט מוגדר לאפס בין-אוזני.

הגדר נקודה זו כאפס. לאחר מכן, כוון את ה-AC באמצעות ארבע נקודות. לאחר מכן הורד את המחט ימינה מעל העצם הטמפורלית כדי לדמיין כל אחת מארבע הנקודות הללו.

סמן את הנקודות בטוש על העצם הטמפורלית וחבר אותן על מנת לצייר מלבן. המלבן ישמש כמדריך לפתיחת חלון בעצם. בהליך זה, פתח את החלון באמצעות מקדחה חשמלית ומקדחה קטנה.

קדחו את היקף המלבן ב 8, 000 סל"ד עד שהעצם מתמסרת. יש לקרר את משטח הקידוח על ידי שטיפתו במי מלח סטריליים קרים כדי למנוע נזק למבנים תת-קורטיקליים. כאשר העצם נכנעת, היזהר לא לקדוח לתוך המוח.

כאשר הגבולות מאבדים, משוך את עצם הכיסוי בעזרת מלקחיים עדינים ואחסן אותה במי מלח סטריליים קרים. בעזרת מיקרוסקופ כירורגי, חותכים בעדינות את קרומי המוח בעזרת סכין מיקרוכירורגית ומסירים אותם באמצעות שני מלקחיים מחודדים. אם מתרחש דימום, יש לשטוף את מקום הניתוח במי מלח סטריליים קרים.

לאחר מכן, שאפו בעדינות את ה-AC באמצעות מכשיר יניקה כירורגי המחובר למחט סטרילית בקצה קהה בגודל 20. שאפו רק את שש השכבות בקליפת המוח, ולא את החומר הלבן שמתחתיו. נקודה זו היא קריטית ויש לבצע אותה בזהירות רבה.

בסיום השאיבה יש לכסות את מקום הניתוח בעצם שחולצה ולמרוח גזה המוסטטית נספגת. תן לשריר הטמפורלי לשחזר את מקומו המקורי ולאחר מכן תפר את העור באמצעות קליפסים לפצע. לאחר מכן, מרחו משחה אנטיביוטית על הפצע.

לאחר מכן, יש להזריק בופרנורפין תת עורי בחלק האחורי של החולדה כמשכך כאבים, שעה ושמונה שעות לאחר סיום הניתוח. שמור את החיה על כרית החימום עד שתתעורר והחזיר אותה לכלוב הדיור שלה להתאוששות. לאחר השלמת המחקר שבוצע עם חולדה עם AC, יש להרדים אותה באופן סופי על ידי הזרקה תוך-צפקית של 0.1 מיליליטר נתרן פנטוברביטל.

לאחר ביצוע שפע תוך לבבי של תמיסת רינגר ופורמלדהיד, הסר את העור והשריר מהראש כדי לחשוף את הגולגולת. בעזרת מספריים של ספנסר, בצע חתך רוחבי לתוך עצם המסלול. לאחר מכן, הסר את החלק האחורי של הגולגולת והשתמש ב-rongeurs כדי לחתוך לאורך הקצוות העליונים של הגולגולת כדי לחשוף את המוח.

היזהר לא לפגוע במוח. לאחר שהמוח נחשף, הסר בזהירות את הדורה מאטר באמצעות מלקחיים מחודדים. השתמשו באצבע כדי לגרוף בעדינות את המוח ולהגביה אותו.

לאחר מכן הרם את המוח וחתוך את העצבים עד שהוא חופשי. לאחר מכן, טבלו את המוח בתמיסת פורמלדהיד ואחסנו אותו בארבע מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לאחר הקיבוע, הנח בזהירות את המוח לתוך מטריצת מוח של חולדה סגיטלית, וחשוף את פני השטח הצדדיים של המוח.

הנח מצלמה 21 סנטימטרים מעל פני קליפת המוח באמצעות מחזיק מצלמה. לאחר מכן, בחר את מצב צילום הסופר-מאקרו וצלם תמונה של פני השטח של המוח. לאחר מכן, באמצעות תוכנת עורך תמונות, פתח את התמונות והקטן אותן ב-50%זהה את הפניות Bregma, Lambda ו-Interaural zero וסמן את מיקומן בתמונות.

צייר את קווי המתאר של האבלציה מעל התמונה הצדדית של המוח. ייבא את מפת הקואורדינטות שבה נמצאים האזורים הראשוניים והמשניים של קליפת המוח השמיעתית לקובץ של תוכנית העורך. לאחר מכן לחץ על המפה וגרור אותה כדי להניח אותה על גבי התצלום הצדדי של המוח המנותק.

הפוך את ההפניות של ברגמה ולמבדה של מפת הקואורדינטות לחופף להפניות ברגמה ו-IA המזוהות בתמונה של המוח הצדדי. לאחר מכן, השתמש בסדק הרינה כהתייחסות כדי להתאים את תמונת המוח למפה ולגרום להם לחפוף. חשוב לוודא שהחומר הלבן שלם.

ניתן לעשות זאת על ידי צביעה חיסונית ראשונית של החלק הסדרתי של המוח. כדי להדגים את יעילות הפרוטוקול שלנו, שמרנו על שלוש החולדות שעברו AC-ablat שרדו במשך שבוע אחד ולאחר מכן אספנו את השבלול כדי לחקור את השינויים בביטוי של תת-יחידות ה-AMPA הרלוונטיות ביותר הקיימות בשבלול הבוגר, GluA2 ו-GluA3 על ידי qPCR. ההשוואה בין התעתיקים של חולדות שעברו AC-ablat לבין חיות ביקורת דמה הראתה ויסות נמוך יותר עבור GluA2 ו-upregulation עבור GluA3 בשני השבלולים, מה שעולה בקנה אחד עם המחקר הקודם שלנו.

בעת הניתוח, חשוב לזכור שלושה דברים: לקדוח את העצם הטמפורלית במהירות הנמוכה ביותר במינימום לחץ, להסיר בזהירות את קרומי המוח כדי למנוע שבירת כלי דם, ולהגביל את השאיפה לחומר האפור. לאחר השליטה, החשיפה הכירורגית והאבלציה של קליפת המוח השמיעתית יכולה להיעשות היא 45 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות פיזיולוגיות, התנהגותיות ו/או אימונוציטוכימיות על מנת לענות על שאלות נוספות, כמו כיצד היעדר קליפת המוח השמיעתית משפיע על תפקודן של מערכות חישה נוספות.