Name: מגה-פלקס ציטוקין פרופיל של העכבר מגורה Splenocytes באמצעות פלטפורמה מבוססת-חרוז Cytometric מתכלה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: למדו פרופיל ציטוקינים מרובים בסופרנטנטים מתרביות תאים של ספלנוציטים מעכברים מגורים באמצעות אימונו-אסיי מבוסס חרוזים וציטומטריית זרימה. שיטה זו מאפשרת ניתוח פרופילים ייחודיים של מערכת החיסון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצה להודות התרומות של סמנים ביולוגיים, חיסונית-מבחני צוות פיתוח מוצר לפיתוח וזמינותו. בנוסף, ברצוננו להודות Vigene טק בע מ על מאמציהם שיתופי בעיצוב חבילות תוכנה לניתוח נתונים.

<ol><li>Stanley, A. C., Lacy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathways+for+cytokine+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Pathways for cytokine secretion.</a> Physiology (Bethesda). 25, 218-229 (2010).</li>
<li>Nicola, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+pleiotropy+and+redundancy%3A+a+view+from+the+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Cytokine pleiotropy and redundancy: a view from the receptor.</a> Stem Cells. 12, (1994).</li>
<li>Miyajima, A., Hara, T., Kitamura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+subunits+of+cytokine+receptors+and+the+functional+redundancy+of+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">Common subunits of cytokine receptors and the functional redundancy of cytokines.</a> Trends Biochem Sci. 17, 378-382 (1992).</li>
<li>Costantini, S., Castello, G., Colonna, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Cytokinome%3A+a+new+challenge+for+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformation%22%5BJournal%5D)">Human Cytokinome: a new challenge for systems biology.</a> Bioinformation. 5, 166-167 (2010).</li>
<li>Capone, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+Cytokinome+Profile+Evaluation%3A+A+Tool+to+Define+New+Diagnostic+and+Prognostic+Markers+of+Cancer+Using+Multiplexed+Bead-Based+Immunoassays%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Serum Cytokinome Profile Evaluation: A Tool to Define New Diagnostic and Prognostic Markers of Cancer Using Multiplexed Bead-Based Immunoassays.</a> Mediators Inflamm. , 3064643(2016).</li>
<li>Schett, G., Elewaut, D., McInnes, I. B., Dayer, J. M., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+cytokine+networks+fuel+inflammation%3A+Toward+a+cytokine-based+disease+taxonomy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">How cytokine networks fuel inflammation: Toward a cytokine-based disease taxonomy.</a> Nat Med. 19, 822-824 (2013).</li>
<li>Tse, E., Kwong, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+lymphoma%3A+Microenvironment-related+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">T-cell lymphoma: Microenvironment-related biomarkers.</a> Semin Cancer Biol. 34, 46-51 (2015).</li>
<li>Reale, M., Greig, N. H., Kamal, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+chemo-cytokine+profiles+in+Alzheimer%27s+and+Parkinson%27s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Mini+Rev+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Peripheral chemo-cytokine profiles in Alzheimer's and Parkinson's diseases.</a> Mini Rev Med Chem. 9, 1229-1241 (2009).</li>
<li>Vistnes, M., Christensen, G., Omland, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+cytokine+biomarkers+in+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">Multiple cytokine biomarkers in heart failure.</a> Expert Rev Mol Diagn. 10, 147-157 (2010).</li>
<li>Gobel, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+coagulation+factor+XII+drives+adaptive+immunity+during+neuroinflammation+via+CD87-mediated+modulation+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Blood coagulation factor XII drives adaptive immunity during neuroinflammation via CD87-mediated modulation of dendritic cells.</a> Nat Commun. 7, 11626(2016).</li>
<li>Palm, A. K., Friedrich, H. C., Kleinau, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nodal+marginal+zone+B+cells+in+mice%3A+a+novel+subset+with+dormant+self-reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Nodal marginal zone B cells in mice: a novel subset with dormant self-reactivity.</a> Sci Rep. 6, 27687(2016).</li>
<li>Yu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Bcl11b+is+specifically+expressed+in+group+2+innate+lymphoid+cells+and+is+essential+for+their+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Bcl11b is specifically expressed in group 2 innate lymphoid cells and is essential for their development.</a> J Exp Med. 212, 865-874 (2015).</li>
<li>Pelly, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-4-producing+ILC2s+are+required+for+the+differentiation+of+TH2+cells+following+Heligmosomoides+polygyrus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-4-producing ILC2s are required for the differentiation of TH2 cells following Heligmosomoides polygyrus infection.</a> Mucosal Immunol. 9, 1407-1417 (2016).</li>
<li>LEGENDplex Multiplex Assays. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.biolegend.com/legendplex">https://www.biolegend.com/legendplex</a> (2017).</li>
<li>Autieri, M. <a target="_blank" href="https://www.hindawi.com/journals/isrn/2012/987629/">Pro- and anti-inflammatory networks in atherosclerosis.</a> ISRN Vascular Medicine. 2012, (2012).</li>
<li>West, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+cytokine+networks+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Emerging cytokine networks in colorectal cancer.</a> Nat Rev Immunol. 15, 615-629 (2015).</li>
<li>Becher, B., Spath, S., Goverman, J. <a target="_blank" href="http://www.nature.com/nri/journal/v17/n1/full/nri.2016.123.html">Cytokine networks in neuroinflammation.</a> Nat Rev Immunol. 17, 49-59 (2017).</li>
</ol>

המחברים הם מועסקים על ידי BioLegend, אשר מייצרת את ריאגנטים המתואר בכתב היד. Vigene טק בע מ פיתחה את התוכנה ניתוח נתונים של LEGENDplex המשמש לניתוח נתונים המופקים וזמינותו המתואר בכתב היד.

התבנית assay שמתואר פרוטוקול זה יכול לספק כימות חזקים של המתווך מסיסים פרופילים בדגימות ביולוגיות שסופקו הנסיין יש מעבדה טכניקה ונדבקת הפרוטוקול המומלץ.
ישנם מספר שלבים מרכזיים שיש לבצע על מנת להבטיח תוצאות אמינות. קודם כל, הסטנדרטים רקומביננטי תתאפשר צריך להשרות במאגר assay במשרה מלאה מומלץ, ואחרי בדילול רק צינורות פוליפרופילן צינורות פוליסטירן יכול לקדם את דבקותה של החלבונים לקיר של הצינורות, אשר יכול להוביל אותות נמוכה בעת יצירת העקומה סטנדרטי. שנית, ראוי רועדת בזמן הדגירה צעדים הוא קריטי. בלי עצבנות נכונה, מאפייני איגוד של חרוזים assay יכול להיות קשות הפריע. בנוסף לכך, הכביסה הנכונה בין השלבים הדגירה נדרש גם. הנסיין לוודא כי עודף ריאגנטים יוסרו מן הבארות לפני התחלת השלב בפרוטוקול. חייב להיות מוטבת מכשירים הגדרות עבור cytometer זרימה המשמש לחקור את החרוזים assay גם כן. בפרט, PMT הגדרות התוקף שתישמר כדי להבטיח הפרדה נאותה חרוז וטווחים דינמי רחב על העיקולים סטנדרטי. סוף סוף, רגע לפני שעוברים ניתוח על cytometer, חרוזים חייב להיות vortexed כדי להבטיח הבולם תקין וכדי למנוע היווצרות של אגרגטים אשר יכול להטות את תוצאות.
פרוטוקול זה פוטנציאלי יכול להיות שונה כדי לנתח רקמת homogenates, כמו גם את סוגי דגימה שנדונו בכתב היד, בתנאי החוקר הוא מוכן למטב את פרוטוקול פירוק שלהם לפני ביצוע מבחני צלחת גדולה, מלאה. הטכניקה בפועל כמובן משתנה בהתאם לסוג הרקמה; אולם, באופן כללי הפרוטוקול צריך להשתמש מאגר ה-pH נייטרלי המכיל פיזיולוגיים ריכוזי מלחים יוניים, ללא חומרים כימיים denaturing, רצוי ללא חומרי ניקוי. אם מה שהוא עושה חייב לשמש, יש לשמור ריכוזים דטרגנט ללא יונית לכל הפחות (למשל לא יותר מ 1%). המאגר צריך להכיל גם מעכבי פרוטאז מספיקות כדי למנוע השפלה הפרוטאוליטי של חלבונים היעד. ללא קשר פרוטוקול פירוק שמשמש, כדאי centrifuged את ההכנות האחרונות להסיר את החלקיקים לפני ניתוח.
בנוגע למגבלות assay, ריכוזי analyte מטרות סוגי דגימה ביולוגית יכול להשתנות במידה רבה. על מנת לכמת כראוי analyte ריכוזים, הם חייב ליפול בתוך הערכים העליונים והתחתונים עבור העקומה סטנדרטי. אקסטרפולציה של ערכים של העקומה אינה בהכרח אמין ואני לא ממליצה. החוקרים ולכן חייב למטב דילולים שלהם דגימות מסוימת בניסויים פיילוט לפני הפעלת וזמינותו של פלייט-מלא. בנוסף, הכנת דגימות ביולוגיות. זהירות כדי להיות לבדיקה הוא בעל חשיבות עליונה להצלחה של פורמט זה וזמינותו. דוגמאות הן lipemic, hemolyzed או מכילים חלבון פסולת להשפיע את האינטראקציות נוגדן אנטיגן המגדירים לעקרון הליבה של זה מתכלה, רינדור לתוצאות uninterpretable.
זה וזמינותו היא משמעותית ביחס שיטות קיימות כימות מכמה סיבות. מתי יפעל כראוי, התבנית assay יכול quantitate analytes עד 13 מתוך מדגם שימוש באמצעי אחסון עד כה קטנים יותר יידרשו כדי לנתח את הדגימה באמצעות מבחני אליסה מסורתי. תבנית זו assay גם אינו דורש מכשור ייעודי על מנת לבצעו. זהו יתרון לעומת אחרים immunoassays מבוססי חרוז זמינים מסחרית כמו וזמינותו ניתן להפעיל באמצעות מספר כלשהו של זרימה נפוץ cytometers.
חקירה מדעית התפקיד שיחק על ידי גורמים מופרשים ציטוקינים רשתות בריאות, מחלות מתרחב. התבנית assay תיאר כתב יד זה יכול להיות כלי רב ערך עבור חוקרים המבקשים להכיר את התופעות רבת ומורכבים. תוכניות מחקר ביו פעיל מתחילים לחקור את התפקיד של ציטוקין רשתות לא רק אזורים כגון מוכללת דלקת6, אלא גם בתוך ההקשר של מצבי מחלה ספציפית כגון טרשת עורקים, סרטן, neuroinflammation 1516,,17. אין ספק, החקירה ימשיכו לגדול באזורים אלה מתרחב החיפוש אחר הריפוי לטפל אלה מצבים כרוניים. הצורך כימות מדויק ואמין של המתווכים מסיסים הקשורים עם מחלות אלו יישארו עדיפות מחקר ביקורתי.

בתפקיד שלהם כמו מולקולות איתות מסיסים, ציטוקינים מתווכים התהליכים multifactorial ומתואמת במיוחד המפקחים על תגובות חיסוניות המארח. הם באים לידי ביטוי בכל שלבי תהליך דלקתי, מייזום לרזולוציה, ולווסת את רשת באינטראקציה מורכבת הכוללת סינתזה משלהם וזו של קולטנים הסלולר שלהם1. רשת תקשורת זו היא שכבתית עם המורכבות שהוא מעבר הגומלין סינרגטי או אויבת שעשויים להתקיים בין רכיבים בודדים. אכן, ציטוקינים רבים ידועים לחלוק פונקציות מיותרות או לפחות חופפים באופן חלקי2,3.
גישות ביולוגיה מערכות משולבות בו זמנית לכמת analytes ציטוקין מרובים כיום מספקים הבנה מקיפה יותר ויותר של cytokinomes ייחודי זה שננהל את תגובות מערכת החיסון שבבסיס המחלה מרובים מדינות4,5. מדינות אלה מחלות נע בין דלקת כללית סרטן, תנאים נוירו-ניוונית של מחלות לב וכלי דם6,7,8,9.
רשתות כאלה ציטוקין יכולה להיחקר ביעילות באמצעות LEGENDplex מבוססי חרוז immunoassays. מבחני אלה מבוססים על אותו עיקרון כמו כריך Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (אליסה), והשתמש פלורסצנטיות מקודד microspheres עם נוגדנים הלכידה המחוברים covalently פני השטח שלהם. נוגדנים אלה הם ותשמרו על פני שטחים הרבה יותר קטן מאשר אלה הנדרשים על-ידי תבניות אליסה מסורתית. דבר זה מאפשר כזה מבחני להתבצע עם הרבה פחות נפח דגימה, בעוד באותו הזמן הפחתת שאינם ספציפיים מחייב מתן מרובב ניתוח של מספר analytes.
וזמינותו שמתואר פרוטוקול זה מנצל את הטכנולוגיה הזו כדי quantitate עד 13 מטרות בו זמנית. נתונים assay זו יכולה להיות מושגת באמצעות מגוון רחב של זרימה זמין נפוץ cytometers, בניגוד מבחני זמינים אחרים לא דורשת השימוש במכשור ספציפי assay ייעודי. עם קטלוג המתרחב של לוחות analyte מאומתים, מבחני אלה היו בשימוש מספר מחקר ביו-רפואי שוטף פרויקטים10,11,12,13.
כדי להדגים את נוחות ואת השירות של הפורמט assay, בניסוי זה שאנו משתמשים בעכבר כדי המסייע ציטוקין פאנל כדי quantitate 13 להפריד בין ציטוקינים ריכוזים של תרביות רקמה supernatants המתקבל splenocytes עכבר תרבותי תחת מרובות תנאים מופחתים. בנוסף תרביות רקמה supernatants, וזמינותו זו גם ניתן לבצע באמצעות הדוגמאות סרום או פלסמה.

<table><tbody><tr><td>צנטריפוגה Allegra 6R עם מתאם מנשא MICROPLUS</td><td>בקמן קולטר</td><td>366816</td><td>עבור מבחני LEGENDplex מופעל במיקרו-צינורות, צלחת 96 בארות V או U-bottom (אופציונלי)</td></tr> <tr><td>LEGENDplex Mouse T עוזר פאנל ציטוקינים</td><td>BioLegend</td><td>740005</td><td>Multiplex Immunoassay (13-plex)</td></tr> <tr><td>נגד עכבר CD3&epsilon; נוגדן</td><td>BioLegend</td><td>100314</td><td>Clone 145-2C11, אנדוטוקסין נמוך, פורמט נטול אזיד</td></tr><tr><td>נוגדן CD28 נגד עכבר</td><td>BioLegend</td><td>102112</td><td>Clone 37.51, אנדוטוקסין נמוך, פורמט נטול אזיד</td></tr><tr><td>משאבת ואקום</td><td>EMD Millipore</td><td>WP6111560</td><td>לבדיקות LEGENDplex באמצעות לוחות סינון (מומלץ)</td></tr> <tr><td>סעפת ואקום</td><td>EMD Millipore</td><td>MSVMHTS00</td><td>לבדיקות LEGENDplex באמצעות לוחות סינון (מומלץ)</td></tr> <tr><td>מאגרי ריאגנטים חד פעמיים סטריליים</td><td>פישר Scientific</td><td>07-200-130</td><td>או שווה ערך</td></tr><tr><td>צינורות פוליפרופילן MicroFACS</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>11-842-90</td><td>עבור מבחני LEGENDplex מופעלים במיקרו-צינורות, צלחת 96 בארות V או U-bottom (אופציונלי)</td></tr> <tr><td>ערכת פיפטה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-388-100</td><td>ארבעה גדלי פיפטות (0.2-2& מיקרו; L, 2-20 ומיקרו; L, 20-200&מיקרו; L, 100-1000& L)</td></tr> <tr><td>פיפטה פישר מדעית רב-ערוצית</td><td></td><td>FA10011G</td><td>המסוגל לחלק 5 &mu; L עד 200 &mu; L</td></tr><tr><td>מיקרופלייט שייקר</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>88880023</td><td>או שווה ערך</td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>75002410</td><td>או מקביל</td></tr><tr><td>צינורות FACS</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC9885747</td><td>12 x 75 מ"מ תחתית עגולה</td></tr><tr><td>PMA (פורבול 12-מיריסטאט 13-אצטט)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>ליפופוליסכריד (LPS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-8274</td><td>Escherichia coli O26:B6</td></tr><tr><td>Ionomycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I0634</td><td></td></tr><tr><td>Branson B200 מנקה אולטרסאונד</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z305359</td><td>או שווה ערך</td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z666505</td><td>1.5 מ"ל צינורות פוליפרופילן</td></tr><tr><td>זרימה ציטומטר</td><td>שונים</td><td></td> <td>שוניםציטומטר מצויד בלייזר יחיד (488 ננומטר כחול) או שני לייזרים (488 ננומטר כחול או 532 ננומטר ירוק + 633 ננומטר אדום) המסוגל לקרוא אורכי גל פליטה ב-575 ננומטר ו-660 ננומטר</td></tr><tr><td>96 בארות פלטת פוליפרופילן</td><td>VWR</td><td>82050-662</td><td>עבור מבחני LEGENDplex מופעל במיקרו-צינורות, צלחת 96 בארות V או U תחתונה (אופציונלי)</td></tr></tbody></table>

מגה-פלקס ציטוקין פרופיל של העכבר מגורה splenocytes באמצעות פלטפורמה מבוססת-חרוז cytometric מתכלה

Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform

Immunoassays מבוססי חרוז להעסיק אותו עיקרון כמו כריך immunoassays. לכידת חרוזים, אשר יכול להיות מובחן על-ידי גודל ועוצמת קרינה פלואורסצנטית allophycocyanin פנימי (APC), הן מצומדת כדי נוגדנים ספציפיים analyte מסוים. בשלב הבא, פאנל הנבחר של לכידת מוגדר חרוז ערכות מודגרת עם דגימה ביולוגית המכילה analytes יעד ספציפי הנוגדנים לכידת. זיהוי נוגדנים biotinylated קוקטייל נוסף, מה שמוביל להיווצרות לכידת חרוז-analyte-זיהוי נוגדנים כריכים.
לבסוף, streptavidin-phycoerythrin (SA-PE) נוסף, אשר נקשר biotinylated זיהוי נוגדנים, מתן אות ניאון עוצמות בפרופורציה כמות analyte מאוגד. PE ניאון האות של אזורים ספציפיים analyte חרוזים זה לכמת באמצעות cytometry זרימה, ריכוזי analytes מסוים נקבעים באמצעות תוכנת ניתוח נתונים ועקומת סטנדרטי המופקים וזמינותו.
בניסוי זה, אנו משתמשים בעכבר T helper ציטוקין פאנל בו זמנית לכמת את הריכוז של מטרות ציטוקין נפרד 13 supernatants תרביות רקמה שנאסף העכבר splenocytes בתרבית בתנאים מופחתים שונים.

פרוטוקול זה מדגים איך פלטפורמה מבוססת-חרוז מתכלה יכול לשמש בו זמנית quantitate ציטוקין פרופילים של דגימות ביולוגיות באמצעות cytometer של זרימה. הדגימות הביולוגיים בשימוש בדוגמה זו היו תא supernatants התרבות של splenocytes העכבר זה היה בעבר מודגרות בתנאים הפעלת שונים, למרות התבנית assay אומתה גם לשימוש עם הדוגמאות סרום או פלסמה.
הנתונים המופקים וזמינותו משמשים לבניית עקומות סטנדרטי עבור כל analytes מרובבת בלוח. התוכנה ניתוח נתונים מסווג את כל analyte מסוים בהתבסס על גודל חרוז ייחודי APC בעוצמה, מכמת אותם באמצעות כתב PE. טווחים דינאמיים, כמו גם את רגישות וזמינותו מודגמות כאשר המותוות בקנה מידה יומן-יומן איור2 א. התוכנה משתמשת בנתונים assay וסיפק באלגוריתם התאמה 5-פרמטר עקומה כדי לחשב במדויק לא רק את ריכוזי analytes המשתמש דגימות ביולוגיות, אלא גם את הגבולות של זיהוי הן גבוהות ונמוכות בסוף כל רגיל עקומות (טבלה 1 ). התבנית שמתואר פרוטוקול זה מספק גם דיוק assay חזקה מאוד. איור 2B ו 2 ג נתונים מוצגים המתארים את ההשתנות אינטרה-וזמינותו של כל analyte. שני ריכוזים חלבון תקן נפרד (גבוה ונמוך) נותחו ב assay אחד עם משכפל 16 עבור כל דגימה. איור 2C ו- 2D לייצג ההשתנות הבין-וזמינותו של היעד analytes בין שלושת מבחני עצמאית. כמו עם הניסויים דיוק אינטרה-assay, גבוה ונמוך ריכוזים סטנדרטי נותחו עם 3 משכפל בכל אחד מן הניסויים עצמאית. השתנות מינימלי ירידה בריכוז מחושב של חלבונים היעד ברור לחלוטין
כדי להדגים את התועלת של מבחני cytometric מבוססי חרוז בחקירתו של פרופילי ביטוי ציטוקינים, העכבר splenocytes היו מודגרות בתנאים הפעלת שונים. בנוסף פקד unstimulated, התאים היו מתפשט גם עם התקליטים, נוגדנים anti-CD3/אנטי-CD28, או phorbol פעילים-12 13-אצטט ionomycin. תא תרבות supernatants נאספו 48 שעות מאוחר יותר, לבדיקה באמצעות לוח ציטוקין העוזר של העכבר כדי. כמת תוצאות ניסוי זה מוצגים באיור 3, והוא תחום בבירור ההשפעה של גירוי תנאים על ריכוזי ציטוקין.
הממצאים המתוארים לעיל אופייניות, כל עוד הנסיין יש מעבדה טכניקה כדלקמן פרוטוקול assay שסופקו. מקורות של שגיאה בתבנית זו assay יכול להיווצר סטיות בתקופות דגירה, ריאגנט כרכים, הכביסה, או הגדרות PMT ב cytometer זרימה להשתמש בה כדי לנתח את הדגימות. איור 4A פיזור מגרש מ assay מוצלחת מראה 2 אוכלוסיות נפרדות חרוז מוגדרים בבירור. זה יכול בניגוד ל 4B איור, שבו הדבקות כביסה ופרוטוקול המסכן הובילו אגרגטים חרוז אשר לטשטש שתי האוכלוסיות. בנוסף, כפי שמעידים ההריסות ברביע השמאלי התחתון, cytometer הכולל אירועים יוצאו עבור ניתוח במקום התבנית המועדפת מגודרת אירועים בלבד. Cytometer ראוי להגדיר חיוני להפקת נתונים אמינים ב assay הזה. ב- PMT המתאים באיור 4C לאפשר הגדרות הרזולוציה של כל אחד analytes 6 בערוץ סיווג APC. הגדרות PMT תגרום לנתונים הדומה לזה המוצג בתוך 4D איור שבו התעלה APC יש חרוז אוכלוסיות בעלות עוצמות סיווג חופפים. זה יהפוך וזמינותו מאז זה יהיה בלתי אפשרי לחשב ריכוזים analyte ללא אוכלוסיות ברורה של חרוזים וזמינותו.
<img alt="לינאריות ושונות של כימות ציטוקינים; גרפים; ניתוח שונות תוך/בין בדיקות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56440/56440fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 
איור 2: תקן עקומת טווחים ודיוק Assay. (א) עיקול רגיל נציג שנוצר על ידי שימוש בלוח ציטוקין המסייע בעכבר כדי. יש להפעיל עיקול רגיל עם כל וזמינותו. (בג) אינטרה-assay דיוק. שתי דגימות עם ריכוזים שונים של חלבונים היעד (גבוה ונמוך) נותחו ב assay אחד עם משכפל 16 עבור כל דגימה. הנתונים מיוצגים אומר + סטיית תקן. (D-E) דיוק assay אינטר. שתי דגימות עם ריכוזים שונים של חלבונים היעד (גבוה ונמוך) נותחו ב שלושה מבחני עצמאית עם משכפל 3 עבור כל דגימה. הנתונים מיוצגים אומר + סטיית תקן. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56440/56440fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="תרשים עמודות של רמות ציטוקינים (pg/mL) בבדיקות גירוי חיסוני: CD3/CD28, LPS, PMA+Iono." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56440/56440fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 
איור 3: כימות של נציג תוצאות. עכבר splenocytes (1 x 106 תאים) היו תרבותי ב- C ° 37 + 5% CO2 בתנאים שונים: unstimulated, LPS (100 ng/mL), αCD3 (1 µg/mL מצופים צלחת) + αCD28 (1 µg/mL מסיסים), ובחום (20 ng/mL) + Ionomycin (500 ng/mL). תרבות supernatants היו שנאספו לאחר 48 שעות ואז לכמת באמצעות לוח ציטוקין העוזר של העכבר כדי. פרופילי ביטוי ציטוקינים דיפרנציאלית בתגובה לגירוי התנאים הם נראים בבירור. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56440/56440fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="גרפים ציטומטריים של זרימה המציגים SSC לעומת FSC ו-APC לעומת PE, הממחישים ניתוח אוכלוסיית תאים." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56440/56440fig4.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 
איור 4: נובעת מוצלחת לעומת מבחני כושל. (א) מבחני מוצלח יהיה אוכלוסיות חרוז נפרדות עבור האוכלוסיות ננו-ספירה. (B) מבחני כושל תהיה הפרדה אוכלוסייה ענייה, חרוז, אגרגטים מדי האירועים שנאספו. (ג) מבחני מוצלח יש מוגדרים בבירור עוצמות בערוץ קרינה פלואורסצנטית מיון אשר קל שער ולכמת. (ד) מבחני לא מוצלח גרוע הפרידו בעוצמות סיווג אשר חופפים מספר אוכלוסיות חרוז, מקשה על כימות. הרבה שגיאות אלה ניתן למנוע דרך הדבקות זהיר פרוטוקול וזמינותו. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56440/56440fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td colspan="3">עיקול רגיל</td>
			<td colspan="2">רגישות (pg/mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analyte</td>
			<td>הנוסחה בכושר</td>
			<td>קורות חיים</td>
			<td>R2</td>
			<td>Min.</td>
			<td>. מקס.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IFN-Γ</td>
			<td>5-P.log(4.43, 14.40, 0.54, 9.11, 0.01)</td>
			<td>1.77%</td>
			<td>0.99</td>
			<td>2.1</td>
			<td>18105.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-5</td>
			<td>5-P.log(4.36, 12.68, 0.64, 5.73, 0.36)</td>
			<td>1.32%</td>
			<td>1</td>
			<td>1.9</td>
			<td>14514.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNF-Α</td>
			<td>5-P.log(4.36, 11.63, 0.79, 5.45, 0.37)</td>
			<td>1.48%</td>
			<td>0.99</td>
			<td>1.9</td>
			<td>20109.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-2</td>
			<td>5-P.log(4.46, 12.62, 0.78, 5.07, 0.34)</td>
			<td>1.34%</td>
			<td>1</td>
			<td>1.9</td>
			<td>25109.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6</td>
			<td>5-P.log(4.58, 11.66, 0.64, 5.77, 0.37)</td>
			</tr></tbody></table>td&gt;1.70%
			<td>0.99</td>
			<td>2.0</td>
			<td>7022.0</td>
		
		<tr>
			<td>IL-4</td>
			<td>5-P.log(4.27, 12.23, 0.62, 5.72, 0.36)</td>
			<td>1.36%</td>
			<td>1</td>
			<td>2.0</td>
			<td>13273.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-10</td>
			<td>5-P.log(4.67, 11.65, 1.20, 6.28, 0.61)</td>
			<td>1.81%</td>
			<td>0.99</td>
			<td>2.2</td>
			<td>5190.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-9</td>
			<td>5-P.log(4.32, 13.86, 0.86, 5.90, 0.45)</td>
			<td>1.82%</td>
			<td>1</td>
			<td>1.9</td>
			<td>12602.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-17A</td>
			<td>5-P.log(4.06, 14.03, 0.47, 6.52, 0.32)</td>
			<td>0.99%</td>
			<td>1</td>
			<td>2.0</td>
			<td>12285.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-17F</td>
			<td>5-P.log(4.52, 12.15, 0.61, 5.52, 0.34)</td>
			<td>0.92%</td>
			<td>1</td>
			<td>2.0</td>
			<td>14841.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-21</td>
			<td>5-P.log(4.90, 8.03, 1.77, 4.74, 1.11)</td>
			<td>0.79%</td>
			<td>1</td>
			<td>9.0</td>
			<td>12943.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-22</td>
			<td>5-P.log(4.57, 12.56, 0.63, 6.06, 0.39)</td>
			<td>1.16%</td>
			<td>1</td>
			<td>2.0</td>
			<td>6408.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-13</td>
			<td>5-P.log(4.40, 11.44, 0.22, 3.19, 1.45)</td>
			<td>1.11%</td>
			<td>1</td>
			<td>2.1</td>
			<td>16728.0</td>
		</tr>
	

טבלה 1: תקן פריסטלטיות ורגישות Assay. התוכנה ניתוח נתונים שימשה ליצירת עקומות סטנדרטי עבור analytes כל הכלול מולטיפלקס וזמינותו. ניתוח ממוחשב זה חל על עיקול 5-פרמטר חזקים הולם האלגוריתם בתקני סדרת דילול מ וזמינותו, ומשמש גם להגדיר רגישות assay באמצעות לגבולות התיאורטיים של זיהוי.

פרוטוקול זה מתאר כימות של מטרות ציטוקין מרובות בו-זמנית בתרביות רקמה supernatants שנאסף splenocytes העכבר מגורה באמצעות פלטפורמה המבוססת על חומרים חרוז מולטיפלקס cytometer זרימה.

מגה-פלקס ציטוקין פרופיל של העכבר מגורה Splenocytes באמצעות פלטפורמה מבוססת-חרוז Cytometric מתכלה

Bead-based immunoassays employ the same basic principle as sandwich immunoassays. Capture beads, which can be differentiated by size and internal ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לכמת מטרות ציטוקינים מרובות בו זמנית בסופרנטנטים של תרביות רקמה שנאספו מטחול עכבר מגורה באמצעות בדיקה אימונולוגית מבוססת חרוזים מרובים וציטומטר זרימה. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לענות על שאלות מפתח בתחום האימונולוגיה, כגון, מהם פרופילי הציטוקינים הייחודיים המתזמרים את התגובה החיסונית בהקשר של מצבי מחלה ספציפיים? היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לבצע כימות בו זמנית של מספר טבעות באמצעות הרבה פחות נפחי דגימה מאשר פורמטים מסורתיים של ELISA ובמקביל הפחתת כריכה לא ספציפית.מי שידגים את ההליך יהיה ניקולס ג'ונסן, עמית מחקר מצוות פיתוח המוצר שלנו. התחל הליך זה בהכנת דגימה ביולוגית כמתואר בפרוטוקול הטקסט. כדי להכין את החרוזים המשותקים של הנוגדנים המעורבבים מראש, סוניקציה של בקבוק החרוזים המעורבבים מראש למשך דקה אחת באמבט סוניקטור בטמפרטורת החדר.לאחר מכן מערבולת למשך 30 שניות לפני השימוש. אם אין אמבט סוניקטור זמין, הגדל את זמן המערבולת לדקה אחת. להכנה סטנדרטית, הוסף 250 מיקרוליטר של מאגר בדיקה כדי להרכיב מחדש את קוקטייל Mouse Th Cytokine Standard הליופילי.מערבבים על ידי מערבולת קצרה, ומניחים לבקבוקון לשבת בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. העבירו את הקוקטייל הסטנדרטי לצינור מיקרו-צנטריפוגה מפוליפרופילן שכותרתו C7. זה ישמש כסטנדרט העליון. סמן שישה צינורות מיקרו-צנטריפוגות מפוליפרופילן כ-C1 עד C6. הוסף 75 מיקרוליטר של מאגר בדיקה לכל אחד מהצינורות הללו.לאחר מכן, העבירו 25 מיקרוליטר מהסטנדרט העליון, C7, לצינור C6, וערבבו היטב על ידי מערבולת. זה יהיה תקן C6. המשך לבצע דילול סדרתי אחד עד ארבעה, על ידי שימוש בקצה פיפטה חדש לכל צינור כדי להוסיף 25 מיקרוליטר מהתקן הקודם ל-75 מיקרוליטר של מאגר הבדיקה בצינור הסטנדרטי הנמוך הבא.עקוב אחר כל הוספה על ידי מערבולת. השתמש במאגר הבדיקה כתקן אפס פיקוגרמים למיליליטר. כדי לבצע את הבדיקה, אפשר לכל הריאגנטים להתחמם לטמפרטורת החדר לפני השימוש.לוחות סינון פוליפרופילן משמשים בהדגמה זו. חיוני לחלוטין שהצלחת תישמר זקופה במהלך כל הליך הבדיקה, כולל שלבי הכביסה, כדי למנוע אובדן החרוזים. הרטיבו מראש את נייר הסינון על ידי הוספת 100 מיקרוליטר של מאגר כביסה 1X לכל באר, ותנו לצלחות לשבת דקה אחת בטמפרטורת החדר.הסר את נפח המאגר באמצעות סעפת הוואקום. כתם את מאגר הכביסה העודף מתחתית הצלחת על ידי לחיצה על הצלחת על ערימת מגבות נייר נקיות. לאחר מכן, הנח את הצלחת על גבי מכסה הצלחת ההפוך.עבור דגימות סופרנטנט של תרבית תאים, הוסף 25 מיקרוליטר של מאגר בדיקה לכל הבארות. הוסף 25 מיקרוליטר מכל תקן לבארות הסטנדרטיות. לבסוף, הוסף 25 מיקרוליטר מכל דגימה לבארות הדגימה.מערבולת את החרוזים המעורבים למשך 30 שניות. לאחר מכן, הוסיפו 25 מיקרוליטר מהחרוזים המעורבים לכל באר, ונערו את בקבוק החרוזים לסירוגין כדי למנוע שקיעת חרוזים. אוטמים את הצלחת בעזרת אוטם צלחות.לאחר האיטום, עטפו את כל הצלחת, כולל מכסה הצלחת ההפוכה, בנייר אלומיניום. מניחים את הצלחת על שייקר צלחת, מהדקים אותה ומנערים בחום של כ-500 סל"ד למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. מבלי להפוך, הנח את הצלחת על סעפת הוואקום והחל את הוואקום כמו קודם.לאחר מכן, הוסף 200 מיקרוליטר של מאגר כביסה 1X לכל באר. הסר את תכולת בארות לוחית הבדיקה על ידי סינון ואקום. כתם את מאגר הכביסה העודף מתחתית הצלחת בעזרת כרית סופגת או מגבות נייר לפני שתחזור על שלב זה פעם נוספת.לאחר מכן, הוסף 25 מיקרוליטר של נוגדנים לזיהוי לכל באר. לאחר איטום הצלחת עם אוטם צלחות טרי, עטפו את כל הצלחת, כולל מכסה הצלחת ההפוכה, בנייר אלומיניום. מניחים את הצלחת על שייקר צלחת ומנערים בחום של כ-500 סל"ד למשך שעה בטמפרטורת החדר.מבלי לשאוב אבק, הוסף 25 מיקרוליטר של מגיב סטרפטווידין פיקואריתרין ישירות לכל באר. אוטמים ועוטפים את הצלחת כמו קודם. לאחר מכן, הניחו את הצלחת על שייקר צלחת ונערו בחום של כ-500 סל"ד למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.לאחר חזרה על שלב סינון הוואקום פעמיים, הוסף 200 מיקרוליטר של מאגר כביסה 1X לכל באר. השעו מחדש את החרוזים על שייקר צלחת למשך דקה אחת. בעזרת פיפטה רב-ערוצית, העבירו את הדגימות מלוח המסנן לצינורות FACS על מנת לקרוא את הדגימות על ציטומטר זרימה.הפעל את ציטומטר הזרימה ותוכנת הרכישה בהתאם להוראות היצרן המצורפות למכשיר. צור תרשים נקודות עם פיזור קדימה על ציר ה-X ופיזור צדדי עבור ציר ה-Y. הגדר את הפיזור קדימה ופיזור הצד למצב ליניארי.מערבולת את בקבוקון החרוזים הגולמיים הכלולים בערכה למשך 30 שניות כדי לתלות מחדש את החרוזים. העבירו 400 מיקרוליטר מהחרוזים הגולמיים לצינור FACS חדש. הגדר את קצב הזרימה של ציטומטר הזרימה לנמוך.הפעל את החרוזים הגולמיים, התאם בזהירות את הרווח והמתח לפיזור קדימה ופיזור צדדי כך ששתי אוכלוסיות הגודל של חרוזים אלה מופרדות באופן גלוי וקל לשער. התאם את סף הפיזור קדימה כדי לא לכלול אירועים לא רצויים. בתרשים פיזור קדימה לעומת פיזור צדדי, צייר שער הכולל את כל אוכלוסיות החרוזים.הצג את אוכלוסיות החרוזים המגודרות מתרשים הפיזור קדימה לעומת פיזור הצד בתרשים הנקודה השנייה עם PE על ציר ה-X ו-APC עבור ציר ה-Y. כוונן את מתח ה-PMT עבור ערוץ הקרינה של APC כך שלאות ה-APC עבור כל אוכלוסיות החרוזים תהיה עוצמת פלואורסצנטיות חציונית, או MFI, שנמצאת בין 10 ל-5,000. לאחר מכן, מערבול את הבקבוקון של חרוזי הגדרת PE למשך 30 שניות כדי להשעות מחדש את החרוזים.העבירו 400 מיקרוליטר של חרוזי ה-PE התלויים מחדש לצינור FACS חדש. החלף את צינור החרוזים הגולמיים בציטומטר הזרימה בצינור חרוזי PE. כוונן את צינור מכפיל הפוטוtage עבור הגדרת ערוץ הקרינה PE כך שה-MFI של חרוזי PE ייפול בין הטווח הספציפי למגרש שנמצא בבקבוקון חרוזי PE.כדי לבצע איסוף נתונים, הגדר את מספר אירועי החרוזים שיירכשו לכ-300 לכל אנוליט. מערבולת כל דגימה במשך חמש שניות לפני הניתוח. לאחר מכן, קרא את הדגימות.בעת קריאת הדגימות, הגדר תחילה את ציטומטר הזרימה למצב הגדרה, והמתן עד שאוכלוסיית החרוזים תתייצב לפני המעבר למצב רכישה. ייצא רק את האירועים המגודרים ולא את סך האירועים לפני ביצוע ניתוח נתונים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. עקומות סטנדרטיות מייצגות עבור אנוליטים מטרה נוצרו באמצעות לוח הציטוקינים T Helper של העכבר.בדיקות המנוהלות כהלכה ידגימו עקומות עם טווחים דינמיים רחבים כפי שמוצג כאן. יש להפעיל עקומות סטנדרטיות בכל פעם שהבדיקה מתבצעת. טחול עכבר תורבת בתנאים שונים במשך 48 שעות.סופרנטנטים תרבית נאספו, ולאחר מכן ריכוזים של 13 מטרות כומתו באמצעות פאנל ציטוקינים T מסייע לעכבר. פרופילי ביטוי ציטוקינים דיפרנציאליים, בתגובה לתנאי גירוי, נראים בבירור. לאחר השליטה, ניתן להשלים את עבודת המעבדה של טכניקה זו תוך פחות מחמש וחצי שעות אם מבוצעת כראוי.זמני רכישת הנתונים והניתוח במורד הזרם ישתנו בהתאם למספר הדגימות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשתמש בפרוטוקול זה, לכמת את ריכוזי האנוליטים בדגימות ביולוגיות באמצעות בדיקה חיסונית ציטומטרית מבוססת חרוזים. זה כולל הכנת ריאגנטים, שלבי דגירה והגדרת ציטומטר זרימה לרכישת נתונים.

multiplex-cytokine-profiling-stimulated-mouse-splenocytes-using

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

הליך זה מתאר את זיהוי ובידוד של לויקוציטים עכבר TH17 כי להפריש באופן פעיל IL-17 על גירוי.

זיהוי ובידוד של Viable IL-17-מפריש תאים עכבר T

סרטון זה מדגים בדיקה חיסונית מבוססת חרוזים לכימות מטרות ציטוקינים מרובות בדגימה. תערובת של מיקרוספרות נפרדות המצומדות לנוגדנים ספציפיים לציטוקינים משמשת לקשירת הציטוקינים הנמצאים בדגימה. כתבים המתויגים על ידי סטרפטווידין משותקים על הציטוקינים הקשורים באמצעות נוגדנים לזיהוי ביוטינילציה. ציטומטריית זרימה מזהה את הציטוקינים הקשורים על סמך הגדלים הייחודיים ועוצמות הפלואורסצנטיות הפנימיות של המיקרוספרות, בעוד שעוצמת הפלואורסצנטיות של המדווחים מציינת את מספר הציטוקינים.

בדיקה חיסונית מבוססת חרוזים לכימות מטרות ציטוקינים מרובות

אנו מציגים במחקר הנוכחי הוא assay קרינה מבוססת רומן באמצעות לימפוציטים נגזר עכבר מהונדס. Assay זה מתאים להקרנה תפוקה גבוהה (HTS) של מולקולות קטנות ניחן קיבולת אחד עיכוב או קידום ההפעלה הלימפוציטים.

Assay לימפוציטים הקרינה מבוסס מתאים להקרנה תפוקה גבוהה של מולקולות קטנות

ניתוח של הסרט מדמיע ציטוקינים מסייעת בלימוד עינית מחלות שונות. מבחני מולטיפלקס חרוז מבוסס הינם פשוטים רגיש ולאפשר בדיקה של מטרות מרובות בדגימות עם כמויות קטנות. כאן נתאר עבור מדמיע הסרט ציטוקין פרופיל של משתמש פרוטוקול חרוז מבוסס מולטיפלקס וזמינותו.

חרוז מבוסס Assay מולטיפלקס לניתוח של פרופילים ציטוקין דמעה

כאן נתאר בגישה פרוטיאומיה מבנית תא בודד כדי להעריך את החיסון פנוטיפי ו פונקציונלי (ציטוקינים תאיים אינדוקציה) שינויים בדגימות דם היקפיים, נותחו באמצעות cytometry המוני.

ניתוח מתא בודד של Immunophenotype וייצור ציטוקין בדם כל הפריפריה באמצעות Cytometry המונית

השימוש בריאגנטים ייחוס לבדיקת שחרור ציטוקינים מאפשר פרופילי בטיחות במבחנה הניתנים לשחזור וסטנדרטיים יותר של נוגדנים חד-שבטיים אימונותרפיים. כאן אנו מתארים כיצד ניתן להשתמש במבחני שחרור ציטוקינים לצד פאנל ריאגנטים ייחוס כדי לחזות את בטיחותם של כמה נוגדנים חד-שבטיים טיפוליים.

שימוש בריאגנטים ייחוס כדי לאשר את החוסן של מבחני שחרור ציטוקינים לחיזוי בטיחות נוגדנים חד-שבטיים

הפרוטוקול מתאר פלטפורמה מיקרופלואידית מתקדמת למדידה כמותית של דינמיקת הפרשת ציטוקינים של תאי דם חד-גרעיניים היקפיים אנושיים בודדים. הפלטפורמה מודדת עד שלושה ציטוקינים במקביל (IL-6, TNFα ו-IL-1β) עבור כל תא בודד המגורה באמצעות ליפופוליסכריד כדוגמה.

גישה מיקרופלואידית לפתרון הפרשת ציטוקינים סימולטנית ורציפה של תאים רב-תפקודיים בודדים 

בדיקות חיסוניות מבוססות דם מלא מספקות כלי קל וחסכוני במשאבים לניתוח חסינות ספציפית לאנטיגן למטרות אבחון ומחקר. מאמר זה מספק פרוטוקול אופטימלי מבוסס דם מלא עם גירוי משותף כפול לניתוח מקיף של חסינות המאכסן לפתוגנים פטרייתיים ונגיפיים, כולל גרסה בנפח נמוך עבור חולים ילדים ובעלי חיים קטנים.

בדיקת דם מלא עם גירוי משותף כפול לניתוח ספציפי לאנטיגן של חסינות המארח לפתוגנים פטרייתיים ונגיפיים

דוח זה מתאר פרוטוקול אוטומטי לבדיקות אימונופלואורסצנטיות מרובות (mIF) על מכתים שקופיות אוטומטי. זה מדגים את יכולת השחזור הגבוהה של פרוטאומיקה מרחבית על צביעות רקמות סטנדרטיות בתפוקה גבוהה ומצלמות פלואורסצנטיות שלמות, שהיא אידיאלית עבור מבחני mIF מותאמים אישית על פני מספר רב של שקופיות רקמה במחקר תרגומי.

מבחני אימונופלואורסצנציה אוטומטיים מרובים בתפוקה גבוהה למחקר תרגומי

פיתחנו פרוטוקול מהיר, רגיש וניתן לשחזור לפרופיל ביטוי גנים פתוגני במהלך זיהום.

פרופיל ביטוי גנים של חיידקים הדבקה באמצעות פלטפורמה דיגיטלית ברקוד

למדו פרופיל ציטוקינים מרובים בסופרנטנטים מתרביות תאים של ספלנוציטים מעכברים מגורים באמצעות אימונו-אסיי מבוסס חרוזים וציטומטריית זרימה. שיטה זו מאפשרת ניתוח פרופילים ייחודיים של מערכת החיסון.

מגה-פלקס ציטוקין פרופיל של העכבר מגורה Splenocytes באמצעות פלטפורמה מבוססת-חרוז Cytometric מתכלה

גלה סרטונים נוספים