September 4th, 2017
פרוטוקול זה מדגים את תנאי הגיוס של מחלה מוחית מום חלול במודל של עכברים, שימושים חדות משופרת מיקרו טומוגרפיה כדי למדוד את הנגע הנטל. שיטה זו מגבירה את הערך של העכבר ויצר מודלים ללמוד את הבסיס המולקולרי של טיפולים פוטנציאליים חלול מום מוחי ומחלות אחרות כשאבדן.
המטרה הכוללת של הליך זה היא לגרום למומים מוחיים בעכברים יילודים, ולמדוד את נטל המחלה באמצעות מיקרו-CT. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום מחלות כלי דם במוח, כגון מומים במערות מוחיות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לקבוע את נטל מחלת המום המוחי במודלים של עכברים יילודים בצורה מדויקת ויעילה בהשוואה לשיטות הקיימות.
הדגמה ויזואלית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שקשה ללמוד אינדוקציה של מום מוחי במערה ושלבי ניתוח מיקרו-CT, מכיוון שהיא דורשת ניסיון ושימוש בתוכנה מתוחכמת. התחל בהמסת 4-HT ב-100% אתנול לריכוז של 10 מיליגרם למיליליטר. הכינו 30 מיקרוליטר אלאקוואס, ואז אחסנו במינוס 80 מעלות צלזיוס.
ביום השימוש, יש לדלל את ה-alaquad ב-4-HT בשמן תירס ל-0.5 מיליגרם למיליליטר. לאחר מכן השתמש במזרק אינסולין כדי להזריק 50 מיקרוליטר של 4-HT לגורים יילודים P1 כדי לגרום לנגעי CCM ניסיוניים. התחל בהכנת הדגימה על ידי מילוי מזרק של 10 מיליליטר המצויד במחט בגודל 29 עם שלושה מיליליטר של 2% פרפורמלדהיד ו-PBS.
לאחר מכן בצע שפע תוך לבבי על גור P8 שעבר המתת חסד על ידי החדרת המחט לחדר לב העכבר, והזרקה איטית של מלוא הנפח של פרפורמלדהיד. לאחר שימוש במספריים לניתוק הראש, הסר את העור מהראש וקילף את הגולגולת באמצעות מלקחיים כדי לנתח את כל המוח ל-4% פרפורמלדהיד ו-PBS. לאחר תיקון המוח למשך הלילה ב-4-HT מעלות צלזיוס.
למחרת, נתק את המוח האחורי באמצעות מלקחיים, ושטוף בתמיסת PBS. לאחר מכן דגרו על המוח האחורי בתמיסת היוד של לוגול, למשך 48 שעות. לאחר הדגירה, יש לייבש לזמן קצר את המוח האחורי באוויר כדי להסיר עודפי תמיסת היוד של לוגול.
לאחר מכן ארזו את המוח האחורי המוכתם ביוד של לוגול בצינורות מיקרו-צנטריפוגה של 0.65 מיקרוליטר, ואטמו לחלוטין עם סרט פרפין מפלסטיק כדי למנוע התכווצות רקמות. הנח את צינורות המיקרו-צנטריפוגה בצינורות פלסטיק של חמישה מיליליטר עם ספוגים כדי למנוע מהם לזוז במהלך הסריקה. הרכיבו אנכית את הצינור המכיל מוח אחורי על מחזיק אלומיניום במערכת המיקרו-CT.
הגדר את פרמטרי הסריקה. השתמש בהקרנות של 540 וזמן חשיפה של שתי שניות עם תנאי מקור של 50 קילו-וולט ו-10 וואט כדי לרכוש את מערכי הנתונים הטומוגרפיים. גרפי רדיו מהסריקה משוחזרים אוטומטית על ידי תוכנת שחזור הקרנה מבוססת חומרה, המסופקת על ידי מערכת המיקרו-CT, ומייצרת סדרת תמונות של פרוסות ציריות של 16 סיביות.
המיקרו-CT המנוגד ליוד של לוגול זיהה מספיק נגעי CCM. תמונות רנטגן סרוקות שוחזרו כדי לייצר תמונות תלת מימד של מוח העכבר, שאפשרו הדמיה של נגעים שלמים בפרנכימה של המוח, בעומקים ובכיוונים שונים, והערכת המבנה במיקום תלת מימדי של נגעים במוח. טבלה זו מציגה דוגמה לתפוקה כמותית של הנגעים הבודדים המסומנים.
לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום מחלות כלי הדם לחקור מנגנונים ואפשרויות טיפוליות למומים מוחיים במערות במודלים של עכברים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לגרום לנגע CCM במודלים של עכברים, וכיצד לרכוש ולנתח את עומס נגעי CCM בטכניקת מיקרו-CT.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
פרוטוקול זה מדגים את אינדוקציה של מחלת מלפפום נקבובי מוחי בעכברים ניונטליים ומשתמש ב-micro-CT למדידת נטל הנגע. שיטה זו משפרת את ההבנה של הבסיס המולקולרי וטיפולים פוטנציאליים למלפפום נקבובי מוחי ומחלות כלי דם מוחיות אחרות.
Quantitative micro-CT imaging of cerebral cavernous malformations (CCMs) in genetically engineered mouse models enables precise assessment of lesion burden, supporting mechanistic de-risking and target validation in cerebrovascular disease research. This approach enhances predictive confidence for early-stage therapeutic hypothesis testing and informs portfolio triage by providing robust, reproducible lesion quantification. Integration of high-resolution imaging with genetic disease models positions this workflow as a critical inflection point for translational continuity in vascular biology pipelines.
This method bridges early discovery and preclinical research by enabling hypothesis-driven genetic manipulation and quantitative phenotyping in mouse models, supporting lead identification and translational biomarker alignment.