Name: סינתזה של פילוח מונוציט פפטיד אמפיפיליות הקזאין עבור הדמיה של טרשת עורקים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: למדו לסנתז מיצלות פפטיד אמפיפיליות המכוונות למונוציטים לצורך הדמיה של טרשת עורקים. השיטה מאפשרת הבחנה בין פלאקים בשלבים מוקדמים ומאוחרים של המחלה ומשפרת את הספציפיות האבחנתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

המחברים, הייתי רוצה להכיר את התמיכה הפיננסית של אוניברסיטת דרום קליפורניה, הלב הלאומית, ריאות, ודם המכון (NHLBI), R00HL124279, אלי ו אידית פרס החדשנות רחבה, L.K. Whittier קרן Non-סרטן פרס המחקר translational שהוענקו EJC. המחברים תודה למרכז מיקרוסקופ אלקטרונים, Microanalysis, מרכז של מצוינות NanoBiophysics, מרכז התמחות על אפיון מולקולרי ומרכז Translational הדמיה-אוניברסיטת דרום קליפורניה לעזרה בארגון כיוונוני אינסטרומנטלית.

הערה: קרא את MSDS עבור ריאגנטים ופעל כל אמצעי בטיחות כימית כנדרש על-ידי מוסד מקומי.
1. הכנת PAMs MCP-1
<ol><li>
הכנת פפטיד MCP-1
	<ol>
<li>שוקלים לצאת mmol 0.25 של Fmoc-L-ליס (מפחיד)-Wang בכלי התגובה (RV). יש לשטוף את הצד של הקרוואן עם dimethylforamide מ ל (DMF) בשכונה fume כימי.</li>
		<li>לטעון את הקרוואן על סינתיסייזר פפטיד benchtop אוטומטית. לטעון ארוזים מראש הבקבוקונים חומצת אמינו, N "- CYNFTINRKISVQRLASYRRITSS - C", מ- C כדי אמיני. לכלול את מבחנה ריקה בסוף השלב הסופי deprotection. הערה: פפטיד מקושקשות עם רצף, N "- CNNSIIRSKQVLRSTRYFRSATYK - C", יכול גם להיות מסונתז שימוש באותו הפרוטוקול.</li>
		<li>לאחר סיום סינתזה, להעביר את פפטידים על שרף הקרוואן המבחנה נצנוץ עם 2-3 מ ל מתנול עד כל שרפים מועברים. לאחר השרף שקעה לתחתית, להסיר את מתנול supernatant ולא להתאדות הנותרים עד יבש. אבק יבש h 2 נוספות או למשך הלילה בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>להפוך את פתרון המחשוף 12 mL המכיל חומצה trifluoracetic (TFA):ethanedithiol:water:triisopropylsilane ב 94:2.5:2.5:1% vol בשכונה fume כימי. מערבולת הפתרון המחשוף כדי לוודא כי הוא מעורב באופן שווה. התראה: כי triisopropylsilane ethanedithiol אוויר רגיש בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד, ארגון לטהר צלוחיות מניות של triisopropylsilane ו- ethanedithiol עבור 1 דקות לפני שמוציאים אותם בחזרה.</li>
		<li>הניחו את כלי הקיבול של סינתזה (SV) על גבי שאכר זרוע על ידי מחבר חובק למעקה ליד החלק התחתון של ה-SV. העברה פפטיד-שרף ה-SV 2 מ של פצילות פתרון עד כל פפטיד-שרפים מועברים.</li>
		<li>לשטוף את הצדדים של ה-SV עם 3 מ ל המחשוף פתרון. לסגור את הפקק של ה-SV ומנערים ב 300 תנודות/דקה במשך 4 שעות.</li>
		<li>שוקלים את צינור צנטריפוגה ריק 50 מ. להקליט את המסה.</li>
		<li>לאחר 4 שעות, לנקז את הפתרון cleaved פפטיד של ה-SV לתוך הצינור צנטריפוגה 50 מ. לשטוף את ה-SV מספר פעמים עם הפתרון המחשוף הנותרים.</li>
		<li>להתנדף פפטיד cleaved פתרון עם חנקן עד שיש פחות מ 4 מ ל שנותרו בצינור צנטריפוגה.</li>
		<li>להוסיף 36 מ"ל של האתר כקרח הפתרון ביקע פפטיד.</li>
		<li>הפתרון עד מערבולת הוא לגמרי לבן או צהוב. צנטריפוגה ב 3000 g x עבור 5 דקות ב 4 ° C, decant את תגובת שיקוע.</li>
		<li>הוסף אתר קר כקרח 40 מ"ל ברכבת התחתית. מערבולת, sonicate שוב. חזור על תהליך צנטריפוגה. Decant את תגובת שיקוע.</li>
		<li>יבש בגדר הרשות הפלסטינית גולמי עם חנקן גז מנקה עד האתר הוא בעליל התאדו.</li>
		<li>הוסף 20 מ"ל מזוקק פעמיים מים, מערבולת, ו- sonicate עד פפטיד היא התפרקה לחלוטין בפתרון.</li>
		<li>להקפיא את הפתרון, lyophilize עד יבש.</li>
		<li>ברגע פפטיד הוא מיובש, לשקול את המסה של הצינור צנטריפוגה המכיל את פפטיד גולמי. להמיס את פפטיד גס 5 מ"ג/מ"ל מים.</li>
		<li>להמיס 25 מ ג של פפטיד גולמי MCP-1 ב- 5 מ ל מים מזוקק פעמיים כדי ליצור ריכוז מוחלט של 5 מ"ג/מ"ל. לטהר את גולמי MCP-1 פפטיד על ידי ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) באמצעות 0.1% TFA במים (הממס A) ו- 0.1% TFA ב- acetonitrile (הממס B) בתור שלבים ניידים על עמודה הפוכה-פאזי C8. להזריק את 5 מיליליטר פפטיד לתוך HPLC. הערה: שלב ניידים הראשונית כללה 100% ממס A בקצב הזרימה של 9.0 מ ל לדקה להקטין הממס A לאט כדי 30% 27 דקות והחזק הזה בהרכב במשך 3 דקות חזרה מעבר הצבע כדי 100% ממס מעל 3 דקות והחזק הזה בהרכב עבור 1 דקות לתת ריצה-הזמן הכולל 34 למינימום של שמור על הטמפרטורה עמודה 55 מעלות צלזיוס. השתמש מצב מקור יון חיובי עבור הניתוח. חומצה פורמית יכול לשמש במקום TFA, אם TFA הוא חומצי מדי עבור העמודה HPLC. מומלץ כי המהירות הרמפה ההרכב הממס האורגני לא יעלה על 2%/min להפרדה טובה יותר.</li>
		<li>לנתח כל שבר באמצעות ספקטרומטר מסה לייזר בסיוע מטריקס desorption/יינון (MALDI) עבור המוצר הצפוי ז/ז-2,890. הערה: להמיס חומצה α-cyano-4-hydroxycinnamic-1 מ ג/מ ל acetonitrile/מים (50: 50% vol) כפתרון מטריקס. במקום µL 0.75 של מטריקס פתרון לצלחת MALDI, ואחריו 0.75 µL של כל שבר. לבצע את הניתוח באמצעות מצב חיובי יון רפלקטיביים במגוון המונית של 500-5000 Da.</li>
		<li>לשלב המוצר שברים, לפוצץ את acetonitrile, להקפיא, ולאחר lyophilize פפטידים מטוהרים עד יבש.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הכנה של הרשות הפלסטינית MCP-1
	<ol>
<li>הכן של עודף טוחנת 1.1 של 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] DSPE-יתד (2000)-maleimide כדי פפטיד של נצנוץ נפרד בקבוקונים. להמיס שתי תרכובות במים מזוקק פעמיים כדי להפוך ~ 15 מ"ג/מ"ל. Sonicate למשך 15 דקות, או עד שני פתרונות ברורים לחלוטין. הערה: DSPE-יתד (2000)-Cy5 הוא מסונתז באמצעות פרוטוקול זהה עם DSPE-יתד (2000)-אמין, N-hydroxysuccinimide (NHS) אסתר-functionalized Cy5, למעט שלב 1.2.3, איפה ה-pH של התמיסה מותאם 8.5.</li>
		<li>להוסיף פתרון (2000)-maleimide DSPE-יתד הפתרון פפטיד. המערבולת ו sonicate.</li>
		<li>להוסיף 1 מ' NaOH dropwise (1 µL) עד ה-pH של התמיסה הוא 7.</li>
		<li>חנקן לטיהור לפתרון 5 דק מערבבים את הפתרון בין לילה.</li>
		<li>להקפיא את הפתרון, lyophilize עד יבש.</li>
		<li>ברגע שהמוצר גולמי הוא מיובש, להמיס המוצק של 5 מ"ג/מ"ל מים.</li>
		<li>לטהר עם HPLC כמתואר לעיל. הערה: פפטיד Unconjugated ו- DSPE-PEG(2000) צריך elute בין 15-30% ריכוז אורגנית (vol %), בעוד DSPE-יתד המספר המשלים (2000)-MCP-1 צריך elute בין 40-50% ריכוז אורגנית.</li>
		<li>לנתח כל שבר באמצעות ספקטרומטר מסה MALDI עבור המתאימים m/z. DSPE-יתד (2000)-MCP-1 צריך לשיא מ רחב/z-5,760. הערה: 2, 5-dihydroxybenzoic חומצה מתאימה ביותר לשימוש כמו המטריקס DSPE-יתד (2000)-MCP-1 עם MALDI.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הרכבה של MCP-1 PAMs
	<ol>
<li>להמיס 1.75 מ ג PAs MCP-1 עם מתנול 3 מ בבקבוקון 1-דראם. Sonicate עד שהרשות MCP-1 היא התפרקה לחלוטין. הערה: ניתן לשלב חומרים פעילי שטח Cy5 ביחס של שן טוחנת של 10:90 הרשות הפלסטינית MCP-1 עבור יישומי הדמיה.</li>
		<li>להתנדף מתנול תחת חנקן בתנועה סיבובית בזמן השטיפה מתנול הנותרים את הצד של המיכל עד סרט אחיד נוצר בתחתית המבחנה. ואקום-יבש הסרט בן לילה.</li>
		<li>מימה את הסרט עם 3 מ"ל של מאגר מים או פוספט תמיסת מלח (PBS) כדי להפוך פתרון 100 מיקרומטר של PAMs MCP-1. בעדינות המערבולת ו sonicate הפתרון עד שקוף. דגירה ב 80 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. הערה: הטמפרטורה מוגברות הוכח כדי להאיץ את תהליך הרכבה עצמית ומאפשרת את הרכיב פפטיד ליצור משני המבנה היציב ביותר, תוך כדי הנמכת42,את הריכוז (CMC) מיצלה קריטי43.</li>
		<li>מגניב את פיזור וכתוצאה מכך לטמפרטורת החדר.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. אפיון PAMs MCP-1
<ol><li>
פיזור אור דינאמי (DLS) ואת פוטנציאל זטה
	<ol>
<li>המקום 100 מיקרומטר של פאם MCP-1 או פאם מקושקשות ב cuvette על פי ההוראות של המכשיר פוטנציאליים DLS או זטא. הערה: DLS, זטה וואקום פוטנציאלי יכול להיות שונה בהתבסס על ההוראות של המכשיר.</li>
		<li>Equilibrate הכלי לטמפרטורת החדר. למדוד את גודל ואת משטח הטעינה של פאם.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים (TEM)
	<ol>
<li>להוסיף 7 µL של 50 מיקרומטר פאם MCP-1 או פאם מקושקשות על גבי רשת TEM מושעים בתוך פינצטה עצמית הסגירה עבור 5 דק הפתיל משם ה-droplet עם מגבון המשימה העדינה.</li>
		<li>להוסיף 7 µL של מים כדי לשטוף את הרשת. לפתיל משם ה-droplet.</li>
		<li>להוסיף 7 µL של wt 1% חומצה phosphotungstic עבור 2 דק הפתיל משם ה-droplet. חזור על שלב 2.2.2.</li>
		<li>יבש את הרשת TEM לפני ניתוח TEM.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ספקטרוסקופיה קיווטות (CD)
	<ol>
<li>הפעל את החנקן למשך 5-10 דקות לפני השימוש בכלי.</li>
		<li>מקום µL 300 של ריק (מים או PBS) cuvette.</li>
		<li>למדוד ספקטרה-190-265 nm, 0.2 מ מ אורך נתיב עם זמן אינטגרציה s 1, ורוחב הפס nm 1 הטמפרטורה בחדר. לאסוף 3 משכפל.</li>
		<li>מדד 100 מיקרומטר MCP-1 פפטיד, פאם MCP-1, ביצים מקושקשות פפטיד, ונעמד פאם תחת באותו המצב שמתואר בשלב 2.3.3. להחסיר מן הריק.</li>
		<li>להתאים את הנתונים באמצעות אינטרפולציה ליניארית של polylysine בסיס ספקטרה.</li>
		<li>כבה את המכשיר. לחכות 10 דקות לפני ביטול את החנקן.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. ניתוח במבחנה של MCP-1 PAMs
<ol><li>
במבחנה הביו
	<ol>
<li>תרבות ולהרחיב את ה-וואי 274.1 ומונוציטים מאתר של Dulbecco ששינה נשר בינוני בתוספת 10% סרום שור עוברית (FBS), 1% פניצילין-סטרפטומיצין, מ מ 0.05 מרקפטואתנול, ב- 37 מעלות מתחת 5% CO2 כדי מעבר 5. הערה: ה-וואי 274.1 הם תאים ההשעיה. כאשר culturing, התקשורת צריכה להיות מתחדש כל 2-3 ימים.</li>
		<li>Pipet ומונוציטים בתקשורת לתוך שפופרת צנטרפוגה סטרילי 50 מ. צנטריפוגה ב 300 x g דקות 5-4 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>האחות המדיה הישנה, resuspend בתקשורת טריים 10 מ"ל לתוך הצינור צנטריפוגה. מערבבים לאט עד תאים מופצים בצורה שווה בתקשורת. לספור את התאים באמצעות צביעת trypan blue ו- hemocytometer.</li>
		<li>לדלל תאים כאלה ישנם 4,000 ומונוציטים לכל µL 90 של מדיה לכל טוב. להוסיף 90 µL של תאים בבארות של צלחת 96-ובכן. תקופת דגירה של 24 שעות. הערה: הימנע משימוש הבארות על הקצה החיצוני של הצלחת כדי למנוע הבדלי אידוי ושינויים תרמי בצלחת. למלא הבארות החיצוני 100 µL PBS.</li>
		<li>להמיס µmol 0.15 של MCP-1 פפטיד, פאם MCP-1, פפטיד מקושקשות או מקושקשת. פאם ב- PBS µL 150 צינורות microcentrifuge נפרדים, מעוקר. לבצע דילול טורי כדי להפוך µL 65 של 1, 10 ו- 100 מיקרומטר של כל דגימה.</li>
		<li>להוסיף 10 PBS µL ריכוז כל בבארות המכיל את ה-וואי 274.1 (סה כ עוצמה: µL 100 לכל, 6 קווי, בארות סה כ 96). תקופת דגירה של 72 h.</li>
		<li>להוסיף 10 µL (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) (MTS) כל היטב. תקופת דגירה של 1 h.</li>
		<li>לנתח את ספיגת שימוש בקורא צלחת 490 nm או בהתאם להוראות היצרן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
במבחנה מיצלה איגוד
	<ol>
<li>ומונוציטים זרע 500,000 ב כל טוב של צלחת 6-ובכן ב- 2 מ של המדיה המכילה 100 מיקרומטר התווית על-ידי Cy5 פאם MCP-1 (יחס טוחנת 10:90 של DSPE-יתד (2000)-Cy5 והרשות MCP-1). תקופת דגירה של 1 h.</li>
		<li>לאסוף ה-וואי 274.1 על ידי צנטריפוגה ב g x 300 דקות 5-4 מעלות צלזיוס. האחות התקשורת.</li>
		<li>Resuspend ולשטוף את התאים ב- 2 מ"ל PBS. צנטריפוגה ב 300 x g דקות 5-4 מעלות צלזיוס. מחוק לגמרי מגניב. חזור על התהליך הכביסה עם 2 מ"ל PBS. מחוק לגמרי מגניב.</li>
		<li>להוסיף 2 מ של paraformaldehyde 4% קר לתקן את התאים. דגירה בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות.</li>
		<li>Pipet התאים קבוע על גבי coverslip זכוכית סטריליים בתוך בארות של צלחת 6-. טוב. צנטריפוגה-400 g x עבור 5 דקות.</li>
		<li>להסיר את paraformaldehyde. לרחוץ ולשטוף עם 2 מ"ל PBS פעם אחת. Resuspend עם 1 מל PB הערה: כאשר שטיפה, להימנע לשבש את פעולת התאים על coverslip.</li>
		<li>לשים 10 µL של 90% גליצרול PBS לשקופית. השתמש במחט עם פינצטה כדי לאסוף את coverslip. יבש על קצה coverslip. הנח בעדינות את coverslip לשקופית עם הפנים למטה.</li>
		<li>בעדינות חותם על קצה coverslip עם לק ברורה. מניחים במקרר עד מוכן עבור הדמיה.</li>
		<li>להשתמש לייזר קונפוקלי סורק מיקרוסקופ (CLSM) המותקן עם לייזרים עבור Cy5-λעירור = 650 ננומטר.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update%3A+A+Report+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), e38-e60 (2016).</li>
<li>Falk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of atherosclerosis.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47 (8, Suppl. C), C7-C12 (2006).</li>
<li>Rahmani, M., Cruz, R. P., Granville, D. J., McManus, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allograft+Vasculopathy+Versus+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Allograft Vasculopathy Versus Atherosclerosis.</a> Circ. Res. 99 (8), 801-815 (2006).</li>
<li>Luis, A. J. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/nature/journal/v407/n6801/full/407233a0.html">Atherosclerosis.</a> Nature. 407 (6801), 233-241 (2000).</li>
<li>Libby, P., Ridker, P. M., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+and+challenges+in+translating+the+biology+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%2C+U.+K%29%22%5BJournal%5D)">Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis.</a> Nature (London, U. K). 473 (7347), 317-325 (2011).</li>
<li>Boring, L., Gosling, J., Cleary, M., Charo, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+lesion+formation+in+CCR2-%2F-+mice+reveals+a+role+for+chemokines+in+the+initiation+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%29%22%5BJournal%5D)">Decreased lesion formation in CCR2-/- mice reveals a role for chemokines in the initiation of atherosclerosis.</a> Nature (London). 394 (6696), 894-897 (1998).</li>
<li>Szmitko, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Markers+of+Inflammation+and+Endothelial+Cell+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">New Markers of Inflammation and Endothelial Cell Activation.</a> Circulation. 108 (16), 1917-1923 (2003).</li>
<li>Deshmane, S. L., Kremlev, S., Amini, S., Sawaya, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+Chemoattractant+Protein-1+%28MCP-1%29%3A+An+Overview%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Interferon+Cytokine+Res%22%5BJournal%5D)">Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1): An Overview.</a> J. Interferon Cytokine Res. 29 (6), 313-326 (2009).</li>
<li>Chung, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte-Targeting+Supramolecular+Micellar+Assemblies%3A+A+Molecular+Diagnostic+Tool+for+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">Monocyte-Targeting Supramolecular Micellar Assemblies: A Molecular Diagnostic Tool for Atherosclerosis.</a> Adv. Healthcare Mater. 4 (3), 367-376 (2015).</li>
<li>Chung, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+and+therapeutic+peptides+in+nanomedicine+for+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Targeting and therapeutic peptides in nanomedicine for atherosclerosis.</a> Exp Biol Med (Maywood). 241 (9), 891-898 (2016).</li>
<li>Sanz, J., Fayad, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+atherosclerotic+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%2C+U.+K.%29%22%5BJournal%5D)">Imaging of atherosclerotic cardiovascular disease.</a> Nature (London, U. K.). 451 (7181), 953-957 (2008).</li>
<li>Tarkin, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://circres.ahajournals.org/content/118/4/750">Imaging Atherosclerosis.</a> Circ. Res. 118 (4), 750-769 (2016).</li>
<li>Hennerici, M., Baezner, H., Daffertshofer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+and+arterial+wall+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrovasc+Dis%22%5BJournal%5D)">Ultrasound and arterial wall disease.</a> Cerebrovasc Dis. 17 Suppl 1, 19-33 (2004).</li>
<li>Nissen, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+intravascular+ultrasound+to+characterize+coronary+artery+disease+and+assess+the+progression+or+regression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Application of intravascular ultrasound to characterize coronary artery disease and assess the progression or regression of atherosclerosis.</a> Am J Cardiol. 89 (4A), 24B-31B (2002).</li>
<li>Khalil, M. M., Tremoleda, J. L., Bayomy, T. B., Gsell, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+SPECT+Imaging%3A+An+Overview%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Molecular SPECT Imaging: An Overview.</a> Int J Mol Imaging. 2011, 796025(2011).</li>
<li>Lerakis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+the+vulnerable+plaque%3A+noninvasive+and+invasive+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Imaging of the vulnerable plaque: noninvasive and invasive techniques.</a> Am J Med Sci. 336 (4), 342-348 (2008).</li>
<li>Sun, Z. H., Rashmizal, H., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+plaques+in+coronary+arteries+with+PET+and+SPECT%5BTitle%5D)+AND+%22J+Geriatr+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of plaques in coronary arteries with PET and SPECT.</a> J Geriatr Cardiol. 11 (3), 259-273 (2014).</li>
<li>Godin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+applications+of+nanomedicine+for+the+diagnosis+and+treatment+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Emerging applications of nanomedicine for the diagnosis and treatment of cardiovascular diseases.</a> Trends Pharmacol. Sci. 31 (5), 199-205 (2010).</li>
<li>Branco de Barros, A. L., Tsourkas, A., Saboury, B., Cardoso, V. N., Alavi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+role+of+radiolabeled+nanoparticles+as+an+effective+diagnostic+technique%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Res%22%5BJournal%5D)">Emerging role of radiolabeled nanoparticles as an effective diagnostic technique.</a> EJNMMI Res. 2 (1), 31-39 (2012).</li>
<li>Jayagopal, A., Linton, M. F., Fazio, S., Haselton, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+atherosclerosis+using+nanotechnology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Atheroscler.+Rep%22%5BJournal%5D)">Insights into atherosclerosis using nanotechnology.</a> Curr. Atheroscler. Rep. 12 (3), 209-215 (2010).</li>
<li>Khodabandehlou, K., Masehi-Lano, J. J., Poon, C., Wang, J., Chung, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+cell+adhesion+molecules+with+nanoparticles+using+in+vivo+and+flow-based+in+vitro+models+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Targeting cell adhesion molecules with nanoparticles using in vivo and flow-based in vitro models of atherosclerosis.</a> Exp Biol Med (Maywood). 242 (8), 799-812 (2017).</li>
<li>Trent, A., Marullo, R., Lin, B., Black, M., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/sm/2011/c1sm05862b#!divAbstract">Structural properties of soluble peptide amphiphile micelles.</a> Soft Matter. 7 (20), 9572-9582 (2011).</li>
<li>Hartgerink, J. D., Beniash, E., Stupp, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide-amphiphile+nanofibers%3A+A+versatile+scaffold+for+the+preparation+of+self-assembling+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Peptide-amphiphile nanofibers: A versatile scaffold for the preparation of self-assembling materials.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (8), 5133-5138 (2002).</li>
<li>Missirlis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+Peptide+Secondary+Structure+on+the+Peptide+Amphiphile+Supramolecular+Structure+and+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Effect of the Peptide Secondary Structure on the Peptide Amphiphile Supramolecular Structure and Interactions.</a> Langmuir. 27 (10), 6163-6170 (2011).</li>
<li>Zhong, L., Johnson, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+affects+amino+acid+preference+for+secondary+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Environment affects amino acid preference for secondary structure.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89 (10), 4462-4465 (1992).</li>
<li>Shimada, T., Lee, S., Bates, F. S., Hotta, A., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wormlike+Micelle+Formation+in+Peptide-Lipid+Conjugates+Driven+by+Secondary+Structure+Transformation+of+the+Headgroups%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Wormlike Micelle Formation in Peptide-Lipid Conjugates Driven by Secondary Structure Transformation of the Headgroups.</a> J. Phys. Chem. B. 113 (42), 13711-13714 (2009).</li>
<li>Missirlis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linker+Chemistry+Determines+Secondary+Structure+of+p5314-29+in+Peptide+Amphiphile+Micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Linker Chemistry Determines Secondary Structure of p5314-29 in Peptide Amphiphile Micelles.</a> Bioconjugate Chem. 21 (3), 465-475 (2010).</li>
<li>Elbert, D. L., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.ms.26.080196.002053">Surface treatments of polymers for biocompatibility.</a> Annu. Rev. Mater. Sci. 26, 365-394 (1996).</li>
<li>Xue, Y., O'Mara, M. L., Surawski, P. P. T., Trau, M., Mark, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Poly%28ethylene+glycol%29+%28PEG%29+Spacers+on+the+Conformational+Properties+of+Small+Peptides%3A+A+Molecular+Dynamics+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Effect of Poly(ethylene glycol) (PEG) Spacers on the Conformational Properties of Small Peptides: A Molecular Dynamics Study.</a> Langmuir. 27 (1), 296-303 (2011).</li>
<li>Canalle, L. A., Loewik, D. W. P. M., van Hest, J. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypeptide-polymer+bioconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Polypeptide-polymer bioconjugates.</a> Chem. Soc. Rev. 39 (1), 329-353 (2010).</li>
<li>Hamley, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEG-Peptide+Conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">PEG-Peptide Conjugates.</a> Biomacromolecules. 15 (5), 1543-1559 (2014).</li>
<li>Acar, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+building+blocks+in+medical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Delivery+Rev%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based building blocks in medical applications.</a> Adv. Drug Delivery Rev. , (2016).</li>
<li>Busseron, E., Ruff, Y., Moulin, E., Giuseppone, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+self-assemblies+as+functional+nanomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Supramolecular self-assemblies as functional nanomaterials.</a> Nanoscale. 5 (16), 7098-7140 (2013).</li>
<li>Barrett, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acsbiomaterials.6b00422">Modular Peptide Amphiphile Micelles Improving an Antibody-Mediated Immune Response to Group A Streptococcus.</a> ACS Biomater. Sci. Eng. 3 (2), 144-152 (2017).</li>
<li>Toughrai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction-Sensitive+Amphiphilic+Triblock+Copolymers+Self-Assemble+Into+Stimuli-Responsive+Micelles+for+Drug+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Macromol.+Biosci%22%5BJournal%5D)">Reduction-Sensitive Amphiphilic Triblock Copolymers Self-Assemble Into Stimuli-Responsive Micelles for Drug Delivery.</a> Macromol. Biosci. 15 (4), 481-489 (2015).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+accumulation+in+mouse+atherogenesis+is+progressive+and+proportional+to+extent+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Monocyte accumulation in mouse atherogenesis is progressive and proportional to extent of disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103 (27), 10340-10345 (2006).</li>
<li>Kashiwagi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+monocyte+subsets+with+vulnerability+characteristics+of+coronary+plaques+as+assessed+by+64-slice+multidetector+computed+tomography+in+patients+with+stable+angina+pectoris%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis+%28Amsterdam%2C+Neth%29%22%5BJournal%5D)">Association of monocyte subsets with vulnerability characteristics of coronary plaques as assessed by 64-slice multidetector computed tomography in patients with stable angina pectoris.</a> Atherosclerosis (Amsterdam, Neth). 212 (1), 171-176 (2010).</li>
<li>Chung, E. J., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Advances+in+Targeted%2C+Self-Assembling+Nanoparticles+to+Address+Vascular+Damage+Due+to+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">Recent Advances in Targeted, Self-Assembling Nanoparticles to Address Vascular Damage Due to Atherosclerosis.</a> Adv. Healthcare Mater. 4 (16), 2408-2422 (2015).</li>
<li>Cassetta, L., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+immunosurveillance%3A+role+of+patrolling+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Cancer immunosurveillance: role of patrolling monocytes.</a> Cell Res. 26 (1), 3-4 (2016).</li>
<li>Williams, C. B., Yeh, E. S., Soloff, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-associated+macrophages%3A+unwitting+accomplices+in+breast+cancer+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Breast+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumor-associated macrophages: unwitting accomplices in breast cancer malignancy.</a> NPJ Breast Cancer. 2, (2016).</li>
<li>Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytes+and+Macrophages+in+Cancer%3A+Development+and+Functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Microenviron%22%5BJournal%5D)">Monocytes and Macrophages in Cancer: Development and Functions.</a> Cancer Microenviron. 6 (2), 179-191 (2013).</li>
<li>Schick, M. J. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/j100803a013">Effect of temperature on the critical micelle concentration of nonionic detergents. Thermodynamics of micelle formation.</a> J. Phys. Chem. 67 (9), 1796-1799 (1963).</li>
<li>Marullo, R., Kastantin, M., Drews, L. B., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+contour+length+determines+equilibrium+secondary+structure+in+protein-analogous+micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Peptide contour length determines equilibrium secondary structure in protein-analogous micelles.</a> Biopolymers. 99 (9), 573-581 (2013).</li>
<li>Hilbich, C., Kisters-Woike, B., Reed, J., Masters, C. L., Beyreuther, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1453457">Substitutions of hydrophobic amino acids reduce the amyloidogenicity of Alzheimer's disease βA4 peptides.</a> J. Mol. Biol. 228 (2), 460-473 (1992).</li>
<li>Trevino, S. R., Scholtz, J. M., Pace, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid+Contribution+to+Protein+Solubility%3A+Asp%2C+Glu%2C+and+Ser+Contribute+more+Favorably+than+the+other+Hydrophilic+Amino+Acids+in+RNase+Sa%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Amino Acid Contribution to Protein Solubility: Asp, Glu, and Ser Contribute more Favorably than the other Hydrophilic Amino Acids in RNase Sa.</a> J. Mol. Biol. 366 (2), 449-460 (2007).</li>
<li>Kim, S. W., Shi, Y. Z., Kim, J. Y., Park, K. N., Cheng, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+barriers+in+micellar+drug+delivery%3A+Loading+efficiency%2C+in+vivo+stability%2C+and+micelle-cell+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Overcoming the barriers in micellar drug delivery: Loading efficiency, in vivo stability, and micelle-cell interaction.</a> Expert Opin Drug Delivery. 7 (1), 49-62 (2010).</li>
<li>Rangel-Yagui, C. O., Pessoa, A. Jr, Tavares, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micellar+solubilization+of+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Micellar solubilization of drugs.</a> J. Pharm. Pharm. Sci. 8 (2), 147-163 (2005).</li>
<li>Batrakova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamental+relationships+between+the+composition+of+pluronic+block+copolymers+and+their+hypersensitization+effect+in+MDR+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Fundamental relationships between the composition of pluronic block copolymers and their hypersensitization effect in MDR cancer cells.</a> Pharm. Res. 16 (9), 1373-1379 (1999).</li>
<li>Chen, L. J., Lin, S. Y., Huang, C. C. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jp9804345?journalCode=jpcbfk">Effect of Hydrophobic Chain Length of Surfactants on Enthalpy-Entropy Compensation of Micellization.</a> J. Phys. Chem. B. 102 (22), 4350-4356 (1998).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

PAMs MCP-1 הם פלטפורמה הדמיה מולקולרית מבטיח, המורכב פפטיד מיקוד הידרופילית וזנב הידרופובי שמניע את מהות עצמית שהורכב ננו-חלקיק. מיצלה פילוח מונוציט הזה ניתן להכין על ידי סינתזה פשוטה ואת שלבי טיהור של פפטיד MCP-1 ו- DSPE-יתד (2000)-MCP-1. PAMs יש מאפיינים רבים מועילים ויוו מולקולרית הדמיה כגון שלהם הרכבה עצמית תחת תנאים מתון biodegradability מהותי, מבניים וכימיים גיוון המאפשר שיתוף אחרים moieties הדמיה או פילוח פפטידים למסור באופן סלקטיבי אתר מסוים של עניין. יהיה מכוון שלהם גודל החלקיקים, צורה, הרכב על ידי שינו...

מחלות לב וכלי דם להישאר להיות הגורמים המובילים. למוות באופן גלובלי עם 17.3 מיליון מקרי מוות ברחבי העולם1. מחלות לב וכלי דם נתרמים על ידי טרשת עורקים, מצב שבו הפלאק לבנות את העורקים, ובכך מעכבים דם, זרימת חמצן אל התאים של הגוף2,3. ההתקדמות של טרשת עורקים כרוך את עיבוי ואת התקשות של העורקים על ידי תגובה דלקתית, חילוף החומרים של השומנים לא סדיר, הצטברות פלאק, המוביל אל רובד אוטם שריר הלב ולמסמנים4,5. תאי אנדותל מבטאים מולקולות ציטוקינים והצמדות, הכוללים MCP-1 זה נקשר לקולטן C-C כימוקין (CCR2) על פני השטח של monocytes6,7,8. כולסטרול מחומצן ממירה ומונוציטים מקרופאגים בשלב מוקדם של היווצרות הפלאק, אשר מגביר את התגובה דלקתית באזור, מוביל פגיעה ברקמות ואת היווצרות הפלאק לא יציבה או פגיע9, 10.
באופן מסורתי, טרשת עורקים מחושבת על-ידי הערכת היצרות luminal על ידי הדמיה אנטומית באמצעות11,של מסתמים או אולטרסאונד-12. עם זאת, שיטות אלה יכול לקבוע אך ורק היצרות חמורה של הקיר עורקים, לא שבשלב מוקדם של טרשת עורקים, כמו צמיחה שלט הראשונית גורמת שיפוץ העורקים כדי לשמור על גודל עורק ודם תזרים קצב12,13, 14. לכן, angiograms underrepresent שכיחות טרשת עורקים. בנוסף, טכניקות הדמיה לא פולשנית כגון פליטת פוטון בודד שחושב טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה, דימות תהודה מגנטית שימשו לאחרונה לאפיין פלאק מורפולוגיה כפי שהם יכולים לספק פרטים הראשונית, אפיון של הפלאק. עם זאת, האופנים האלה מוגבלים לעיתים קרובות על ידי חוסר רגישות, רזולוציה מרחבית, או דורשים השימוש של קרינה מייננת, ביצוע הדמיה פלאק התקדמות בשלבים שונים הרבה יותר מאתגר15,16, 17. מערכת משלוח הדמיה אשר במיוחד מזהה שלטי בשלבים שונים של טרשת עורקים נשאר להיות מפותח.
חלקיקים הוכיחו להיות פלטפורמה המתעוררים ויוו פלאק מיקוד ואבחון18,19,20,21. בפרט, PAMs הם יתרון בשל המגוון הכימי שלהם ואת היכולת להכיל מגוון moieties, יצירות, גדלים, צורות של פני השטח functionalization22. פפטיד חומרים פעילי שטח (PAs) מורכב הידרופיליות, פפטיד "headgroup" מצורף וזנב הידרופובי, אשר בדרך כלל שומנים; מבנה amphiphilic זה מקנה יכולות וההספק עצמי ומאפשר תצוגה multivalent של פפטידים על פני השטח של חלקיקים22,23,24. Headgroups פפטיד יכול להשפיע על צורת החלקיקים באמצעות קיפול ומימן מליטה בין פפטידים25. פפטידים מקפלים כתהליכי β-גיליון הוכחו יוצרות הקזאין מוארך, ואילו אישור α-הסליל יכולים ליצור שני כדורי ומוארך הקזאין22,23,24, 2526,,27. ניתן להניח linkers פוליאתילן גליקול (PEG) למגן את המטען משטח של פפטיד בין פפטיד הידרופילית את וזנב הידרופובי של PAMs, שיפור הזמינות של ננו-חלקיק מחזור מערכתי28, 29 , 30 , 31. PAMs הם גם יתרון כי הם אינם מסתיימים הוכחו, יש מגוון רחב של יישומי32,33. המסיסות במים הקזאין מציע יתרון על פני מערכות אחרות כגון חלקיקים פולימרים מסוימים אינם מסיסים במים, יש להיות מושעים ב- solubilizers עבור זריקות34מבוססי ננו-חלקיק. בנוסף, היכולת ליצור PAMs זה לפרק בתגובה לגירויים ספציפיים הופכת PAMs מבוקר הסמים תאיים משלוח35ההרסני.
על ידי קשירה לקולטן CCR2 המצטבר קשת אבי העורקים, PAMs פותחו בעבר עבור מונוציט מיקוד לעקוב אחר השלבים השונים התרדמה ב אבי העורקים9. בעכברים ספקיות- / - , הצטברות מונוציט מגדילה באופן פרופורציונלי פלאק התקדמות36. יתר על כן, נמצא כי חולים עם שלטי נוטה להיקרע, בשלב מאוחר מכילים כמויות גבוהות של monocytes37. לכן, השינוי של PAMs לשלב MCP-1 הוא שימושי כי זה מאפשר להגדיר מיקוד ובידול בין התרדמה, מאוחר-בשלב מוקדם. מחקרים אלה הוכחה הרעיון לאמת גם כי PAMs בטוחים מספיק לשמש pre-clinically, נמחקים renally38. מאז ומונוציטים ודלקת האופייני למחלות אחרות, PAMs MCP-1 יש פוטנציאל לשמש ליישומים טיפוליים ואבחון מחלות אחרות מעבר טרשת עורקים-8,-39,-40 , 41.
במסמך זה, אנו מדווחים על הזיוף של PAMs MCP-1 מאוד מדרגיים, שהורכבו עצמית, אשר הדגים של החלקיק לגודל האופטימלי משטח הטעינה, המיקוד סלקטיבי ומונוציטים עבור יישומי הדמיה משופר של טרשת עורקים.

<table><tbody><tr><td>1,2-ethanedithiol</td><td>VWR</td><td>E0032</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>10 מ"ל צנרת סרולוגית חד פעמית</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות צנטריפוגה, פוליפרופילן</td><td>VWR</td><td>89401-566</td><td>ליישומים שונים</td></tr><tr><td>2,5-חומצה דיהידרוקסיבנזואית, 99%</td> <td>AC165200050 מדעי של פישר</td><td></td><td>עבור MALDI</td></tr><tr><td>25 מ"ל חד פעמי צנרת סרולוגית</td><td>VWR</td><td>89130-900</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol, 50 מ"מ</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>31350010</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>5 מ"ל צנרת סרולוגית חד פעמית</td><td>VWR</td><td>89130-896</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות צנטריפוגה</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td>ליישומים שונים</td></tr><tr><td>בקבוק תרבית 75 ס"מ</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-680-65</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>75 מ"ל כלי תגובה</td> טכנולוגיות <td>חלבון</td><td>3000005</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים 96 בארות</td><td>VWR</td><td>40101-346</td><td>לבדיקת MTS</td></tr><tr><td>אצטוניטריל, HPLC כיתה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A998SK-4</td><td>לטיהור HPLC</td></tr><tr><td>זכוכית בורוסיליקט, 1 דראם</td><td>VWR</td><td>66011-041</td><td>לסינתזה PAM</td></tr><tr><td>פיפט זכוכית Borosillicate, טיפים ארוכים</td><td>VWR</td><td>14673-043</td><td>ליישומים שונים</td></tr><tr><td>Coverslip, 0.16-0.19 מ"מ, 22 x 22 מ"מ</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542B</td><td>למיקרוסקופיה קונפוקלית</td></tr><tr><td>Cy5 אמין</td><td>Abcam</td><td>ab146463</td><td>לצימוד פפטידים</td></tr><tr><td>אתר דיאתיל, כיתה ACS</td><td>Fisher Scientific</td><td>E138-1</td><td>למשקעי פפטיד</td></tr><tr><td>חד פעמי מזרקים, 20 מ"ל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-817-54</td><td>לטיהור HPLC</td></tr><tr><td>נויבאואר כפול נשלט המוציטומטר</td><td>VWR</td><td>63510-13</td><td>לספירת תאים</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000) אמין</td><td>Avanti</td><td>880128P</td><td>לצימוד פפטידים</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000) maleimide</td><td>Avanti</td><td>880126P</td><td>לצימוד פפטידים</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000)-NHS ester&nbsp;</td><td>Nanocs</td><td>PG2-DSNS-10K</td><td>לצימוד ל-Cy5</td></tr><tr><td>Dulbecco's עיט גלוקוז בינוני-גבוה</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>D5796-500ML</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי, מוסמך, מומת בחום</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10438026</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ala-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-A</td><td>לסינתזה</td></tr> <tr><td>של פפטידיםטכנולוגיות חלבון Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH /HBTU</td><td></td><td>PS3-H5-RBF</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Asn(Trt)-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-NT</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Cys(Trt)-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-CT</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Gln(Trt)-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-QT</td><td>לסינתזת פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ile-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-I</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Leu-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-L</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Lys(Boc)-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-KBC</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Phe-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-F</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ser(tBu)-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-SB</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Thr(tBu)-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-TB</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-YB</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Val-OH /HBTU</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>PS3-H5-V</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>שרף Fmoc-Lys(Boc)-wang, 100-200 רשת</td><td>Novabiochem</td><td>856013</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>חומצה פורמית, אופטימה LC/MS כיתה</td><td>פישר מדעי</td><td>A117-50</td><td>לטיהור HPLC</td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>VWR</td><td>M152-1L</td><td>למיקרוסקופיה קונפוקלית</td></tr><tr><td>מונה ספירת יד</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S90189</td><td>לספירת תאים</td></tr><tr><td>מוטות ערבוב מגנטיים, </td><td>בצורת ביצה VWR</td><td>58949-006</td><td>לצימוד פפטידים</td></tr><tr><td>מתנול, מוסמך ACS</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td>לסינתזת PAM</td></tr><tr><td>ערכת בדיקה קולורימטרית של התפשטות תאי MTS</td><td>VWR</td><td>10191-104</td><td>לבדיקת MTS</td></tr><tr><td>N, N-Dimethylformamide, דרגת ריצוף</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>N-Methylmorpholine</td><td>טכנולוגיות חלבון</td><td>S-1L-NMM</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC416780250</td><td>לקיבוע תאים</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010049</td><td>ליישומים שונים</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין, 10,000 U/mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td>לתרבית תאים</td></tr> כלי <tr><td>סינתזה פפטיד, 25 מ"ל& נ.ב.פ;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>CG186011</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>חומצה פוספוטונגסטית&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A248-25</td><td></td></tr><tr><td>לספקטרום</td><td>TEM פיפרידין</td><td>P1146-2.5LTGL</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>שקופית מיקרוסקופ זכוכית רגילה 75 x 25 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-A3</td><td>למיקרוסקופיה קונפוקלית</td></tr><tr><td>מאגרי ריאגנטים, סטריליים&nbsp;</td><td>95128093</td><td>VWR לתרבית תאים</td><td></td></tr> <tr><td>פינצטה סגירה עצמית</td><td>TedPella</td><td>515</td><td>לסרט תמיכה TEM</td></tr><tr><td>TEM</td><td>TedPella</td><td>01814F</td><td></td></tr><tr><td>לחומצה טריפלואורואצטית TEM&nbsp;</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP618-500</td><td>למחשוף פפטידים וטיהור HPLC</td></tr><tr><td>Triisopropylsilane</td><td>VWR</td><td>TCT1533-5 מ"ל</td><td>למחשוף פפטידים</td></tr><tr><td>תמיסה כחולה טריפאן, 0.4%</td> <td>ThermoFisher Scientific</td><td>15250061</td><td>לספירת תאים</td></tr><tr><td>פינצטה, משוננת לשימוש כללי</td><td>VWR</td><td>231-SA-SE</td><td>למיקרוסקופיה קונפוקלית</td></tr><tr><td>WEHI-274.1</td><td>ATCC</td><td>ATCC&nbsp; CRL-1679</td><td>עכברים מונוציטים</td></tr><tr><td>אוטומטיים סינתיסייזר פפטיד שולחני</td> טכנולוגיות <td></td><td>חלבון</td><td>PS3 סינתיסייזר פפטיד ספסל</td></tr> <tr><td>ואלפא;- ציאנו- 4- חומצה הידרוקסיצינמית, 99%</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>476870-2G</td><td>עבור MALDI</td></tr></tbody></table>

סינתזה של פילוח מונוציט פפטיד אמפיפיליות הקזאין עבור הדמיה של טרשת עורקים

Synthesis of Monocyte-targeting Peptide Amphiphile Micelles for Imaging of Atherosclerosis

טרשת עורקים הוא תורם מרכזי למחלות לב וכלי דם, הגורם המוביל למוות ברחבי העולם, אשר טוען 17.3 מיליון אנשים בשנה. טרשת עורקים הוא גם הגורם המוביל של מוות פתאומי, אוטם שריר הלב, שעודד פלאק לא יציב נקרעים ועוברים occlude את כלי הדם ללא אזהרה. זרם שיטות הדמיה לא יכול להבדיל בין פלאק לא יציב ויציבה להיקרע. פפטיד חומרים פעילי שטח הקזאין (PAMs) יכול להתגבר על חיסרון זה כפי ניתן לשנותן עם מגוון של פילוח moieties לאגד במיוחד כדי רקמות חולות. ומונוציטים הוכחו להיות סמנים מוקדם של טרשת עורקים, בעוד הצטברות גדולה של monocytes משויך הפלאק נוטה להיקרע. לפיכך, חלקיקים שיכולות היעד ומונוציטים ניתן להפלות בשלבים שונים של טרשת עורקים. לשם כך, כאן, נתאר פרוטוקול על פי פילוח מונוציט PAMs (מונוציט chemoattractant חלבון-1 (MCP-1) PAMs). PAMs MCP-1 הם התאספו עצמית דרך סינתזה בתנאים מתון כדי טופס חלקיקים של 15 ננומטר קוטר עם יד תשלום משטח נייטרלי. במבחנה, PAMs נמצאו מסתיימים והיתה זיקה מחייבת גבוהה עבור ומונוציטים. בשיטות המתוארות בזאת מבטיחים למגוון רחב של יישומים טרשת עורקים, כמו גם מחלות דלקתיות אחרות.

הכנה של פאם MCP-1 מוטיב CCR2 מחייב (שאריות 13-35) של MCP-1 חלבון [YNFTNRKISVQRLASYRRITSSK] או מקושקשות פפטיד [YNSLVFRIRNSTQRKYRASIST] שונתה על-ידי הוספת משקע ציסטאין על קצה אמיני. פפטיד MCP-1 היה מסונתז על ידי שיטה מוצק-פאזי בתיווך Fmoc באמצעות סינתיסייזר של פפטיד אוטומטית. פפטיד גולמי היתה מטוהרת על-ידי הפוכה-פאזי HPLC על עמודה C8 ב 50 מעלות צלזיוס באמצעות 0.1% TFA ב תערובות acetonitrile/מים, מאופיין MALDI ספקטרומטר מסה (איור 1). פפטיד המ...

מאמר זה מציג שיטה המערבים את סינתזה ואפיון של פילוח מונוציט פפטיד אמפיפיליות הקזאין, מבחני המתאימה כדי לבדוק את התאימות והיכולת של מיצלה כדי לאגד ומונוציטים.

Atherosclerosis is a major contributor to cardiovascular disease, the leading cause of death worldwide, which claims 17.3 million lives annually. ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לסנתז מיצלות אמפיפיליות המכוונות לפפטידים מונוציטים להדמיית טרשת עורקים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלת מפתח בתחום הלב וכלי הדם לגבי הדמיה אבחנתית של רובד טרשת עורקים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא ששילוב של מיצלות אמפיפיליות פפטידיות עם MCP-1 מאפשר ספציפיות מיקוד גדולה יותר והבחנה בין נגעים טרשת עורקים בשלב מוקדם ומאוחר.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על אבחון רובד בשלבים שונים של טרשת עורקים, שכן חולים עם פלאק בשלב מאוחר המועדים לקרע מכילים מספר גבוה יותר של מונוציטים. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי טרשת עורקים, ניתן ליישם אותה גם על מחלות אחרות, כגון סרטן. מי שידגים איתי את ההליך יהיה ג'ונתן וואנג, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלנו.התחל בשקילת 0.25 מילימול של שרף fmach-L-ליזין-באך-וונג-שרף בכלי תגובה. העבירו את הכלי למכסה אדים כימי ושטפו את דפנות הכלי בחמישה מיליליטר דימתילפורמיד. טען את כלי התגובה ובקבוקוני חומצות אמינו ארוזים מראש ממסוף C-to-N, על סינתיסייזר פפטיד אוטומטי על שולחן, כולל בקבוקון ריק בקצה להגדרת ההגנה הסופית.לאחר הפעלת הסינתזה, העבירו את הפפטידים והשרף מכלי התגובה לבקבוקון נצנוץ המכיל שניים עד שלושה מיליליטר מתנול עד להעברת כל השרף. כאשר השרף שקע לתחתית הבקבוקון, הסר את הסופרנאן ואפשר לשרף להתייבש באוויר, ולאחר מכן ייבוש בוואקו

synthesis-monocyte-targeting-peptide-amphiphile-micelles-for-imaging

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

כדי להדגים הדמיה מולקולרית סרטן MR עם פפטיד קטן ממוקד חומר ניגוד MRI ספציפי לחלבוני פלזמה קרוש בstroma גידול במודל עכבר של סרטן ערמונית.

MR הדמיה המולקולרית של סרטן הערמונית עם חומר ניגוד ממוקד המולקולרי קטן CLT1 פפטיד

דוגמא של תרופה הננו על בסיס חומצת polymalic מוצגת לקראת תכנון רציונלים של רפואה אישית כי הוא ישים לסרטן. הוא מתאר את הסינתזה של תרופת ננו לטיפול בסרטן השד אנושי מסוג HER2 חיובי בעכבר בעירום.

Biopolymers מבוסס חומצת Polymalic ננו עבור מיקוד של גידול סמנים מרובים: הזדמנות לרפואה מותאמת אישית?

אנו מראים את ההכנה ומתייחסים להיתכנות של כלי רכב סלולריים המכילים ננו-מוטות זהב להדמיה פוטו-אקוסטית של סרטן.

ניתוח הכנת photoacoustic של כלי רכב ניידים המכילים Nanorods הזהב

טכנולוגיית מיקרוגל מאפשרת סינתזה מהר מאוד של חלקיקי תחמוצת ברזל לאפיון פלאק טרשת עורקים. השימוש של aminobisphosphonate בצד החיצוני של ננו-החלקיקים מספק הצטברות מהירה בתחום הטרשת העורק.

סינתזה מיקרוגל מונחה של תחמוצת ברזל חלקיקים עבור איתור מהיר של טרשת עורקים

כדי לספק תרופות לסרטן לאתרי גידול עם ספציפיות גבוהה ותופעות לוואי מופחתות, נדרשות שיטות חדשות המבוססות על ננו-חלקיקים. כאן, אנו מתארים מיצלות צולבות דיסולפיד שניתן להכין בקלות על ידי חמצון בתיווך מי חמצן ומסוגלות להתנתק ביעילות בסביבת גידול מפחיתה כדי לשחרר מטענים.

גישה קלילה ויעילה לייצור ההפיך דיסולפיד צולב Micelles

פפטידים ויראלי-derived מצמידים נוגדן-conjugates (ACs) היא גישה צובר תאוצה בשל הפוטנציאל להעברת מטענים מולקולרית עם הצטברות תאי הגידול מוגברת. ניצול שיטות נפוצות כדי להעריך את ההטיה פפטיד, AC הצטברות תאיים המטען ואת הגידול מיקוד, פרוטוקול זה מסייע החוקרים במהלך שלבי הפיתוח מפתח.

ההערכה הראשונית של נוגדן-conjugates שונה עם פפטידים ויראלי-derived הגדלת לצבירה התאית ושיפור הגידול מיקוד

ומונוציטים הם מתווכים חשובים של arteriogenesis בהקשר של מחלת עורקים היקפית. פרוטוקול זה באמצעות מטריקס קרום המרתף דמוי מיקרוסקופ intravital, חוקר אנגיוגנזה ביות ו הקשורות הגידול מונוציט לאחר ההזרקה מונוציט במודל מאתר מצדו בעורק הירך.

מיקרוסקופ intravital של יונת מונוציט, הקשורות הגידול אנגיוגנזה במודל מאתר של מחלת עורקים היקפית

אנו מתארים פרוטוקול למדוד גלגול מאת ומונוציטים מעבר monolayers אנדותל אנושית ועם בגרות עוקבות שלהם לתאי קצף. זה מספק שיטה תכליתי כדי להעריך את מאפייני atherogenic ומונוציטים מבודד מאנשים עם מחלות שונות תנאים וכדי להעריך גורמים בדם אשר עשוי לשפר את הנטייה הזאת.

כימות של גלגול מונוציט ויצירת תאי קצף מאנשים עם מצבים דלקתיים כרוניים

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לכמת את פעילות כימוטקטיק של דם מונוציטים בדגמי העכבר, כדי להעריך את ההשפעות של התערבויות תזונתיות, תרופתי וגנטי על מונוציט דם ולאפיין את מונוציטים בדם נגזר מקרופאגים ב מודלים לעכבר באמצעות חלבון מונוציט-כימוסטנט-1 (MCP-1)-העמיסו במרתף ממברנה ממברנות ג'ל הנגזר.

הכמת של פעילות כימוכתית מונוציט בVivo ואפיון מקרופאגים הנגזרים מונוציט

כאן אנו מתארים את השימוש של הרכבה עצמית 3 ממדי הפיגום לתרבות תאים אנושיים אבי עצביים. אנו מציגים פרוטוקול לשחרר את התאים מן הפיגומים כדי להיות מנותח למשל לאחר מכן על ידי cytometry הזרימה. פרוטוקול זה עשוי להתאים סוגי תאים אחרים לבצע מחקרים מפורטים באופן מכניסטי.

טיפוח האדם ובתאים עצבית ב Hydrogel עצמית להרכבת 3 מימדי פפטיד

למדו לסנתז מיצלות פפטיד אמפיפיליות המכוונות למונוציטים לצורך הדמיה של טרשת עורקים. השיטה מאפשרת הבחנה בין פלאקים בשלבים מוקדמים ומאוחרים של המחלה ומשפרת את הספציפיות האבחנתית.

סינתזה של פילוח מונוציט פפטיד אמפיפיליות הקזאין עבור הדמיה של טרשת עורקים

גלה סרטונים נוספים