Name: תחיית המתים של רדום דפניה מגנה: פרוטוקול ויישומים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: למדו שיטה לתחיית שלבים נרדמים של Daphnia magna ממשקעי אגמים. הטכניקה מאפשרת חקר תהליכים אבולוציוניים ואקולוגיים בפרקי זמן ממושכים, ומספקת כלי רב עוצמה להבנת מנגנוני האבולוציה בטבע.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי המענק מדגיש NERC (NE N016777 1). Ensis בע מ, שירותי מדעי הסביבה, המרכז לחקר שינוי סביבתי, אוניברסיטת קולג '-לונדון שנדגמו, יצאתי עם ליבת משקעים.

<ol><li>Lindenmayer, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1442-9993.2011.02351.x/abstract">Value of long-term ecological studies.</a> Austral Ecol. 37 (7), 745-757 (2012).</li>
<li>Orsini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+time+machine%3A+using+dormant+propagules+to+forecast+how+populations+can+adapt+to+changing+environments%5BTitle%5D)+AND+%22TREE%22%5BJournal%5D)">The evolutionary time machine: using dormant propagules to forecast how populations can adapt to changing environments.</a> TREE. 28, 274-282 (2013).</li>
<li>Grant, P. R., Grant, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unpredictable+evolution+in+a+30-+year+study+of+Darwin%27s+finches%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Unpredictable evolution in a 30- year study of Darwin's finches.</a> Science. 296, 707-711 (2002).</li>
<li>Lohbeck, K. T., Riebesell, U., Reusch, T. B. H. <a target="_blank" href="http://www.nature.com/ngeo/journal/v5/n5/full/ngeo1441.html">Adaptive evolution of a key phytoplankton species to ocean acidification.</a> Nature Biosci. 5, 346-351 (2012).</li>
<li>Barrick, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+evolution+and+adaptation+in+a+long-term+experiment+with+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genome evolution and adaptation in a long-term experiment with Escherichia coli.</a> Nature. 461 (7268), 1243-1247 (2009).</li>
<li>Barrick, J. E., Lenki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+dynamics+during+experimental+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Genome dynamics during experimental evolution.</a> Nat Rev Genet. 14, 827-839 (2013).</li>
<li>Blount, Z. D., Barrick, J. E., Davidson, C. J., Lenski, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+analysis+of+a+key+innovation+in+an+experimental+Escherichia+coli+population%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genomic analysis of a key innovation in an experimental Escherichia coli population.</a> Nature. 489 (7417), 513-518 (2012).</li>
<li>Kawecki, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.cell.com/trends/ecology-evolution/fulltext/S0169-5347(12)00142-5">Experimental evolution.</a> TREE. 27, 547-560 (2012).</li>
<li>Fukami, T., Wardle, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+ecological+dynamics%3A+reciprocal+insights+from+natural+and+anthropogenic+gradients%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Long-term ecological dynamics: reciprocal insights from natural and anthropogenic gradients.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 272, 2105-2115 (2005).</li>
<li>Merila, J., Hendry, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Climate+change%2C+adaptation%2C+and+phenotypic+plasticity%3A+the+problem+and+the+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Appl%22%5BJournal%5D)">Climate change, adaptation, and phenotypic plasticity: the problem and the evidence.</a> Evol Appl. 7 (1), 1-14 (2014).</li>
<li>Evans, M. E., Dennehy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ+banking%3A+bet-hedging+and+variable+release+from+egg+and+seed+dormancy%5BTitle%5D)+AND+%22Q+Rev+Biol%22%5BJournal%5D)">Germ banking: bet-hedging and variable release from egg and seed dormancy.</a> Q Rev Biol. 80 (4), 431-451 (2005).</li>
<li>Appleby, P. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAppleby%2C+PG+%22Chronostratigraphic+techniques+in+recent+sediments%22">Chronostratigraphic techniques in recent sediments</a>. 1, Kluwer Academic Publisher. (2001).</li>
<li>Appleby, P. G., et al. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF00026640">PB-210 dating by low background gamma-counting.</a> Hydrobiologia. 143, 21-27 (1986).</li>
<li>Bidle, K. D., Lee, S. H., Marchant, D. R., Falkowski, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fossil+genes+and+microbes+in+the+oldest+ice+on+Earth%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Fossil genes and microbes in the oldest ice on Earth.</a> PNAS. 104, 13455-13460 (2007).</li>
<li>Geerts, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+evolution+of+thermal+tolerance+in+the+water+flea+Daphnia%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Clim+Change%22%5BJournal%5D)">Rapid evolution of thermal tolerance in the water flea Daphnia.</a> Nat Clim Change. 5, 665-668 (2015).</li>
<li>Jansen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+tolerance+in+the+keystone+species+Daphnia+magna-a+candidate+gene+and+an+outlier+analysis+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ecol%22%5BJournal%5D)">Thermal tolerance in the keystone species Daphnia magna-a candidate gene and an outlier analysis approach.</a> Mol Ecol. 26 (8), 2291-2305 (2017).</li>
<li>Hairston, N. G. Jr, De Stasio, B. T. Jr <a target="_blank" href="https://www.nature.com/nature/journal/v336/n6196/abs/336239a0.html">Rate of evolution slowed by a dormant propagule pool.</a> Nature. 336, 239-242 (1988).</li>
<li>Hairston, N. G. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.nature.com/nature/journal/v401/n6752/abs/401446a0.html">Lake ecosystems: Rapid evolution revealed by dormant eggs.</a> Nature. 401, 446(1999).</li>
<li>Weider, L. J., Lampert, W., Wessel, M., Colbourne, J. K., Limburg, P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1688727/">Long-term genetic shifts in a microcrustacean egg bank associated with anthropogenic changes in the Lake Constance ecosystem.</a> Proc. R. Soc. Lond. B. 264, 1613-1618 (1997).</li>
<li>Kerfoot, W. C., Robbins, J. A., Weider, L. J. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.4319/lo.1999.44.5.1232/full">A new approach to historical reconstruction: Combining descriptive and experimental paleolimnology.</a> Limnol Oceanogr. 44 (5), 1232-1247 (1999).</li>
<li>Cousyn, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+local+adaptation+of+zooplankton+behavior+to+changes+in+predation+pressure+in+the+absence+of+neutral+genetic+changes%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Rapid, local adaptation of zooplankton behavior to changes in predation pressure in the absence of neutral genetic changes.</a> PNAS. 98, 6256-6260 (2001).</li>
<li>Decaestecker, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-parasite+Red+Queen+dynamics+archived+in+pond+sediment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Host-parasite Red Queen dynamics archived in pond sediment.</a> Nature. 450, 870-874 (2007).</li>
<li>Miner, B. E., De Meester, L., Pfrender, M. E., Lampert, W., Hairston, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+genes+to+communities+and+ecosystems%3A+Daphnia+as+an+ecogenomic+model%5BTitle%5D)+AND+%22P+Roy+Soc+B-Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Linking genes to communities and ecosystems: Daphnia as an ecogenomic model.</a> P Roy Soc B-Biol Sci. 279 (1735), 1873-1882 (2012).</li>
<li>Ebert, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEbert%2C+D+%22Ecology%2C+epidemiology%2C+and+evolution+of+parasitism+in+Daphnia%22">Ecology, epidemiology, and evolution of parasitism in Daphnia</a>. , National Library of Medicine (US), National Center for Biotechnology. (2005).</li>
<li>Orsini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+genetic+stability+in+natural+populations+of+the+waterflea+Daphnia+magna+in+response+to+strong+selection+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ecol%22%5BJournal%5D)">Temporal genetic stability in natural populations of the waterflea Daphnia magna in response to strong selection pressure.</a> Mol Ecol. 25, 6024-6038 (2016).</li>
<li>IPCC. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Summary+for+policymakers%22">Summary for policymakers</a>. , Cambridge, United Kingdom and New York, NY, USA. 1-32 (2014).</li>
<li>Patmore, I. R., et al. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10933-013-9756-0">Big Ben: a new wide-bore piston corer for multi-proxy palaeolimnology.</a> J Paleolimnol. 51 (1), 79-86 (2014).</li>
<li>Wright, H. E. Jr <a target="_blank" href="http://jsedres.geoscienceworld.org/content/37/3/975">A square-rod piston sampler for lake sediments.</a> J Sedimentary Petrology. 37, 975-976 (1967).</li>
<li>Kilham, S. S., Kreeger, D. A., Lynn, S. G., Goulden, C. E., Herrera, L. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1023/A:1003231628456">COMBO: a defined freshwater culture medium for algae and zooplankton.</a> Hydrobiologia. 377, 147-159 (1998).</li>
<li>Klüttgen, B., Kuntz, N. orbert, Ratte, H. T. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0045653596000811">Combined effects of 3,4-dichloroaniune and food concentration on life-table data of two related cladocerans, Daphnia magna and Ceriodaphnia quadrangula.</a> Chemosphere. 32, 2015-2028 (1996).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22R%3A+A+language+and+environment+for+statistical+computing%22">R: A language and environment for statistical computing</a>. , Vienna, Austria. (2017).</li>
<li>Jansen, B., Geldof, S., De Meester, L., Orsini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+microsatellite+markers+in+the+waterflea+Daphnia+magna%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ecol+Res%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of microsatellite markers in the waterflea Daphnia magna.</a> Mol Ecol Res. 11, 418-421 (2011).</li>
<li>Orsini, L., Spanier, K. I., De Meester, L. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/profile/Luisa_Orsini/publication/221759092_Genomic_signature_of_natural_and_anthropogenic_stress_in_wild_populations_of_the_waterflea_Daphnia_magna_Validation_in_space_time_and_experimental_evolution/links/0fcfd50bca54f4110b000000.pdf">Genomic signature of natural and anthropogenic stress in wild populations of the waterflea Daphnia magna: validation in space, time and experimental evolution.</a> Mol Ecol. 21, 2160-2175 (2012).</li>
<li>Verberk, W. C. E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+oxygen+limit+thermal+tolerance+in+arthropods%3F+A+critical+review+of+current+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Does oxygen limit thermal tolerance in arthropods? A critical review of current evidence.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 192, 64-78 (2016).</li>
<li>Frisch, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+millennial-scale+chronicle+of+evolutionary+responses+to+cultural+eutrophication+in+Daphnia%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Lett%22%5BJournal%5D)">A millennial-scale chronicle of evolutionary responses to cultural eutrophication in Daphnia.</a> Ecol Lett. 17 (3), 360-368 (2014).</li>
<li>Yashina, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+whole+fertile+plants+from+30%2C000-y-old+fruit+tissue+buried+in+Siberian+permafrost%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Regeneration of whole fertile plants from 30,000-y-old fruit tissue buried in Siberian permafrost.</a> PNAS. 109, 4008-4013 (2012).</li>
<li>Southam, A. D., Weber, R. J. M., Engel, J., Jones, M. R., Viant, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+workflow+for+high-resolution+spectral-stitching+nanoelectrospray+direct-infusion+mass-spectrometry-based+metabolomics+and+lipidomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A complete workflow for high-resolution spectral-stitching nanoelectrospray direct-infusion mass-spectrometry-based metabolomics and lipidomics.</a> Nat Protoc. 12 (2), 310-328 (2017).</li>
<li>Rhodes, J., Beale, M. A., Fisher, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+Choices+for+Library+Prep%3A+A+Comparison+of+Library+Preparation+Methods+for+Whole+Genome+Sequencing+of+Cryptococcus+neoformans+Using+Illumina+HiSeq%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Illuminating Choices for Library Prep: A Comparison of Library Preparation Methods for Whole Genome Sequencing of Cryptococcus neoformans Using Illumina HiSeq.</a> Plos One. 9 (11), (2014).</li>
<li>Baym, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inexpensive+Multiplexed+Library+Preparation+for+Megabase-Sized+Genomes%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Inexpensive Multiplexed Library Preparation for Megabase-Sized Genomes.</a> Plos One. 10 (5), 6(2015).</li>
<li>Bourcy, C. F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Quantitative+Comparison+of+Single-Cell+Whole+Genome+Amplification+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">A Quantitative Comparison of Single-Cell Whole Genome Amplification Methods.</a> Plos One. 9 (8), (2014).</li>
<li>Hasmats, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+whole+genome+amplification+for+sequence+capture+and+massively+parallel+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Assessment of whole genome amplification for sequence capture and massively parallel sequencing.</a> PLoS One. 9 (1), e84785(2014).</li>
<li>Becks, L., Ellner, S. P., Jones, L. E., Hairston, N. G. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functional+genomics+of+an+eco-evolutionary+feedback+loop%3A+linking+gene+expression%2C+trait+evolution%2C+and+community+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Lett%22%5BJournal%5D)">The functional genomics of an eco-evolutionary feedback loop: linking gene expression, trait evolution, and community dynamics.</a> Ecol Lett. 15 (5), 492-501 (2012).</li>
<li>Ellner, S. P., Geber, M. A., Hairston, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+rapid+evolution+matter%3F+Measuring+the+rate+of+contemporary+evolution+and+its+impacts+on+ecological+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Lett%22%5BJournal%5D)">Does rapid evolution matter? Measuring the rate of contemporary evolution and its impacts on ecological dynamics.</a> Ecol Lett. 14 (6), 603-614 (2011).</li>
<li>Yoshida, T., Jones, L. E., Ellner, S. P., Fussmann, G. F., Hairston, N. G. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+evolution+drives+ecological+dynamics+in+a+predator-prey+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Rapid evolution drives ecological dynamics in a predator-prey system.</a> Nature. 424 (6946), 303-306 (2003).</li>
<li>Urban, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+ecology+of+metacommunities%5BTitle%5D)+AND+%22TREE%22%5BJournal%5D)">The evolutionary ecology of metacommunities.</a> TREE. 23, 311-317 (2008).</li>
<li>Dokulil, M. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDokulil%2C+MT+%22Eutrophication%3A+Causes%2C+Consequences+and+Control%22">Eutrophication: Causes, Consequences and Control</a>. , Springer. Netherlands. 81-88 (2014).</li>
<li>Urban, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+forecast+for+biodiversity+under+climate+change%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Improving the forecast for biodiversity under climate change.</a> Science. 353 (6304), (2016).</li>
<li>Schwartz, S. S., Hebert, P. D. N. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-2427.1987.tb01057.x/abstract">Methods for the activation of the resting eggs of Daphnia.</a> Freshwater Biol. 17, 373-379 (1987).</li>
<li>Vanderkerhove, J., et al. <a target="_blank" href="http://hera.ugr.es/doi/15773231.pdf">Hatching of cladoceran resting eggs: temperature and photoperiod.</a> Freshwater Biol. 50, 96-104 (2005).</li>
<li>Caceres, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+variation%2C+dormancy%2C+and+coexistence%3A+a+field+test+of+the+storage+effect%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Temporal variation, dormancy, and coexistence: a field test of the storage effect.</a> PNAS. 94 (17), 9171-9175 (1997).</li>
<li>Caceres, C. E. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1890/0012-9658(1998)079[1699:IVITAP]2.0.CO;2/abstract">Interspecific variation in the abundance, production, and emergence of Daphnia diapausing eggs.</a> Ecology. 79 (5), 1699-1710 (1998).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף

עקב מוליכות חום גבוהה של מים, מערכות אקולוגיות מים מתוקים הם בסיכון גבוה יותר של המגוון הביולוגי אובדן מאשר המערכות האקולוגיות יבשתי מול הכללית התחממות34 חיוני, לכן, כדי להבין את התגובה של keystone מינים של מערכות אקולוגיות אלו ולזהות מנגנוני ההתמודדות לשרוד מתח תרמי. ההבנה של מנגנונים אלה ברמות מינים והקהילה יכול לעזור לחזות כיצד מינים שמושפעים התחממות וגולש איך ההשפעה על מינים בודדים לרמות אחרות הזנה. בסופו של דבר, הבנת מנגנוני תגובות על התחממות כדור הארץ מאפשר הזיהוי של תיקונים אסטרטגיות להפחתת extinctions.
מחקרים המובאים כאן מראים כי תגובת מגנה ד בטמפרטורה pervasively מתווך על ידי פלסטיות של תכונות היסטוריית החיים ולא כי בתגובה בטמפרטורה לבד לכפות עלויות כושר ברורה, לפחות האוכלוסייה למד כאן. פלסטיות גבוהה בתכונות היסטוריית החיים נתמך על ידי הבדלים שאינם משמעותיים ביכולות מתחרות של האוכלוסיות (sub) בנוכחות התחממות כדור הארץ. עם זאת, התחרות וקהילותיהם, ניסויים אוכלוסיות מרובות ייתכן שיהיה צורך להכליל ממצאים אלה.
תחייתו של שלבים רדום מספק משאב חסר תקדים ללמוד מנגנוני הסתגלות ואת מסלולי התפתחות של זן עד שעה10. זואופלנקטון מינים תועלת זמן דור מהירה (כשבועיים), ואת הכדאיות של שלבים רדום, אשר מאפשר קדום. כדי להתחרות headtohead נגד צאצאיו משלו, או 'החוזר' האבולוציה שמתחיל ממדינות שונות בעבר. תחיית המתים אקולוגיה בעיקרו של דבר מאפשר החקירה של תוצאה אבולוציונית מיוחדת נמדדת לפי כמה אירועים קודמים. זיהוי מרכיבים גנטיים של אבולוציה אפשרית כיום בניסויים במעבדה בעזרת מיקרואורגניזמים שעבורם 'שורות אב קדמון' קפוא, להחיות אותו לניתוח השוואתי עם צאצא מפותחת שלהם6. עם זאת, אחת המגבלות העיקריות של עבודה עם מעבדה אורגניזמים הוא 'המדינה אב קדמון' הוא בסיסית שהוסטו כבר. המחקר של שלבים רדום מאפשר הדוגמאות של דגימות מן הזמן לגירושן לכל אירוע דחק (למשל, תנאים סביבתיים וטהור) וכדי למדוד מסלולים אבולוציונית מתנאי הסביבה ללא הפרעה למדינות שונות בעבר עד לתקופה המודרנית. בשנים האחרונות, המחקר של ה-DNA פולימורפיזם בשלבים זואופלנקטון לתחייה או עדיין רדום סיפקה תובנות חשובות האחרונות תהליכים דמוגרפיים, מסתגלת תרמו הגנטי של אוכלוסיות של ימינו14 , 16 , 25 , 33 , 35 , 36. עם נגישות גבוהה יותר של טכנולוגיות רצף תפוקה גבוהה, הגנום ואת transcriptome של שלבי לתחייה או עדיין רדום יכול להיות רציף, סוג ומספר שינויים גנטיים שנצבר המתפתחת אוכלוסיות מעל הזמן נמדד.
התקומה SOP המוצג כאן יש ליישומים חשובים בתחום של מולטי-טכנולוגיות על שתי רמות. טכנולוגיות רב ניתן ליישם דגימות לתחייה, המאפשר ניתוח ממצה של היסודות המולקולריים המעורבים בתגובות הסתגלות ללחץ הסביבה הבחירה. בנוסף, טכנולוגיות ניתן ליישם decapsulated אלא שלבי עדיין רדום. עד כה, היישום של טכנולוגיות רצף תפוקה גבוהה לנוח שלבים היה מוגבל על ידי הדרישה של כמות גדולה של חומר קלט. מגבלות אלה מתבצעת והרימה אותה37. עם הדרישות להורדת חומר קלט ולהתקדם בעזרת nanofluidics, רצף הגנום כולו (WGS) אפשרי עכשיו מ קטנה כמו 1 ng או כמה pg להתחיל גשמי38. השימוש של הגנום כולו הגברה (WGA) וטכניקות הגברה (של WTA) כל transcriptome, המאפשרת את העשרת של DNA ו- RNA של כמויות קטנות מאוד של רקמות, יש מהפכה39,metagenomics40 וגם רפואי מחקר41. טכנולוגיות אלה חלה על ביצים רדום decapsulated לאפשר את חריגה של מגבלות הקשורים הכדאיות של שלבים רדום של חוקרים של תקופות זמן ממושך (למשל, מאות שנים).
תחייתו של קהילות הגעה בהפקת שלבים מנוחתו מאפשר היישור של סיפורי הקהילה בשינויים ידועים של הנופים הטבעיים, או עם שינויים סביבתיים להסיק מניתוחי של משקעים orsoils2. הניתוח של הקהילה משתנה בתגובה לשינוי סביבתי מספק לנו את היכולת לכמת פידבקים eco-אבולוציונית42 שיש להם השלכות משמעותית על ההתמדה האוכלוסייה43, אינטראקציות עם מחלות44 , הקהילה הרכבה45, ושינויים במערכת האקולוגית פונקציות ושירותים46. לבסוף, תחזיות מדויקות לגבי תגובות ביולוגיות שינוי סביבתי הם הכרחיים כדי להנחות את ההגנה של המגוון הביולוגי47 מודלים הנוכחית אינם מדויקים בהקשר זה כי הם לא עשה חשבון מנגנונים ביולוגיים חשובים כגון דמוגרפיה, פיזור, האבולוציה מינים אינטראקציות. הבנה כיצד תהליכים אלה משתנים במשך הזמן ושימוש במידע זה כמו לכהן ב דוגמנות תחזית ישפר את היכולת שלנו לחזות מינים ושנה הקהילה התמדה אל מול הסביבה2.
היישום של ה-SOP המובאת כאן אינה ללא אתגרים. המגבלה העיקרית של לאוהדיו שלבים רדום הוא הצורך של ציוד מיוחד עבור הדגימה. בנוסף, התהליך כולו, מן המשקעים ניפוי להקמה של תרבויות המשובטים, דורש זמן ניכר על הידיים.
חלק מהשלבים SOP המובאת כאן המתעכבים ברצון מינים דפניה אחרים. אלה הם: דגימה, הקמת קווי המשובטים, תכנון ניסויים. עם זאת, צעדים אחרים של ה-SOP עשויים לדרוש עוד יותר אופטימיזציה המותאמים למין שנבחנה. Decapsulation לעיתים קרובות חלה על דגימות מגנה ד כדי לשפר את ההצלחה הבקיעה. עם זאת, גישה זו עשוי לא להיות מתאים דגימות קטנות יותר. הבקיעה גירויים יכול להשתנות גם בין המינים48 ובין הדגימה conspecific49. לפיכך, לאופטימיזציה אד הוק של המדרגות הבקיעה של ה-SOP עשוי להידרש לפני ליישומים אחרים. בזמן הבקיעה ההצלחה של האוכלוסייה מגנה ד לתחייה מן האגם טבעת (30.5% על פני הארכיון משקע) עולה בקנה אחד עם תוצאות קודמות49, הבקיעה הצלחה משתנה עם מצב ההשתמרות המשקע, המין 50,51, המקור הגיאוגרפי של משקעים48. מחקרים עתידיים על המנגנונים המווסתים כניסה וההתקדמות דרך השלבים של תרדמה ואסטרטגיה נדרש לזהות גירויים הבקיעה האופטימלי לצרכיו מינים שונים.
לבסוף, רקע הידע של מערכת המחקר, בפרט, נוכחותם של המינים של הריבית לאורך זמן, מומלץ. זו יכולה להיות מושגת באמצעות רשומות היסטוריות. אם רשומות היסטוריות אינן זמינות, דגימה, הקרנת משטח שכבות המשקע אגם לפני דגימה הליבה, מומלץ, למרות שזה מספק מידע רק על ההיסטוריה האחרונה.

מחקרים ארוכי טווח הם קריטיים להבנת תהליכים אקולוגי ואבולוציוני בטבע, בהערכת להגיב וכיצד נמשכות במהלך שינוי סביבתי1מינים. זה בגלל תהליכי eco-אבולוציונית לקרות על פני דורות, שינויים בסביבת מתקיימים לאורך זמן טווחי זמנים. יתר על כן, מחקרים ארוכי טווח לספק מפתח בנתונים אמפיריים, לשפר את הדיוק של דוגמנות חזוי לתחזית אבולוציונית תגובות של מערכות אקולוגיות טבעיות שינויים סביבתיים2. הדיוק של מודלים אלה היא קריטית כדי ליישם אסטרטגיות ניהול ושימור לשמירה על המגוון הביולוגי שירותי המערכת האקולוגית.
לא כולל כמה מקרים יוצאי דופן (למשל, גלפאגוס דארווין פרושים3 ואצות4), מחקרים ארוכי טווח מוגבלים בעיקר מינים עם זמן דור קצר, אותם ניתן להפיץ ב מעבדה5,6 , 7 , 8. לפיכך, התהליכים דינמיקה אבולוציונית לגורם המרכזי עליו מושתתת נשארים חמקמקים. בגלל קשיים לוגיסטיים הקשורים עם גישה לדוגמיות הטמפורלי, בנתונים אמפיריים נלמדים בתדירות גבוהה יותר ב מרחבית יותר בהקשר הטמפורלי, תהליכי eco-אבולוציונית טמפורלית להסיק או המודל של נתונים מרחביים. גישה זו מכונה 'מרחב-עבור-time' החלפת9, לפיה שטח מאומצת כתחליף בחקר דינמיקה אבולוציונית טמפורלית. המגבלה העיקרית ההחלפה 'מרחב-עבור-time' היא כי המחירים של הסתגלות המרחבי בקני מידה שונים נבדלים וריאציה טמפורלית מאותה אוכלוסייה; לפיכך, מסקנות בהתבסס על החלפה של זמן עם שטח הם משוחד10.
חלופה רב עוצמה המאפשר לימוד דינמיקה אבולוציונית של מערכות אקולוגיות טבעיות לאורך זמן הוא הניתוח של שינויים אקולוגיים ולא גנטי במין בהפקת שלבים רדום11. אלה שלבים רדום לארכיון ביולוגי טופס מרובדת שניתן באופן מדויק מיום ולצבור paleolimnologically מאופיין12,13. חשוב, השלבים האלה רדומים יכולים להיות החיינו ומשמשת בניסויים במעבדה, איפה את תגובתם אבולוציונית השינוי הסביבתי ניתן למדוד ישירות. אוכלוסיות ההיסטורי יכול להיות התחרו נגד צאצאיהם מפותחת המודרנית ללמוד כושר שינויים והפונקציה של גנים מתפתח בשלב עם שינוי סביבתי14,15,16.
שלבים רדום כוללים זרעים, ציסטות, נבגים, ביצה בנקים. למרות המחקרים הראשונים על החיו ביצים רדום שתחילתה בסוף שנות השמונים17ו קומץ של מחקרים החלת טכניקה זו בתחילת שנות ה-9018,19, בתחום אקולוגיה התחייה היה באופן רשמי הוקמה על ידי העיתון החלוצי של Kerfoot ועמיתים 199920. פרקטיקה זו הוחל בעיקר בתחום paleolimnological שחזורים של מים מתוקים מינים17,21,22. עם זאת, שוחד אינה זמינה עדיין. כאן, מספק תיאור צעד אחר צעד של פרוטוקול תחיית המתים שהוחל ביצים רדום של המין זואופלנקטון דפניה magna , מן הדוגמאות של שנלכד להקמת תרבויות המשובטים הוולדות. הצעדים של ה-SOP המתעכבים ברצון מינים אחרים של דפניה, כמו גם פעולות שעשויות לדרוש נוספים מיטוב, הם דנו.
דפניה הם מים מתוקים zooplankters נוכח ברוב המכריע של בתי גידול lotic23 . דפניה מינים הם גם parthenogens אל-זוויגית או מחזורי גידול. מאגנה ד הוא parthenogen מחזורית מתרבה clonally תחת תנאים סביבתיים נוחים24. כאשר התנאים הסביבתיים להתדרדר, ייצור זכר מתרחשת ומוביל רקומבינציה מינית את היווצרות של הביצים זה להיכנס למצב של תרדמה מוגן מן הסביבה על-ידי תיק כיטין שנקרא ephippium. שיעור של הביצים רדום בוקעות תנאים סביבתיים נוחים חוזרים. עם זאת, חלק גדול של הבנק הביצה הרדומה מעולם לא יש סיכוי לבקוע, ובכך לבנות את ארכיון ביולוגי לאורך זמן. שלבים רדום שישאר קבור ב המשקע של אגמים, בריכות, יכול להיות לתחייה לחקר דינמיקה אבולוציונית לאורך פרקי זמן ארוכים. כיוון ביצים רדום של magna ד הם התוצאה של רקומבינציה מינית, הן ייצוג טוב של המגוון הגנטי הטבעי של מינים25. יתר על כן, הם יכולים להישמר דרך רבייה המשובטים במעבדה. מאפיינים אלו מספקים את היתרון הייחודי של אורגניזמים דגם isogenic, תוך שמירה על המגוון הגנטי טבעי.
שני מחקרים מפתח מוצגים כדי להדגים את היתרונות של ישירות השוואת היסטוריים ומודרניים צאצאי האוכלוסייה באותו מגנה ד חווה לחץ סביבתי הבחירה לאורך זמן. מאגנה ד דגימות שהוקמו לתחייה מן האגם טבעת (דנמרק), רדוד (עומק 5m; פני 22 ha) בריכה מעורבת שחווה גידול ממוצע טמפרטורה, גלי חום שמתרחשת לאורך זמן. אוכלוסיות מגנה ד (sub) היו לתחייה לאורך זו הדרגה הזמנית המתפרסות על-פני 60 שנה (1960-2005) ולמד לחקור תגובה אבולוציונית טמפרטורה להתחממות. במחקר הראשון בניסוי גן משותף, שינויים בכושר-מקושרים על החיים תכונות נמדדו בתגובה לעלייה בטמפרטורה של C ° +6, בקו אחד עם הנבואה של הפאנל הבין-ממשלתי לשינוי האקלים 100 השנים הקרובות 26. במחקר השני, ניסוי mesocosm שימש כדי למדוד את יכולותיהם תחרותי של שלושת האוכלוסיות (sub) תחת התחממות כדור הארץ. ניסויים אלה בשילוב מראים כי בנוכחות של התחממות כדור הארץ כמו הלחץ היחיד, כל תכונות היסטוריית החיים של אוכלוסיות להציג רמה גבוהה של פלסטיות יכולות תחרותי שווה. ממצאים אלה מראים כי ההתחממות כמו מצוקה מטיל עלויות משמעותי כושר, לפחות בקרב האוכלוסייה למד כאן.

<table><tbody><tr><td>שקיות דגימה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>11542783</td><td>שקית דגימה מסתובב חוטים עגולים מערכת סגירה ולשוניות בטיחות פוליאתילן סטרילי עם שטח כתיבה שקוף 89&micro; מ 'עובי 140 מ"מ x 229 מ"מ, 720 מ"ל פישרברנד</td></tr><tr><td>בוכנה קורר</td><td>ENSIS בע"</td>מ <td>צינור</td><td>ארוך וכבד צלל לים, לאגם, לקרקעית הבריכה כדי לחלץ דגימות של משקעי בוץ. ליבות בוכנה הן בעלות קוטר ויארי והן בדרך כלל</td></tr><tr><td>בסולם דיוק</td> PVC <td>Veritas-M124A</td><td>TLP-50</td><td>איזון אנליטי</td></tr><tr><td>מסננת גיאולוגית</td><td>UKGE מוגבלת</td><td>SV7521</td><td>מסננת גיאולוגית בקוטר 200 מ"מ -</td></tr><tr><td>מסננת גיאולוגית</td> רשת 1 מ"מ <td>UKGE מוגבלת</td><td>SV7525</td><td>מסננת גיאולוגית בקוטר 200 מ"מ - 0.125 מ"מ</td></tr><tr><td>מגש דגימה לבן</td> רשת <td>NHBS</td><td>http://www.nhbs.com/title/view/159614?ad_id=1509</td><td>מגשי מעבדה רב-תכליתיים סטנדרטיים פסטר</td></tr><tr><td>פיפטה</td><td>גלוב סיינטיפיק בע"מ.</td><td>138020B</td><td>פיפט העברה, 1.7 מ"ל, לשימוש כללי, 87 מ"מ, ציור נורה - מיקרוסקופ סטריאו 0.9 מ"ל</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>ניקון</td><td>smz800</td><td>עם טווח הגדלה 1x -8x מקושר ליחידת בקרת מצלמה</td></tr><tr><td>צלחת פטרי</td><td>EduLab</td><td>153-533</td><td>סטרילי בקוטר 90 מ"מ צנצנות זכוכית מפלסטיק</td></tr><tr>צנצנות<td>זכוכית</td><td>קומפאק</td><td>צנצנות ריבה עגולות 4oz</td><td>100 מ"ל צנצנות</td></tr><tr><td>זכוכית</td><td>compak</td><td>צנצנות אטום / צנצנת בונטה 10oz</td><td>200 מ"ל צנצנות</td></tr><tr><td>צנצנות זכוכית</td><td>bottlecompanysouth</td><td>500 מ"ל צנצנת ריבת מזון עם מכסה טוויסט כבוי</td><td>500 מ"ל צנצנות</td></tr><tr><td>תוכנה סטטיסטית R</td><td>https://cran.r-project.org/</td> <td>na</td><td>חינם מקוון גנו&nbsp; שפה וסביבה למחשוב סטטיסטי וגרפיקה</td></tr><tr><td>מיקרו-דיסקציה מלקחיים</td><td>פישר מדעי</td><td>41122405</td><td>מלקחיים נירוסטה עדינה עבור מיקרו-דיסקציה</td></tr><tr><td>תוכנת תמונה</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td><td>בקוד פתוח ImageJ ערכת כלים לעיבוד תמונה שנכתבה ב-Java</td></tr><tr><td>מזוקוסמוס</td><td>אמזון</td><td>ו-Nobby Fauna-Box III, 41 x 23 x 29 ס"מ, 20.0 ליטר</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרו-צנטריפוגה</td><td>Sigma_Aldrick - Merck</td><td>Z606340</td><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה פרימיום 1.5 מ"ל</td></tr><tr><td>AGENCOURT DNAdvance</td><td>Beckman Coulter</td><td>A48705</td><td>ערכת מיצוי DNA</td></tr><tr><td>בגודל סטנדרטי</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4322682</td><td>LIZ500 - תקן גודל תואם לרצפי ABI</td></tr><tr><td>ABI3032 רצף</td><td>ABI</td><td></td><td>ו-Sequencer המשמש לביצוע ניתוח שברים או ריצוף סנגר</td></tr></tbody></table>

תחיית המתים של רדום דפניה מגנה: פרוטוקול ויישומים

Resurrection of Dormant Daphnia magna: Protocol and Applications

מחקרים ארוכי טווח מאפשרות זיהוי תהליכי eco-אבולוציוניים המתרחשים לאורך פרקי זמן ארוכים. בנוסף, הם מספקים מפתח בנתונים אמפיריים הנתנות ב דוגמנות חזוי לתחזית אבולוציונית תגובות של מערכות אקולוגיות טבעיות לשינויים סביבתיים בעתיד. עם זאת, לא כולל כמה מקרים חריגים, מחקרים ארוכי טווח ואספקות נדירים בגלל קשיים לוגיסטיים הקשורים עם גישה לדוגמיות טמפורלית. דינמיקה טמפורלית נלמדים לעתים קרובות במעבדה או בניסויים מבוקרים mesocosm עם מחקרים יוצאי דופן לשחזר את האבולוציה של אוכלוסיות הטבעי בטבע.
. הנה, סטנדרטי (SOP) מסופק להחיות או להחיות רדום דפניה magna, זן keystone זואופלנקטון נרחבת של המערכת האקולוגית הימית, לקדם באופן דרמטי את אוסף נתוני האורך המדינה-of-the-art מערכות טבעיות. בתחום אקולוגיה תחיית המתים הוגדרה בשנת 1999 על-ידי Kerfoot ועמיתים לעבודה, אף-על-פי הראשון ניסיונות הבקיעה diapausing זואופלנקטון ביצים תאריך חזרה בסוף שנות השמונים. מאז העיתון הזרע של Kerfoot, המתודולוגיה של לאוהדיו זואופלנקטון מינים לעתים קרובות יותר ויותר הוחל, למרות הופץ בין מעבדות רק באמצעות העברה ישירה הידע. כאן, הנוהל המתואר המספק פרוטוקול שלב אחר שלב על העשייה לאוהדיו רדום דפניה מגנה ביצים.
שני מחקרים מרכזיים ניתנים ב אשר תגובת כושר לתחייה דפניה מגנה לאוכלוסיות ההתחממות נמדד, ניצול היכולת ללמוד לאוכלוסייה היסטוריים ומודרניים באותן ההגדרות. לבסוף, נדון היישום של טכנולוגיות רצף ' הדור הבא ' בשלבים לתחייה או עדיין רדום. טכנולוגיות אלה מספקים כוח חסר תקדים בניתוח של תהליכים ומנגנונים של האבולוציה, אם חלה על אוכלוסיות שעברו שינויים בלחץ הבחירה לאורך זמן.

בנתונים אמפיריים לטווח ארוך הם קריטיים להבנת דינמיקה אבולוציונית, ההתמדה של אוכלוסיות טבעי. נתונים כאלה הם בדרך כלל מאתגרת כדי לקבל בגלל קשיים לוגיסטיים הקשורים עם גישה הדרישה בביצוע לטווח ארוך כדי איסוף נתונים ודוגמאות טמפורלית. שני מפתח מחקרים שהוצגו כאן, הוכחה אמפירית של התגובה הטמפרטורה של zooplankter המרכזית של מערכות אקולוגיות מים מתוקים מסופק על פי אבולוציונית. זה מופעלת על ידי השימוש בשכבות הביצה הרדומה הבנקים לספק הזדמנות ללמוד את התגובה של אוכלוסיות היסטורי וצאצאיהם מודרניים כדי עקה בהגדרות ניסיוני משותף.
ניסוי גן משותף הניסוי גן משותף הראה כי כל התכונות ההיסטוריה הגיבו טמפרטורה (איור 6 ו איור 7). ניתוח הנתונים ANOVA גילה כי כל האוכלוסיות (sub) להגיב לטמפרטורת דרך פלסטיות (טבלה 2), למעט התמותה, אשר אינו מגיב. ראיות של שינויים אבולוציוניים (הבדלים בין האוכלוסיות (sub)) נצפתה רק ב גידול האוכלוסיה (טבלה 2), אשר גדל באופן משמעותי בשניים מתוך השלושה אוכלוסיות (sub) ב 24 ° C (איור 6).
<img alt="קצב גידול, בגרות, פוריות לעומת טמפרטורה; גרף ארבעה פאנלים; ניתוח מחקר אקולוגי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56637/56637fig6.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> איור 6: ניסוי גן משותף. התגובה נורמות החיים תכונות (פוריות, בגודל בגיל בגרות), גידול האוכלוסיה (r) מוצגים עבור כל האוכלוסייה (sub) מתחת לטמפרטורה התחממות (24 ° C) לעומת גן משותף של הטמפרטורה הנוכחית המשטר (18 ° C). גידול האוכלוסיה "r" מחושבת באמצעות משוואת אוילר (1). מרווחי הביטחון מוצגים. אוכלוסיות (sub) הם לפי צבעים: כחול (i): 1960-1970; (ii) ירוק: 1970-1985; (iii) אדום: &gt; 1999. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/56637fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="שיעורי הכחדה לאורך זמן; גרף המשווה אחוז פרטים שנכחדו על פני תקופות זמן שונות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56637/56637fig7.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> איור 7: תמותה. שיעורי התמותה לכל האוכלוסייה (sub) (1960-1970; 1970-1985; &gt; 1999) מוצגים תחת התחממות כדור הארץ (24 ° C) לעומת משטרים מודרניים טמפרטורה (18 ° C). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/56637fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
ניסוי Mesocosm לאחר ארבעה שבועות של בחירה, המיוצג על-ידי ההתחממות ב 24 ° C, התדירות של שלושת האוכלוסיות (sub) לא השתנה באופן משמעותי (χ2 = 0.55, P = 0.76) לעומת inoculum הראשוני (איור 8). בין 30 אחרים מחוסן בניסוי mesocosm, הרוב זוהה לאחר ארבעה שבועות של בחירה (איור 9). באופן ספציפי, 70% חוסנו אחרים היו התאושש, תואם עם ציפייה Poissonian מחלים נציג אחד לפחות של כל גנוטיפ במדגם של 32 אנשים.
<img alt="תרשים עמודות שכיחות אוכלוסייה, שנים שונות, תנאי ניסוי, ניתוח אחוזים." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56637/56637fig8.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 8"> איור 8: תחרות הניסוי - האוכלוסייה תדר- חציון ממוצע האוכלוסייה ואת רביעונים (25th ו 75th), מוצג עבור שלוש אוכלוסיות (sub) של magna ד לאחר ארבעה שבועות של הבחירה בניסויים תחרות mesocosm (24 ° C), לעומת תדר השווה הראשונית (ב ההתחלה). אוכלוסיות (sub) הם לפי כפי שמוצג באיור 6צבעים. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/56637fig8large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="תרשים עמודות תדר גנוטיפ; מציג התפלגות מזהה גנוטיפ על פני תקופות עם פסי שגיאה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56637/56637fig9.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 9"> איור 9: תחרות הניסוי - גנוטיפ תדר- גנוטיפ תדרים – חציון בממוצע רביעונים (25th ו 75th), מוצגים לאחר ארבעה שבועות של חשיפה התחממות כדור הארץ (24 ° C) לעומת תדירות שווה הראשונית של אחרים (קו מנוקד). שמות בציר ה-x הם מזהה אחרים חוסנו, לקבץ לפי האוכלוסייה (sub) (כחול, 1960-1970; ירוק, 1970-1985; רד, &gt; 1999). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/56637fig9large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>לוקוס</td>
			<td>,</td>
			<td>גודל הטווח (bp)</td>
			<td colspan="2">תחל (5' - 3')</td>
			<td>תווית צבע</td>
			<td>מוטיב חוזר</td>
			<td>Tm</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B008</td>
			<td rowspan="2">HQ234154</td>
			<td rowspan="2">150-170</td>
			<td colspan="2">F: TGGGATCACAACGTTACACAA</td>
			<td rowspan="2">ויק</td>
			<td rowspan="2">(TC) 9
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: GCTGCTCGAGTCCTGAAATC</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B030</td>
			<td rowspan="2">HQ234160</td>
			<td rowspan="2">154 – 172</td>
			<td colspan="2">F: CCAGCACACAAAGACGAA</td>
			<td rowspan="2">חיית המחמד</td>
			<td rowspan="2">(ג'י אי) 11
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: ACCATTTCTCTCCCCCAACT</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B045</td>
			<td rowspan="2">HQ234168</td>
			<td rowspan="2">118 – 126</td>
			<td colspan="2">F: GCTCATCATCCCTCTGCTTC</td>
			<td rowspan="2">נד</td>
			<td rowspan="2">(TG) 8
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: ATAGTTTCAGCAACGCGTCA</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B050</td>
			<td rowspan="2">HQ234170</td>
			<td rowspan="2">234 – 248</td>
			<td colspan="2">F: TTTCAAAAATCGCTCCCATC</td>
			<td rowspan="2">6FAM</td>
			<td rowspan="2">(גה) 6
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: TATGGCGTGGAATGTTTCAG</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B064</td>
			<td rowspan="2">HQ234172</td>
			<td rowspan="2">135 – 151</td>
			<td colspan="2">F: CTCCTTAGCAACCGAATCCA</td>
			<td rowspan="2">6FAM</td>
			<td rowspan="2">(TC) 8
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: CAAACGCGTTCGATTAAAGA</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B074</td>
			<td rowspan="2">HQ234174</td>
			<td rowspan="2">196-204</td>
			<td colspan="2">F: TCTTTCAGCGCACAATGAAT</td>
			<td rowspan="2">נד</td>
			<td rowspan="2">(GT) 9
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: TGTGTTCCTTGTCAACTGTCG</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B096</td>
			<td rowspan="2">HQ234181</td>
			<td rowspan="2">234 – 240</td>
			<td colspan="2">F: GGATCTGGCAGGAAGTGGTA</td>
			<td rowspan="2">ויק</td>
			<td rowspan="2">(AC) 15
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: TTGAACCACGTCGAGGATTT</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">B107</td>
			<td rowspan="2">HQ234184</td>
			<td rowspan="2">250 – 274</td>
			<td colspan="2">F: GGGGTGAAGCATCAAAGAAA</td>
			<td rowspan="2">חיית המחמד</td>
			<td rowspan="2">(CT) 8
</td>
			<td rowspan="2">56</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">R: TGTGACCAGGATAAGAGAAGAGG</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: בתי קולנוע Microsatellite. NCBI ההצטרפות מספר (AN), המידע מולטיפלקס, הרצפים פריימר PCR, הטווח גודל ה-PCR, מוטיב חוזר, לצבוע פעם תווית של פריימר לפנים, והטמפרטורה מחזק (Tm) מוצגים.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="2">שיעור הצמיחה פופ (r)</td>
			<td>Df</td>
			<td>F</td>
			<td>P</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">האבולוציה (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>30.309</td>
			<td>&lt; 0.001</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">פלסטיות (Temp)</td>
			<td>1</td>
			<td>531.546</td>
			<td>&lt; 0.001</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. פלסטיות (פופ x Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>65.137</td>
			<td>&lt; 0.001</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">התמותה</td>
			<td>Df</td>
			<td>F</td>
			<td>P</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">האבולוציה (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>2.234</td>
			<td>0.1162</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">פלסטיות (Temp)</td>
			<td>1</td>
			<td>2.679</td>
			<td>0.1071</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. פלסטיות (פופ x Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>1.8657</td>
			<td>0.164</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">פוריות</td>
			<td>Df</td>
			<td>F</td>
			<td>P</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">האבולוציה (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>1.8852</td>
			<td>0.1633</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">פלסטיות (Temp)</td>
			<td>1</td>
			<td>6.8934</td>
			<td>0.0117</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. פלסטיות (פופ x Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>1.6511</td>
			<td>0.203</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">גודל בעת הפירעון</td>
			<td>Df</td>
			<td>F</td>
			<td>P</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">האבולוציה (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>0.211</td>
			<td>0.8106</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">פלסטיות (Temp)</td>
			<td>1</td>
			<td>11.1361</td>
			<td>0.0017</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. פלסטיות (פופ x Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>0.6586</td>
			<td>0.5225</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">גיל בעת הפירעון</td>
			<td>Df</td>
			<td>F</td>
			<td>P</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">האבולוציה (Pop)</td>
			<td>2</td>
			<td>0.7811</td>
			<td>0.4637</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">פלסטיות (Temp)</td>
			<td>1</td>
			<td>8.0764</td>
			<td>0.0066</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Evol. פלסטיות (פופ x Temp)</td>
			<td>2</td>
			<td>0.088</td>
			<td>0.9159</td>
		</tr>
</tbody></table>בטבלה 2: השונות (ANOVA). ניתוח השונות בדיקה אם שינויים תכונות היסטוריית החיים וכן גידול האוכלוסיה של אוכלוסיות לתחייה (sub) חשופים להתחממות מוסברים על ידי הסתגלות אבולוציונית (אוכלוסיות), פלסטיות (טיפול טמפרטורה), שלהם המונח אינטראקציה (האבולוציה של פלסטיות). משמעותי p-ערכים (p&lt; 0.05) מוצגות בגופן מודגש.
1 וידאו משלימים: דגימה של משקעים ליבות. השימוש corer ביג בן מוצג. ביג בן הוא צינור הליבה של-1.5 מ' אורך עם קוטר צינור פנימי של 14 ס מ. זה מורכב בוכנה על חבל וראש corer, שאליו מחוברים מוטות לנסוע ברכבת התחתית לתוך המשקע. לוכד ליבה משמש לתמיכה הצינור הליבה פרוס כלי קטן. הבוכנה נדחף למטה לתוך המשקע על ידי לחץ הכבידה. מסגרת משמש כדי לתמוך את הצינור הליבה במהלך תהליך ההבלטה מתבצעות בעזרת שקע בקבוק ששונה דוחף את הבוכנה כלפי מעלה. כל שכבה משקעים על משטח המתכת השטוחים ונשתמש הועבר דגימה שקוף שקיות לאחסון לטווח ארוך [אפל וקר (4 ° C) תנאים]. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/Supplementary_video1_Sampling.mp4">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הקובץ.</a>
2 וידאו משלימים: משקעים ניפוי. הציוד הדרוש עבור ניפוי משקעים הוא סולם precision, מגשים דגימה לבן, הנפות גיאולוגי. בין כל שכבה משקעים, לפחות 5 g נשמרים עבור תיארוך רדיומטרי. שארית המשקע משמש כדי לבודד ephippia. המשקע הוא sieved דרך שתי הנפות גיאולוגי, אחד עם 1 מ מ, שנייה עם 125 µm שרוחב, נערמו אחד על גבי השני. בינונית ויוצקים על מסננת רשת 1 מ מ להפריד חימר גדולים חסרי חוליות, חלקיקי החומר. בינוני שפכו על המסננת השנייה עם 125 µm רשת מפריד ד magna ephippia וחומר חלקיקי קטן. Aliquots של משקעים מועברים למגש דגימה לבן. Ephippia מגנה ד הם הבחינו לפי העין במגש רקע לבן. Ephippia של כל שכבה נאספים פטרי נפרדים. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/Supplementary_video2_Sieving_sediment.mp4">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הקובץ.</a>
וידאו משלים 3: Decapsulation. תחת stereomicroscope, ephippia magna ד נפתחות עם מלקחיים microdissection על ידי הפעלת לחץ על עמוד השדרה של המקרה כיטין. קרום ביצה הפנימי יוסר בעדינות ולא נח הביצים בעדינות הועבר עם פיפטה פסטר צלחת פטרי המכילות 10 מ"ל של מדיום. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/Supplementary_video3_Decapsulation.mp4">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הקובץ.</a>
וידאו משלימים 4: הבקיעה. לאחר חשיפה ארוכה photoperiod ו 20 ° C, חידוש התפתחות העובר בין 48 שעות מספר שבועות. עם השלמת הפיתוח, העוברים להשתחרר ממעטפת הביצית, לשחות בחופשיות בטווח הבינוני. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56637/Supplementary_video4_Hatching.mp4">אנא לחץ כאן כדי להוריד את הקובץ.</a>

מחקרים ארוכי טווח חיוניים להבנת תהליך האבולוציה ולא על מנגנוני הסתגלות. באופן כללי, מחקרים אלה דורשות התחייבויות מעבר חיים החוקרים. . הנה, שיטה חזקה מתואר באופן דרמטי ההתקדמות איסוף נתונים המדינה-of-the-art להפיק נתוני האורך בתוך מערכות טבעיות.

Long-term studies enable the identification of eco-evolutionary processes that occur over extended time periods. In addition, they provide key empirical ...

מטרת הניסוי הזה היא להחיות שלבים רדומים של מיני דפניה מגנה. זוהי שיטה רבת עוצמה המקדמת באופן דרמטי את איסוף הנתונים ליצירת נתונים לטווח ארוך במערכות טבעיות. שיטה זו מאפשרת לחקור תהליכים אקו-אבולוציוניים המתרחשים על פני תקופות זמן ממושכות בטבע, במסגרת הזמן של פרויקט מחקר.היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מספקת כוח חסר תקדים בניתוח התהליכים והמנגנונים של האבולוציה אם היא מיושמת על אוכלוסיות שחוו שינויים בלחץ הברירה לאורך זמן. כמו כן, המתודולוגיה של תחיית המתים עבור מינים פלנקטוניים יושמה לעתים קרובות. עד כה הם הופצו בין מעבדות רק על ידי העברת ידע מכוונת.הדגמה חזותית של שיטה זו תאפשר למי שאינם מומחים ליישם אקולוגיה של תחיית המתים על ידי ביצוע מדריך שלב אחר שלב, המקדם את היישום של טכנולוגיה רבת עוצמה כדי להקל על חקר האבולוציה. לאחר השגת צינור ליבה של משקעי דגימה מאגם או בריכה, השתמש בכלי מתכת שטוח כדי לפרוס את הליבה לשכבות אופקיות של סנטימטר אחד. לאחר מכן, אספו את שכבות המשקעים בשקיות נפרדות.ליבת המפץ הגדול נועדה להפחית את ההפרעה של שכבות המשקעים במהלך הדגימה. כאשר משתמשים בליבות אחרות, ניתן להסיר את הטבעת החיצונית של כל שכבת משקעים בעזרת חותך עוגיות מעין להב כדי להגביל את הזיהום בין השכבות. לבסוף, אחסנו את דגימות המשקעים בקופסת קרטון אטומה, בחדר חשוך בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס.ראשית, שקלו כל שכבת משקעים בקנה מידה מדויק. לאחר מכן, מסננים כל שכבה בשתי מסננות גיאולוגיות מוערמות. למסננת הראשונה יש גודל רשת גדול יותר להסרת חומרים גדולים יותר ממשקעי הדגימה.למסננת השנייה יש רשת עדינה יותר, המפרידה בין אפיפיה וחלקיקים קטנים אחרים לשארית משקעי הדגימה. העבר את כמות המשקעים שנאספו על ידי מסננת הרשת העדינה יותר למגש רקע לבן. כדי להקל על הפרדת האפיפיה, הוסף עד 200 מיליליטר מי קידוח למגש הלבן כדי לתלות מחדש את שבר המשקעים.בדוק את המשקעים במגש הלבן לאיתור אפיפיה. Ephippia יהיה בגודל של כמילימטר אחד, ובצבע חום כהה עם צורה ייחודית. ניתן להוסיף מים נוספים למגש כדי לדלל את המשקעים, ולהקל על הבדיקה החזותית של אפיפיה.איתור עיניים של אפיפיה במשקעים דורש ידע טקסונומי מוקדם של המין, שכן מורפולוגיה של אפיפיה היא ספציפית למין. השתמש במלקחיים של מיקרו-דיסקציה כדי לבודד אפיפיה בודדת מהמגש, ולהעביר אותם לצלחת פטרי עם 10 מיליליטר מי קידוח. ראשית, השתמשו במלקחיים של מיקרו-דיסקציה כדי להעביר אפיפיה בודדת מצלחת הפטרי למגלשת זכוכית תחת מיקרוסקופ סטריאו.לאחר מכן, בחר הגדלה המציגה את כל מארז הצ'יטין בחדות גבוהה. השתמש במלקחיים המיקרו-דיסקציה כדי להחזיק את הקצוות הנגדיים של האפיפיה. לאחר מכן, הפעל לחץ עדין על ידי דחיפת המלקחיים זה כלפי זה לאורך הרכס של מארז הכיטין.כאשר מארז הכיטין נפתח, ייצב את האפיפיה בעזרת זוג מלקחיים אחד. בעזרת זוג המלקחיים השני, חשפו בעדינות את העובר הרדום. לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי להסיר בזהירות את הקרום הפנימי הרך המקיף את העובר.כדי למנוע שבירת תאי הביצית, ניתן להשתמש במלקחיים קהים בעת הפרדת הממברנה הפנימית מהעוברים. פירוק קפסולציה באמצעות מלקחיים מיקרו-דיסקציה תחת מיקרוסקופ סטרילי דורש תרגול וידיים יציבות. לאחר שליטה, ניתן להשיג זאת תוך מספר שעות.השתמש בפיפטה של פסטר כדי להעביר את הביצים הרדומות לצלחת פטרי נקייה עם 10 מיליליטר מי קידוח. ניתן לאסוף ביצים רדומות מאותה שכבת משקעים באותה צלחת פטרי. לבסוף, לגרום לבקיעה על ידי חשיפת הביצים לספקטרום מלא, יום ארוך, אור פוטופריוד וטמפרטורה גבוהה.בתנאים אלה, ביצים ללא קפסולות כהלכה צריכות לבקוע בין 48 שעות לארבעה שבועות. כדי ליצור קווים איזושבטיים, השתמש בפיפטה של פסטר כדי להעביר דפניה מגנה בודדת לצנצנות נפרדות. דפניה מגנה שקמה לתחייה מארכיון המשקע של טבעת האגם משמשת להערכת תגובה אבולוציונית להתחממות.הצלחת הבקיעה מארכיון המשקעים נעה בין 11 ל-58% אבקועים משלוש תת-אוכלוסיות זמניות נחשפו לתנאי ניסוי המייצגים את הטמפרטורה הנוכחית של טבעת האגם, 18 מעלות צלזיוס, ואת הטמפרטורה החזויה ל-100 השנים הבאות, 24 מעלות צלזיוס. קצב הגדילה, הפוריות, הגודל בבגרות והגיל בבגרות הראו תגובה פלסטית לטמפרטורה. ואילו התמותה לא הגיבה.הבדלים אבולוציוניים בין תת-אוכלוסיות נצפים רק באמצעות ANOVA בקצב גידול האוכלוסייה, שגדל משמעותית בשתיים מתוך שלוש תת-האוכלוסיות, כפי שניתן לראות מנקודות נורמה של תגובה. האבקועים משלוש תת-האוכלוסיות התחרו במזוקוסמוס ניסיוני שנשמר ב-24 מעלות צלזיוס. לאחר ארבעה שבועות של סלקציה, שכיחות תת-האוכלוסיות אינה משתנה באופן משמעותי מתחילת הניסוי.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להחיות את דפניה מגנה רדומה. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לנקות מכשירים בין שלבים כדי למנוע זיהום צולב בין שכבות משקעים. רצוי לטפל בדגימות קרקע ומשקעים בחלל מעבדה ייעודי.החייאת אוכלוסיות רדומות מאפשרת לחוקרים לחקור אוכלוסיות היסטוריות ומודרניות באותה סביבה, ולשחזר ביעילות את האבולוציה לאורך זמן. היישום של טכנולוגיות ריצוף מהדור הבא להחייאת השלבים הרדומים מספק כוח חסר תקדים בניתוח תהליכים ומנגנוני אבולוציה באוכלוסיות שחוו שינויים בלחץ הברירה לאורך זמן.

resurrection-of-dormant-daphnia-magna-protocol-and-applications

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

שיטה פשוטה, זולה, יעילה של הכנת עוברים תסיסנית לניתוח לחיות הדמיה מוצג. פרוטוקול שלנו מספק לחות חילוף הגזים ולא לדחוס את העובר תסיסנית. שיטה זו מתאימה עבור הדמיה GFP מבוססי לחיות עוברים תסיסנית באמצעות מיקרוסקופ stereomicroscope או תרכובת זקוף.

הכנת תסיסנית עוברים Live-הדמיה באמצעות פרוטוקול Drop Hanging

טכניקה זו חושפת את neuromusculature עובריים תסיסנית עבור אימונוהיסטוכימיה או הקלטה אלקטרו. זה שימושי לחקר אירועי מוקדם בהתפתחות neuromuscular או ביצוע electrophysiology ב מוטנטים שאינם יכולים לבקוע.

מסיק והכנת תסיסנית עוברים הקלטה אלקטרו ונהלים אחרים

פרוטוקול זה מתאר תחזוקה וטיפול קבוע כדי לשמור על תנאים אופטימליים לגידול בעלי דג זברה. הסרטון מדגים את הפרוטוקול לתחזוקת מערכת, דיור רגיל, הזנה, רבייה, וגידול של זחלי דג זברה.

טיפול קבוע ותחזוקה של דג זברה (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) מעבדה: מבוא

מבוא של מולקולות קטנות לעובר דרוזופילה הפיתוח מציע פוטנציאל גדול לאפיון פעילות ביולוגית של תרכובות רומן, סמים ורעלים כמו גם לחיטוט מסלולים התפתחותיים בסיסיים. שיטות שתוארו במסמך זה מתארים את שלבים שלהתגבר על מחסומים טבעיים לגישה זו, המרחיב את התועלת של מודל עובר דרוזופילה.

שיטה של ​​permeabilization של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עוברים למבחנים של מולקולה קטנה פעילות

דג הזברה הוא אורגניזם מודל חשוב לחקר הומאוסטזיס אנרגטי.  על ידי שימוש במחוון חמצון חיזור רגיש NADH2, alamar Blue, פיתחנו בדיקה המודדת את קצב חילוף החומרים של זחלי דג הזברה בפורמט צלחת של 96 בארות וניתן ליישם אותה לגילוי תרופות או גנים.

תפוקה גבוהה<em&gt; Danio rerio</em&gt; Assay הוצאה אנרגיה

סדרה של שיטות בסיסיות כדי לאפשר את המחקר של אקולוגיה הרבייה של דגים שמורים באקווריום מתוארים. אלה הם פרוטוקולים שימושיים לאיסוף דגים באמצעות SCUBA, הובלת דגים חיים, והתבוננות בהתנהגות הרבייה של דגים שנלכדו באקווריום.

שיטות בסיסיות לחקר אקולוגיה פוריות של דגים באקווריום

שיטה להפעיל מחדש תאי גזע עצביים שקטים בגרשי מוח דרוזופילה מתורבתים הוקמה. בשיטה זו, ניתן לנתק את תפקיד האותות המערכתיים מאותות מהותיים רקמה בוויסות של השבתת תאי גזע עצביים, כניסה ויציאה.

הפעלה מחדש של תאי גזע עצביים במוח דרוזופילה מתורבת

עבודה זו נועדה להעריך ולסקור את הליך הבדיקה הביולוגית של Artemia salina קטלניות, המזוהה גם כבדיקת קטלניות של שרימפס מלח. שיטה פשוטה וזולה זו נותנת מידע על הרעילות הכללית (הנחשבת להערכת רעילות ראשונית) של דגימות, כלומר, מוצרים טבעיים.

קטלניות ביואסאי באמצעות ארטמיה סלינה L.

שיטת שימור ארוכת טווח לזני דרוזופילה כחלופה להעברה תכופה של זבובים בוגרים לבקבוקוני מזון טריים רצויה מאוד. פרוטוקול זה מתאר שימור בהקפאה של תאי נבט קדמוניים של דרוזופילה והחייאת זנים באמצעות השתלתם בעוברים מארחים אגמטיים.

שימור בהקפאה של תאי נבט קדמוניים והחייאת זני דרוזופילה

מאמר זה לוקח את הטרנסגנזה בתיווך אינטגראז phiC31 בדרוזופילה כדוגמה ומציג פרוטוקול אופטימלי למיקרו-הזרקה עוברית, צעד מכריע ליצירת זבובים טרנסגניים.

מיקרו-הזרקה של עובר לטרנסגנזה בדרוזופילה

RASopathies הן תסמונות גנטיות רב-מערכתיות הנגרמות על ידי היפראקטיביזציה של מסלול RAS-MAPK. וריאנטים פתוגניים פוטנציאליים הממתינים לאימות מופיעים ללא הרף בעוד ראיות פרה-קליניות גרועות מגבילות את הטיפול. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול ה-in vivo שלנו לבדיקה ואימות צולב של רמות הפעלת ERK הקשורות ל-RASopathy ואת האפנון הפרמקולוגי שלו במהלך האמבריוגנזה על ידי הדמיית FRET חיה בדג זברה Teen-reporter.

פרוטוקול יעיל להערכת אפנון פעילות ERK במודלים מוקדמים של תסמונת נונן של דג הזברה באמצעות מיקרוסקופ FRET חי ואימונופלואורסצנציה

למדו שיטה לתחיית שלבים נרדמים של Daphnia magna ממשקעי אגמים. הטכניקה מאפשרת חקר תהליכים אבולוציוניים ואקולוגיים בפרקי זמן ממושכים, ומספקת כלי רב עוצמה להבנת מנגנוני האבולוציה בטבע.

תחיית המתים של רדום דפניה מגנה: פרוטוקול ויישומים

גלה סרטונים נוספים