Name: גישה תעלת Semicircular אחורי האוזן הפנימית המסירה הגן עכבר Neonatal (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 52 s
Description: למד גישת תעלת Semicircular אחורית להזרקת גנים לאוזן הפנימית בעכברים נאונטליים. שיטה זו מאפשרת הזרקת וירוס AAV8-whirlin לתאי שיער ולשיפור פונקציות שמיעה ושיווי משקל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי כספים NIDCD חלוקה של מגזר מחקר /NIH (DC000082-02 כדי W.W.C.), כמו גם DC000081 אל ליבה הדמיה מתקדמות. . אנחנו אסירי תודה על הצוות מתקן בעלי חיים NIDCD על הדאגה לבעלי-חיים שלנו.

כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה במכון הלאומי על חירשות והפרעות אחרות תקשורת (NIDCD ASP1378-15).
1. הליך ההתקנה והכנות
<ol><li>לעקר את כל הכלים על ידי אתילן אוקסיד בתחילת הניסוי. בין בעלי החיים, לנקות כלים באמצעות עיקור חרוז.</li>
	<li>לטעון את הפתרון הכולל ריפוי גנטי ויראלי לתוך micropipette על המיקרו-מזרק. וקטור ויראלי השתמשו במחקר זה היה AAV2/8-whirlin ' (עונה 1 פרק 10-13 הגנום עותקים למיליליטר, ראה את הטבלה של חומרים). הערה: בדרך כלל, µL 1.1 הנפח הכולל נטען את micropipette.</li>
</ol>2. הרדמה
הערה: המתח העכבר השתמשו במחקר זה הוא העכבר whirler. Homozygous מוטציות (Whrnאינטרנט/אינטרנט) והן הארנבונים מאותה משפחתית ולא משפחתית הטרוזיגוטיים (Whrnבחיבור אינטרנט) שימשו.
<ol><li>מקם את האמא בכלוב נפרד (נפרד מן הגורים).</li>
	<li>למקם את הכלוב הביתה המכילה את הגורים (P0 - P5 הגורים) על משטח חום recirculating (ערכה ב 37.5 מעלות צלזיוס) כדי לחמם את העכברים.</li>
	<li>לגזור את החלק האגודל של כפפת לייטקס, ולמקם גור בתוכו.</li>
	<li>מקום הכלבלב כפפת לייטקס האגודל לתוך דלי קרח ~ 2 דקות.</li>
	<li>במקום הכלבלב anesthetized על חבילת ההקפאה פלסטיק מרובע מסחרי גדול עם גזה 4 "x 4" בין הגורים השטח של הלהקה.</li>
	<li>למלא את כפפת גומי עבות עם קרח כתוש, ולמקם את הכפפה קרח סביב הכלבלב.</li>
	<li>בדוק אם הכלבלב שלמאחה מורדם על ידי חוסר מוחלט של כל תגובה לגירויים שונים (כולל קמצוץ הבוהן המשרד). להשאיר את הגור הקרח משך זמן הניתוח (כ 5-10 דקות). הערה: מומלץ להשאיר את הגורים על חבילת קרח למשך לא יותר מ 15 דקות במהלך הניתוח.</li>
</ol>3. ניתוח בגישה (איור 1)
<ol><li>לנקות את העור מאחורי האוזן עם המחיקה של יוד ולנגב עם אלכוהול, ברגע החיה. הוא מורדם.</li>
	<li>עושים חתך postauricular ~ 2 מ מ מאחורי האוזן באמצעות מיקרו-מספריים, לחלק את שריר שריר הצוואר עם מיקרו-מספריים.</li>
	<li>לזהות את עצב הפנים של בועה. בולה הסחוס ושקוף למחצה בגיל הזה, היא שוכנת המדיאלי לעצב הפנים. ניתן לראות את העורק stapedial דרך של בולה בגיל הזה, המהווה נקודת ציון שימושית.</li>
	<li>בצע את עצב הפנים עליונית ו posteriorly כדי לאתר את התעלה semicircular האחורי (PSCC). הסר את סיבי השריר ואת רקמות רכות המכסים את התעלה semicircular האחורי באמצעות מיקרו-מספריים. הערה: PSCC זה הסחוס בגיל הזה.</li>
	<li>לחדור את PSCC באמצעות micropipette של זכוכית (~ 10 μm בקוטר) על המיקרו-מזרק.</li>
	<li>מזריקים נגיפי והמוצגים לתוך האוזן הפנימית. הערה: בדרך כלל, סכום כולל של 20 זריקות של 49 nL של הטיפול הגנטי מועברים לתוך התעלה semicircular אחורי מעל 40 ~ s (הנפח הכולל ~ 1 µL). כייל ויראלי בשימוש היה עונה 1 פרק 10-13 הגנום עותקים בכל mL.</li>
	<li>סגירת החתך בעור באמצעות בתפר polyglactin 5-0.</li>
</ol>4. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>במקום הכלבלב על כרית חימום כדי לשחזר את טמפרטורת גוף נורמלית במהלך ההתאוששות מן ההרדמה עם קבוע ידנית גירוי/מתגלגל עם האצבעות בכפפה אנושי.</li>
	<li>לאחר הכלבלב הוא ער, מקם אותו בחזרה לכלוב שלה הביתה.</li>
	<li>לטפו כל pup באמצעות מקלון צמר גפן זה נחשף מצעים כלוב הביתה. הערה: המטרה של זה הוא צריך העכברים להריח כפי שעשו לפני הניתוח, אשר מגבירה את הסבירות של האמא מחדש קבלת שהניתוח שלאחר המלטה. במידת האפשר, שתן מהאם ניתן לאסוף ולהשתמש מרח על הגורים באמצעות מקלון צמר גפן כדי להקטין עוד יותר את הסיכוי של דחייה.</li>
	<li>חלות שמן מינרלי האף של האם כדי desensitize שלה8, להציג מחדש את האמא לתוך הכלוב הביתה.</li>
</ol>

<ol><li>Chien, W. W., Monzack, E. L., McDougald, D. S., Cunningham, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+for+sensorineural+hearing+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Ear+Hear%22%5BJournal%5D)">Gene therapy for sensorineural hearing loss.</a> Ear Hear. 36, 1-7 (2015).</li>
<li>Askew, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tmc+gene+therapy+restores+auditory+function+in+deaf+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Tmc gene therapy restores auditory function in deaf mice.</a> Sci Transl Med. 7, 295(2015).</li>
<li>Akil, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+hearing+in+the+VGLUT3+knockout+mouse+using+virally+mediated+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Restoration of hearing in the VGLUT3 knockout mouse using virally mediated gene therapy.</a> Neuron. 75, 283-293 (2012).</li>
<li>Pan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+restores+auditory+and+vestibular+function+in+a+mouse+model+of+Usher+syndrome+type+1c%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Gene therapy restores auditory and vestibular function in a mouse model of Usher syndrome type 1c.</a> Nat Biotechnol. 35, 264-272 (2017).</li>
<li>Isgrig, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Therapy+Restores+Balance+and+Auditory+Functions+in+a+Mouse+Model+of+Usher+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene Therapy Restores Balance and Auditory Functions in a Mouse Model of Usher Syndrome.</a> Mol Ther. 25, 780-791 (2017).</li>
<li>Lentz, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+hearing+and+vestibular+function+by+antisense+oligonucleotides+in+a+mouse+model+of+human+deafness%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Rescue of hearing and vestibular function by antisense oligonucleotides in a mouse model of human deafness.</a> Nat Med. 19, 345-350 (2013).</li>
<li>Shibata, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+Interference+Prevents+Autosomal-Dominant+Hearing+Loss%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">RNA Interference Prevents Autosomal-Dominant Hearing Loss.</a> Am J Hum Genet. 98, 1101-1113 (2016).</li>
<li>Van Sluyters, R. C., Obernier, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+care+and+use+of+mammals+in+neuroscience+and+behavioral+research%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the care and use of mammals in neuroscience and behavioral research.</a> Contemp Top Lab Anim. 43, 48(2004).</li>
<li>Chien, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Therapy+Restores+Hair+Cell+Stereocilia+Morphology+in+Inner+Ears+of+Deaf+Whirler+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene Therapy Restores Hair Cell Stereocilia Morphology in Inner Ears of Deaf Whirler Mice.</a> Mol Ther. 24, 17-25 (2016).</li>
<li>Hirose, K., Hartsock, J. J., Johnson, S., Santi, P., Salt, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+lipopolysaccharide+compromises+the+blood-labyrinth+barrier+and+increases+entry+of+serum+fluorescein+into+the+perilymph%5BTitle%5D)+AND+%22J+Assoc+Res+Otolaryngol%22%5BJournal%5D)">Systemic lipopolysaccharide compromises the blood-labyrinth barrier and increases entry of serum fluorescein into the perilymph.</a> J Assoc Res Otolaryngol. 15, 707-719 (2014).</li>
<li>Okada, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+targeting+mouse+vestibule+using+adenovirus+and+adeno-associated+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Gene transfer targeting mouse vestibule using adenovirus and adeno-associated virus vectors.</a> Otol Neurotol. 33, 655-659 (2012).</li>
<li>Suzuki, J., Hashimoto, K., Xiao, R., Vandenberghe, L. H., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cochlear+gene+therapy+with+ancestral+AAV+in+adult+mice%3A+complete+transduction+of+inner+hair+cells+without+cochlear+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Cochlear gene therapy with ancestral AAV in adult mice: complete transduction of inner hair cells without cochlear dysfunction.</a> Sci Rep. 7, 45524(2017).</li>
</ol>

המחברים יש אין גילויים הרלוונטיים להכין.

מספר גישות כירורגיות תוארו לגשת לאוזניים הפנימיות מכרסמים. Cochleostomy וגישות חלון עגול הנפוץ ביותר לגישה שבלול, ואילו התעלה semicircular האחורי ועל גישות שק endolymphatic משמשים בדרך כלל כדי לגשת את אברי שיווי המשקל1. במחקר שנערך לאחרונה, הראינו כי תעלת semicircular האחורי זריקות של טיפול גנטי ויראלי, גרמו יעילות גבוהה של התמרה חושית תא שיער של אברי שיווי המשקל והן שבלול5. למעשה, התמרה חושית תא שיער שבלול היה גבוה באמצעות זריקות תעלת semicircular אחורי, כאשר לעומת זריקות ...

ריפוי גנטי באוזן הפנימית הוא שדה המתפתחת של החקירה. זה הוחל במודלים בבעלי חיים שונים ototoxicity לחימה, טראומת רעש של אובדן שמיעה תורשתי1. מספר מחקרים שנעשו לאחרונה הראו שחזור פונקציונלי של שמיעה ופונקציות לאיזון בעכברים המוטנטים לאחר באוזן הפנימית ג'ין טיפול משלוח2,3,4,5,6, 7. אחת של המפתח גורמים בקביעת ההצלחה של טיפול גנטי באוזן הפנימית היא גישה כירורגית המשמשים לגישה האוזן הפנימית. באופן אידיאלי, הגישה כירורגי יהיה קל לביצוע, ציוני הדרך אנטומיים יהיה עקבי וקל לזיהוי, ו התמרה חושית וכתוצאה מכך של סוגי תאים יישוב יהיה גבוה.
במחקר שנערך לאחרונה, הראינו כי כאשר הטיפול הגנטי הנגיפי הוזרק דרך תעלת semicircular האחורי של העכבר מוטציה whirler (דגם של אובדן שמיעה, בעיות בתפקוד שיווי המשקל), התמרה חושית יעילה של תאי חישה השיער נראה את שיווי המשקל כמו גם איברים כמו שבלול5. יעילות גבוהה של התמרה חושית החישה תא שיער הביאו לשיפור של פונקציות השמיעה ואת שיווי המשקל בעכברים המוטנטים האלה.
במאמר זה, נתאר בפירוט את הגישה תעלת semicircular האחורי כדי לגשת האוזן הפנימית העכבר neonatal.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ הפעלה</td><td>Zeiss</td><td></td><td>OPMI Pico ENT מיקרוסקופ. מיקרוסקופים אחרים לדיסקציה יעבדו גם הם.</td></tr><tr><td>Micro-forcepts</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10, 11295-51</td><td>#5 ו- #55 Dumont</td></tr><tr><td>מיקרו-מספריים</td><td>Fine Science</td><td>Tools 15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Nanoliter2000 מיקרו-מזרק</td><td>World Precision Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>Mastex</td><td>דגם 500/600</td><td></td></tr><tr><td>5-0 תפרי ויקריל</td><td>Ethicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AAV8-whirlin</td><td>Vector Biolabs</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיפטה זכוכית</td><td>Sutter Instruments</td><td>B100-75-10</td><td>זכוכית בורוסיליקט</td></tr></tbody></table>

גישה תעלת semicircular אחורי האוזן הפנימית המסירה הגן עכבר neonatal

Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse

ריפוי גנטי באוזן הפנימית מציע הבטחה גדולה בתור טיפול פוטנציאלי עבור אובדן שמיעה וסחרחורות. אחת גורמים קריטיים של ההצלחה של טיפול גנטי באוזן הפנימית היא למצוא שיטת משלוח אשר התוצאות היעילות התמרה חושית עקבית של סוגי תאים ממוקד תוך מזעור אובדן שמיעה. במחקר זה, אנו מתארים את הגישה תעלת semicircular האחורי כשיטה מעשית למסירה גן באוזן הפנימית בעכברים neonatal. אנו מראים כי המסירה הגן דרך תעלת semicircular האחורי הוא היכולת perfuse האוזן הפנימית כולה. זיהוי אנטומיים קלה של תעלת semicircular אחורי, כמו גם מניפולציה מינימלי של העצם הטמפורלית הנדרש, לעשות ניתוח זה הגישה אופציה אטרקטיבית עבור המסירה הגן באוזן הפנימית.

הזרקה של טיפול גנטי AAV8 whirlin לתוך neonatal whirler עכברים דרך תעלת semicircular אחורי, גרמו whirlin ביטוי תאים שיער utricular (איור 2), (ירוק) עם היעילות הכוללת של זיהום של 53.1% (SD 38.1, n = 28)5 . תאים שיער transduced היה מוארך stereocilia (אדום) לעומת תאים שיער מהאוזניים ללא הזרקת contralateral (מיקרומטר ± 2.11 5.35 לעומת ± 0.34 3.20 מיקרומטר, בהתאמה)5.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within...

במחקר זה, אנו מתארים את הגישה תעלת semicircular האחורי בתור שיטה אמינה למסירה גן באוזן הפנימית בעכברים neonatal. אנו מראים כי המסירה הגן דרך תעלת semicircular האחורי הוא היכולת perfuse האוזן הפנימית כולה.

גישה תעלת Semicircular אחורי האוזן הפנימית המסירה הגן עכבר Neonatal

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לגשת לאוזן הפנימית של העכבר להעברת גנים. שיטה זו יכולה לסייע בהעברת ריפוי גנטי לאוזן הפנימית של העכבר בצורה יעילה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא אמינה וקלה ללמידה.בדרך כלל אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו בגלל הגודל הקטן של האוזן הפנימית של העכבר. עם זאת, עם תרגול, רוב האנשים יכולים להשלים דיסקציה כירורגית תוך עשר דקות. התחל את ההליך במכשירים סטריליים והפעל את מעקר החרוזים כדי לנקות מכשירים בין בעלי חיים.טען את הנגיף הטיפולי למיקרופיפטה בקוטר עשרה מיקרון המחוברת למזרק מיקרו. הווקטור הנגיפי ששימש בניסויים שלנו הוא AAV28-whirlin עם טיטר של 1 כפול 10 ל-13 עותקי גנום למיליליטר. עבור סרטון זה, נעשה שימוש בצבע כחול מתילן כדי להקל על ההדמיה.נקו את העור מאחורי האוזן עם שלושה פילינג בטדין ואחריהם מגבון אלכוהול. לאחר מכן, השתמש במספריים מיקרו כדי ליצור פוסט-אאוריקולרי כשני מילימטרים מאחורי האוזן ולחלק את הרקמה הרכה הבסיסית. זהה את עצב הפנים והבולה.שריר הסטרנוקלידומסטואיד נמצא בניצב לעצב הפנים. ניתן לראות את העורק הסטפדיה דרך הבולה שהיא נקודת ציון שימושית. עקוב אחר עצב הפנים בצורה עליונה ואחורית כדי לאתר את התעלה החצי עגולה האחורית.השתמש במספריים המיקרו כדי להסיר את סיבי השריר והרקמות הרכות המכסה את התעלה החצי עגולה האחורית. לאחר מכן, חדרו לתעלה החצי עגולה האחורית עם מיקרופיפטת הזכוכית הטעונה על מזרק המיקרו והזריקו את הצבע לאוזן הפנימית. בדרך כלל, בסך הכל 20 זריקות של 49 ננו ליטר מועברות לתעלה החצי עגולה האחורית במשך 40 שניות לנפח כולל של כמיקרוליטר אחד.משוך את הפיפטה מיד לאחר מתן הכרך האחרון. לאחר מכן, סגור את חתך העור באמצעות תפר פוליגלקטין 5-0. הזרקת AAV8-whirlin לעכברי מערבולת יילודים כפי שמוצג בסרטון זה הביאה לביטוי מערבולת המוצג בירוק בתאי שיער חדריים.לתאי שיער מותמרים היו סטריאוציליה מוארכת שהוצגה באדום בהשוואה לתאי שיער מאוזניים נגדיות שאינן מוזרקות. הזרקת תעלה חצי מעגלית אחורית של AAV8-whirlin הביאה גם להתמרה של תאי שיער שבלול בעכברי המערבולת. תאי שיער מותמרים ביטאו מערבולת בקצות סטריאוציליה והיו להם סטריאוציליה מוארכת בהשוואה לתאי שיער מאוזניים נגדיות שלא הוזרקו.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו ABI ובדיקת הסטריאו על מנת לענות על שאלות נוספות כמו האם להעברת גן באוזן הפנימית יש השפעה על תפקודי השמיעה ושיווי המשקל. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום העברת גנים באוזן הפנימית לחקור פגמים בהעברת גנים באוזן הפנימית של העכבר.

posterior-semicircular-canal-approach-for-inner-ear-gene-delivery

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

האוזן הפנימית העכבר הוא איבר placode הנגזרות חושית אשר התפתחותית תוכנית מפורטת במהלך ההריון. אנו...

ין העברת לאוזן הפנימית על ידי פיתוח מאוס<em&gt; In vivo</em&gt; Electroporation

מקור: Kozin, E. D., et.al. הדמיה ישירה של גרעין השבלול הגבי של העכברים לגירוי אופטוגנטי של מסלול השמיעה. J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים העברת גנים בתיווך וירוס לגרעין השבלול הגבי של העכבר (DCN) כדי לאפשר גירוי שמיעתי המושרה על ידי אור. וקטור ויראלי המקודד אופסין, תעלת יונים רגישה לאור, מוזרק לתוך ה-DCN לאחר קרניוטומיה ושאיפת מוח לגישה ישירה. האופסינים המבוטאים מאפשרים להפעיל נוירונים על ידי אור, ומספקים מודל לחקר תגובות מסלול השמיעה באמצעות אופטוגנטיקה.

העברת גנים בתיווך וירוס לגרעין השבלול הגבי של העכבר לגירוי שמיעתי המושרה על ידי אור

סרטון זה מציג קנלסטומיה, הליך המאפשר העברת תרופות מקומית לאוזן הפנימית של עכבר דרך התעלה החצי עגולה עם נזק מינימלי לשמיעה ולתפקוד שיווי המשקל. שיטה זו מאפשרת חיסון של וקטורים נגיפיים, תרופות ומולקולות קטנות לתוך האוזן הפנימית של העכבר.

קנלוסטומיה להעברת סמים מקומית לאוזן הפנימית של עכבר בוגר

מקור: Akil, O., et al., שיטה כירורגית להעברת גנים בתיווך ויראלי לאוזן הפנימית של העכבר דרך קרום החלון העגול. J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים את ההליך של העברת גן טיפולי לאוזן הפנימית של גור עכבר עם ליקוי שמיעה גנטי. באמצעות וקטור ויראלי הקשור לאדנו-(AAV), הגן מוזרק דרך קרום החלון העגול, ומאפשר לחלקיקים נגיפיים להיכנס לתאי השיער, לשחזר את ייצור טרנספורטר הגלוטמט ולבסס מחדש איתות קול למוח.

טיפול גנטי מבוסס וקטור ויראלי לשיקום שמיעה במודל עכבר

הגישה הכירורגית הפוסט-אפרכסת המתוארת מאפשרת אספקה מהירה וישירה לשבלול העכבר scala tympani תוך מזעור אובדן דם ותמותת בעלי חיים. ניתן להשתמש בשיטה זו לטיפול בשבלול באמצעות העברה מולקולרית, פרמקולוגית וויראלית לעכברים לאחר לידה דרך קרום החלון העגול.

שיטה ניתוחית למשלוח באופן ויראלי המתווכת Gene לאוזן הפנימית באמצעות עכבר העגול חלון ממברנה

אנו מציגים שיטה המתארת בידוד ותרבית של צמחי שבלול מהאוזן הפנימית של עכבר עוברי.  אנו גם מדגימים שיטה להעברת גנים לתוך צמחי שבלול באמצעות אלקטרופורציה של גל מרובע. תרבית הצמח במבחנה יחד עם טכניקת העברת גנים מאפשרת לחוקרים לחקור את ההשפעות של שינוי ביטוי גנים במהלך ההתפתחות.

תרבות של עוברי Explants שבלול העכבר וג&#39;ין העברה על ידי Electroporation

מטרת פרוטוקול זה היא להתוות גישה כירורגית כדי לספק גישה ישירה לגרעין השבלול הגבי במודל עכברי.

הדמיה ישירה של Murine הגבי שבלול Nucleus לoptogenetic גירוי של הנתיב השמיעתי

שתי גישות מיקרו-כירורגיות להעברת תרופות מקומיות לאוזן הפנימית מתוארות כאן ומושוות במונחים של השפעה על פרמטרי שמיעה, ציטוארכיטקטורה של השבלול וביטוי סמנים דלקתיים.

מחקר השוואתי של שיטות שיגור תרופות אל האוזן הפנימית עכבר: Bullostomy Versus הזרקת Transtympanic

המטרה של פרוטוקול זה היא להדגים את הכנה, תרבות, טיפול, immunostaining של explants מון neonatal cochlear. הטכניקה יכולה להיות מנוצל כמו כלי בדיקה במבחנה במחקרי שמיעה.

Neonatal Murine Cochlear Explant טכניקה כמו<em&gt; במבחנה</em&gt; כלי הקרנה במחקר שמיעה

. מדווחים שיטה כירורגית כדי לנהל את התרופות האוזן הפנימית של הפרימטים אנושיות, המרמוסט נפוצות (ההצטרפות נקראו Callithrix), דרך קרום חלון עגול.

הליך כירורגי עבור ניהול של הסמים לאוזן הפנימית, לא אנושית הפרימטים נפוצות קוף (ההצטרפות נקראו Callithrix)

כאן נתאר canalostomy הליך המאפשר משלוח סמים מקומי לתוך האוזן הפנימית של עכברים בוגרים ו neonatal דרך תעלת semicircular במינימום נזקים לפונקציה שמיעה ואת שיווי המשקל. בשיטה זו ניתן לחסן וקטורים ויראלי, פרמצבטיקה, מולקולות קטנות לתוך האוזן הפנימית העכבר.

Canalostomy כמו הגישה כירורגי של משלוח סמים מקומי לתוך האוזן הפנימית של עכברים בוגרים ו Neonatal

למד גישת תעלת Semicircular אחורית להזרקת גנים לאוזן הפנימית בעכברים נאונטליים. שיטה זו מאפשרת הזרקת וירוס AAV8-whirlin לתאי שיער ולשיפור פונקציות שמיעה ושיווי משקל.

גישה תעלת Semicircular אחורי האוזן הפנימית המסירה הגן עכבר Neonatal

גלה סרטונים נוספים