5 בינואר 2018
פרוטוקול זה מתאר את השימוש T-maze ששונה להערכת תפקודי למידה/בזיכרון דום-induced איסכמיה מוחית חנק.
המטרה הכוללת של מבוך T מותאם זה היא להעריך למידה תפקודית וזיכרון לאחר איסכמיה מוחית הנגרמת מדום לב. חברי צוות מותאמים אלה יכולים לעזור לענות על תפקוד ההיפוקמפוס במחלות הגורמות לליקויים בזיכרון לטווח קצר, כגון דום לב. היתרון העיקרי של מבוך ה-T השונה הוא העיצוב הפשוט יחסית שלו.
זה חזק מספיק כדי למדוד זיכרון למידה תפקודי לאחר איסכמיה. בנוסף, ניתוח הנתונים פשוט וישיר. מכיוון שדום לב חנק גורם בעיקר לליקויים בזיכרון לטווח קצר, ניתן ליישם את מבוך ה-T המותאם גם למחלות אחרות של מערכת העצבים המרכזית, הגורמות לליקויים בזיכרון לטווח קצר.
כגון מחלת אלצהיימר, מחלת פרקינסון והתקף איסכמי חולף. לאחר צנתור עצם הירך והעורקים והווריד, התאם פרמטרים פיזיולוגיים לפי הצורך על ידי ויסות נפח השבץ, החמצן או רמות תחמוצת החנקן. לאחר מכן השתמש במזרק מיליליטר אחד המחובר למתאם פיתוי בגודל 23, כדי לתת וקורוניום ברומיד דרך וריד הירך והמתן שתי דקות.
ודא שלחץ הדם הוא בסביבות 100 מילימטר כספית. לגרום לדום נשימה למשך שש דקות על ידי ניתוק הצינור האנדוטרכיאלי ממכונת ההנשמה. חסום עוד יותר את הצינור האנדוטרכיאלי על ידי מזרק מיליליטר אחד כדי להבטיח דום נשימה מלא.
במהלך הדקה האחרונה של דום נשימה, התאם את קצב הנשימה של מכונת ההנשמה ל-80 נשימות לדקה והגדל את החמצן לשני ליטר לדקה עם אפס אחוז תחמוצת חנקן כדי לפוצץ את כל האיזופלורן או תחמוצת החנקן שנותרו במכונת ההנשמה. לאחר שש דקות של דום נשימה, הסר את המזרק של מיליליטר אחד מהצינור האנדוטרכיאלי. חבר מחדש את הצינור האנדוטרכיאלי למכונת ההנשמה.
לאחר מכן, השתמש במזרק של מיליליטר אחד המחובר למתאם פיתוי בגודל 23 כדי לתת אפינפרין דרך וריד הירך. בצע לחיצות חזה ידניות על ידי האגודל, המורה והאצבע האמצעית על חזה החיה, בתנועה מעגלית קלה על ציר X ו- Z, עד להחזרת זרימת הדם הספונטנית. לאחר מכן השתמש במזרק נוסף של מיליליטר המחובר למתאם פיתוי בגודל 23 כדי לתת נתרן ביקרבונט דרך וריד הירך, מיד לאחר החזרה למחזור ספונטני, כדי להקל על חמצת בדרכי הנשימה.
10 דקות לאחר ההחייאה, מדוד שוב את גזי הדם כדי לקבוע את מצב בסיס החומצה. השתמש בהמוסטט כדי להדק את עורק הירך והווריד. הסר לאט ובעדינות צנתרים עורקיים וורידיים באמצעות מלקחיים קהים.
לאחר מכן הקצה את עורק הירך והווריד עם תפר משי 5 O למניעת דימום. סגור את העור המכסה את אתר הניתוח עם תפר משי 3 O בטכניקת תפירה קטועה, כדי למזער את הסיכוי לפתיחה מחדש של הפצע. לאחר שהחולדה מתחילה לנשום בכוחות עצמה, 30 עד 60 דקות לאחר ההחייאה, נתק ממכונת ההנשמה והסר בעדינות את הצינור האנדוטרכיאלי.
הכניסו את החולדה לחממת התינוקות למשך הלילה. לבסוף העבירו את החולדה לכלוב האישי והחזירו את החולדה למתקן החי עם צ'או רגיל ומים. ביום שלפני הניתוח, טפל בכל חולדה במשך חמש דקות ולעולם אל תרים את החולדה מהכלוב בעת הטיפול.
לאחר מכן הרם אותו בעדינות בזנבו ביד אחת, בעוד היד השנייה תומכת ברגליו, ותן לו לקפוץ מהיד לכלוב חמש פעמים. הפרד כל חולדה לכלובים בודדים כדי שלא ישלטו על מזון או ריב. לאחר מכן שלושה ימים לאחר ניתוח דמה או ACA, העבירו את החולדה עם הכלוב לחדר שקט וחשוך לפני תחילת הריצה הראשונה.
הפעל רק מנורת שולחן בהספק נמוך והנח אותה בפינת חדר הבדיקה כדי לשמור על תאורה מינימלית. אפשר לחולדה להסתגל לחושך למשך 10 דקות. לאחר מכן מורחים שכבה דקה של מצעים כדי לכסות את כל רצפת המבוך ומניחים את החולדה בזרוע ההתחלה.
תנו לכל חולדה שלוש דקות לחקור את זרוע המטרה הימנית או השמאלית. אחרי שהחולדה מתחייבת לאחת מזרועות המטרה, כאשר כל ארבע הכפות של החולדה נכנסו לזרוע המטרה, נעלו את צומת ה-T בין זרוע ההתחלה לזרוע המטרה היריבה כדי למנוע מהחולדה להיכנס לזרוע המטרה היריבה. השאירו את החולדה במבוך למשך 30 שניות.
לאחר מכן הרימו את החולדה והחזירו אותה לכלוב שלה למשך כ-30 שניות. לאחר מכן הסר את בלוק צומת T ממבוך ה-T. הנח את החולדה שוב בזרוע ההתחלה וחזור על הבדיקה כדי לקבוע החלפה ספונטנית.
בקשו מהחולדות לבצע ארבע ריצות ביום עם הפסקה של 10 דקות לאחר שתי הריצות הראשונות. לבסוף, החליפו את המצעים במהלך ההפסקה של 10 דקות ובין בעלי חיים כדי למנוע הטיית ריח. נקו את מבוך ה-T עם 75% אתנול ואחריו מים מזוקקים בסוף כל יום ניסוי.
תוצאות מבדיקת ההחלפה הספונטנית מצביעות על כך ששיעור ההחלפה משלושה ימים רצופים בקבוצת ה-ACA היה נמוך משמעותית בהשוואה לקבוצת הביקורת. זאת בשל העובדה שחולדות שנחשפו ל-ACA פיתחו עלייה בהעדפת הצד בהשוואה לביקורת. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשתמש במבוך ה-T המותאם הזה כדי להעריך גירעון זיכרון לטווח קצר לאחר איסכמיה מוחית במכרסם.
בזמן ניסיון מבוך ה-T המותאם הזה, חשוב לחסום בעדינות את הזרוע הנגדית לאחר שהחולדה נכנסת לאחת מזרועות המטרה. בנוסף, יש לבצע מבוך T בחדר חשוך עם תאורה מינימלית, מה שמפחית את חרדת העכברושים.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
פרוטוקול זה מתאר את השימוש במבוך T משופר להערכת למידה תפקודית וזיכרון לאחר איסכמיה מוחית שהושרית על ידי דום לב. תכנונו של מבוך ה-T המשופר הוא פשוט אך יעיל למדידת פגעי זיכרון הקשורים לאיסכמיה.
הערכה של ליקויי זיכרון לטווח קצר במודלים פרה-קליניים של דום לב תומכת בתיקוף יעדים לטיפולים נוירופרוטקטיביים. T-maze המודעמ提供 שיטה הניתנת לשחזור ובמתח נמוך למדידת זיכרון עבודה תלוי-היפוקמפוס, המאפשרת הפחתת סיכונים מכניסטית בשלב הגילוי המוקדם. גישה זו מגבירה את הביטחון החזוי בעת הערכת תרכובות להשגה של התאוששות קוגניטיבית לאחר איסכמיה.
מבוך ה-T המותאם נכנס במסגרת רצף הגילוי, החל מתיקוף המטרה ועד לאופטימיזציה של מובילים (lead optimization), ובמיוחד עבור תוכניות CNS העוסקות באינדיקציות איסכמיות או ניווניות.