Name: היצרות של הכלילי התחתון: מודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: למדו כיצד ליצור היצרות בווריד הכלילי התחתון בעכברים כדי לחקור מנגנוני יצירת קרישי דם עמוקים. שיטה זו מחקה הפרעות בזרימת הדם ומסייעת בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי קרן לב הבריטי (PG/13 60 30406) ואת אוניברסיטת בירמינגהם.

כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על-ידי חיה רווחה אתית סקירה הגוף ואת משרד הפנים בבריטניה (בריטניה, פרוייקט רשיון 40/3745). עכברים על רקע C57BL/6, 8-12 שבוע 19-25 גרם משקל, של שני המינים משמשים.
1. בעלי חיים הרדמה
<ol>
	<li>במקום עכבר לתא אינדוקציה, לגרום הרדמה על ידי תערובת של 5% איזופלוריין 100% חמצן. קצב זרימה של חצי ליטר לדקה חכה עד העכבר לגמרי מפסיקה לנוע ושימוש תדירותו של נשימה הופך נדיר.</li>
	<li>להסיר את העכבר מן החדר ולגלח את הבטן קוצץ חשמלי. הסרת שיער מהבטן יסודי ככל האפשר כדי למנוע זיהום של חלל הבטן.</li>
	<li>הנח את העכבר במצב פרקדן ולמקם את האף של העכבר לתוך קונוס מקושרים למערכת הרדמה. להקטין את אחוז איזופלוריין ל 2-3% (האחוז המדויק אולי מעט שונים חיה חיה). ודא כי החיה שוכבת עם קצב הנשימה שלה להיות נמוך יותר מהרגיל אבל הימנעות מתנשף. אם להשתנק מתרחשת, להקטין את אחוז איזופלוריין ב- 0.5%.
	<ol>
		<li>בדוק את רפלקס פדלים לאשר ההרדמה המתאים ולהתחיל ניתוח רק אם זה שלילי. הוטרינר משחה למרוח את העיניים למניעת יובש.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>להחיל פתרון אנטי-אחרים (1% Hibitane) על העכבר של הבטן, לנגב האזור באמצעות כותנה סטרילי באד בדרך למעט פוטנציאל זיהום מחדש של האתר כירורגית (למשל, מבפנים להוציא בצורה מעגלית). חזור על 3 פעמים.</li>
</ol>
2. יישום של היצרות IVC ושחזור העכבר
הערה: כל הכלים באותה מידה כמו חומרים (צמר גפן, גזה, תמיסת מלח וכו) בא במגע עם אזור הניתוח חייב להיות סטרילי. המפעיל חייב יתנקה לפני הניתוח לבין ללבוש כפפות סטריליות והגלימה במהלך ההליך. מיקרוסקופ ידיות צריך לעטוף בנייר סטרילי.
<ol>
	<li>לתת עכברים טיפול נגד כאבים לפני הניתוח במהלך תקופת הניסוי כולו. לדוגמה, השתמש הבופרנורפין 0.1 מ"ג/ק"ג subcutaneously 30 דקות לפני הניתוח, ואז כל 12 שעות עד החיה היא מורדמים. כמו פקקת בשיטה זו מתפתחת באופן דומה לדלקת סטרילית, למנוע באמצעות תרופות אנטי דלקתיות כמו premedication.</li>
	<li>מכסה את העכבר עם תלוי סטרילי, לעשות בו חור הכיסוי ותאבטחי לחשוף את האתר של הניתוח. בעזרת מספריים, לעשות חתך לאורך האמצע בבטן, 1.5 ס למטה מ בעצם החזה. בעזרת צמר גפן exteriorize המעיים בצד שמאל של העכבר, לכסות אותם עם גזה סטרילית טבולים תמיסת מלח חמים (37 מעלות צלזיוס) כדי למנוע ייבוש.</li>
	<li>לזהות את IVC ואת סניפיה בצד (ייתכנו 0, 1 או 2 מהם) בכיוון סימטרית מהאתר של פיוז'ן של IVC עם הווריד של הכליה השמאלית. מאתרים ומפסיקים את כל הענפים גלוי בצד עם 7-0 התפרים Prolene אינרטי כמו קרוב IVC ככל האפשר.
	<ol>
		<li>לא לנסות להחזיק הענפים בצד עם המלקחיים ישירות אלא למשוך אותם מחזיקות רקמת השומן הסובבים אותם עם מלקחיים ביד אחת ולגרום מנהרה מתחת הענף עם מלקחיים וביד השנייה. לא לסגור סניפים האחורי.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>מחזיק הרקמות הסובבות עם מלקחיים, משוך את IVC למעלה ועזב בהפקת המתח באזור קטן בין של IVC את העורקים בדיוק על הזווית בין IVC את וריד הכליה השמאלית. קח בחשבון שזה כמעט בלתי אפשרי להפריד העורקים IVC אפילו 2-3 מ מ מתחת (לכיוון סימטרית).</li>
	<li>באמצעות תנועות מתפצלים עם מלקחיים טיפים להפוך את יד ימין חור בין העורקים של IVC. יש לזכור כי התנועות יותר עשה, גבוה יותר הסיכוי לגרום נזק את כלי הקיבול. באופן אידיאלי, לנסות לצמצם את מספר תנועות 3-5.</li>
	<li>להכין חלק 7-0 בתפר Prolene אינרטי של 2 ס מ. למקם אותו בתוך חלל הצפק של העכבר בצד שמאל של המפעיל בסביבה IVC.</li>
	<li>משוך את IVC עזבו שוב. הכנס את העצות מלקחיים הנכון לתוך החור בין העורקים של IVC כך הטיפים להופיע בצד השני של IVC. קח את התפר ולמשוך אותו בחזרה דרך החור (איור 3א).</li>
	<li>קשר זמני עם התפר אך אינו סגור. מקום 30G המחט ("כרווח") כפופות בקרס לתוך הקשר עכשיו אותו וסגור (איור 3ב).</li>
	<li>הסר את מרווח (איור 3ג').</li>
	<li>להחזיר המעיים בחזרה אל חלל הצפק עם כותנה באד ולהפיץ אותם באותה מידה בה.</li>
	<li>סגור צפק 6-0 בתפר תפר נספג באמצעות לולאות רציפה. סגור את. לולאות הראשונה והאחרונה בתור קשר.</li>
	<li>קרוב לעור בעזרת סיכות מתכת.</li>
	<li>להחדיר את העכבר 0.5 מיליליטר חמים (37 מעלות צלזיוס) תמיסת גלוקוז subcutaneously כדי לשחזר את האיזון נוזלי של האורגניזם.</li>
	<li>למקם את העכבר הכלוב בודדים חמים (25 ° C) קאמרית או חדר האוכל, ג'ל מים בתוך הכלוב. להתבונן עד העכבר הוא התאושש לחלוטין (בדרך כלל, סביב 1 h).</li>
</ol>

<ol><li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li>
<li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism%3A+the+Worcester+VTE+study+%281985-2009%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med%22%5BJournal%5D)">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li>
<li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="https://publications.parliament.uk/pa/cm200405/cmselect/cmhealth/99/99.pdf">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li>
<li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Travel+and+venous+thrombosis%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li>
<li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4 30-34 (2009).</li>
<li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li>
<li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li>
<li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li>
<li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytes%2C+neutrophils%2C+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li>
<li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li>
<li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li>
<li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li>
<li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li>
<li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li>
<li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL%2F6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+%28stasis%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li>
<li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li>
<li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity%3A+the+case+of+deep+vein+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, Suppl 1 233-241 (2013).</li>
<li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li>
<li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrolytic+inferior+vena+cava+model+%28EIM%29+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737(2011).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+%28EIM%29+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li>
<li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li>
<li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Hemorheol+Microcirc%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li>
<li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis%3A+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li>
<li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mice+have+increased+thrombotic+potential%3A+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

. הנה, פרוטוקול שישקף היצרות IVC, אשר מחקה עיוות זרימת דם, גורם מפעילה מרכזי עבור DVT, מוצג. היצרות של IVC המניע לפיתוח thrombi 65-100% של C57BL/6 עכברים בתוך 48 שעות ו- 25-50% של עכברים בתוך h 2-66,8,23 (בריל A, שלא פורסמו נתונים, 2016). מגבלה משמעותית של השיטה הוא ההשתנות כגון גודל24 (איור 4), אשר נצפית לאחר היצרות (48 שעות) IVC לטווח ארוך וגם לטווח קצר (6 שעות). הסיבות השתנות כזה (בהתחשב בעובדה זהה תנאים, כגון מרווח, הרדמה וכו ', משמשים) נותרים מעורפלים. אבל אחד יכול לשער אנטומי זה וריאציות בין העכברים (לדוגמה, רוחב של IVC, מספר ומיקום של הן בצד האחורי סניפים) ביסוד התופעה. ההשתנות כגון גודל הופך את שכיחות פקקת (אחוז של עכברים עם כגון) התוצאה העיקרית. פקקת שכיחות ניתן להשוות באמצעות טבלה לשעת חירום, בדיקה מדוקדקת של פישר. באחד הניסויים היה יוצא דופן כאשר מופחתת כגון גודל עם שכיחות פקקת אותו לאחר הזרקת נוגדנים עיכוב podoplanin נצפתה 7
שיטה זו שימושית במיוחד כאשר חניכה פקקת ורידים הוא למד. היא מאפשרת חקירת האירועים בתחילת הקיר כלי, כגון גיוס של תאים, המוביל בסופו של דבר פקקת. Pro - או אנטי - thrombotic השפעות הסמים שניתן להעריך באמצעות מודל זה עם שכיחות פקקת להיות הבדיקה העיקרית. היצרות במשך 48 שעות ישימה לחשוף של פנוטיפ נגד קדחת, ואילו היצרות 6-אייץ ' יכול לשמש אם הפנוטיפ prothrombotic צפוי. ניתן גם לבצע ניתוח היסטולוגית של כגון, IVC החומה המקיפה.
השאלה אם הצד מסתעף צריך להיות מאתרים או שמאלה פטנטים נשאר פתוח. קבוצה אחת הראו כי מצדו בצד סניפים אינה מגדילה כגון גודל, מיקום של ענף צדדי קרוב יותר מאשר 1.5 מ מ לאתר מצדו IVC פוגע באופן דרמטי כגון פיתוח25. סגירת בצד סניפים עלול לגרום לפציעה אנדותל בהם, גם להאריך את הזמן של ניתוח26. בידיים שלנו, חוסר סגירת סניף צד מקטין משמעותית שכיחות פקקת (ל 10-30% לאחר 48 שעות היצרות; בריל, לא פורסם) ולכן אנו מאתרים ומפסיקים את כל גלוי בצד סניפים.
באופן אידיאלי, פקדים littermate אמור לשמש כמו עכברים, אפילו על רקע זהה אך ממקורות שונים, ייתכן השכיחות פקקת שונה במקצת. אם נלמד את ההשפעה של DVT עצמה על כל הפרמטרים (לדוגמה, הביוכימי), חיות המופעלים באמצעות העמדת פנים אמור לשמש. עכברים המופעלים שאם עוברים אותו הנוהל אבל הקשירה בסביבה IVC סגור באופן רופף והשאיר שם בלי לייצר היצרות.
הטעות בתדירות הגבוהה ביותר (שלב קריטי), פרוטוקול זה הוא מאמץ כדי להפריד בין העורקים, IVC לא בדיוק על הזווית בין כלי אבל נמוך במקצת, אשר בדרך כלל התוצאות דימום. כאשר דימום מסיבי מתרחש, התאוששות טובה של העכבר הופך לא סביר, מומלץ להפסיק את הניסוי, להרדימו. בדרך כלל, עכברים לשחזר היטב, לנוע בתוך הכלוב, לא באופן משמעותי במשקל. אנו ממליצים על שימוש בעכברים מעל 20 גרם עבור זכרים ונקבות, לשמור על בעלי חיים (בעיקר גברים) בכלובים בודדים לאחר הניתוח עד תום הניסוי כדי להימנע הלחימה ופציעה. דווח במודל אחר (אלקטרוליטי) של DVT כי עכברים זכרים לייצר thrombi גדולים יותר מאשר הנקבות27. ניתוח של הנתונים שלנו לא חשפה את הפרש משמעותי פקקת השכיחות בין זכר ונקבה עכברים (בריל, לא פורסם). לכן, חוקרים מעודדים לביצוע ניסויים באמצעות מודל היצרות IVC על עכברים של שני המינים.
מגלה הרבה תפרים או סיכות לא ניתן לפסוק כל ניסויים ארוך במיוחד (בשבוע ולא יותר). לפיכך, עכברים צריך להיבדק לפחות פעמיים ביום במיוחד עבור שלמות התפירות, תשומת לב מיוחדת יש לתת הופעת סימני דם על מצעים הכלוב.
יצוין כי, כמו מודל בעל חיים אחר, היצרות של IVC יש המגבלות מבחינת תרגום בני אדם. לדוגמה, IVCs מאתר אין שסתומים, ואילו DVT האנושי מתפתח בתוך שסתומי ורידים. כמו כן, לבני האדם יש אנכי אוריינטציה בעמוד השדרה עם המשאבה שרירים להיות מכניזם חשוב, האצת זרימת הדם בורידים. לעומת זאת, עכברים יש כיוון עמוד השדרה אופקי עם אין תפקיד של המשאבה שריר בתמיכה הדם בחזרה ללב. יש לקחת בחשבון מגבלות אלה בעת תרגום נתונים העכבר כדי המחלה האנושית.

פקקת ורידים עמוקה (DVT) היא הפיתוח של thrombi בורידים עמוקים, בדרך כלל (אך לא רק) ברגליים. ב במילות חיבור עם תסחיף ריאתי (PE; איזור ביחד כמו פקיקי ורידי, VTE) זה מתפתח אצל האמריקאים כ 900,000 מדי שנה ומייצג של חמור נושא הבריאות ובעיה חסכוני1,2. PE, סיבוך של DVT, מתרחשת כאשר כגון מקבל תלוש ממקום מושבו ההתחלתי, מגיע אל הריאות, דבר העלול לגרום אי ספיקה נשימתית ומוות. מספר ההרוגים של VTE חורג התמותה לאיידס, השד סרטן ותעבורה תאונות, משולב3.
הגורם שגורם DVT חוץ ידוע סיבות, כמו סרטן או טראומה, הוא חוסר ניידות 4,5. ייתכן שהדבר נובע מכך ניתוח (במיוחד אורטופדיות), שיתוק, טיסות למרחקים ארוכים או סיבות אחרות. זרימת הדם בורידים תלוי משאבת השרירים, לכן האיבר תוצאות הנייח בדם קיפאון לזרום פנימה שסתומי ורידים, מה שמוביל פקקת. מטרת השיטה המתוארת במסמך זה הוא מסכם את הדברים כאלה דם זרימה עיוות6,7. הגבלת זרימת חלקית ב הכלילי התחתון (IVC) מחקה התנאים שנוצרו בשסתומי ורידים האנושי ותוצאות היווצרות כגון דומה למבנה האדם thrombi6. חלק גדול כגון אדום, והיא מורכבת כדוריות דם אדומות, פיברין, התאגדות של טסיות. Thrombi יש קטן "החלק הלבן" מועשרים בטסיות הדם (איור 1), המזכירים פסי זון"המתואר thrombi ורידית אנושי. בשני חלקי כגון מכילים גם נויטרופילים8, אשר הם בין התאים הראשון בכדי להתגייס באתר של עתידיות כגון6,9. נויטרופילים בהחלק האדום לגרש מלכודות חוץ-תאית נויטרופילים (רשתות), ואילו נויטרופילים בהחלק הלבן נראה להיות רשתות8. באופן דומה ל- DVT אנושי, פקקת בעכברים מלווה פלזמה מוגבה רמות D-דיימר (איור 2). הפארין (enoxaparin), המשמש עבור טיפול מונע DVT בחולים, מונע גם פקקת בעכברים. יתרון חשוב של שיטה זו הוא היעדר חסיפה אנדותל9, שהוא מאפיין של DVT האנושי10. תכונה זו הופכת היצרות IVC דגם הרלוונטית קלינית יותר של DVT מאשר, למשל, אינדוקציה של קרישי דם על-ידי הברזל ותחמוצת כלוריד, אשר גורם אנדותל חסיפה, כאשר thrombi מכילים בעיקר טסיות11, 12,13. דגם של הקפאה מלאה ב- IVC הוא המועדף על ידי מספר קבוצות14,15,16. בניגוד היצרות, שבו זרימה שיורית נשמר בתוך הכלי, יישום של ההקפאה לחלוטין עצירה של זרימת, מגביל את הנגישות של חומרים מערכתית בניהול האתר פקקת. בנוסף, נראה כי המנגנונים שבבסיס פקקת הנגרם על ידי היצרות ו- stasis הם שונים: היצרות גורמת להתפתחות דלקת מקומית (הפעלה של אנדותל, שחרור של Weibel-Palade גוף תוכן, גיוס של תאים חיסוניים, טסיות הדם לקיר כלי) גורם9,6,"immunothrombosis"17, ואילו stasis נראה לזירוז מעדיף פקקת, בפרט, על בסיס רקמות פקטור קרישה אחרים, מנגנונים הקשורים ופיברינוליזה18,19,20. לפיכך, הדגמים היצרות ו- stasis משקפים שונה מעט היבטים של פיתוח כגון ורידים, למרות המנגנונים שלהם בהחלט לחפוף. דגם IVC electrolytic (EIM) של DVT21,22 גורם כגון באופן חלקי בלבד occluding הקיר כלי. לכן, זה נוח לבדיקת השפעת ניהול מערכתי של תרופות שונות על כגון צמיחה. מודל זה, לעומת זאת, מבוסס על ההנחה שיבוש IVC קיר שלמות (החדרת מחט) אינדוקציה של קרישי דם על ידי זרם חשמלי, שהופך את הרלוונטיות pathophysiological של מנגנון זה לפחות לויכוח.

<table><tbody><tr><td>C57BL / 6 עכברים</td><td>צ'ארלס ריבר</td><td></td><td>8 - 10 שבועות, bothe מינים</td></tr><tr><td>מספריים</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 מלקחיים</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 תפר פרולן</td><td></td><td>Ethicon W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 תפר Vicryl</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>ניצני כותנה</td><td>Spar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millswabs סטריליים&nbsp;</td><td>וטרינרי מילפלדג'&nbsp;</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>וילונות</td><td>Kruuse</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז תמיסת מלח-Aqupharm3</td><td>Animal Care</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>Clear H20 הידרוג'ל 98% מים סטריליים&nbsp; </td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>אספקה</td><td></td><td></td>וטרינרית לאומית</tr><tr><td>ווטרינרית איזופלורן וופורייזר</td><td></td><td></td>שירותי <td>הרדמה כללית</td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W / W אדי אינהלציה,</td> נוזל <td>אספקה</td><td></td><td></td>וטרינרית</tr> לאומית <tr><td>סטריליזטור Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אולימפוס SZX10</td><td>אולימפוס</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

היצרות של הכלילי התחתון: מודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

עמוק הווריד טרומבוזה (פקקת) וסיבוך ההרסניות שלה, תסחיף ריאתי, בעיה בריאותית חמורה עם תמותה גבוהה. מנגנוני היווצרות כגון בורידים נותרים מעורפלים. חוסר ניידות (למשל, לאחר ניתוח או טיסות למרחקים) הוא אחד הגורמים העיקריים שהובילו DVT. התוצאה pathophysiological של חוסר ניידות היא זרימת דם תקיעות שסתומי ורידים. . הנה, מודל מתואר המחקה כזה הפרעות זרימה כגורם נהיגה פקקת. במודל זה, נוצרת זרימה חלקית שהגבלת (היצרות) הכלילי התחתון (IVC). סגירה של-90% של לומן IVC במשך 48 שעות תוצאות התפתחות מבנית דומים לאלה בבני thrombi. הדמיון: i) רוב אמצעי האחסון כגון הוא אדום, קרי, מורכב כדוריות דם אדומות, פיברין, ii) נוכחות של חלק לבן (שורות זון), טפט אנדותל iii) ללא-חשופה רמות מוגברות iv) פלזמה D-דימר, v) אפשרות למנוע פקקת מאת הפארין. מגבלות כוללות גודל משתנה thrombi ואת העובדה כי אחוז מסוים של פראי-סוג עכברים (0 - 35%) לייצר כגון. בנוסף התצפית הויזואלית מדידה, thrombi אולי ניתן לאבחן על ידי טכנולוגיות לא פולשנית, כגון בדיקת אולטרה סאונד, אשר מאפשר ניטור את הדינמיקה של התפתחות כגון. נקודות זמן קצר יותר (h 1-6), מיקרוסקופיה intravital ניתן להחיל ישירות לצפות אירועים (למשל, גיוס של תאים לקיר כלי) מקדים כגון היווצרות. השימוש בשיטה זו על-ידי מספר צוותים ברחבי העולם הפכה אותו ניתן לחשוף מנגנונים בסיסיים של DVT החניכה לזהות מטרות אפשריות שעשוי להיות מועיל עבור מניעת שלו.

במסמך זה, מתואר דגם של DVT הנגרמת על ידי זרימת עיוות IVC. אינדוקציה של היצרות ב- IVC יוזם עיוות ותוצאות סטגנציה של זרימת הדם, לאחר זמן מה (במקרה זה, 48 h) בפיתוח של כגון, DVT מבנית דומה האדם thrombi (איור 1א'). הנוכחות של כגון בפנים IVC היא בקלות לזיהוי חזותי (איור 1B). הדמיון חשוב בין המודל לבין DVT האנושי הוא פלזמה מוגבה רמות D-דיימר (איור 2). D-דיימר הוא תוצר של פיברין השפלה, נוכחותו בדם מרמז כי תהליך קדחת פעיל קורה.
המודל מוצג שלב אחר שלב איור 3A-C. IVC חשוף בקפידה, חור בין העורקים של IVC מורכב ומשך התפר (Prolene 7-0) הוא דרך החור מתחת IVC. ואז IVC זה מאתרים מאת התפר מעל כרווח (30 גרם המחט, איור 3ד'), אחרי אשר מוסר את מרווח. הליך זה מאפשר כ- 90% סגירה של לומן IVC להשאיר 10% הנותרים פטנטים. פעולה זו מבטיחה סטגנציה בזרימת הדם המוביל בסופו של דבר פקקת.
איור 4 מדגים החיסרון העיקרי של המודל, כגון משתנה גודל. כל אלה thrombi התקבלו אצל אותו ניסוי מתבצע על עכברים זכר פראי סוג של מקור אחד, גיל, משקל הגוף דומה. למרות כל העכברים המיוצר thrombi (פקקת השכיחות של 100%), הגודל שלהם משתנה בבירור במגוון רחב.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
איור 1: כגון נציג לאחר 48 שעות ההגבלה/היצרות. היצרות (A) כגון טיפוסי לאחר 48 שעות IVC. שימו לב אדום (שאושרו על-ידי תאי הדם האדומים) וחלקים לבן (מועשר טסיות). IVC (B) (משמאל) עם או בלי (מימין) כגון. גודל ברים = 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
איור 2 : פלזמה D-דיימר רמות גבוהות לאחר היישום היצרות IVC. עכברים היו נענשים היצרות IVC. הדם נלקח בנקודות זמן המצוין, 1:9 התייצב עם 3.8% סודיום ציטרט, פלזמה הוכן על ידי צנטריפוגה (2,300 x g, 5 דקות), רמות D-דיימר נקבעו על ידי ערכת דיאגנוסטיקה לפי הנחיות היצרן. חוגים לייעד עכברים המופעלים באמצעות העמדת פנים, צלבים לייעד היצרות IVC. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
איור 3: לזרום הגבלת/היצרות במודל הנבוב נחות (IVC) של DVT בעכברים. שלבים רצופים של המודל מוצגים. (א) עשוי חור בין IVC את העורקים, בתפר עשה דרכו בסביבה IVC. (B) קשר סגורה מעל כרווח (30 גרם מחט). (C) מרווח מוסרת: התצוגה האחרונה המנתח רואה לפני סגירת העכבר. קו מקווקו צהוב demarcates של IVC. אירוו עומד על וריד הכליה השמאלית. גודל ברים = 0.2 מ מ. (ד) מרווח (30 גרם מחט). גודל ברים = 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
איור 4 . השתנות כגון גודל. עכברים היו נענשים היצרות IVC 48 שעות. הציג thrombi מתקבלים על אותו ניסוי. סולם ברים 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

נתאר כאן היצרות ב הכלילי התחתון כמודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה. מודל זה recapitulates הגבלת זרימת דם, אחד הגורמים המפעילים העיקריים של פקקת ורידים בבני אדם.

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

המטרה הכוללת של הליך כירורגי זה היא ליצור היצרות של הווריד הנבוב התחתון כדי לחקות עיוות זרימת דם להתחלת פקקת ורידים עמוקים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום פקקת הוורידים לגבי המנגנונים של התחלת פקקת ורידים עמוקים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מדמה הפרעה בזרימת הדם, מנגנון מפתח להתחלת פקקת בוורידים.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שקשה להסביר מילולית את הפרדת הווריד הנבוב התחתון מאבי העורקים ויצירת החור בין רקמות אלה. התחל בגילוח הבטן של עכבר מורדם בן שמונה עד 12 שבועות במשקל 19 עד 25 גרם והנח את העכבר במצב שכיבה על כרית חימום. השתמש בצמר גפן סטרילי כדי לחטא את העור החשוף שלוש פעמים בתמיסה אנטיבקטריאלית.אשר את רמת ההרגעה המתאימה על ידי חוסר תגובה לצביטה בבוהן וכסה את העכבר בווילון סטרילי עם חור מעל אתר הניתוח. תחת מיקרוסקופ מנתח, בצע חתך לאורך קו האמצע של הבטן, החל מ -1.5 סנטימטרים מתחת לעצם החזה והשתמש בניצני כותנה כדי להוציא את המעיים לצד שמאל של החיה. מכסים את רקמת המעי בגזה סטרילית ספוגה במי מלח של 37 מעלות צלזיוס.הנח מחזירי רקמות כדי להרחיב את החתך ולאתר את הווריד הנבוב התחתון, או IVC, והסתעפויות הצדדיות שלו זנב לווריד הכליה השמאלי. בעזרת מלקחיים, משוך כלפי מעלה את רקמת השומן המקיפה את הענפים הצדדיים, ולאחר מכן השתמש במלקחיים נוספים כדי לחפור מנהרה מתחת לענף. ולקשור את כל הענפים הצדדיים קרוב ככל האפשר ל- IVC עם תפרי פרולן אינרטיים 7-0.החזק את הרקמות שמסביב עם מלקחיים, משוך את ה- IVC למעלה ושמאלה כדי לייצר מתח באזור הקטן שבין IVC לאבי העורקים, בדיוק בין ה- IVC לווריד הכליה השמאלי. הכנס זוג מלקחיים שני בין אבי העורקים ל- IVC ופתח וסגור את המלקחיים לא יותר משלוש עד חמש פעמים כדי ליצור חור. חשוב מאוד ליצור את החור בדיוק בנקודה בה ה- IVC מתכנס עם וריד הכליה השמאלי.בעזרת יד שמאל, הנח חתיכה של שני סנטימטרים של תפר פרולן אינרטי 7-0 בצד שמאל של חלל הצפק, קרוב ל- IVC, ומשוך את ה- IVC למעלה ושוב שמאלה. הכנס את המלקחיים השניים לחור שבין אבי העורקים ל- IVC כך שהקצוות יופיעו בצד השני של ה- IVC ומשכו את התפר לאחור דרך החור. צור קשר זמני רופף והנח מרווח מחט בגודל 30, כפוף לוו, לתוך הקשר.לאחר הידוק הקשר, הסר את המרווח והשתמש בצמר גפן כדי להחזיר את המעיים לחלל הצפק. בעזרת לולאות רציפות סוגרים את הצפק בתפר VICRYL 6-0 וסוגרים את העור בעזרת סיכות מתכת. הזריק לעכבר תת עורי 0.5 מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס גלוקוזלין.לאחר מכן, הכניסו את העכבר לכלוב בודד בתא של 25 מעלות צלזיוס המכיל מזון ומי ג'ל עם ניטור עד להתאוששות מלאה. השראת היצרות ב- IVC יוזמת עיוות וקיפאון של זרימת הדם וכתוצאה מכך התפתחות פקקת הדומה מבחינה מבנית לפקקת הוורידים העמוקים שנצפתה בבני אדם ושניתן לדמיין בקלות באופן מקרוסקופי. בנוסף, D-dimer מוגבר, תוצר של פירוק פיברין, נצפה בפלזמה במודל היצרות IVC זה, מה שמעיד על נוכחות של תהליך פקקת פעיל הדומה לזה שנראה בבני אדם.למרות שרוב חיות הניסוי ייצרו פקקת במודל זה, חסרון מרכזי אחד הוא השונות בגודל הפקקת שנצפתה בין בעלי חיים. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 15 דקות אם היא מבוצעת כראוי. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום פקקת ורידים לחקור את מנגנוני ה-DVT במודל עכבר.

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

אינדוקציה אלקטרוליטי של הפעלת האנדותל אל פני השטח הפנימי של תוצאות הנבוב נחותים קאווה להיווצרות סוג ורידי פקיק עקב הפעלת האנדותל בדם קיפאון חלקי, שני מרכיבים של השלישיה של וירצ'וב.

אלקטרוליטי נחותים הווריד הנבוב Model (EIM) של פקקת ורידים

המודל להשלים עכבר קיפאון של פקקת נחות הווריד הנבוב התשואות כמויות מדידים של רקמת עורק בקיר פקיק. זה הוכיח שימושי להערכת אינטראקציות בין הקיר וריד ואת פקיק occlusive והן להערכת התקדמות של דלקת כרונית חריפה.

עכבר דגם השלם הקיפאון של פקקת נחותים הווריד הנבוב

כדי לשפר את הידע של היווצרות neotissue תאית ומולקולרית שלנו, מודל עכברי של TEVG פותח לאחרונה. השתלים הושתלו שתלי כחציצת וריד נבוב infrarenal בעכברי C57BL / 6. מודל זה משיג תוצאות דומות לאלה שהושגו בחקירה הקלינית שלנו, אבל לאורך זמן כמובן הרבה מקוצר.

השתלה של וריד נבוב חציצת שתל נחותה בעכבר דגם

בפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים להשגת פקקת ורידים באמצעות מודל של ההקפאה. בנוסף, אנו משתמשים בשיטה לא פולשנית למדוד כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן.

פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה

Aortocaval פיסטולה נוצר על ידי לפרוץ את העורקים מורנה אינפרא כליות באמצעות שני הקירות לתוך הורקאווה הנחותים ולאחר מכן הבריאה של היצרות בתוך הזרימה שלה באמצעות הארכה חלקית של האובורד הנחותים. מודל זה ניתן לשימוש כדי ללמוד היצרות הורידים המרכזי.

מודל מורנה של היצרות הורידים המרכזית באמצעות Aortocaval פיסטולה עם היצרות זרימה יוצאת

מאמר זה נועד להציג שיטה אופטימלית להערכת פקקת ורידים במודל סרטן עכברים, באמצעות קליפסים וסקולריים להשגת קשירה ורידית. אופטימיזציה ממזערת את השונות במדידות הקשורות לפקקת ומשפרת את הרלוונטיות לפקקת ורידים הקשורה לסרטן אנושי.

בדיקת פקקת ורידית במודל עכבר של סרטן

הפרוטוקול מציג מודל הישרדות של מכרסמים לבדיקת התערבויות של בלון ארסי (VB) בוורידים עמוקים שאינם טרומבוטים, טרומבוטיים ופוסט-טרומבוטיים.

מכרסם נחות Vena Cava Venoplasty בלון מודל

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את התהליך של הפעלת-CD40 והרחבה של תאים B Murine מ splenocytes של C57BL / 6 עכברים, אשר יכול לשמש תא מודל אנטיגן מציג (APC) ללמוד אינדוקציה של חסינות.

דגם Murine של הפעלת-CD40 בתאי B

השתלת מח עצם Murine היא טכניקה בשימוש נרחב ללמוד מנגנונים אימונולוגיים המסדירים את מחלת שתל נגד מארח בבני אדם. היכולת לעקוב אחר דפוסי סחר בתא...

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

מודלים העכבר ניסיוני של אסטמה אלרגית להציע אפשרויות חדשות ללימוד בהיווצרות המחלה ופיתוח ותרופות חדשות. דגמים אלה מתאימים גם לגורמים השולטים מדידה תגובה חיסונית אלרגית, דלקת בדרכי הנשימה, ו פתופיזיולוגיה ריאתי.

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

למדו כיצד ליצור היצרות בווריד הכלילי התחתון בעכברים כדי לחקור מנגנוני יצירת קרישי דם עמוקים. שיטה זו מחקה הפרעות בזרימת הדם ומסייעת בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות.

היצרות של הכלילי התחתון: מודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה

גלה סרטונים נוספים