27 בפברואר 2018
פרוטוקול זה מתאר מודל העכבר של כירורגיה אורתופדית, שבו נעשה שימוש כדי לחקור מנגנונים של neuroinflammation לאחר הניתוח, שינויים התנהגותיים, וכאשר בשילוב עם parabiosis, ללמוד התחדשות רקמות במהלך ההזדקנות.
המטרה הכוללת של שיטות כירורגיות אלה היא לבחון את ההשפעות של טראומה על תפקוד לקוי של איברים מרובים, במיוחד פרביוזה תשמש לאנסטומוזה של עכבר צעיר ומבוגר יחד וכתוצאה מכך אספקת דם משותפת. לאחר מכן אחד העכברים במודל זה יישבר כדי לראות את ההשפעות ההתחדשות וההשפעה על התפקוד הקוגניטיבי ביחס למערכת המשותפת של העכבר הצעיר והמבוגר. שיטות אלו יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח הקשורות לתחום האימונולוגיה, הזדקנות, התחדשות רקמות ותפקוד קוגניטיבי.
היתרון העיקרי של ההליך האורתופדי הוא היישום הקליני של ממצאים אלה על סיבוכים נפוצים לאחר ניתוח, למשל דליריום ותפקוד קוגניטיבי לקוי לאחר הניתוח. לפני הניסוי, שמור עכברים בסביבה ממוזגת עם מחזורי אור וחושך של 12 שעות וגישה נאותה למזון ומים סטנדרטיים. לאכלס לא יותר מחמישה חברים להמלטה בכל כלוב ולהימנע מתנאים שעלולים לעודד לחימה.
השתמש בעכבר נקבה אחד בגיל שלושה חודשים ובעכבר זקן אחד בגיל 17 חודשים. לפרביוזה, התאקלמו שני עכברים יחד לפחות שבועיים לפני הניתוח. בדוק את מצב הגוף והמראה הכללי של עכברים מדי יום.
כדי להתכונן לניתוח, שקלו את שני העכברים. לאחר מתן הרדמה כללית, הניחו את העכברים על כרית מחוממת במצב שכיבה. לבסוף, שמור על רמת הרדמה נכונה לכל עכבר.
לאחר מכן, גלחו כל אחד משני העכברים לאורך קו רציף מהמרפק, האגף והברך בצד שאליו יש לחבר. יש לחטא עם יוד בתוספת קרצוף עור 70% אלכוהול במשך שלושה מחזורים לסירוגין כהכנה לחתך. התחל במתן משככי כאבים לאחר אינדוקציה ולפני מניפולציה כירורגית.
יש להזריק 0.25% בופיבקאין באגפים ממש לפני הפתיחה. בכל עכבר, השתמש באזמל כדי לבצע חתך בעור לאורך הצד הנע בין הפרוקסימלי לברך לפרוקסימלי בלבד למרפק ומבלי להפריע לשרירים שמתחת לעור. הצטרפו לתלת ראשי של בעלי החיים עם שני תפרים קטועים.
לאחר מכן חבר את קירות הגוף לאורך האגפים עם תפר רציף של שבעה עד תשעה מעברים. לאחר מכן, חבר את הארבע ראשי של החיה עם שני תפרים קטועים וסגור את העור של שני הפרביונטים עם תפרים קטועים. השלם תפרים קטועים עם העכבר במצב שכיבה.
אפשר לעכברים להתעורר באוויר הסביבה. שכן כל זוג בנפרד והקפד לעקוב אחר הזוגות מדי יום על ידי ביצוע ניקוד מצב הגוף פעמיים בשבוע ושקילת הזוגות פעמיים בשבוע. לבסוף, אפשר ארבעה שבועות של זמן החלמה כדי להבטיח זרימת דם משותפת בין הפרביונטים אם מבצעים ניתוח שבר בשוק.
לאחר מכן, יש לגלח את ההיבט המדיאלי של הגפה האחורית הימנית של העכבר כדי לחשוף את אזור הניתוח ולחטא עם יוד בתוספת קרצוף עור 70% אלכוהול במשך שלושה מחזורים לסירוגין. התחל במתן משככי כאבים לאחר אינדוקציה ולפני מניפולציה כירורגית. יש להזריק 0.25% בופיבקאין באתר הניתוח הפרוקסימלי לברך ממש לפני הפתיחה.
שמור על שדה כירורגי סטרילי לאורך כל ההליך באמצעות מכשירים אוטוקלאב. בצע חתך באמצעות מספריים פרוקסימלי לברך לאורך ההיבט המדיאלי של הגפה האחורית הימנית עד לאמצע השוקה בעכבר השמאלי. חשוף את הפיר האמצעי של השוקה ואתר חזותית את הדיאפיזה.
כופפו את הברך ודמיינו את רמת השוקה באמצעות הרצועה הפטלופמורלית כציון דרך. דמיין את גיד הפיקה. לאחר מכן קדחו ידנית חור בתעלה התוך-מדולרית באמצעות מחט בגודל 25 באמצעות תנועת גלגול של האצבע והאגודל.
לאחר מכן, הכנס סיכת נירוסטה 0.38 מילימטר דרך החור כ -15 מילימטרים לתוך החלל המדולרי עד שתורגש התנגדות וחתוך בשר עם רמת השוקה באמצעות חותך תיל. לאחר מכן השתמש במספריים קשרים ישרים כדי לשבור את פיר השוק האמצעי. התבונן חזותית באתר השבר וברקמות הסמוכות כדי לבדוק אם יש ייצוב של אתר השבר.
לאחר מכן סגור את העור באמצעות סיכות עוריות. לבסוף, הזריק מיליליטר אחד של מי מלח רגילים שחוממו מראש ב-37 מעלות צלזיוס תת עורי בכל עכבר להחלפת נוזלים. הניחו את העכברים על רפידות מחוממות כדי להתאושש לפני החזרתם לכלוב ביתי נקי.
בדוק עכברים מדי יום לאיתור סימני צליעה, זיהום או דימום. צילומי רנטגן של שוק שבורה באמצע הפיר הצביעו על שקיעת רקמות רבה יותר ביבלות השבר של עכברים צעירים מאשר ביבלות השבר של עכברים מזדקנים. יתר על כן, יבלות שבר של עכברים צעירים הכילו יותר עצם ופחות רקמה פיברוטית מאשר יבלות שבר מעכברים מזדקנים.
ניתוח שבר בשוק גרם לדלקת עצבית גדולה יותר בהיפוקמפוס בעכברים בני 20 חודשים בהשוואה לעכברים בני ארבעה חודשים. בנוסף, עכברים לאחר ניתוח מראים גם ליקויים בתפקוד הזיכרון התלוי בהיפוקמפוס, למשל באמצעות הערכה התנהגותית של התניה של פחד. חשיפה למחזור דם צעיר שיפרה את תיקון העצם עם איחוד מוקדם יותר, שקיעת עצם מוגברת וירידה בפיברוזיס.
התחדשות זו של התחדשות העצם התרחשה ללא תלות באוסטיאובלסטים החיוביים לאוסטאוקלצין האנדוגניים, אלא הסתמכה על תאים חיוביים CD45 שהיגרו מהפרביונט הצעיר. לאחר השליטה, ניתן לבצע את טכניקת הפרביוזה תוך 1-1/2 שעות וניתן לבצע את מודל השבר הטיביאלי תוך 15 דקות. במידת הצורך, ניתן לבצע את שני ההליכים גם ללא תלות זה בזה.
בזמן ניסיון הליך שבר השוק, חשוב לשמור על שדה כירורגי מעוקר ולהבטיח מיקום נכון של הסיכה ואוסטאוטומיה נכונה. לבסוף, זכרו לעקוב בקפידה אחר עכברים לאורך חיי המחקר. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לבצע את מודל הפרביוזה ואת ניתוח השבר הטיביאלי.
פרוטוקול זה מתאר מודל עכברי של ניתוח אורתופדי למחקר נוירו-דלקת לאחר ניתוח ושינויים התנהגותיים. כמו כן, הוא בוחן התחדשות רקמות במהלך ההזדקנות באמצעות פאראביוזה (parabiosis).
מודל זה מאפשר הפחתת סיכונים מכנית של סיבוכים לאחר ניתוח הקשורים לגיל, על ידי קישור בין טראומה כירורגית לבין דלקת עצבית (נוירו-דלקת) ופגיעה ברגנרציה של רקמות. הוא מספק מערכת חיזוי להערכת אסטרטגיות התחדשות מערכתיות בשלב הגילוי הפרה-קליני. גישה זו תומכת בתיקוף מטרות ובזיהוי סממנים ביולוגיים תרגומיים עבור תוצאים נוירו-קוגניטיביים ושל מערכת השלד והשרירים באוכלוסיות מזדקנות.
המודל משתלב ברצף הגילוי, החל מבדיקת השערות לגבי מטרות, דרך זיהוי מובילי תרופות ועד להערכת יעילות פרה-קלינית, במיוחד עבור תחלואה נלווית הקשורה להזדקנות.