שימוש CRISPR/Cas9 ג'ין עריכה כדי לחקור את פעילות Oncogenic Calreticulin מוטציה בתאים Hematopoietic תלויי ציטוקין

12.5K צפיות

צוטט 6 פעמים

10:21 דק׳

5 בינואר 2018

10.3791/56726-v

5 בינואר 2018

12.5K צפיות

Nouran S. Abdelfattah¹ , Ann Mullally¹^,²^,³

¹Division of Hematology, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, ²Broad Institute, ³Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School

ג'ין יישוב עריכה באמצעות CRISPR/Cas9 הנחתה במידה רבה את ההבנה של פונקציות ביולוגיות של גנים. כאן, אנו מנצלים את המתודולוגיה CRISPR/Cas9 כדי דגם calreticulin מוטציות בתאים hematopoietic תלויי-ציטוקין לשם פעילותם oncogenic למידה.

גלה סרטונים נוספים

מוטציות ב-Calreticulin

בדיקת טרנספורמציה של תאי Ba/F3

תכנון של sgRNAs (Single Guide RNAs)

בניית וקטור לנטיבירי

חיבור קצוות לא הומולוגי (Non Homologous End Joining)

ניתוח בציטומטריית זרימה

בדיקת חיוניות תאים

אינטרלוקין 3 עכברי

Chapters in this video

0:05

כותרת

0:44

שיבוט אוליגו-sgRNA

1:08

עיכול של LentiGuide-puroVector

2:04

ליגציה של אוליגו-נועים מאוחים לתוך השלד המעוכל

3:02

יצירת תאי שורות המבטאים spCas9 באופן יציב

5:40

בדיקת רפורטר לפעילות Cas9

6:10

ספינקציה של sgRNAs לתאים המבטאים Cas9

6:31

טרנספורמציה תאית של Ba/F3 וברירה חיובית באמצעות הסרת m-IL3

7:23

תוצאות: שימוש בכלי CRISPR/Cas9 ובטרנספורמציה תאית של Ba/F3 לחקר הפוטנציאל האונקוגני של קאלרטיקולין מוטנטי

9:02

סיכום

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.