Name: הערכה של תאי גזע טיפולים במודל פציעת גיד ברך הדו-צדדיים בחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 31 s
Description: למדו להעריך טיפולים בתאי גזע לפגמים בגידים באמצעות מודל דו-צדדי בחולדות. שיטה זו ממזערת שונות בין פרטים ומפחיתה את מספר בעלי החיים הנדרשים למחקר אורתופדי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצה להכיר את ד ר סו, PhD, אותה לניתוח סטטיסטי של הנתונים. המחברים גם תודה ד ר מקלור, לוטרינריה, DACLAM, לה עצות על ההרדמה, כאב ניהול פרוטוקולים השתמשו במחקר. פרויקט זה נתמך על ידי מענקים ממשרד מדעי אוניברסיטת ווסטרן לבריאות של סגן עבור מחקר (12678v) וקרנות 1433 סעיף USDA (2090).

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של ווסטרן אוניברסיטת למדעי הבריאות.
1. בידוד והרחבה של MSCs חברת מטריקס אקווין חבל הטבור
<ol><li>להשיג את השליה מארה למבוגרים (בהריון) לאחר שנצפה foaling ואת גילוח ורחיצה כירורגית לבודד את חבל הטבור מן השליה. שמור את חבל הטבור buffered פוספט תמיסת מלח (PBS) עם 1% פניצילין-סטרפטומיצין (P/S) ב 4 ° C במהלך העברה עד עיבוד.</li>
	<li>לשטוף את חבל הטבור פעמיים עם טמפרטורת החדר PBS עם 1% P/S בשפופרת 50 מ ל. חתך חבל הטבור לחלקים 2-inch-ארוכת על צלחת 150 מ מ, שטיפת הטמפרטורה בחדר PBS עם 1% P/S בשפופרת 50 מ ל שתיים או שלוש פעמים, עד רוב הדם שוטפים החוצה.</li>
	<li>חותכים את חבל הטבור longitudinally לחשוף כלי. הסר את כלי, כולל 2 עורקים, וריד על גבעול allantoic מן החוט בעזרת מלקחיים ומספריים. לאסוף את חבל הטבור מטריקס (וורטון), אשר הוא כלי שמסביב כמו ג'לי מטריקס, על צלחת 150 מ מ על ידי גירוד עם אזמל, מינצ הריבה חתיכות משובחים.</li>
	<li>וורטון המקום מרסיסים הטבור 2 – 3 (כ 12-15 גרם) בשפופרת 50-mL עם 15 מ"ל של 0.1% (w/v) collagenase פתרון מסוג IA PBS. דגירה ב 37 ° C עם טלטול עדין עבור 3-4 h עד התפרקה.</li>
	<li>צנטריפוגה רקמות מתעכל ב g 300 x למשך 15 דקות, תשאף תגובת שיקוע. Resuspend רקמה מתעכל ב-15 מיליליטר בטמפרטורת החדר PBS עם 1% P/S, לערבב על ידי pipetting צנטריפוגה-g 150 x עבור 5 דקות, תשאף תגובת שיקוע (שטיפה). חזור על לשטוף פעמיים נוספות.</li>
	<li>Resuspend שטף את התאים ב-15 מיליליטר בטמפרטורת החדר PBS עם 1% P/S, לערבב על ידי pipetting, זן מאת עם 100 מיקרומטר תא מסננת, צנטריפוגה ב g 150 x למשך 5 דקות, תשאף תגובת שיקוע.</li>
	<li>הכן תרבות בינוני (ס מ) על ידי ערבוב נמוך הגלוקוז Dulbecco של בינוני הנשר ששינה (LG-DMEM) עם סרום שור עוברית (FBS) ו 1% P/ס לעקר את המדיום על-ידי סינון.</li>
	<li>Resuspend מאומצות בתאים 10 מ"ל של ס מ מראש התחמם עד 37 ° C, לערבב על ידי pipetting, להעביר לתוך בקבוקון 25 ס מ2 תרביות רקמה, דגירה 5% CO2 ב-90% לחות ו 37.0 ° C. שינוי ס"מ כל 3 ימים עד התרבות מגיע למפגש 70 – 80%, כאשר התרבות להיות passaged.</li>
	<li>המעבר לתרבות, תשאף ס מ את הבקבוק, לשטוף עם 5 מ של טמפרטורת החדר PBS פעמיים ועל ניתוק עם 3 מ"ל של 0.25% טריפסין/ethylenediaminetetraacetic חומצה (EDTA) ב 37 מעלות צלזיוס במשך 5 דקות.</li>
	<li>לנטרל טריפסין/EDTA עם 6 מ של ס מ מראש חימם את 37.0 ° C, לערבב באמצעות pipetting, להעביר לתוך צינור 15 מ"ל, צנטריפוגה ב g 150 x למשך 5 דקות, תשאף תגובת שיקוע. Resuspend תאים מנותק מ ל 1 ס מ, לערבב על-ידי pipetting. לספור את התאים קיימא באמצעות trypan blue ו- hemocytometer. זרע מחדש לתוך בקבוקון תרביות רקמה 25 ס מ2 -תאים/ס מ 5,0002, דגירה 5% CO2 ב-90% לחות ו 37.0 ° C.</li>
</ol>2. הכנת Spheroids עם UCM-MSCs תרבותי על סרטים משקם
<ol><li>כדי להכין 100 מ של 1% (w/v) משקם פתרון, להוסיף 1 גר' משקם 99 מ ל מים מזוקקים (dH2O) ומערבבים היטב עם פגים.</li>
	<li>להוסיף 670 µL של חומצה אצטית ולהמשיך לערבב עד משקם מתמוסס והופך צמיגה. זה בדרך כלל לוקח 3-4 שעות.</li>
	<li>להוסיף 500 µL של פתרון משקם לבאר כל צלחת תרביות רקמה 12-ובכן, מערבולת את הצלחת כדי להפיץ משקם פתרון אחיד ולכסות את כל המשטח התחתון.</li>
	<li>יבש את הצלחת פתרון מצופה משקם תחת זרימה שכבתית ארון ללא כיסוי במשך הלילה במשך 24 שעות ביממה. ברגע מיובש, סרט דק נוצר ואת דבקה צלחת.</li>
	<li>לנטרל משקם הסרט על-ידי הוספת 1 מ"ל של 0.5 N הידרוקסיד הנתרן (NaOH) פתרון טוב לכל, תקופת דגירה של 2 h בטמפרטורת החדר. האחות NaOH מכל קידוח ולשטוף כל טוב עם 1 מ"ל של dH2O 3 פעמים. לשטוף כל טוב עם 1 מ"ל אתנול 70% (EtOH) פעם אחת.</li>
	<li>כדי לעקר את הסרט משקם, להוסיף 1 מ"ל של 70% EtOH לתוך כל טוב ואני דגירה בין לילה בארון זרימה שכבתית. האחות EtOH הנותרים מכל קידוח ביום המחרת. לשטוף כל טוב עם 1 מ"ל של PBS סטרילי שלוש פעמים. לעקר את משקם הסרט באור אולטרה סגול תחת זרימה שכבתית ארון בן לילה ללא כיסוי.</li>
	<li>טופס spheroids של יו-MSCs, זרע מורחבת, passaged תאים לבאר כל-תאים/ס מ 5,0002, ולהעביר דגירה 5% CO2 ב-90% לחות ו 37.0 ° C. הערה: יכול להיות מודגרות תאים תחת היפוקסיה או normoxia, תלוי האינטרס של החוקר.</li>
</ol>3. הבעה של סמני פני נותחו באמצעות Cytometry זרימה
<ol><li>
הכנת השעיה תא בודד
	<ol>
<li>צלחת רגילה<ol>
<li>הסר בינוני מכל קידוח, לשטוף פעמיים עם טמפרטורת החדר PBS.</li>
			<li>ניתוק תאים עם 500 µL של ריאגנט דיסוציאציה תא לתוך כל טוב של צלחת 12-ובכן למשך 5 – 10 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
			<li>לאחר דגירה, מוסיפים 1 מ"ל של צביעת מאגר (PBS המכילה 0.5% BSA) לבאר כל ומערבבים על ידי pipetting כדי לנתק את התאים.</li>
			<li>העברת תא ההשעיה לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל, צנטריפוגה ב 150 x g למשך 5 דקות.</li>
		</ol>
</li>
		<li>משקם את הצלחת<ol>
<li>לאסוף את כל spheroids על-ידי מדיום שואבת באמצעות פיפטה עם טיפ 1,000 µL. העברת בינוני שנאספו לתוך צינור חרוטי 15-mL. לאחר איסוף בינוני, לשטוף היטב על-ידי הוספת 1 מ"ל ל- PBS, להעביר PBS שטף לתוך הצינור חרוט באותה 15 מ"ל.</li>
			<li>תגובת שיקוע צנטריפוגה spheroids-g x 150 עבור 5 דקות והסר.</li>
			<li>להוסיף 500 µL מהתרכובת דיסוציאציה תא (למשל, accutase), תקופת דגירה של 5 – 10 דקות בטמפרטורת החדר. מערבבים באמצעות pipetting טיפ 1 מ"ל עד spheroids מביצועם אינן גלויות.</li>
			<li>להוסיף 1 מ"ל של מאגר מכתימים לתוך תא בודד ההשעיה צנטריפוגה ב 150 x g למשך 5 דקות.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
שטיפת התאים
	<ol>
<li>להסיר את תגובת שיקוע מהצינור חרוט והשהה מחדש את התאים 3 מ"ל של קור מכתים מאגר. לשמור תאים על קרח לאורך כל הניסוי שלב זה.</li>
		<li>צנטריפוגה ב g x 300 במשך 5 דקות (כביסה).</li>
		<li>לשטוף פעמיים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
צביעת תאים
	<ol>
<li>תגובת שיקוע צנטריפוגה-300 גרם x עבור 5 דקות והסר.</li>
		<li>לספור התאים קיימא באמצעות trypan blue hemocytometer. עונה 1 פרק 106 תאים מחדש להשעות חסימת µL 50 מאגר (PBS המכיל 10% הסוס סרום), תקופת דגירה של 30 דקות על קרח.</li>
		<li>להוסיף 10 µL fluorescein isothiocyanate (FITC) מצומדת נוגדנים (CD44, CD90, CD105, CD34, histocompatibility הגדולות מורכבות (MHC) class II או isotype פקד עבור כל נוגדן) ו- µL 40 של צביעת המאגר ולאחר מכן דגירה מוגנים מפני אור עבור h 1 על קרח.</li>
		<li>להוסיף 3 מ"ל של קור מכתים מאגר לערבב, צנטריפוגה-g 300 x עבור 5 דקות ואני תשאף תגובת שיקוע (כביסה).</li>
		<li>חזור על לשטוף פעמיים.</li>
		<li>מחדש להשעות בגדר תא ב- 0.5 מ של צביעת מאגר</li>
		<li>להוסיף 5 µL של 7-מ (הכדאיות צבען) ולאחר תקופת דגירה של 30 דקות על הקרח</li>
		<li>לנתח דגימות תאים מוכתם על ידי זרימה cytometer. אל תכלול פסולת על ידי האס ו FSC שלהם קטן יותר, לזהות את התאים קיימא עם ספיגת התחתון של 7-מ. מגרש FL1 ו- FL2 על y - ו x-הצירים, בהתאמה. השתמש בפקד isotype כדי ליצור שער מעל קו אלכסוני. למדוד את אחוז תאים מוכתם באופן חיובי באזור. ספירת לפחות 20,000 אירועים/המדגם (משלים איור 1).</li>
		<li>למדוד את אחוז תאים מוכתמת עם נוגדנים gating התאים קיימא ו- auto-זריחה, להפחית אחוז תאים מוכתם עם פקד isotype.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. דו צדדיים גיד ברך דגם פגם בחולדה
<ol><li>בחר חולדות ספראג-Dawley (למבוגרים זכר, 4-5 חודשים, משקל הגוף 350-375 גרם). שימו לב גדול יחסית לגודל החולדות בשימוש עבור דגם זה.</li>
	<li>עזים ומתנגד ולהחיל עין מלאכותית חומר סיכה העכברוש עם 8% sevoflurane 2 ל'/min 100% חמצן מועברת באמצעות מסכה, עד העלמות רפלקס קמצוץ-הבוהן בבית הבליעה אינדוקציה.</li>
	<li>לנהל זריקה תוך שרירית של Meloxicam (1 מ"ג/ק"ג) כמו מונעת כאבים.</li>
	<li>מקם את החולדה בין שני בקבוקי חצי ליטר מים מלא במים חמים ומכוסה מטלית כדי לשמור על טמפרטורת הגוף והמיקום, תוך מניעת פגיעה בעור. סרט הדבקה בכל קצה השולחן. כדי לצמצם את הסיכון של היפותרמיה, לכסות את הגוף עם פלסטיק בועות (איור 1).</li>
	<li>לשמור על הרדמה עם זרימה רצופה של 5% sevoflurane בתערובת 1 ליטר 100% חמצן דרך האף קונוס, עם החיה על recumbency הגבי על כרית חימום מים.</li>
	<li>כדי למנוע טראומה לעור, לא קליפ האתרים כירורגי. במקום זאת, להחיל קרם מסיר שיער מעל שני stifles. השתמש לוחץ הלשון כדי להסיר את קרם והשיער.</li>
	<li>שפשפי באתר כירורגית עם chlorhexidine digluconate סקראב, לשטוף עם אתנול 70% 3 פעמים.</li>
	<li>פצעים וחתכים בעור עם להב #15 האזמל עקר כיוון proximal כדי הדיסטלי, על ההיבט craniomedial של חנוק. . תתחיל לחתוך כ-1 ס מ proximal לרמה של עצם הפיקה, ותעלה כ 5 מ מ דיסטלי tubercle הטיביאלי.</li>
	<li>משקפים על העור כדי לחשוף את הגיד ברך על-ידי שחרור הרקמה התת עורית הבסיסית עם להב #15 ומהדקים.</li>
	<li>
באמצעות הלהב #15 אזמל, בלו השלישי המרכזי של כל גיד ברך (1 מ מ) מן ההיבט דיסטלי של עצם הפיקה tibial tuberosity.
	<ol>
<li>יישר חוט קוטר מ מ 0.99 קירשנר נגד הגיד כתבנית כדי לתקנן את הגודל של הפגם ב כל איבר (איור 2).</li>
		<li>לעשות חתכים מלא-עובי 2 בכל צד של החוט קירשנר עם להב האזמל #15 מס לבודד את החלק המרכזי של הגיד (איור 3). נכרות החלק המרכזי הציר הקרוב, יש עם איריס בסדר מספריים (איור 4).</li>
		<li>לפני סגירת fascia של חנוק, הכנס את הקריש (מעורבות לתאים ההשעיה, ACP) עבור הקבוצות הטיפול המתאים כמתואר ב- 5.5. סגור fascia עם דפוס צולבת ועור עם דפוס intradermal בעזרת 5-0 polyglactin 910 תפרים (איור 5).</li>
	</ol>
</li>
	<li>חזור על הפעולות על חנוק contralateral. הערה: חיסרון אחד מוקצה באופן אקראי לקבל טיפול (גזע תאים ממוזגים על משקם או תרבותי על לוחות סטנדרטיים). הפגם contralateral נותר ריק כדי לשמש בקרה פנימית.</li>
	<li>לאחר הניתוח, לנהל 4 טבליות של enrofloxacin (2 מ"ג/לוח, אורלית, ופעם ביום) ו לוח של meloxicam (2 מ"ג/לוח, דרך הפה, פעם ביום) במשך 7 ימים. אלה מנות מומלצות על-ידי וטרינר חיות מעבדה ואושר בפרוטוקול IACUC.</li>
</ol>5. משלוח של MSCs בתוך הפגם גיד ברך
<ol><li>עזים ומתנגד עכבר בריא אשר לא משמש ליצירת פגם גיד ברך עם 8% sevoflurane 2 ל'/min 100% חמצן מועברת באמצעות מסכה, עד העלמות רפלקס קמצוץ-הבוהן בבית הבליעה אינדוקציה.</li>
	<li>לאסוף מ ל דם על ידי ניקוב לב מהחולדה ספראג-Dawley anesthetized (למבוגרים זכר, 4-5 חודשים, משקל הגוף 350-375 גרם), במזרק 5 מ עם מחט 20 גרם המכיל 1 מ ל חומצה-ציטראט-dextrose (5:1 v/v).</li>
	<li>המתת חסד העכברוש לאחר דקירה בלב, איסוף דם, על ידי הזרקת פנטוברביטל (100 מ"ג/ק"ג), בעוד תחת ההרדמה באותו intracardial.</li>
	<li>Centrifuge המדגם-350 גרם x למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. להעביר את תגובת שיקוע ולאחסן aliquots (120 µL כל) ב-20 ° C עד השימוש.</li>
	<li>מיד לפני ההשתלה ויוו , להפשיר את aliquot הנ ל, לערבב µL 20 עם 0.5 x 10 MSCs6 (מ- 1.9 או 3.1.2.1) מנותקת צלחות רגיל באמצעות טריפסין/EDTA, או לאסוף משקם צלחות על ידי שטיפה (עם PBS/בינוני).</li>
	<li>6 µL של 10% סידן כלורי (2CaCl) להוסיף µL 100 הנותרים של פלסמה המופשרים בטוב של 96-ובכן צלחת כדי להפעיל הפלזמה, זירוז היווצרות קריש דם (מופעל פלזמה ממוזגים: ACP).</li>
	<li>לערבב תא ההשעיה (20 µL) ו- ACP (µL 100) ליצירת קריש דם (איור 6). מקם את קריש הדם בתוך הפגם גיד ברך שנוצרו לפני סגירת fascia של חנוק (ראה שלב 4.10.3).</li>
</ol>6. התוצאה הפונקציונלית
<ol><li>לפקח על חולדות פעמיים ביום, סימנים של כאב, בהתבסס על37,38 סולם (RGS) גרימיס עכברוש ונפיחות מעל ההשתלה. הערה: שיטת הניקוד (0-6) פותחה כדי להעריך את הפונקציה אמבולטורי מבוסס על 3 פעילויות, כולל עמידה הגפיים האחוריות מתוזמן עם forelimbs נתמך (0-3), בעיתוי הגפיים האחוריות שזורמים בעמידה (0-2), ואת היכולת לטפס (קיר (0-1) כלוב פלסטיק של 17 ס"מ טבלה 1).</li>
	<li>הערכת חולדות על הפעילות עומד שתי הגפיים האחוריות בבוקר ובערב של כל נקודת זמן לחישוב ציון ממוצע.</li>
	<li>הערכת חולדות על היכולת בהצלחה לטפס על קיר כלוב פלסטיק 17 ס"מ עם שני הגפיים האחוריות שנגיע לפסגה.</li>
</ol>7. גרוס המראה ואת Histopathology של הגיד ברך
<ol><li>המתת חסד חולדות ב 7 ימים (כדי להעריך דלקת) או 28 ימים (כדי להעריך ריפוי רקמות) פוסט הטיפול על-ידי intracardial הזרקת פנטוברביטל (100 מ ג/ק ג) תחת הרדמה עם 8% sevoflurane ו 2 ל' 100% חמצן מועברת באמצעות המסכה.</li>
	<li>לקצור עצם הפיקה-גיד-שוקה tuberosity יחידות על ידי סכין ומספריים לאחר המתת חסד. הסרת רקמות רכות והרצועות סביב חנוק, חוץ הגיד ברך.</li>
	<li>לבחון כל הדגימה מראה גולמי, עיבוי של הגיד (איור 7).</li>
	<li>אוריינט הדגימה על ידי הנחת קשר של המנתח של 5.0 Polydioxanone על ההיבט הפרוקסימלית ואת לרוחב של הגיד. לתקן את הדגימה כל 10% הפתרון נייטרלי פורמלין במאגר ולקבל מקטעים רוחבי (5 מיקרומטר) החלק באמצע של כל גיד.</li>
	<li>כתם הסעיפים באמצעות hematoxylin אאוזין, ואת Trichrome של מאסון מכתים בעקבות פרוטוקולים סטנדרטיים.</li>
	<li>נבחן מקטע כדי לזהות הנוכחות של שטף דם בתוך הפגם, וכן שינויים פתולוגיים כגון דלקת.</li>
	<li>להעריך את הציון היסטולוגית של מקטעים באמצעות מערכת התוצאות שפורסמו בעבר, המבוססים על קולגן כיתה, מידת אנגיוגנזה, סחוס היווצרות (טבלה 2)39.</li>
</ol>

המחברים יש אין ניגוד אינטרסים לחשוף.

תאים לסוסים נבחרו עבור פרויקט זה, כי בסופו של דבר אנחנו מתכוונים לבחון את המועמדים גישות ניהול של tendinopathies טבעי אצל סוסים. ואכן, פציעות גיד אצל סוסים הם מושך כמודלים הטבעי של tendinopathy באדם עקב הדמיון ביולוגי בין הסוסים כופף דיגיטלי שטחית גיד אכילס בני41. תא השטח סמני CD44, CD90, CD105, CD34 ו- MHC II נבחרו עבור immunophenotyping של תאים, בהתאם לקריטריונים המומלצים על ידי האגודה הבינלאומית הסלולר42. במחקר שנערך לאחרונה, eqUCM-MSCs היו חיובי CD44 שלילי עבור CD34 ו- ...

פציעה בגיד הוא אחד הגורמים השכיחים ביותר של ניוון שרירים וכאב משמעותי על פני מינים1. ברפואה וטרינרית, פציעות גיד רצועה הם עניין מיוחד בסוסים, כפי 82 אחוז פציעות כל סוסי מרוץ לערב מערכת השלד, 46% של אלה משפיעים על הגידים והרצועות2,3. היווצרות רקמה צלקתית משפיע על תכונות ביו-מכני של הגידים נרפא ומסביר הפרוגנוזה שמרו על החזרה לשימוש אתלטיק לאחר פציעות גיד כופף; re-פגיעה מתרחשת תוך שנתיים ב עד 67% של סוסים שמרני4. רפואה רגנרטיבית מספק חלופות הרומן תנאי כי האתגרים טיפולים מסורתיים. טיפול בתאי גזע עצמיים הפיק מספר5,מעודד תוצאות6 אבל הוא מוגבל על ידי התחלואה המשויך אוסף רקמה המינהל מתעכב בשל התכנות/עיבוד של תאים, השפעת מצב הבריאות של המטופל (כמו גיל) על המאפיינים של גזע תאים7,8. מגבלות אלה מספקות תירוץ חוקרת תאי גזע allogeneic כחלופה מדף. תאים עוברית נגזר adnexa הם מועמדים מושך כי הם לעקוף את החששות אתית ואת סכנת היווצרות טרטומה הקשורים בתאי גזע עובריים. בין adnexa עוברי, חבל הטבור מטריקס (יו), גם בשם וורטון, הוא שופע וקל לאסוף.
ללא קשר למקור תא, שיפור stemness הוא חיוני להקים בנק תא עבור רפואה רגנרטיבית allogenic. מבחינה תפקודית, stemness ניתן להגדיר את פוטנציאל התחדשות עצמית, שושלת היוחסין מרובה בידול9. עדות stemness מסתמך על התפשטות ובידול מבחני, יחד עם ביטוי של גנים סמנים Oct4, Sox2, ו Nanog9. אסטרטגיה אחת כדי לשפר את stemness מסתמך על השימוש biomaterials לשמש חלל ומרק ונושאי שיפור התפשטות ובידול של UCM MSCs. גישה זו מבטלת חששות לגבי מניפולציה של גורמים תעתיק לתכנת התאים בוגרים לתוך תאים pluripotent המושרה. בין biomaterials נחשב ספקים פוטנציאליים עבור תאי גזע, משקם הוא מושך את התאימות שלו, degradability10. Aminopolysaccharide הטבעי הזה נוצר על ידי אלקליין deacetylation של כיטין, הפנימי רב טבעי-סוכר השני הנפוץ ביותר, בעיקר מתקבל subproduct של רכיכה10. יש קודם לכן חקר אינטראקציות בין MSCs משקם פיגומים, ואנו נצפתה היווצרות של spheroids11,12,13,14,15, 16. גם דיווחנו על העליונות של chondrogenesis ב משקם מטריצות12,13,14,15,16,17, 18. לאחרונה, שני מחקרים עצמאיים שתיאר spheroids היווצרות רקמת שומן, רקמת השליה נגזר MSCs תרבותי משקם הסרט19,20. צורה זו של spheroids לא רק משופרת stemness, אך גם השתפר השמירה של תאי גזע אחרי ויוו השרשה20.
השכיחות ותחלואה של tendinopathy על פני מינים חייב עודדה ההתפתחות של ניסיוניות לימוד הפתופיזיולוגיה של tendinopathies ולבדוק טיפולים חדשים כגון הזרקת תאי גזע. סוסים, המושרה collagenase tendonitis הוא דגם נפוץ כדי להדגים את היעילות באמצעות MSCs תיקון גיד21. הרלוונטיות של גישה זו היא מוגבלת, שכן זריקות לגרום לשינויים דלקתית חריפה, ואילו tendinopathies קלינית הם בדרך כלל תוצאה של כרונית מאולצת22,23. בנוסף, אינדוקציה כימי של גיד המחלה גורמת לתגובה הריפוי, לא לשכפל את תהליך הריפוי לקוי קיימים מקרים קליניים22,23. כריתה של קטע של הגיד כופף דיגיטלי שטחית תואר כמודל כירורגי של דלקת גידים סוסים24. לאחרונה, בגישה פולשנית שימש כדי להגביל את הנזק טראומטי הליבה המרכזית של גיד כופף דיגיטלי שטחית25. ניתוח מודלים לא לדמות את מנגנון עייפות עשוי להוביל למחלות גיד טבעי, נוטים חוסר הפארמצבטית בהיקף הנזק שנוצר25. ללא תלות המודל, תחלואה, העלות המשויכת אקווין מודלים של גיד המחלות הן מגבלות נוספות, אשר להצדיק את עניין במודלים מכרסמים כצעד ראשון ויוו הערכה של טיפולים חדשניים.
אחד היתרונות העיקריים של גרסאות ניסיוניות בחולדות מורכב העלות ואת היכולת לשלוט ההשתנות הבין-אישי. מכרסמים יכול להיות מוגדר ביחס גורמים פיזיולוגיים שונים בשל שיעורי צמיחה מהירה שלהן, קצרים יחסית תוחלת חיים, הגבלת המקורות של וריאציה, לכן להפחית את מספר בעלי החיים הנדרשים כדי לזהות הבדלים. אסטרטגיות כדי לגרום מחלות גיד בחולדות יש הסתמכה על אינדוקציה כימיים, אלא גם על יצירה כירורגית של גיד חלקית פגמים21. ניתוח מודלים עשויים לדמות יותר דגמים כימיים טבעיים tendinopathies, אך יכול לגרום תחלואה גבוהה כשל קטסטרופי של הגיד הפגוע. במובן הזה, חולדות נראה טוב יותר מועמדים מאשר עכברים לדגמים אלה, שכן גודלם מאפשרת יצירה של פגמים גדולים יותר, ובכך להקל הערכה של רקמת ריפוי. חולדות ספראג-Dawley השתמשו במחקרים ניסיוני של tendinopathies ארבע קבוצות גיד מרכזי: מסובבי הכתף, כופף, אכילס, הגידים ברך26. בין אלה, מודלים המערבים הגיד ברך הם במיוחד מושך בשל גודל גדול יותר של גיד הזה וקלות גישה זה27. הגיד ברך מייחסת את השריר הארבע ראשי tibial tuberosity. בתוך מנגנון זה פושט, עצם הפיקה היא ויוצרת זה מנחה את הפעולה של הארבע ומגדיר את היקף proximal הגיד ברך. הנוכחות של עוגנים גרמית ב extents הפרוקסימלית ו דיסטלי של הגיד ברך מקלה על בדיקות ביו-מכני. מודלים המערבים הגיד ברך כלל להסתמך על פגמים כירורגי חד צדדית, עם גיד ללא פגע contralateral הגשה28,שליטה29. המודל הנפוץ ביותר של פגם גיד ברך כרוך excising את החלק המרכזי (1 מ מ רוחב) של הגיד ברך מהקודקוד דיסטלי של עצם הפיקה כדי החדרת tibial tuberosity, בעוד הגיד ברך contralateral הוא נותר ללא פגע. מדדי תוצאות כללו היסטולוגיה, שאינו הרסני בדיקה ביו-מכני או בדיקות ביו-מכני כשל, אולטראסאונד הדמיה, שמחוץ פלורסצנטיות הדמיה, התבוננות ברוטו של בדיקות פונקציונליות28,30 ,31. מודלים חד צדדית אינן מאפשרות השוואה של הטיפול המוצע עם ניהול שמרני של פציעה דומה בתוך אותה חיה. באופן דומה, השוואה בין מספר טיפולים מחייב בעלי חיים נפרדים. מודל דו צדדיים לחסל את לזו וההבדלים בין ולהפחית את מספר החיות הדרושים עבור המחקר32. עם זאת, פציעות דו-צדדי עשוי להגדיל את התחלואה, צליעה הדו-צדדי יכול לעכב טיפול הערכה. מעט מחקרים דווח בקצרה השימוש של פגמים גיד ברך הדו-צדדיים חולדות אך המוקד על ההשפעות של טיפולים יותר מאשר פרי-סוכן ניהול ותחלואה של33,דגם34.
המטרה לטווח ארוך של מחקר זה היא לפתח אסטרטגיה כדי לשפר את ההישרדות stemness וב -vivo של UCM-MSCs שנועדו השתלת allogenic. כדי להשיג מטרה זו, אנו דיווחו לאחרונה stemness משופר של יו-MSCs על ידי היווצרות של spheroids על הסרט משקם, דגירה תחת סביבת ובשפתיים35. מאפיינים אלה במבחנה שויכו משופרת biomechanical מאפיינים מולדים גיד ברך שטופלו UCM ממוזגים-MSCs. בהתבסס על תוצאות אלו, המודל פגם גיד ברך הדו-צדדיים עכברוש. נשמע מתאים לבדוק את המועמד טיפולים עבור פציעות גיד36. מטרת המחקר דיווח הנה לספק נתונים היסטוריים פרוטוקולים עבור בידוד ואפיון של יו-MSCs, הכנת מערכת ביולוגיים עבור תאי גזע, יצירת וטיפול צלחית הדו-צדדיים גיד פגמים, ובעל שלאחר הניתוח שחזור והערכה של רקמת ריפוי בתוך הליקויים.

<table><tbody><tr><td>PBS 10x</td><td>Hyclone</td><td>SH30258.01</td> קולגנאז <td>מתכלה</td></tr><tr><td>מסוג IA</td><td>Worthington</td><td>LS004197</td><td></td></tr><tr><td>DMEM מתכלה עם גלוקוז</td><td>נמוך Hyclone</td><td>SH30021. FS</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>סרום בקר</td><td>עוברי Hyclone</td><td>SH30910.03</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין מתכלה 100x</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td> טריפסין <td>מתכלה</td></tr><tr><td>0.25%</td> <td>Hyclone</td><td>SH30042.01</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>מתכלה טכנולוגיות תאים חדשניות</td><td>AT104</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>טריפן כחול</td><td>Hyclone</td><td>SV30084.01</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>צ'יטוזן</td><td>סיגמא</td><td>C3646</td><td></td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד</td> מתכלה <td>Sigma</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר מתכלה אלבומין</td><td>היקלון</td><td>SH30574.01</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>צינור פוליסטירן תחתון עגול</td><td>קורנינג</td><td>149591A</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>עכבר נגד סוסים CD44 (FITC)</td><td>AbD serotec</td><td>MCA1082F</td><td>עכבר מתכלה</td></tr><tr><td>נגד חולדות CD90 (FITC)</td><td>AbD serotec</td><td>MCA47FT</td><td>עכבר מתכלה</td></tr><tr><td>נגד סוסים MHC-II (FITC)AbD</td> <td>serotec</td><td>MCA1085F</td><td>עכבר מתכלה</td></tr><tr><td>IgG1 (FITC) - בקרת איזוטיפ</td><td>AbD serotec</td><td>MCA928F</td><td></td></tr><tr><td>עכבר מתכלה חד-שבטי [SN6] ל-CD105 (FITC)</td><td>abcam</td><td>ab11415</td> עכבר <td>מתכלה</td></tr><tr><td>IgG1 (FITC) - בקרת איזוטיפ</td><td>abcam</td><td>ab91356</td><td>עכבר מתכלה</td></tr><tr><td>אנטי אנושי CD34 (FITC)</td><td>BD</td><td>BDB560942</td> עכבר <td>מתכלה</td></tr><tr><td>IdG1 kappa (FITC)</td><td>BD</td><td>BDB555748</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>7-AAD</td><td>BD</td><td>BDB559925</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>BD Accuri C6 זרימה ציטומטר</td><td>BD</td><td></td><td>ציוד</td></tr><tr><td>ואקוטיינר 5 מ"ל</td><td>Med Vet International</td><td>RED5.0</td> חומצה מתכלה-ציטראט-דקסטרוז <td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>C3821</td><td></td></tr> סידן <tr><td>כלוריד</td> מתכלה <td>Sigma</td><td>C5670</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>Sevoflurane</td><td>JD Medical</td><td>60307-320-25</td><td></td></tr><tr><td>חולדות מתכלות</td> קוד זן <td>נהר צ'ארלס</td>: <td>400</td><td>חיית ניסוי</td></tr><tr><td>ערכת ניתוח חולדה</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>ציוד</td><td>728942</td></tr><tr><td>להב כירורגי #15</td><td>MEDLINE</td><td>MDS15115</td> חולדה <td>מתכלה</td></tr><tr><td>MD's Baytril (2 מ"ג/טבליה), רימדיל (2 מ"ג/טבליה)Bio</td> <td>Serv</td><td>F06801</td><td></td></tr><tr><td>פוליגלקטין מתכלה 910, 5-0</td><td>Ethicon</td><td>J436G</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>Eosin alchol shandon</td><td>Thermo מדעי</td><td>6766007</td><td>מתכלה</td></tr><tr><td>האריס המטוקסילין</td><td>תרמו מדעי</td><td>143907</td><td>מתכלה</td></tr></tbody></table>

הערכה של תאי גזע טיפולים במודל פציעת גיד ברך הדו-צדדיים בחולדות

Evaluation of Stem Cell Therapies in a Bilateral Patellar Tendon Injury Model in Rats

רפואה רגנרטיבית מספק חלופות הרומן לתנאי זה אתגר טיפולים מסורתיים. שכיחות התחלואה של tendinopathy על פני מינים, בשילוב עם סגולות הריפוי מוגבלת של רקמה זו, תתבקש החיפוש אחר טיפולים הסלולר והם יהיו. לדחוף את התפתחות ניסיוניות ללמוד את יעילותם. חבל הטבור מטריקס-derived בתאי גזע mesenchymal (UCM-MSC) הם מועמדים מושך כי הם בשפע, קל לאסוף, לעקוף את החששות אתית ואת סכנת היווצרות טרטומה, עדיין דומים בתאי גזע עובריים פרימיטיביים יותר מקרוב יותר עניין MSCs. משמעותיות רקמות-derived מבוגרים התמקדה משקם כאסטרטגיה כדי לשפר את המאפיינים של MSCs דרך היווצרות ספרואיד. זה טכניקות פרטים נייר כדי לבודד UCM-MSCs, להכין spheroids בסרט משקם, לנתח את השפעת היווצרות ספרואיד על פני השטח סמן ביטוי. כתוצאה מכך, יצירת מודל פציעת גיד ברך הדו-צדדיים בחולדות מתואר ויוו השרשת UCM-MSC spheroids שנוצר בסרט משקם. סיבוך לא נצפתה במחקר לגבי תחלואה, הלחץ בעליה אפקטים או זיהום ברקמות. הציון פונקציונלי של החולדות המופעלים על 7 ימים היה נמוך מזה של חולדות רגילה, אך חזר להיות תקין תוך 28 ימים לאחר הניתוח. עשרות היסטולוגית ריפוי רקמות אישרו הנוכחות של קריש ב פגמים שטופלו מוערכים ב 7 ימים, היעדר התגובה גוף זר, ואת מתקדמת הריפוי 28 ימים. מודל פגם זה גיד פיקת הדו-צדדיים שולט הבין-וריאציה באמצעות יצירת פקד פנימי בתוך כל עכברוש, היה הקשורים עם תחלואה מקובל, והתירו גילוי של ההבדלים בין הגידים לא מטופל וטיפולים.

במחקר הנוכחי, התוצאות מוצגים אומר ± SD (סטיית תקן). התאים הם בודדו אותנו מהמתרחש חבלים חבל הטבור של 6 סוסות, אחוז שורות תאים מבודדים לבטא כל סמן תא השטח תחת מיזוג רגיל או משקם הושוו עם מבחן פרידמן, כמו ניתוח השונות פרמטרית עם חזר אמצעים. ליצירת דגם של גיד פגם, חולדות 8 שימשו להערכת 7 ימים לאחר הניתוח, חולדות 12 שימשו להערכת 28 ימים. תוצאות של תוצאות תפקודי מוצגים אומר SEM ± (שגיאת התקן של הממוצע), בהשוואה באמצעות t-המבחן. UCM נבחר כמקור הסלולר בשל שפע, נוחות של אוסף, והתפשטות מעולה יחסית ...

מאמר זה מתאר את ההכנה והערכה של חבל הטבור spheroids מטריקס-derived בתאי גזע mesenchymal עם דגם פגם הדו-צדדיים גיד ברך בחולדה. מודל זה היתה משויכת תחלואה מקובל היה למצוא כדי לזהות הבדלים בין הגידים אינו מטופל ומטופל ו בין שני הטיפולים נבדק.

Regenerative medicine provides novel alternatives to conditions that challenge traditional treatments. The prevalence and morbidity of tendinopathy across ...

המטרות הכוללות של מודל חולדות דו-צדדי זה הן לייעל את השימוש בבעלי חיים ולהעריך מועמדים לטיפול במומים בגידים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על כל שאלות מפתח בתחום האורתופדי. כגון הערכת טיפול תאי בגידים.היתרון העיקרי של מודל זה הוא שהוא שולט בשונות בין-אישית, ובכך מפחית את מספר בעלי החיים הנדרשים לאיתור הבדלים בין טיפולים. הדגמה חזותית של המודל היא קריטית מכיוון שקשה ללמוד יצירת פגמים בגיד הפיקה הסטנדרטיים הדו-צדדיים בחולדות. המודל דורש ידע טוב באנטומיה המקומית, מיומנויות כירורגיות בסיסיות חזקות ודיוק בעבודה על מבנים קטנים.כדי להתחיל, שטפו חבל טבור של סוסים שנקטפו פעמיים בצינור של 50 מיליליטר באמצעות PBS בטמפרטורת החדר המכיל אנטיביוטיקה. לאחר מכן, העבירו את הרקמה לצלחת של 150 מילימטר וחתכו אותה לשברים באורך שני סנטימטרים. לאחר מכן העבירו את השברים לצינור של 50 מיליליטר ושטפו אותם עם PBS המכיל אנטיביוטיקה כדי להסיר את הדם.עשו זאת פעמיים או שלוש בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, חותכים את החלקים המקוטעים של חבל הטבור לאורך כדי לחשוף את הכלים העוברים לאורכו. בעזרת מלקחיים ומספריים, הסר את הכלים הללו, הכוללים שני עורקים ווריד.כעת, משניים או שלושה שברים, אספו את המטריצה דמוית הג'לי המקיפה את הכלים. מגרדים אותו בעזרת אזמל. לאחר מכן טוחנים את המטריצה דמוית הג'לי, הידועה גם בשם ג'לי וורטון, לחתיכות עדינות.לאחר מכן, העבירו את הג'לי לשפופרת של 50 מיליליטר עם 15 מיליליטר של 0.1% קולגנאז מסוג 1A ב-PBS ודגרו את הרקמה ב-37 מעלות צלזיוס בניעור עדין במשך שלוש עד ארבע שעות עד להמסה מלאה. לאחר מכן, צנטריפוגה את הרקמה המעוכלת ושואב את הסופרנטנט. כעת, אנו משעים את הרקמה המעוכלת ב-15 מיליליטר PBS ומערבבים על ידי פיפטינג.לאחר מכן, חזור על שטיפה זו עם PBS שלוש פעמים באמצעות צנטריפוגה איטית יותר. לאחר השטיפה האחרונה, השעו מחדש את התאים ב -15 מיליליטר PBS ולאחר מכן השתמשו במסננת תאים של 100 מיקרון כדי לסנן את התאים ולצנטריפוגה למשך חמש דקות ב -150 פעמים גרם כדי לאסוף את התאים. השעו מחדש את התאים ב -10 מיליליטר של מדיום גידול טרי ב -37 מעלות צלזיוס.העבירו את המתלה לבקבוק תרבית בגודל 25 סנטימטר מרובע ודגרו על התאים, והחליפו את המדיום כל שלושה ימים. כאשר התאים מגיעים למפגש של 70 עד 80%, מעבירים אותם, שואבים את המדיום ושוטפים את התאים פעמיים עם PBS בטמפרטורת החדר ללא אנטיביוטיקה. לאחר מכן השתמש בשלושה מיליליטר של 0.25% טריפסין edta כדי לנתק את התאים.סיים את התגובה בתוספת של שישה מיליליטר של מדיום חם. אוספים את התאים התלויים וכדורים אותם. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של מדיום.להשלמת המעבר, זרעו מחדש בקבוק תרבית רקמה עם 5,000 תאים לסנטימטר רבוע והמשיכו לגדל את התרבית. כדי להתחיל, הכינו תמיסת צ'יטוזן טרייה. לאחר מכן טען כל באר של צלחת 12 בארות עם 500 מיקרוליטר תמיסה.סובב את הצלחת כדי להפיץ את התמיסה על כל המשטחים. לאחר מכן, יבש את הצלחת מתחת לארון זרימה למינר. לאחר 16 עד 24 שעות, בסרט דק של צ'יטוזן ייווצר בבארות הצלחת.נטרל את הסרט הזה על ידי הוספת מיליליטר אחד של 0.5 נתרן הידרוקסיד רגיל לכל באר. לאחר מכן, דגרו את הצלחת למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. מאוחר יותר, שאפו את הנתרן הידרוקסיד מכל באר ולאחר מכן שטפו כל באר במיליליטר מים מזוקקים.בצע שלוש שטיפות מים ולאחר מכן שטוף כל באר עם מיליליטר אחד של 70% אתנול פעם אחת. לאחר הסרת שטיפת האתנול, החלף אותה במיליליטר אחר של אתנול 70% ודגר את הצלחת למשך הלילה בארון זרימה למינרי כדי לעקר את סרט הצ'יטוזן. ואז למחרת שאפו את האתנול הנותר מכל באר ושטפו כל באר עם PBS שלוש פעמים.הסר את ה-PBS ולאחר מכן עקר עוד יותר את סרט הצ'יטוזן באמצעות חשיפה ישירה למשך הלילה לאור אולטרה סגול ללא המכסה. כעת, כדי ליצור ספרואידים של תאי גזע מזנכימליים שמקורם בחבל הטבור, זרעו את הבארות ב-20,000 תאים ודגרו על הצלחת בתנאים רגילים או היפוקסיים. הניחו חולדה מורדמת בין שני בקבוקי 0.5 ליטר מלאים במים חמים וכסו את הבקבוקים במטלית כדי לשמור על חום החולדה מבלי לסבול מפציעות עור.כדי להפחית את הסיכון להיפותרמיה, יש לכסות את הגוף בניילון בועות. לאחר מכן, כדי למנוע טראומה בעור, מרחו קרם מסיר שיער על שני המחנקים והשתמשו במדכא לשון כדי להסיר את הקרם והשיער. לאחר מכן, הדביקו כל איבר לשולחן.כעת, שפשפו את אזור הניתוח עם כלורהקסידין דיגלוקונאט ושטפו אותו עם 70% אתנול. עשה זאת שלוש פעמים והמשך בניתוח. בעזרת אזמל סטרילי מספר 15, חתכו את העור בכיוון פרוקסימלי עד דיסטלי בהיבט המדיאלי הגולגולתי של החנק.התחל את החתך כסנטימטר אחד קרוב לגובה הפיקה והאריך אותו כחמישה מילימטרים דיסטלי לפקעת השוקה. לאחר מכן, שחרר את הרקמה התת עורית הבסיסית עם האזמל והשקף את העור כדי לחשוף את גיד הפיקה. כעת, יישר חוט קירשנר בקוטר 0.99 מילימטר כנגד גיד הפיקה בין ההיבט הדיסטלי של הפיקה לשחפת השוקה.לאחר מכן, תוך שמירה על יציבות החוט, השתמש באזמל כדי לבצע חתכים משני צידי החוט, ולשחרר חלק מהגיד ברוחב של כמילימטר אחד. לאחר מכן כרתו את החלק המרכזי באופן קרוב ודיסטלי בעזרת מספריים קשתית עדינים. במקביל, בקש מעוזר להכין את הקריש.לשם כך, יש להפשיר את דגימת הפלזמה ולערבב 20 מיקרוליטר ממנה עם חצי מיליון תאי גזע מזנכימליים. לאחר מכן, בצינור מיקרוצנטריפוגה, מערבבים שישה מיקרוליטרים של 10% סידן כלורי עם 100 מיקרוליטר פלזמה מופשרת, זה יפעיל את הפלזמה הזו. לאחר מכן, מערבבים את תרחיף התאים לתוך הפלזמה המופעלת, זה יגרום לפלזמה להיקרש.כעת, הנח את הקריש המוכן בתוך הפגם בגיד הפיקה. הגבל את המניפולציה של הקריש כדי למזער את שחרור הנוזלים מהקריש. לאחר מכן, בעזרת חמישה o פוליגלקטין תשעה 10 תפרים, סגור בזהירות את הפאשיה בתבנית צולבת מבלי להפריע לקריש.סיים על ידי סגירת העור בתבנית תוך-עורית. התאים בודדו מחבל הטבור של שש סוסות וגודלו בתנאים סטנדרטיים או על סרטי צ'יטוזן. התאים שגודלו על צ'יטוזן יצרו ספרואידים.מודל הפגם בגיד הפיקה נבדק על חולדות רבות ונעשה שימוש בסוללה של בדיקות התנהגותיות כדי להעריך את ההחלמה. עד 28 ימים לאחר הניתוח, החולדות חזרו לחוזק הבסיסי לאחר גירעון ראשוני בכוח שנמדד שבעה ימים לאחר הניתוח. בבדיקה היסטולוגית עם כתם הטריכרום של מאסון, נצפתה חדירה מתונה של העורקים והנימים יחד עם היווצרות קולגן בינונית עד נרחבת בעוד שהיווצרות סחוס לא נתמכה.בסך הכל, מודל הפגם בגיד הפיקה הדו-צדדי מגביל את השונות הבין-אישית ללא תחלואה משמעותית. לפיכך, הפחתת מספר החיות הדרושות לניסויים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליצור מודל פגם בגיד הפיקה הדו-צדדי של חולדה וכיצד חולדות מתאוששות מניתוח זה.לאחר השליטה, ניתן לבצע את ההליך פחות מ-30 דקות עם שלושה חוקרים. החוקר הראשון מכין את התא, השני מבצע את הניתוח, ואילו השלישי מסייע בניתוח ומפקח על ההרדמה. לאחר הליך זה, ניתן להשתמש בשיטות כגון בדיקות ביומכניות, היסטולוגיה ואימונוהיסטוכימיה על מנת להשוות את השפעת הטיפול על ריפוי הגידים.

evaluation-stem-cell-therapies-bilateral-patellar-tendon-injury-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

טכניקה ניסויית לטיפול בפגמי osteochondral במפרק הברך של הארנב מתוארת. ההשתלה של תאי גזע מזנכימיים אלוגניות לפגמי osteochondral מספקת פיתוח מבטיח בתחום הנדסת רקמות. הכנת הפיברין-תא...

טיפול במומי Osteochondral במפרק הברך של הארנב על ידי השתלה של תאי גזע mesenchymal אלוגנאית בקרישי הפיברין

פרוטוקול זה מתאר תיוג רדיו של תאי גזע מזנכימליים של סוסים והשתלתם בפגיעות גידים בסוס על מנת לקבוע את הישרדות התאים ואת התפלגות הרקמות באמצעות סינטיגרפיה גמא.

In vivo ההדמיה ומעקב של טכנציום-99m תווית תאי גזע מח העצם mesenchymal בסוסי Tendinopathy

מודלים של בעלי חיים הם כלים חשובים להערכת שתלים מהונדסי רקמות. מאמר זה מציג את הפרוטוקול להכנת שתל פולימרי מתכלה חשמלי לשימוש בהנדסת רקמות רצועה צולבת קדמית, כמו גם פרוטוקול כירורגי להשתלה במודל חולדה.

Athymic עכברוש מודל להערכת הנדסי קדמי צולב גידים שתלי

אנו מתארים פרוטוקול in vivo למדידת כיפוף הגב של כף הרגל בעקבות גירוי של העצב הפרונאלי והתכווצות התא האחורי הקדמי של הגפה האחורית של החולדה. מדידות כאלה הן כלי תרגומי הכרחי להערכת פתולוגיה של שרירי השלד וגישות הנדסת רקמות לתיקון והתחדשות שרירים.

יישומים של<em&gt; In vivo</em&gt; בדיקות פונקציונליות של עכברוש השוקה הקדמי להערכת רקמות מהונדסות תיקון שרירי שלד

פרוטוקול זה מתאר את תהליך ההערכה של ריפוי גידים אצל חולדות זה מוזרק עם טסיות allogeneic פלזמה עשיר (PRP) או תמיסת מלח לאחר הסרת חלק גיד אכילס. ההתקדמות של גיד ריפוי מוערך במספר נקודות זמן באמצעות סוגים שונים של ניתוחים.

ההשפעות של טסיות דם עשיר Allogeneic פלזמה (PRP) על תהליך ריפוי של אכילס משרטוטי הגידים של חולדות: תיאור מתודולוגיים

תלת-מימדי גירוי מכני מכאני מערכת ביוריאקטור הוא ביווריקטור אידיאלי עבור הבחנה מסוימת של הבידול בתאי גזע הנגזר גיד והיווצרות גיד ניאו.

החלת גירוי מכני תלת מימדי ביוריאקטור מערכת לגרום לבידול Tenogenic של תאי גזע הנגזר גיד

פרוטוקול זה מבסס מודל פגמים בסחוס בעובי מלא (FTCD) על ידי קידוח חורים בחריץ טרוכלארי הירך של חולדות ומדידת התנהגות הכאב והשינויים ההיסטופתולוגיים הבאים.

פיתוח והערכה של מודל חולדה של פגמים בסחוס בעובי מלא

מחקר זה מפרט נהלים לביסוס פגיעה כרונית בשרוול מסובב ארנב (RC). באופן ספציפי, הפציעה נוצרת ביחידה תת-סקפולארית (SSC) של גיד-שריר/מיוטנדי כדי לחקות אנטומיה ופתופיזיולוגיה של RC אנושי, כולל ניוון שומן שרירי חמור (FD). פרוטוקול זה יכול להיות מיושם כדי לחקור פציעות RC ולהעריך טיפולים רגנרטיביים.

פיתוח מודל פגיעה בשרוול מסובב דמוי ארנב כרוני לחקר פיברוזיס וניוון שומן שרירי

כאן, אנו מציגים מערכת מודל אסמבלואיד המחקה את ההצלבה התאית של הגידים בין רקמת הליבה של הגיד נושא העומס לבין תא חיצוני המכיל אוכלוסיות תאים המופעלות על ידי מחלה ופציעה. כמקרה שימוש חשוב, אנו מדגימים כיצד ניתן לפרוס את המערכת כדי לחקור הפעלה רלוונטית למחלה של תאי אנדותל חיצוניים.

הנדסת מכלולי גידים לבדיקת הצלבה תאית במחלה ותיקון

במודל עכבר של בתוך הרחם השתלה

למדו להעריך טיפולים בתאי גזע לפגמים בגידים באמצעות מודל דו-צדדי בחולדות. שיטה זו ממזערת שונות בין פרטים ומפחיתה את מספר בעלי החיים הנדרשים למחקר אורתופדי.

הערכה של תאי גזע טיפולים במודל פציעת גיד ברך הדו-צדדיים בחולדות

גלה סרטונים נוספים