Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Lauren Green; Cody J. Smith

doi:10.3791/57024

Photoconversion תא בודד בהמחיה שלם דג זברה

JoVE Journal
Developmental Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Developmental Biology

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion תא בודד בהמחיה שלם דג זברה

Full Text

6,451 Views

09:49 min

March 19, 2018

DOI: 10.3791/57024-v

Lauren Green^1,2, Cody J. Smith^1,2

¹Department of Biological Sciences,University of Notre Dame, ²Center for Stem Cells and Regenerative Medicine,University of Notre Dame

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להראות איך תא photoconversion מושגת באמצעות חשיפה UV על אזורים מסוימים להביע החלבון הניאון, אאוס, בבעלי החיים.

המטרה הכוללת של טכניקת המרת פוטו זו היא להבחין בין תאים בודדים בבעל חיים בודד לבין אוכלוסיות תאים פלואורסצנטיים אחרות. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות התפתחותיות מרכזיות בתחום, ולאפשר לנו לדמיין נדידת תא בודד לאורך זמן. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא זעיר פולשנית וניתן להשתמש בה לתיוג תאים בודדים או אוכלוסיות גדולות יותר.

בנוסף, המשתמש יכול לבחור את אזור העניין הספציפי ולהמיר תמונה את היעד הרצוי. לאחר הזדווגות של דג זברה טרנסגני זכר ונקבה המבטא חלבון הניתן להמרה ואיסוף הביצים על פי פרוטוקול הטקסט, השתמש במיקרוסקופ מנתח עם מקור אור של 488 ננומטר וערכות מסנני GFP כדי לסנן 24 עוברי hpf. בעזרת מחט או פינצטה, יש לפרק ידנית את העוברים.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos