RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
he_IL
Menu
Menu
Menu
Menu
DOI: 10.3791/57109-v
Jordan F. Hastings1, Jeremy Z.R. Han1, Robert F. Shearer1,2, Sean P. Kennedy1,3, Mary Iconomou1,4, Darren N. Saunders5, David R. Croucher1,6,7
1The Kinghorn Cancer Centre,Garvan Institute of Medical Research, 2Ubiquitin Signaling Group, Protein Signaling Program, The Novo Nordisk Foundation Center for Protein Research, Faculty of Health and Medical Sciences,University of Copenhagen, 3RCSI Molecular Medicine,Royal College of Surgeons in Ireland, 4Department of Epigenetics,Max Planck Institute of Immunobiology and Epigenetics, 5School of Medical Sciences,University of New South Wales, 6St Vincent's Hospital Clinical School,University of New South Wales, 7School of Medicine and Medical Science,University College Dublin
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
כתב יד זה מתאר את הפרוטוקול לטיהור ריאקציה דו-מולקולרית קומפלמנטציה זיקה (BiCAP). שיטה חדשנית זו מקלה על ספציפיות בידוד ואפיון פרוטיאומיה מבנית במורד הזרם של כל שני חלבונים אינטראקציה, בעוד למעט האו ם-ומורכבת חלבונים בודדים, כמו גם מתחמי הקים עם שותפים איגוד מתחרות.
שיטה זו יכולה לעזור לנו לענות על שאלות מפתח בביולוגיה ובביוכימיה של התא, כגון כיצד ההרכבה הדינמית של קומפלקסים של חלבונים וחלבונים שולטת במסלולי איתות ובהתנהגות התא. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שאנו יכולים לבודד באופן ספציפי שני חלבונים הפועלים באינטראקציה, תוך אי הכללת חלבונים בודדים לא מורכבים, ושותפי קישור מתחרים. למרות שאנו משתמשים בשיטה זו כדי לספק תובנה לגבי דימריזציה קליטה של טירוזין קינאז בסרטן השד, ניתן ליישם אותה גם על כל סביבה או מחלה פיזיולוגית אחרת.
היה לנו רעיון לראשונה לשיטה הזו כשהבנו שננו-גוף GFP מזהה את האפיטופ התלת-ממדי של GFP וחלבונים פלואורסצנטיים אחרים. כדי להתחיל, הוסף 150 ננוגרם של וקטור כניסה, 150 ננוגרם של וקטור יעד ושמונה מיקרוליטר של מאגר TE, לצינור של 0.2 מיליליטר. לאחר מכן הוסף שני מיקרוליטרים של רקומבינאז ו-ZiMex, וצנטריפוגה את השניים לזמן קצר.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Related Videos
10:50
Related Videos
18K Views
08:54
Related Videos
28.7K Views
14:58
Related Videos
48.9K Views
04:29
Related Videos
693 Views
13:51
Related Videos
16.7K Views
10:37
Related Videos
15.6K Views
07:40
Related Videos
12.1K Views
09:35
Related Videos
14.6K Views
10:01
Related Videos
20.5K Views
09:02
Related Videos
20.6K Views