Name: השתלת תאי רקמת שומן-Derived גיליון כדי להפחית את זליגת לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: למדו להכין ולהשתיל גיליונות תאי גזע מרקמת שומן (ASC) על אנאסטומוזה קולורקטלית במודל עכברים. השיטה מפחיתה זליגה אנאסטומוטית ומשפרת ריפוי רקמות ללא חומרים סינתטיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים פרופ ' ד ר S.E.R. Hovius, ד ר M.A.M. Mureau, מנתחים כל המחלקה לכירורגיה פלסטית האוסף של רקמת השומן התת עורית. עמ' הראש נתמך על ידי מענק של התוכנית היה האחווה הולנד (NFP-12/435), במהלך התנהלות של המחקר. עיון Bastiaansen-Jenniskens נתמך על ידי מענקים מקרן דלקת מפרקים ההולנדית (LP11).

רקמת השומן התת עורית בטן הושג מתורמים האנושי עם אישור של הוועדה האתית הרפואית (#MEC-2014-092), המרכז הרפואי של אוניברסיטת MC ארסמוס, רוטרדם, הולנד. ניסויים בבעלי חיים כל אושרו על-ידי אתית הוועדה של חיות ניסוי, המרכז הרפואי של אוניברסיטת MC ארסמוס, רוטרדם, הולנד (133-14-01).
1. האדם השיקופיים בידוד ותרבות
<ol><li>להכין 3 מ"ל של בידוד בינוני 1g של רקמת שומן. מיקס גלוקוז נמוך Dulbecco של בינוני הנשר ששינה (LG-DMEM) עם 10 גרם/ליטר שור אלבומין (BSA) ו 1 g/L collagenase סוג 1.</li>
	<li>לנתח את האדם רקמת השומן התת עורית בטן (n = 8, כל נקבה, אומר גיל 40 ± בת 9) לחלקים קטנים (0.5 ס מ) באמצעות להב כירורגי סטרילי בגודל 10. לאדאמסון-חום רקמת מלקחיים, קורות חיים SafetyCabinet הביולוגיים סטרילית.</li>
	<li>אחסן את הרקמה ביתור בקבוק אחסון זכוכית סטריליים מדיה. שוקל את הסכום הכולל של רקמות ביתור ולהתחיל העיכול עם המדיום בידוד מוכן (50 גרם של רקמת שומן עם 150 מ ל בידוד בינוני לכל בקבוק). ניתן להשהות את הפרוטוקול פה על-ידי אחסון הבקבוק עם רקמת שומן גזור, בידוד בינוני ב 4 ° C על מערבל רולר בן לילה. ואז prewarm את הבקבוק ביום המחרת לטמפרטורת החדר 25 º C למשך 15 דקות לפני שתמשיך לשלב הבא. הערה: רקמת השומן התת עורית בטן הושג כחומר שאריות מתורמים שעברו ניתוח שחזור שד באישור ועדת ארסמוס MC רפואית אתית (# MEC-200) ועל פי את הקוד האתי: "שימוש משני נכונה של רקמה אנושית"(< http://www.federa.org>). שאריות רקמת שומן שימשה רק מתורמים אשר לא הפרסומות כדי שימוש משני.</li>
	<li>לעכל את רקמת שומן ביתור בתוך בקבוק אחסון זכוכית סטריליים מדיה של שייקר-חממה-150 סל ד ו- 37 מעלות לשעה.</li>
	<li>לחלק את הפתרון מתעכל צינורות 50 מ ל, centrifuge הצינורות 10 דקות ב 390 x g.</li>
	<li>להכין תרבות בינוני: LG-DMEM בתוספת 10% סרום שור עוברית (FBS), 50 גנטמיצין µg/mL ו- µg/mL 1.5 ampothericin B.</li>
	<li>בעקבות צנטריפוגה, להסיר את תגובת שיקוע, resuspend בגדר תא ב- 20 מ של תרבות בינוני (LG-DMEM בתוספת 10% סרום שור עוברית (FBS), 50 גנטמיצין µg/mL ו- µg/mL 1.5 ampothericin B). Centrifuge את התאים שוב עבור 5 דקות ב 390 x g ולהסיר את תגובת שיקוע.</li>
	<li>Resuspend בגדר תא עם 10 מ"ל של תרבות בינוני (LG-DMEM בתוספת 10% FBS, גנטמיצין µg/mL 50 ו- 1.5 µg/mL ampothericin B) ולסנן התליה תא דרך מסנן 100 מיקרומטר.</li>
	<li>להוסיף 50 µL של 3% חומצה אצטית/מתילן כחול פתרון (עבור פירוק תאי הדם האדומים) µL 50 של השעיה תא, לערבב את הפתרון, להשתמש 10 µL כדי לספור את התאים. בצע תא סופר עם hemocytometer. ואז צלחת התאים-צפיפות של תאים/ס מ 40,0002 תרבות בינוני (LG-DMEM בתוספת 30% FBS, גנטמיצין µg/mL 50 ו- 1.5 µg/mL ampothericin B).</li>
	<li>דגירה התאים ב- 37 מעלות צלזיוס ב אווירה לח עם 5% CO2 במשך 24 שעות ביממה.</li>
	<li>בעקבות הדגירה, שטיפת התאים עם פוספט חמים (37 מעלות צלזיוס) buffered תמיסת מלח (PBS) כדי להסיר שאריות תאים ולהחליף את התקשורת עם 10% FBS תרבות בינוני עם טרי להוסיף חומצה אסקורבית-2-פוספט (25 µg/mL) ואת הצמיחה פיברובלסט רקומביננטי אנושי פקטור 2 (FGF2, 1 ng/mL).</li>
	<li>תת-תרבות השיקופיים ב 90% זרימה באמצעות תקן 0.25% טריפסין EDTA פתרון (3 מ"ל של בקבוקון T175). לאחר 3-5 דקות, לנטרל את הפתרון EDTA טריפסין 0.25% עם 10 מ"ל של תרבות בינוני (LG-DMEM בתוספת 10% FBS, גנטמיצין µg/mL 50 ו- 1.5 µg/mL ampothericin B). הערה: לזרום cytometry ניתוח שימוש נפוץ ASC סמני פני ובידול tri-השושלת מבחני היו שבוצעה בעבר, חשף כי השיקופיים מבודדים באמצעות זה פרוטוקול מוצגים ASC מאפיינים ספציפיים21,22.</li>
	<li>לשטוף את התאים עם 10 מ"ל של תרבות בינוני (LG-DMEM בתוספת 10% FBS, גנטמיצין µg 50/mL ו- 1.5 µg/mL ampothericin B) עבור בקבוקון T175 centrifuge התאים עבור 8 דקות ב 250 x g. הסר את תגובת שיקוע, resuspend תאי 1 מ"ל של תרבות בינוני. לספור את התאים עם hemocytometer.</li>
	<li>צלחת התאים T175 מבחנות תרבות-צפיפות של תאים/cm 8,0002.</li>
	<li>להקפיא את השיקופיים הנותרים של חנקן נוזלי עם 10% דימתיל סולפוקסיד (דימתיל סולפוקסיד) תרבות בינוני לפני שימוש נוסף.</li>
</ol>2. עולה גיליון הכנה
<ol><li>מראש מעיל תרבות תרמו מגיב מנות (3.5 ס"מ קוטר) עם 1 מ"ל של FBS ולאחר מכן מקם את הכלים בתוך אינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפחות לפני תא זריעה.</li>
	<li>Trypsinize השיקופיים באמצעות פתרון EDTA טריפסין 0.25% למשך 3-5 דקות (3 מ"ל על בקבוקון תרבות T175). אם יש גושים תא כלשהו לאחר trypsinization, לסנן את התאים דרך מסנן 100 מיקרומטר לפני שספר.</li>
	<li>לנטרל את הפתרון טריפסין עם LG-DMEM בתוספת 10% FBS (10 מ"ל על בקבוקון T175), צנטריפוגה התליה תא במשך 8 דקות ב 250 x g... להסיר את תגובת שיקוע, resuspend תאי 1 מ"ל של LG-DMEM בתוספת 10% FBS.</li>
	<li>לאחר ציפוי כלים תרבות תרמו מגיב עם FBS, להעביר את הכלים החממה צלחת התחממות כדור הארץ ב 37 מעלות צלזיוס ולהסיר FBS מתוך קערה.</li>
	<li>השיקופיים זרע-תאים/cm 400,0002 (בסך הכל, 3.52 תאים6 × 10, מעורבבת עם 2 מ של תרבות בינוני לכל מנה).</li>
	<li>בזהירות להפיץ את התאים בצורה אחידה ככל האפשר על ידי נדנוד בעדינות את המנה.</li>
	<li>תרבות ASC גיליונות עבור h 48-37 מעלות צלזיוס ב אווירה לח עם 5% CO2. הערה: לנסות למזער את פתיחת הדלת של החממה לאחר זריעה השיקופיים כדי למנוע טיפות טמפרטורה העלול להפריע היווצרות גיליון ASC או לגרום התנתקות מוקדמת של גליונות ASC בנוי.</li>
</ol>3. חלקית קיצור קיבה, המעי הגס השקה
<ol><li>זירוז ולשמור על חולדות זכרים Wistar (במשקל בין 250-350 גר') עם 1 ליטר/דקה של איזופלוריין (1.5-5%)/oxygen באינהלציה ולהזריק 0.05 מ"ג/ק"ג. הבופרנורפין intramuscularly.</li>
	<li>לאחר החיות תחת הרדמה כללית, להעריך את עומק הרדמה באמצעות בדיקת רפלקס. להחיל משחה העין המכילים ויטמין A לעיניים למניעת יובש. כאשר ההרדמה נחשב מספיק לניתוח, גילוח ורחיצה כירורגית הכן את הבטן על ידי גילוח שערות, ריסוס אזור כירורגית פעמיים עם 70% אתנול. לעטוף את הבטן עם וילונות נייר סטרילי. שימוש בטכניקה אספטית ולתחזק את שדה סטרילי במהלך הליך כירורגי לגמרי.</li>
	<li>עושים חתך בבטן קו האמצע של 5 ס"מ עם גודל להב כירורגי סטרילי 10 ולהרחיב את החתך עם קורות חיים. לזהות exteriorize המעי הגס, שתשלח המעי הגס מהשארית חלל הבטן עם פדים בטעימת מלוחים. לזהות באמצע צודק, ולאחר כשנשארו העורקים מעינה מצע המעי, בוטה לנתח סביב כל ספינה וספינה באמצעות יתוש האלסטד מאתרים ומפסיקים את כל כלי בודדים עם משי קלועה נספגים 4 0.</li>
	<li>לבודד את המקטע הגס בין 1.0 ס מ aborally אל המעי 0.5 ס מ מעל עורק מצע המעי העליון סימטרית. Transect דרך המעי הגס בריא באמצעות קורות חיים. לאחר כריתה מקטע מעי, להביא לקרע, קצוות המעי הגס יחד על ידי החדרת שני ספוגיות כותנה ארוכה הטרנס-אנלית דרך המעי הגס דיסטלי ולאחר מכן לתוך סוף המעי הגס הפרוקסימלית.</li>
	<li>באמצעות מיקרוסקופ כירורגי, ליצור לחיבור תעלות end-to-end sutured דיו על ידי אחד-שכבת היפוך תפירת בעזרת תפרים קטע 5 (המוזרק monofilament פוליאמיד 8/0). מקום התפרים קטע דרך כל השכבות של הקיר המעי הגס ומקם את extraluminally קשרים.</li>
	<li>לחלק את החולדות באקראי שליטה או קבוצה גיליון ASC.</li>
</ol>4. ASC גיליון השתלת
<ol><li>לאפשר את הכלים תרבות להתקרר לטמפרטורת החדר 40 דקות לפני ההשתלה ויוו , כדי להקל על ניתוק גיליון ASC. הערה: לאחר הניתוק, גליונות ASC לכווץ כ 2 ס מ קוטר. ASC גיליון הכדאיות נשאר גבוה לפחות 3-6 שעות לאחר ניתוק20.</li>
	<li>הסר את תרבות בינוני והחלף אותו עם 1 מ"ל של נסיוב חינם LG-DMEM.</li>
	<li>בעדינות לתפוס העיטורים של הגיליון עולה עם מלקחיים atraumatic ומניחים בצד הצלחת של הגיליון עולה מעל הקו anastomotic.</li>
	<li>בזהירות כדי למתוח את עולה גיליון כ 0.25 ס מ מעל ומתחת לקו anastomotic באמצעות מלקחיים atraumatic לעטוף הסדין סביב המעי הגס. הרם את המעי הגס עד עטיפת הגיליון ASC מסביב בצד הגבי. הערה: ASC גליונות באופן ספונטני לדבוק הקו anastomotic, אין צורך להשתמש בדבק רקמות או כל biomaterial אחרים. קבוצת הביקורת לא מקבל כל טיפול נוסף.</li>
	<li>הסר את ספוגיות כותנה ולשנות את כפפות וכלי נגינה. החלף את המעי הגס בבטן. סגור הבטן-linea alba עם שכבה אחת של פועל באמצעות תפרים שנספג קלוע polyglycolic חומצה 5/0. תפר את subcutis, cutis ביחד בשכבה אחת של פועל באמצעות תפרים שנספג קלוע polyglycolic חומצה 5/0.</li>
</ol>5. לאחר הניתוח והערכת מעקב
<ol><li>מיד נתרענן החיות עם זריקה תת עורית של 5 מ"ל תמיסת מלח חמים במשככי. מקם את החיות מתחת למנורת חום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף ולנטר את סימני החיים עד חיות להכרה מספקת כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. הערה: בעלי חיים, כי עבר ניתוח לא הוחזרו לחברה של בעלי חיים אחרים עד החלים לחלוטין. לאחר התאוששות, לאפשר גישה חופשית למים, צ'או עכבר רגיל. לשיכוך כאבים לאחר ניתוח, לנהל 0.05 מ"ג/ק"ג. הבופרנורפין subcutaneously כל 6-8 h במשך 3 ימים. אנטיביוטיקה לא נוהלו בכל עת במחקר זה.</li>
	<li>להשיג יומי הקליני הערכות של בריאות ומשקל. במקרה של ציון נמוך מאוד בריאות או הרזיה חמורה, חיות צריך להרדימם מאת מפצעי דקירה הלב עדיין תחת הרדמה.</li>
	<li>ביום שלאחר הניתוח 3 או יום 7, עזים ומתנגד העכברושים שוב עם 1 ליטר/דקה של איזופלוריין (1.5-5%)/oxygen באינהלציה מבלי. הבופרנורפין, ולבצע re-פתיחת בטן עם חתך בצורת U. בדוק את הבטן על הסימנים של דלקת הצפק, stricture, הדבקויות סיביים, הנוכחות של אבצס. ציון דירוג הסיכון של הדבקויות, מורסה על הבטן וגם באזור anastomotic.</li>
	<li>לקבוע את הלחץ המתפרצת anastomotic על ידי insufflation האוויר קטע סגור של המעי הגס כולל ההשקה. רישום לחץ האוויר והמקום של קרע כאשר האוויר הראשון לדלוף כ מתפוצץ לחץ.</li>
	<li>הסרת המעי הגס כל חיה שהקריבה עצמה ולתקן על חתוך קטע של המעי הגס - המכיל ההשקה המעי הגס - עם 4% buffered פורמלדהיד, בעקבות פרפין הטבעה וחיתוך המעי הגס למקטעים עבה μm 4.</li>
	<li>המתת חסד החיות תוך בהרדמה ישירות אחרי אוסף של המקטע השקה מאת מפצעי דקירה בלב. לאשר מוות בעלי חיים עם העדר נשימה תנועה ללא היסוס.</li>
	<li>מבצעים stainings פתולוגיה Hematoxylin & אאוזין ו Picro סיריוס אדום, immunohistochemical stainings עם נוגדנים נגד המיטוכונדריה אנושי, תאי אנדותל של עכברוש (anti-CD34) ותאים של מערכת החיסון (CD3 +, CD163 +.).</li>
	<li>Digitalize השקופיות לבדיקה ממוחשבת ולהשוות את קבוצות בעלי חיים.</li>
</ol>

<ol><li>Kawahara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-incision+laparoscopic+right+colectomy+for+recurrent+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatogastroenterology%22%5BJournal%5D)">Single-incision laparoscopic right colectomy for recurrent Crohn's disease.</a> Hepatogastroenterology. 57 (102-103), 1170-1172 (2010).</li>
<li>Saia, M., Buja, A., Mantoan, D., Agresta, F., Baldo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colon+Cancer+Surgery%3A+A+Retrospective+Study+Based+on+a+Large+Administrative+Database%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Laparo+Endo+Per%22%5BJournal%5D)">Colon Cancer Surgery: A Retrospective Study Based on a Large Administrative Database.</a> Surg Laparo Endo Per. 26 (6), e126-e131 (2016).</li>
<li>Snijders, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+the+risk+for+anastomotic+leakage%2C+the+postoperative+mortality+caused+by+leakage+in+relation+to+the+overall+postoperative+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of the risk for anastomotic leakage, the postoperative mortality caused by leakage in relation to the overall postoperative mortality.</a> Eur J Surg Oncol. 38 (11), 1013-1019 (2012).</li>
<li>Daams, F., Luyer, M., Lange, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+anastomotic+leakage%3A+aspects+of+prevention%2C+detection+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroentero%22%5BJournal%5D)">Colorectal anastomotic leakage: aspects of prevention, detection and treatment.</a> World J Gastroentero. 19 (15), 2293-2297 (2013).</li>
<li>Testini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+pericardium+patch+wrapping+intestinal+anastomosis+improves+healing+process+and+prevents+leakage+in+a+pig+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Bovine pericardium patch wrapping intestinal anastomosis improves healing process and prevents leakage in a pig model.</a> PLoS One. 9 (1), e86627(2014).</li>
<li>Kilroy, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+profile+of+human+adipose-derived+stem+cells%3A+expression+of+angiogenic%2C+hematopoietic%2C+and+pro-inflammatory+factors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cytokine profile of human adipose-derived stem cells: expression of angiogenic, hematopoietic, and pro-inflammatory factors.</a> J Cell Physiol. 212 (3), 702-709 (2007).</li>
<li>Mussano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+Factor+Profile+Characterization+of+Undifferentiated+and+Osteoinduced+Human+Adipose-Derived+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Growth Factor Profile Characterization of Undifferentiated and Osteoinduced Human Adipose-Derived Stem Cells.</a> Stem Cells Int. , 6202783(2017).</li>
<li>Hassan, W. U., Greiser, U., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+adipose-derived+stem+cells+in+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Role of adipose-derived stem cells in wound healing.</a> Wound Repair Regen. 22 (3), 313-325 (2014).</li>
<li>Shudo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addition+of+mesenchymal+stem+cells+enhances+the+therapeutic+effects+of+skeletal+myoblast+cell-sheet+transplantation+in+a+rat+ischemic+cardiomyopathy+model%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Addition of mesenchymal stem cells enhances the therapeutic effects of skeletal myoblast cell-sheet transplantation in a rat ischemic cardiomyopathy model.</a> Tissue Eng Pt A. 20 (3-4), 728-739 (2014).</li>
<li>Otsuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+stem+cell+sheets+improved+cardiac+function+in+the+rat+myocardial+infarction%2C+but+did+not+alter+cardiac+contractile+responses+to+beta-adrenergic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res%22%5BJournal%5D)">Adipose stem cell sheets improved cardiac function in the rat myocardial infarction, but did not alter cardiac contractile responses to beta-adrenergic stimulation.</a> Biomed Res. 36 (1), 11-19 (2015).</li>
<li>Hamdi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epicardial+adipose+stem+cell+sheets+results+in+greater+post-infarction+survival+than+intramyocardial+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Epicardial adipose stem cell sheets results in greater post-infarction survival than intramyocardial injections.</a> Cardiovasc Res. 91 (3), 483-491 (2011).</li>
<li>Cerqueira, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+stem+cells+cell+sheet+constructs+impact+epidermal+morphogenesis+in+full-thickness+excisional+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Human adipose stem cells cell sheet constructs impact epidermal morphogenesis in full-thickness excisional wounds.</a> Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).</li>
<li>Perrod, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Sheet+Transplantation+for+Esophageal+Stricture+Prevention+after+Endoscopic+Submucosal+Dissection+in+a+Porcine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cell Sheet Transplantation for Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection in a Porcine Model.</a> PLoS One. 11 (3), e0148249(2016).</li>
<li>Pascual, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+in+biosutures+do+not+improve+healing+of+experimental+colonic+anastomoses%5BTitle%5D)+AND+%22Brit+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived mesenchymal stem cells in biosutures do not improve healing of experimental colonic anastomoses.</a> Brit J Surg. 95 (9), 1180-1184 (2008).</li>
<li>Yoo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-tissue-derived+Stem+Cells+Enhance+the+Healing+of+Ischemic+Colonic+Anastomoses%3A+An+Experimental+Study+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Korean+Soc+Coloproctol%22%5BJournal%5D)">Adipose-tissue-derived Stem Cells Enhance the Healing of Ischemic Colonic Anastomoses: An Experimental Study in Rats.</a> J Korean Soc Coloproctol. 28 (3), 132-139 (2012).</li>
<li>Okano, T. <a target="_blank" href="http://europepmc.org/abstract/med/17432182">Cell sheet engineering.</a> Rinsho Shinkeigaku. 46 (11), 795-798 (2006).</li>
<li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+cell+sheet+technique+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Rep%22%5BJournal%5D)">Application of the cell sheet technique in tissue engineering.</a> Biomed Rep. 3 (6), 749-757 (2015).</li>
<li>Labbe, B., Marceau-Fortier, G., Fradette, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sheet+technology+for+tissue+engineering%3A+the+self-assembly+approach+using+adipose-derived+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell sheet technology for tissue engineering: the self-assembly approach using adipose-derived stromal cells.</a> Methods Mol Biol. 702, 429-441 (2011).</li>
<li>Sukho, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cell+Sheet+Application+for+Tissue+Healing+In+Vivo%3A+A+Systematic+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B-Re%22%5BJournal%5D)">Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet Application for Tissue Healing In Vivo: A Systematic Review.</a> Tissue Eng Part B-Re. , (2017).</li>
<li>Sukho, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+adipose+stem+cell+sheets+on+colon+anastomotic+leakage+in+an+experimental+model%3A+Proof+of+principle%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Effects of adipose stem cell sheets on colon anastomotic leakage in an experimental model: Proof of principle.</a> Biomaterials. 140, 69-78 (2017).</li>
<li>Verseijden, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+capacity+of+human+adipose-derived+stromal+cells+during+adipogenic+differentiation%3A+an+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Angiogenic capacity of human adipose-derived stromal cells during adipogenic differentiation: an in vitro study.</a> Tissue Eng Pt A. 15 (2), 445-452 (2009).</li>
<li>Sukho, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Cell+Seeding+Density+and+Inflammatory+Cytokines+on+Adipose+Tissue-Derived+Stem+Cells%3A+an+in+Vitro+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Effect of Cell Seeding Density and Inflammatory Cytokines on Adipose Tissue-Derived Stem Cells: an in Vitro Study.</a> Stem Cell Rev. 13 (2), 267-277 (2017).</li>
<li>Surface, N. U. Cell Harvesting by Temperature Reduction. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://tools.thermofisher.com/content/sfs/brochures/AppNote-Nunc-UpCell-N20230.pdf">https://tools.thermofisher.com/content/sfs/brochures/AppNote-Nunc-UpCell-N20230.pdf</a> (2008).</li>
<li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+anastomotic+leakage+caused+by+insufficient+suturing+after+partial+colectomy%3A+a+new+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Infect+%28Larchmt%29%22%5BJournal%5D)">Colorectal anastomotic leakage caused by insufficient suturing after partial colectomy: a new experimental model.</a> Surg Infect (Larchmt). 15 (6), 733-738 (2014).</li>
<li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+colorectal+anastomotic+leakage+with+tissue+adhesive+in+experimental+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Reducing colorectal anastomotic leakage with tissue adhesive in experimental inflammatory bowel disease.</a> Inflamm Bowel Dis. 21 (5), 1038-1046 (2015).</li>
<li>Servier. Smart servier medical art. , http://smart.servier.com (2017).</li>
<li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+anastomotic+leakage+by+reinforcement+of+colorectal+anastomosis+with+cyanoacrylate+glue%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Reducing anastomotic leakage by reinforcement of colorectal anastomosis with cyanoacrylate glue.</a> Eur Surg Res. 50 (3-4), 255-261 (2013).</li>
<li>Aysan, E., Dincel, O., Bektas, H., Alkan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypropylene+mesh+covered+colonic+anastomosis.+Results+of+a+new+anastomosis+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Polypropylene mesh covered colonic anastomosis. Results of a new anastomosis technique.</a> Int J Surg. 6 (3), 224-229 (2008).</li>
<li>Suarez-Grau, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinogen-thrombin+collagen+patch+reinforcement+of+high-risk+colonic+anastomoses+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastrointest+Surg%22%5BJournal%5D)">Fibrinogen-thrombin collagen patch reinforcement of high-risk colonic anastomoses in rats.</a> World J Gastrointest Surg. 8 (9), 627-633 (2016).</li>
<li>Kobayashi, J., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+a+thermoresponsive+cell+culture+dish%3A+a+key+technology+for+cell+sheet+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Technol+Adv+Mat%22%5BJournal%5D)">Fabrication of a thermoresponsive cell culture dish: a key technology for cell sheet tissue engineering.</a> Sci Technol Adv Mat. 11 (1), 014111(2010).</li>
<li>Elloumi-Hannachi, I., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sheet+engineering%3A+a+unique+nanotechnology+for+scaffold-free+tissue+reconstruction+with+clinical+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Cell sheet engineering: a unique nanotechnology for scaffold-free tissue reconstruction with clinical applications in regenerative medicine.</a> J Intern Med. 267 (1), 54-70 (2010).</li>
<li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nat Med. 12 (4), 459-465 (2006).</li>
<li>Makarevich, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+angiogenesis+in+ischemic+skeletal+muscle+after+transplantation+of+cell+sheets+from+baculovirus-transduced+adipose-derived+stromal+cells+expressing+VEGF165%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced angiogenesis in ischemic skeletal muscle after transplantation of cell sheets from baculovirus-transduced adipose-derived stromal cells expressing VEGF165.</a> Stem Cell Res Ther. 6, 204(2015).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי המחקר בוצע בהיעדר יחסים מסחריים או פיננסי שיכול להחשב בתור ניגוד אינטרסים פוטנציאליים.

זליגת anastomotic הוא האירוע לוואי החמורה ביותר בעקבות צוות עם השקה ראשי. טכניקות אופטימלית למניעת הפרעה anastomotic ודליפה עדיין חסרים. יישום מקומי של מערך של biomaterials נערכה, עם שלל תוצאות25,26,27. המטרה של טיפולים תא היא להקל על רקמות תיקון על ידי החלפת רקמות או הגירוי של ריפוי מקומי באמצעות הפרשת paracrine.
במודל זה עכברוש, עולה גיליון השתלת היה מוצלח מבחינה טכנית. הערכה קלינית, היסטולוגית הפגי...

קיצור קיבה חלקית עם השקה ראשי הוא ניתוח נפוץ שבוצעו שניתן להיעשות למחלות רבות להשפיע על המעי הגס כגון סרטן המעי הגס, מחלת קרוהן, דיברטיקוליטיס1,2. הכי חששתי סיבוך לאחר ההשקה המעי הגס היא דליפה anastomotic3. למרות מספר גורמי סיכון הקשורים עם דליפות anastomotic זוהו, פתרונות למניעת זליגת נשארים unkown4,5.
רקמת שומן-derived סטרומה תאים (השיקופיים) קשורים עם תכונות אנטי דלקתיות עם מחלות6,7, מה שהופך את התאים האלה מבטיח מועמדים טיפולים משובי8. היעילות של השיקופיים כדי לקדם ריפוי רקמות הוצגה ברקמות שונות כגון שריר הלב, העור לוושט9,10,11,12,13. עם זאת, ישנם כמה דיווחים על השימוש השיקופיים כדי לקדם ריפוי מעיים. השתלת המקומי של השיקופיים אל המעי הגס ניסיוני. חיבור באמצעות biosutures מצופים ASC או זריקות serosal של השיקופיים הראו שיפור או ריפוי14 או לא מנעו anastomotic זליגת למרות יותר לחיוביות anastomotic ריפוי15.
השתלת המקומי של השיקופיים ההשעיה או בשילוב עם biomaterials יכול להיות משויך תא לא מספיקות השמירה או של חלוקת התאים המושתלים11לקוי. 16,טכנולוגיה של תא גליון17 מציע שיטה חדשנית של עולה משלוח18,19. לפיכך, במחקר הקודם, גישה מוזרה הוצע באיזה השיקופיים מאורגן בתא גליון יכול להיות מיושם על ניסיוני השקה המעי הגס20. מחקר זה הראה כי השתלת גיליון ASC הוא מוצלח בהפחתת בריחת השקה המעי הגס לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים. מאמר זה מדווח טכניקה כירורגית השתלת והכנה של גיליון ASC.

<table><tbody><tr><td>LG DMEM</td><td>Gibco, טכנולוגיות חיים</td><td>22320022</td><td>בידוד ותרבות ASC</td></tr><tr><td>קולגנאז סוג I</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>17100-01</td><td>ASC</td></tr><tr><td>בידוד בקר סרום אלבומין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td>ASC בידוד</td></tr><tr><td>סרום בקר</td><td>עוברי Gibco, Life technologies</td><td>10270-106</td><td>FBS, בידוד ותרבית ASC</td></tr><tr><td>3% אצטי חומצה עם מתילן כחול</td><td>טכנולוגיות תאי גזע</td><td>7060</td><td>בידוד ASC</td></tr><tr><td>ג'נטמיצין</td><td>ג'יבקו, טכנולוגיות חיים</td><td>15750-037</td><td>בידוד ותרבית ASC</td></tr><tr><td>אמפותריצין B</td><td>Gibco, טכנולוגיות חיים</td><td>15290-018</td><td>שייקר בידוד ותרבות ASC</td></tr><tr><td>(שייקר סביבתי Gallenkamp דגם 10X 400)</td> <td>בידוד Akribis Scientific</td><td>F240</td><td>ASC</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Hettichlab</td><td>Rotina380</td><td>בידוד ותרבית</td></tr><tr><td>ASC מאגר פוספט מלח</td><td>Gibco, טכנולוגיות חיים</td><td>14190-094</td><td>PBS, בידוד ותרבות ASC</td></tr><tr><td>חומצה אסקורבית-2-פוספט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8960</td><td>ASC בידוד ותרבית גורם</td></tr><tr><td>גדילה פיברובלסטים רקומביננטי אנושי 2</td><td>AbD Serotec</td><td>AF-100-15</td><td>FGF2, בידוד ותרבות ASC</td></tr><tr><td>Trypsin EDTA</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>25200-056</td><td>תרבית ASC</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D2650-5x</td><td>DMSO, הקפאת ASC</td></tr><tr><td>כלי תרבית רספונסיביים תרמו-רספונסיביים</td><td>Nunc Thermo Scientific</td><td>174904</td><td>הכנת יריעות ASC</td></tr><tr><td>משי קלוע שאינו נספג 4/0</td><td>B ניתוח 21151042 בראון</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מונופילמנט שאינו נספג פוליאמיד 8/0</td> B <td>ניתוח</td><td>G1118170 בראון</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פוליגליקולית קלועה נספגת 5/0</td><td>B ניתוח C1048207 בראון</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

השתלת תאי רקמת שומן-derived גיליון כדי להפחית את זליגת לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

זליגת anastomotic הוא סיבוך נוראי לאחר ניתוח המעי הגס. למרות שיטות למניעת זליגת יש רמות שונות של יעילות קלינית, הם עד עכשיו לא מושלם פתרונות. טיפול בתאי גזע באמצעות גליונות ASC יכול לספק פתרון לבעיה זו. השיקופיים נחשבים כמו מבטיח מועמדים לקידום רקמת ריפוי בגלל תכונותיהם עם מחלות, immunomodulatory. כאן, אנו מספקים שיטות כדי לייצר הגליונות ASC בצפיפות גבוהה, אשר מושתלים על גבי השקה המעי הגס במודל חולדה כדי להפחית לדליפת. השיקופיים נוצר תא גליונות במנות תרבות תרמו מגיב זה יכול להיות מנותק בקלות. ביום של השתלת, בוצעה כריתת חלקית עם השקה המעי הגס 5-תפר. חיות הושתלו מייד עם גיליון 1 עולה לכל חולדה. גליונות ASC באופן ספונטני דבקה ההשקה ללא בדבק כלשהו, בתפר או biomaterial כלשהו. קבוצות בעלי חיים הוקרבו 3 ו 7 ימים במשככי. בהשוואה לבעלי המושתלים, השכיחות של אבצס anastomotic ודליפה היה גבוה בבעלי השליטה. במודל שלנו, השתלת של גיליונות עולה לאחר ההשקה המעי הגס היה מוצלח עם קצב דליפת נמוך יותר.

תרשים זרימה של מחקר זה המתאר ASC גיליון תרבות והן את ההליך של צוות, השקה מוצג באיור1. איור 2 מציג ASC גיליון מורפולוגיה מיקרוסקופית ואת המראה מאקרוסקופית של הגיליון ASC במהלך ואחרי הניתוק. איור 3 מראה את השלבים השונים של ניתוק גיליון ASC והשתלות. איור 4 מראה הנוכחות של הגיליון ASC קו anastomotic ומניעה של זליגת 3 ימים במשככי.
<p class="jove_content" fo:keep-together....

ההכנה והשתלות של רקמת שומן נגזר תאי גזע (ASC) מגיליונות דיו sutured. חיבור המעי הגס במודל חולדה מוצג. יישום זה הרומן מראה כי גיליונות ASC יכולים להפחית זליגת השקה המעי הגס.

השתלת תאי רקמת שומן-Derived גיליון כדי להפחית את זליגת לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

מכיוון שהם מניחים השפעה חיובית על ריפוי רקמות, יריעות ASC נבדקו במודלים רבים של מחלות, כגון אוטם שריר הלב. ניסוי זה מראה כי ניתן להשתמש ביריעות ASC תוך בטן ולמרוח על המעי. היתרון העיקרי של יריעות ASC הוא שאין צורך בחומרים סינתטיים.בנוסף, השתלת יריעות ASC קלה יחסית לביצוע, עם מעט תרגול. יישום חדשני זה של השתלת יריעות ASC פותח כדי למנוע דליפה לאחר כריתת המעי, ומציע צעד ראשון לאסטרטגיה טיפולית חדשה. יריעות ASC המיושמות על אנסטומוזה במעי הוכחו כמבטיחות במניעת דליפה.ניתן ליישם יריעות ASC גם על איברים תוך-בטניים אחרים, כגון דרכי השתן. התחל בניתוח רקמת שומן בטנית תת עורית אנושית לחתיכות של 0.5 ס"מ, עם להב כירורגי סטרילי בגודל 10, מלקחיים לרקמות אדסון-בראון ומספריים של מצנבאום. שקלו את הכמות הכוללת של רקמה מנותחת בבקבוק זכוכית סטרילי.יש להוסיף 30 מ"ל של חומר בידוד לבקבוק. ולעכל את רקמת השומן המנותחת באינקובטור שייקר ב-150 סל"ד ו-37 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר שעה מחלקים את תמיסת הרקמה המעוכלת לצינורות של 50 מ"ל, וצנטריפוגה את הצינורות למשך 10 דקות בטמפרטורה של 390 גרם.לאחר הצנטריפוגה הסר את הסופרנטנט.הוסף מדיום כדי להשהות מחדש את כדורי התא, והוסף עוד מדיום תרבית, עד 45 מ"ל. צנטריפוגה את התאים המשולבים למשך חמש דקות ב-390 גרם והסר את הסופרנטנט. השעו מחדש את גלולת התא עם 10 מ"ל מדיום תרבית.ולסנן את מתלה התאים דרך מסנן 100 מיקרון. הוסף 50 ליטר של תמיסת מתילן כחולה של חומצה חומצית 3%, ל -50 ליטר של תרחיף תאים, כדי לכינים כדוריות דם אדומות. לאחר ערבוב התמיסה, פיפטה 10 ליטר על המוציטומטר וספרו את התאים.צלחת התאים בצפיפות של 40000 תאים לסמ"ר, בבקבוק T175 המכיל מדיום תרבית. ולדגור על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה עם 5% CO2 למשך 24 שעות. למחרת, שטפו את התאים במי מלח חמים עם פוספט כדי להסיר פסולת תאים.לאחר מכן, החלף את המדיום במדיום תרבית FBS של 10%, בתוספת חומצה אסקורבית-2-פוספט טרי וגורם גדילה פיברובלסטים רקומביננטי אנושי שני. דגירה עד שהתאים מגיעים למפגש של 90%. תת-תרבית של תאי גזע שומנים במפגש של 90%, תוך שימוש בתמיסה סטנדרטית של 0.25% טריפסין-EDTA.לאחר שלוש עד חמש דקות יש לנטרל את תמיסת 0.25%Trypsin-EDTA עם 10 מ"ל מדיום תרבית. מעבירים לצינור צנטריפוגה, וצנטריפוגה את התאים למשך שמונה דקות ב -250 גרם.הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את התאים ב -1 מ"ל של מדיום תרבית. לאחר ספירת התאים עם המוציטומטר, צלחו את התאים בצלוחיות תרבית T175, בצפיפות של 8000 תאים לסמ"ר.הקפיאו את שאר ה-ASCs בחנקן נוזלי, עם 10% דימתיל סולפוקסיד במדיום תרבית לפני שימוש נוסף. ציפוי מקדים של כלי תרבית מגיבים תרמו בקוטר 3.5 ס"מ, עם 1 מ"ל סרום בקר עוברי. לאחר מכן מניחים את הכלים בחממה בחום של 37 מעלות צלזיוס, למשך 30 דקות לפחות לפני הזריעה.כדי לסייע להידבקות ASC למנה המגיבה לחום, ולהפחית את הסיכון לניתוק מוקדם של יריעות ASC בתרבית, יש לצפות את המנה המגיבה לחום בסרום בקר עוברי לפני זריעת התאים. נסה ASCs כמו קודם, אם יש גושי תאים לאחר טריפסיניזציה, סנן את התאים דרך מסנן של 100 מיקרון לפני הספירה. מוציאים את הכלים מהחממה, ומעבירים לצלחת מחממת בחום של 37 מעלות צלזיוס.הסר FBS מהצלחת. לאחר השעיית כדור התא ב-LG DMEM, עם 10% FBS, וספירת התאים, יש לדלל 3.52 פעמים 10 ל-6 ASCs ב-2 מ"ל של מדיום תרבית למנה, כדי לזרוע 400,000 תאים לסמ"ר בכל צלחת של 3.5 ס"מ. מחלקים בזהירות את התאים בצורה אחידה ככל האפשר, על ידי הנפת המנה בעדינות.לאחר מכן, תרבית יריעות ASC במשך 48 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה עם 5% CO2. ביום ההשתלה, אפשר לכלי התרבות להתקרר לטמפרטורת החדר 40 דקות לפני השתלת in vivo כדי להקל על ניתוק יריעות ASC. לאחר הקירור, הסר את מצע התרבית והחלף אותו ב-1 מ"ל של LG DEM ללא סרום.כדי להשתיל את יריעת התא, תפסו בעדינות את קצה יריעת ה-ASC בעזרת מלקחיים אטראומטיים והניחו את צד המנה של יריעת ה-ASC על גבי הקו האנטומוטי. טיפול עדין ביריעות ומיקום נכון של יריעות חיוניים כדי להבטיח השתלת יריעות שלמות מוצלחת. מתחו בזהירות את יריעת ה- ASC לכ- 0.25 ס"מ מעל ומתחת לקו האנטומוטי.עטפו את הסדין סביב המעי הגס, הרימו את המעי הגס, כדי לעטוף את יריעת ה- ASC סביב הצד הגב. חיות ביקורת, שלא קיבלו יריעות ASC מושתלות, מציגות דליפת צואה ליד הקו האנטומוטי, המסומן על ידי החץ הלבן ביום השלישי שלאחר הניתוח. בעלי חיים אלה עם יריעות ASC מושתלות, המסומנות על ידי החץ השחור, הראו דליפת צואה מופחתת והיווצרות מורסה ביום השלישי שלאחר הניתוח.אותה תוצאה נצפתה שבעה ימים לאחר הניתוח. תמונה זו מציגה חתך מייצג של אתר האנסטומוזה של המעי הגס בבעל חיים מושתל מוכתם ב-H ו-E.ניתן לזהות את מבנה היריעה באתר האנסטומוזיס, עד שבעה ימים לאחר הניתוח. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך מספר דקות אם היא מבוצעת כראוי.גיליון ASC יידבק באופן ספונטני למשטח התא האפס של המעי הגס, אין צורך להשתמש בדבק או תפר כדי להתאים ליריעת ה- ASC. לאחר צפייה בסרטון זה אתה אמור להבין היטב כיצד להכין ולהשתיל יריעות ASC על אנסטומוזה של המעי הגס בחולדות, למניעת דליפה לאחר כריתת מעי גס חלקית.

transplantation-adipose-tissue-derived-stem-cell-sheet-to-reduce

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים טכניקה לבידוד וטיפוח תאי גזע שמקורם בשומן (ADSCs) המסומנים באופן פלואורסצנטי מרקמת השומן של קשת פריאורטית. לאחר הבידוד, NCADSCs מזוהים, ממוינים באמצעות מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות, ולאחר מכן תרבית על צלחת, קידום התפשטות תאים.

בידוד תאי גזע שמקורם בשומן מרקמת שומן פריאורטית מורין

ב2001, חוקרים באוניברסיטת UCLA תאר את בידודה של אוכלוסייה של תאי גזע בוגרים, המכונה תאי גזע שמקורם בשומן או ASCs, מרקמת שומן. מאמר זה מתאר את הבידוד של ASCs מlipoaspirates באמצעות פרוטוקול עיכול ידני, האנזימטית באמצעות collagenase.

בידוד ידני של תאי גזע שמקורם בשומן מLipoaspirates האדם

נגזר שומן בתאי גזע (השיקופיים) בקלות מבודדים, שנקטפו השומן של חולדות רגילה. גליונות ASC יכולים להיווצר באמצעות הנדסה תא גיליונות, יכול להיות מושתלים לתוך צוקר סוכרתית חולדות שומני מפגין מלא-עובי העור פגמים עם עצם חשופה והן מכוסות bilayer של עור מלאכותי.

יצירת והשתלות של גיליון נגזר שומן בתאי גזע (ASC) במודל של ריפוי פצע סוכרתי

מחקר זה מדווח על שיטה מוצלחת של תא סטרומה נגזרת רקמת שומן endoscopical (ADSC) -תווים השתלה למניעת היצרות ושט לאחר דיסקציה submucosal אנדוסקופית מורחבת (ESD) במודל של חזירים.

השתלת ADSC גליון למניעת היצרות לאחר מורחבת הושט Submucosal אנדוסקופי Dissection

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לפתח ויוו סרטן מודל של שימוש בטכנולוגיית תאי גליון. מודל כזה יכול להיות מאוד שימושי עבור הערכת הרפוי נגד סרטן.

חקר את הפוטנציאל של תא גזע Mesenchymal גיליון על הפיתוח של קרצינומה Hepatocellular In Vivo

מאמר זה מתאר שיטת השתלת להשתיל השתל בפטמות האפיתל התאים לתוך משטח שומן לבן של בעלי חיים הנמען. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לבחון את השפעות המארחים ו/או התורמים בהתפתחות האפיתל של הפטמות ומבטלת את הצורך בניקוי מראש, ובכך מרחיב את התועלת שבטכניקה זו.

חולדה השתלת תא האפיתל לתוך משטח שומן לבן הגלימה

שיטת השתלת איונים מכוסה שומן זו מתאימה לאיתור איים מושתלים בחלל התוך-צפק. יש לציין כי היא אינה דורשת שימוש בחומרים מחייבים ביולוגיים או בתפירה.

השתלת איון מכוסה שומן באמצעות רקמת שומן לבן אפידידימלית

פרוטוקול זה מתאר את השיטה להקמת מודל חולדה של pouchitis. מודל השקית האיליאלית נוצר על ידי ביצוע ניתוח אנסטומוזה אנאלי (IPAA) באמצעות טכניקות מיקרוכירורגיות. לאחר הניתוח, החולדה טופלה ב-4% דקסטרן סולפט נתרן (DSS) במשך 4 ימים.

מודל חולדה של פאוצ'יטיס לאחר כריתת פרוקטוקולקטומיה ואנסטומוזה אנאלי של כיס איליאלי באמצעות דקסטרן סולפט נתרן

כאן אנו מציגים פרוטוקול השתלת רקמת שומן לבן וחום המציע אסטרטגיה מבטיחה להיפוך תת-פוריות, השמנת יתר והיפרגליקמיה, תוך שיפור תפקוד הכליות בעכברי BTBR סוכרתיים והשמנת יתר.

שתלי שומן לבנים וחומים: גישה לתיקון ליקויים רבייתיים, מטבוליים וכלייתיים בעכברים שמנים שחורים ושזופים (BTBR)

כאן אנו מציגים שיטה סטנדרטית לבידוד יעיל של תאי גזע ומגדלי שומן שמקורם בשומן, המאופיינת בהפחתה של &gt;90% בזמן העיבוד, חיוניות תאית גבוהה ותאימות רחבה.

בידוד יעיל של תאי גזע ושומנים שמקורם בשומן מרקמת שומן חזיר

למדו להכין ולהשתיל גיליונות תאי גזע מרקמת שומן (ASC) על אנאסטומוזה קולורקטלית במודל עכברים. השיטה מפחיתה זליגה אנאסטומוטית ומשפרת ריפוי רקמות ללא חומרים סינתטיים.

השתלת תאי רקמת שומן-Derived גיליון כדי להפחית את זליגת לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים

גלה סרטונים נוספים