Name: דגם העכבר סרטן הלבלב Syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: חקור את השפעות האלקטרופורציה הבלתי הפיכה על סרטן הלבלב באמצעות דגם עכברים סינגני. שיטה זו מאפשרת הערכת צמיחת גידולים במערכת חיסונית תקינה ומספקת תובנות לגבי תגובת המערכת החיסונית לטיפול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

RRW קיבל תמיכה עבור זה לעבוד במענק מחקר שיתופי Translational ממומן על ידי דוושת סן דייגו פאדרס C3 סיבה (#PTC2017).

ניסויים בבעלי חיים כל לבצע הפעולות הבאות שפרוטוקול זה תאושר על ידי בהתאמה אכפת לי חיה מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC). כל ההליכים המתוארים כאן אושרו על ידי IACUC UCSD.
1. רכישת חיות הנמען
הערה: שורת התאים 4580 KPC-לוק הוקמה מגידול וביצועו LSL-קראסG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL-ROSA26 לוק / + העכבר (KPC), אשר הוא מודל הנדסה גנטית של PC על רקע C57BL/6. היתרון של הקו הסלולרי הוא והוא צורונים מבטא לוציפראז-הפעלת פיקוח על הגידול במודלים orthotopic. עם זאת, שורות תאים אחרים עשוי לשמש גם כל עוד הם תואמים הרקע הגנטי של העכברים הנמען.
<ol><li>לקבוע מראש את קבוצות הניסוי ואת המספר של בעלי חיים לכל קבוצה.</li>
	<li>בחר את הגיל (6 - 10 - בן שבועיים עכברים מומלץ) ומשמשת מין החיות בשימוש על פי ההשערה לבין הקו הסלולרי.</li>
</ol>2. התרבות תאים
<ol><li>שימוש Dulbecco המתואמת של הנשר בינוני (DMEM): תערובת מזין F12 מדיה (50: 50) המכיל 10% סרום שור עוברית (FBS) ו 1% סטרפטומיצין פניצילין אנטיביוטיקה (צמיחה מלאה מדיה) כדי לגדל תאים 4580 KPC-לוק.</li>
	<li>אם קפוא, להפשיר את התאים 4 ימים לפני ההשתלה הגידול.</li>
	<li>לגדל את התאים ב 37 ° C עם 5% CO לחות2 ו- 95% בתנאים אספטי.</li>
	<li>Trypsinize התאים עם 0.25% טריפסין למשך 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפני שהם מגיעים > 80% confluency ולנטרל את טריפסין על-ידי הוספת פעמיים את עוצמת הקול של צמיחה מלאה מדיה. הערה: תאים אלה אינם קובעים גידולים ביעילות בעכברים אם הם משמשים ב- 100% confluency או אם הם נמצאים passaged עבור יותר מ-12 שעות. לפיכך, מומלץ להקפיא את התאים על המעברים קודמות confluency אופטימלית.</li>
	<li>לספור את התאים באמצעות hemocytometer והמשך הגידול אינדוקציה אם נאותה מספרים קיימים (0.5 - 1 x 106 תאים/עכבר...). אם לא, הרחב את התאים עבור קטע נוסף עד מספרי הטלפון הנייד נאותה מתקבלים.</li>
</ol>3. אינדוקציה של גידולים קמ ר
<ol><li>להכין את החומרים הדרושים: P1000 P100 פיפטות וטיפים, מזרק 1-mL, 25 גרם ומחטים, קרום המרתף מטריקס (BMM), DMEM מדיה הבזליים, 1.5-mL צנטריפוגה צינורות. לשמור כל חומר סטרילי וקר (4 ° C) עד הסוף של ההליך. גם על קוצץ שיער, מטליות אלכוהול מוכנים לשימוש בבעלי חיים.</li>
	<li>Trypsinize (לפי שלב 2.4) לספור את התאים ו resuspend אותם על ריכוז של 2-4 x 107 תאים למ"ל של DMEM קר.</li>
	<li>הוסף אמצעי שווה של 100% BMM כדי להפוך השעיה התא האחרון ב- 50% BMM. עוצמת הקול הסופי צריך סכום 50 µL של התא השעיה על העכבר בכל הנדרש. הכינו 10% עודף כדי להכיל את שטח מת במזרק ועל שגיאות pipetting.</li>
	<li>להציב המתלים כרכים µL 550 מ ל 1.5 צנטריפוגה צינורות aliquot בקרח.</li>
	<li>לרסן את החיות (עכברים C57BL/6 זכר 6 - בן שבועיים) באמצעות restrainer או באופן ידני. הערה: לחלופין, עכברים יכול להיות מרדימים עם 2.5% איזופלוריין גז חמצן בספיקה של 2 ל'/דקה באמצעות מכשיר אידוי של דיוק.</li>
	<li>לגלח את האתר של הזרקה, אשר הוא עדיף על חיילינו מעל רגל, משתמש בטלוויזיה. בעזרת ספוגית אלכוהול, ניקוי האתר של הזרקת פעמיים.</li>
	<li>לצייר µL 250 תאים השעיה-ריכוז סופי של 1-2 x 107 תאים/מ ל מזרק קר 1-mL ולהסיר כל בועות אוויר על-ידי הזזת את הבוכנה למעלה ולמטה. מחט 25 גרם לצרף המזרק, הקפד למלא את החלל בתוך המחט.</li>
	<li>הכנס היטב את המחט מתחת לעור בזווית של 30 מעלות לגוף ליד לאגפים, מוודא שהמחט פירס לא חלל הצפק או את מערכת השרירים של הגפיים.</li>
	<li>לרדד את המחט מקבילה לגוף, ולשטח קמטים על העור. לאט לאט להחדיר 50 µL תא השעיה. . תחזיקי את המחט באתר של הזרקת 10 s כדי לאפשר את BMM לגבש כדי למנוע דליפה כלשהי.</li>
	<li>לסגת לאט את המחט שומרים. על זה מקביל ללא כל תנועה הצידה. בעדינות לנקות את האתר של הזרקת עם ספוגית אלכוהול ולשחרר את העכבר לדיור שלה. הערה: אם העכבר היה מרדימים במהלך ההליך, לפקח על החיה עד זה חוזר רפלקסים שקמה בעצמה אחרי שמפילים שלה.</li>
	<li>נטר את צמיחת הגידול באופן קבוע באמצעות מחוגה עד שהוא מגיע 5 מ מ קוטר.</li>
</ol>4. אינדוקציה של גידולים Orthotopic
<ol><li>להכין את החומרים הדרושים. אוטוקלב כלי כירורגי כמו מספריים, אזמלים, המחט נהגים, והצביע ומלקחיים שקצהו שטוח. שמור בהישג יד התפרים סטרילי (שנספג 6-0 ולא נספגים 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, העין סיכה, גאזה כותנה, 10% povidone יוד פתרון, וילונות כירורגי, כריות חימום, הבופרנורפין ו סוכנים הרדמה.</li>
	<li>המתת חסד עכבר התורם (רצוי של רקע אותו נדרש עבור דגם orthotopic) נושא גידול SQ KPC באמצעות תא מילוי איטי CO2 . לסלק את הגידול SQ בקפידה בתנאים סטריליים בשכונה BSL-2 באמצעות מלקחיים סטרילי ולא microscissors זמן קצר לפני orthotopic-השרשה. במהלך הגידול כריתה לטפל לא כדי לנקב חלל הצפק. ולשטוף את הגידול באופן מיידי עם 2 חילופי PBS סטרילי.</li>
	<li>באמצעות ואזמלי מנתחים סטרילי, מינצ הגידול נכרת לחתיכות3 1 מ מ למקם אותם על צלחת פטרי המכילות קר סטרילי DMEM מדיה הבזליים, לאחסן בקירור עד ההשרשה.</li>
	<li>לנהל את העכבר הנמען 0.05 - 1 מ"ג/ק"ג. הבופרנורפין כאבים גואנגצ'אנג, 30 דקות לפני הניתוח.</li>
	<li>עזים ומתנגד עכברים הנמען עם 2-3% איזופלוריין חמצן (2 ל'/דקה) באמצעות מכשיר אידוי של דיוק (או סוכנים אחרים הרדמה). תמשיך עכברים 37 ° C חימום pad עבור מכלול של ההליך. חומר סיכה חלות על העיניים כדי למנוע לייבוש. מבחן עומק הרדמה על ידי חוסר המזעזעות רפלקס בתחילה, ואשר המטוס כירורגית בהרדמה היעדרה של רפלקס פדלים קמצוץ הבוהן עדין. לשמור את ההרדמה במהלך כל תהליך כירורגי.</li>
	<li>הנח את העכבר על גבו, בעדינות להפוך את זה על הצד השמאלי שלו, כך נחשף בצד שמאל של הבטן. להסיר את שיער בטן של העכבר באמצעות קרם depilatory ולנקות עם גזה כדי להבטיח שאין שיער חינם מזין את החתך פוסט של הבטן. להכין את הבטן השמאלית ניתוח באמצעות 3 מחזורים של 10% povidone יוד ואחריו מגבונים אלכוהוליים לחטא את העור.</li>
	<li>באמצעות אזמל סטרילי, לבצע חתך רוחבי או עקיפה 1.5 ס מ של העור, 1 ס"מ משמאל האמצע, מתחת בית החזה, המדיאלי מעט את הטחול. לאחר מכן, להרחיב את החתך דרך מערכת השרירים בבטן, שיקוף החתך שטחית שמעליה.</li>
	<li>לאתר הטחול משתמש שטוח משופעת מלקחיים, בעדינות להחצין את זה של חלל הבטן. . משכי הטחול באמצעות של המוליך כותנה סטרילי, למצוא בזנב הלבלב מצורף בתחתית של הטחול.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים שקצהו שטוח, תמשוך בזנב הלבלב רוחבית.</li>
	<li>לאסוף פיסת גידול טחון דק אחד מן העכבר התורם עם קצה מחט סטרילית פיין (6-0) הפתולוגיים ומקם אותה בעזרת המלקחיים סטרילי.</li>
	<li>בעוד בעדינות היציבה בגוף/הזנב הלבלב רוחבית, הכנס את המחט של התפר המכיל מקטע הגידול לזנב של הלבלב. עוברים את התפר באיטיות דרך הרקמות, מחזיק את הגידול בקשר עם זנב הלבלב. להחיל אחד או שני תפרים נוספים בהתאם התמצאות החלקיק ביחס הרקמה.</li>
	<li>הסר את המחט לחלוטין מן הרקמה ולשמור את הלבלב/טחול המוחצנים של 60 נוספים s תוך פיקוח עבור סימנים של דימום או דליפה. לאחר מכן, להפנים אותם בעדינות לתוך חלל הבטן בעזרת מלקחיים בוטה.</li>
	<li>לסגור מערכת השרירים בבטן באמצעות גם בתפר שנספג 6-0 תפר רציף או מופרע וסגור צמוד העור באמצעות 3-0 עד 6-0 קטעה תפרים נספגים. להפסיק את ההרדמה בשלב זה.</li>
	<li>לאפשר את העכבר כדי לשחזר בכלוב בבית שלה עם גישה חופשית מזון ומים. מניחים את הכלוב על כרית החימום כדי להקל על שחזור. לפקח על סימנים חיוניים כגון נשימה, זלוף וכו ', במהלך תהליך ההחלמה.</li>
	<li>לאשר את סימני בטעותו רפלקס ברגע משחזרת את העכבר, ויכול אז החזרה לכלוב לדיור קבוע.</li>
	<li>לנהל הבופרנורפין 0.05 - 0.1 מ"ג/ק"ג 8-12 שעות לאחר הניתוח, ו- h כל 8-12 לאחר ההליך כנדרש סימנים של כאב.</li>
	<li>לפקח על הגידול באמצעות ביולומינסנציה של ויוו מערכת הדמיה (ראה את הטבלה של חומרים).<ol>
<li>בעקבות הגידול על ידי הדמיה מתחיל ביום 4 לאחר orthotopic-השרשה, ולבצע הדמיה פעמיים בשבוע.</li>
		<li>ביום הדמיה, לנהל (הזרקת בקרום הבטן) 30 מ"ג/ק"ג של D-luciferin כדי anesthetized העכבר הנמען (2-3% איזופלוריין חמצן (2 ל'/דקה)) 10 דקות לפני הדמיה.</li>
		<li>תמונת לפעילות לוציפראז באמצעות הגדרת הפריה חוץ גופית ללא מסננים כלשהם פליטה למשך תקופה מינימלית של חשיפה של 5 ב imager הפריה חוץ גופית עם הבמה מחוממת חינם אוטומטי-זריחה, תוך שמירה על ההרדמה על העכברים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. חמתו של גידולים קמ ר
<ol><li>להכין את החומרים הדרושים: כיכר electroporator גל, מפסק רגל בטיחות, אלקטרודות (מערך המחט לעומת פינצטה-מפעילה), מתאמים. לשמור על התפרים סטרילי (המוזרק 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, חומר סיכה העין, גאזה כותנה, הבופרנורפין ו הרדמה גם בקרבת מקום.</li>
	<li>לחטא את פינצטה או מחט מערך אלקטרודות באמצעות גז עיקור. Autoclaving אינו מומלץ. השתמש מעקר חרוז זכוכית כדי לעקר את האלקטרודות בין בעלי חיים.</li>
	<li>לנהל הבופרנורפין 0.05 - 0.1 מ"ג/ק"ג כדי העכברים נושאות 30 דקות לפני ההליך.</li>
	<li>בצע את שלבים 4.4-4.5 לזירוז בהצלחה הרדמה בעכברים, ברגע השתל הגידול SQ מגיע בקוטר 5 מ מ.</li>
	<li>הנח את העכבר anesthetized על הצד כדי לגשת הגידול SQ לאגף. להסיר את השיער בעזרת קוצץ ועור נקי בעזרת ספוגית אלכוהול.</li>
	<li>לשימוש גידולים מ ר, שני מחטים מערך אלקטרודות. לרומם את העור ישירות תחת אתר גידול באמצעות מלקחיים והכנס האלקטרודות דרך העור מקבילה לגוף מוודא שהם לא לחדור חלל הצפק. פעם אחת דרך העור, מיקום האלקטרודות באופן כזה שהם סוגר את הגידול.</li>
	<li>לתכנת את electroporator כדי לספק 100 µs פולסים בתדר של 1 הרץ על 1,500 V ס עבור סכום כולל של 150 פולסים. לספק את פולסים באמצעות דוושת רגל. להפריד כל ערכה של פולסים 10 על-ידי 10 s, על מנת לאפשר פיזור חום, לאשר את המיקום הנכון של האלקטרודות. הערה: ללא שימוש סוכני משתק, עכברים יחוו התכווצות שרירים עם חמתו שיכולים לגרום תזוזה של האלקטרודות. אלא אם כן מאובטח באופן ידני.</li>
	<li>הסר את האלקטרודות לאחר מינון מלא, אשר לא יעלה על הרשומה ס' 200 המתח בפועל תימסר, אשר מוצג על electroporator. לאפשר העכברים להתאושש בעקבות חמתו לפי השלבים 4.14-4.16.</li>
</ol>6. חמתו של גידולים Orthotopic
הערה: חמתו של גידולים orthotopic כרוך ניתוח הישרדות נוסף על העכבר אותו וכך מצריכים אישור מיוחד IACUC המקומית לפני תחילת.
<ol><li>להכין חומרים הדרושים: אוטוקלב כלים כירורגיים כמו מספריים, כמו מה, אזמל, המחט נהגים, הצביע מלקחיים, והודיע במול מלקחיים. זכור בקרבת מקום גם כן: תפרים סטרילי (שנספג 6-0 ולא נספגים 4-0), מטליות אלכוהול, קוצץ שיער, קרם depilatory, חומר סיכה העין, גאזה כותנה, 10% povidone יוד הפתרון, וילונות כירורגי, כריות חימום, גל מרובע electroporator, מפסק רגל בטיחות, אלקטרודות שלהם מתאמים, הבופרנורפין ו הרדמה.</li>
	<li>להעריך את העכברים עבור orthotopic הגידול על ידי הדמיה ויוו (ראה שלב 4.17) על ידי הזרקת 30 מ"ג/ק"ג של D-Luciferin intraperitoneally. הערה: הגידולים orthotopic הינם אידיאליים עבור חמתו הטיפול 8-10 ימים שלאחר ההשתלה כאשר הגידולים הם בבירור, עדיין סגורים על הלבלב כפי שניתן לראות בתמונות הפריה חוץ גופית לוציפראז (ראה את התוצאות נציג).</li>
	<li>בצע שלבים 4.4-4.9, כדי לאתר את הגידול מושתל. אם הגידול לא קל לאתר, להשתמש מלקחיים לרודולף בוטה כדי להזיז את הקיבה והטחול בעדינות כדי לזהות את הגידול.</li>
	<li>להחצין את הגידול עם מלקחיים לרודולף בוטה וללכוד את הגידול בחוזקה אלקטרודות הפלטינה של פינצטה-מפעילה. לספק את פולסים אלקטרופורציה כפי מתוכנת בשלב 5.7 באמצעות electroporator את גל מרובע בסדרות של 10 פולסים נשלט על-ידי המתג רגל.</li>
	<li>שמור את הגידול מוחצן s 60 לפחות פוסט חמתו לעקוב אחר סימנים של דימום. הוסף את הגידול בחזרה לתוך חלל הבטן סגירת החתך שתואר קודם (צעדים 4.13-4.16), לפקח על העכבר עד זה יחלים.</li>
	<li>נטר את ההשפעות של חמתו על הגידול באמצעות ויוו לוציפראז הדמיה לפי שלב 4.17.</li>
</ol>

<ol><li>Rahib, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projecting+cancer+incidence+and+deaths+to+2030%3A+the+unexpected+burden+of+thyroid%2C+liver%2C+and+pancreas+cancers+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Projecting cancer incidence and deaths to 2030: the unexpected burden of thyroid, liver, and pancreas cancers in the United States.</a> Cancer Res. 74 (11), 2913-2921 (2014).</li>
<li>Howlader, N., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHowlader%2C+N+%22SEER+Cancer+Statistic+Review%2C+1975-2013%22">SEER Cancer Statistic Review, 1975-2013</a>. , 
 <a target="_blank" href="http://seer.cancer.gov/csr/1975_2013/">http://seer.cancer.gov/csr/1975_2013/</a> (1975).</li>
<li>Clark, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+the+immune+reaction+to+pancreatic+cancer+from+inception+to+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Dynamics of the immune reaction to pancreatic cancer from inception to invasion.</a> Cancer Res. 67 (19), 9518-9527 (2007).</li>
<li>Lee, E. W., Loh, C. T., Kee, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+guided+percutaneous+irreversible+electroporation%3A+ultrasound+and+immunohistological+correlation%5BTitle%5D)+AND+%22Technol+Cancer+Res+Treat%22%5BJournal%5D)">Imaging guided percutaneous irreversible electroporation: ultrasound and immunohistological correlation.</a> Technol Cancer Res Treat. 6 (4), 287-294 (2007).</li>
<li>Charpentier, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irreversible+electroporation+for+the+ablation+of+liver+tumors%3A+are+we+there+yet%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Irreversible electroporation for the ablation of liver tumors: are we there yet?</a> Arch Surg. 147 (11), 1053-1061 (2012).</li>
<li>Narayanan, G. <a target="_blank" href="https://www.thieme-connect.com/products/ejournals/abstract/10.1055/s-0035-1564706">Irreversible Electroporation.</a> Seminars in Interventional Radiology. 32 (4), 349-355 (2015).</li>
<li>Martin, R. C. 2nd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+200+locally+advanced+%28stage+III%29+pancreatic+adenocarcinoma+patients+with+irreversible+electroporation%3A+safety+and+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Treatment of 200 locally advanced (stage III) pancreatic adenocarcinoma patients with irreversible electroporation: safety and efficacy.</a> Ann Surg. 262 (3), 486-494 (2015).</li>
<li>Belfiore, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+CT-guided+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+as+a+novel+neoadjuvant+protocol+in+locally+advanced+pancreatic+cancer%3A+Our+preliminary+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Percutaneous CT-guided irreversible electroporation followed by chemotherapy as a novel neoadjuvant protocol in locally advanced pancreatic cancer: Our preliminary experience.</a> Int J Surg. 21 Suppl 1, S34-S39 (2015).</li>
<li>Belfiore, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concurrent+chemotherapy+alone+versus+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+on+survival+in+patients+with+locally+advanced+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Oncol%22%5BJournal%5D)">Concurrent chemotherapy alone versus irreversible electroporation followed by chemotherapy on survival in patients with locally advanced pancreatic cancer.</a> Med Oncol. 34 (3), 38(2017).</li>
<li>Chu, K. F., Dupuy, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+ablation+of+tumours%3A+biological+mechanisms+and+advances+in+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Thermal ablation of tumours: biological mechanisms and advances in therapy.</a> Nat Rev Cancer. 14 (3), 199-208 (2014).</li>
<li>Wissniowski, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+tumor-specific+T+lymphocytes+by+radio-frequency+ablation+of+the+VX2+hepatoma+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Activation of tumor-specific T lymphocytes by radio-frequency ablation of the VX2 hepatoma in rabbits.</a> Cancer Res. 63 (19), 6496-6500 (2003).</li>
<li>Eros de Bethlenfalva-Hora, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+ablation+suppresses+distant+tumour+growth+in+a+novel+rat+model+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency ablation suppresses distant tumour growth in a novel rat model of multifocal hepatocellular carcinoma.</a> Clin Sci (Lond). 126 (3), 243-252 (2014).</li>
<li>Zerbini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiofrequency+thermal+ablation+for+hepatocellular+carcinoma+stimulates+autologous+NK-cell+response%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Radiofrequency thermal ablation for hepatocellular carcinoma stimulates autologous NK-cell response.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1931-1942 (2010).</li>
<li>Ali, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+dendritic+cells+by+local+ablation+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Activation of dendritic cells by local ablation of hepatocellular carcinoma.</a> J Hepatol. 43 (5), 817-822 (2005).</li>
<li>Fietta, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+inflammatory+response+and+downmodulation+of+peripheral+CD25%2BFoxp3%2B+T-regulatory+cells+in+patients+undergoing+radiofrequency+thermal+ablation+for+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Immunol%22%5BJournal%5D)">Systemic inflammatory response and downmodulation of peripheral CD25+Foxp3+ T-regulatory cells in patients undergoing radiofrequency thermal ablation for lung cancer.</a> Hum Immunol. 70 (7), 477-486 (2009).</li>
<li>Jiang, C., Davalos, R. V., Bischof, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+basic+to+clinical+studies+of+irreversible+electroporation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">A review of basic to clinical studies of irreversible electroporation therapy.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 62 (1), 4-20 (2015).</li>
<li>Neal, R. E. 2nd, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+local+and+systemic+anti-tumor+efficacy+for+irreversible+electroporation+in+immunocompetent+versus+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Improved local and systemic anti-tumor efficacy for irreversible electroporation in immunocompetent versus immunodeficient mice.</a> PLoS One. 8 (5), e64559(2013).</li>
<li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li>
<li>Safran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+reporter+strain+for+noninvasive+bioluminescent+imaging+of+cells+that+have+undergone+Cre-mediated+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Mouse reporter strain for noninvasive bioluminescent imaging of cells that have undergone Cre-mediated recombination.</a> Mol Imaging. 2 (4), 297-302 (2003).</li>
<li>Martin, R. C. 2nd, McFarland, K., Ellis, S., Velanovich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irreversible+electroporation+in+locally+advanced+pancreatic+cancer%3A+potential+improved+overall+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Irreversible electroporation in locally advanced pancreatic cancer: potential improved overall survival.</a> Ann Surg Oncol. 20 Suppl 3, S443-S449 (2013).</li>
<li>Neal, R. E., Garcia, P. A., Robertson, J. L., Davalos, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+Characterization+and+Numerical+Modeling+of+Tissue+Electrical+Conductivity+during+Pulsed+Electric+Fields+for+Irreversible+Electroporation+Treatment+Planning%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Transactions+on+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Experimental Characterization and Numerical Modeling of Tissue Electrical Conductivity during Pulsed Electric Fields for Irreversible Electroporation Treatment Planning.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 59 (4), 1076-1085 (2012).</li>
</ol>

המחברים יש אין גילויים הכספיים הרלוונטיים.

במחקר זה, הראו מודל immunocompetent עכבר למחשב זה יכול לשמש כדי לחקור את ההשפעות של חמתו על הגידול. כיום, חמתו משמש כמו טכניקה-thermal אבלציה רק בחולים שנבחרו מאוד מקומי מתקדם PC אין התקדמות המחלה מרוחק לאחר חודשים של טיפול לפני הניתוח. השימוש ולכן הוגבלה כי רוב החולים עם מחשב מקומי מתקדם לפתח מחלה גרורתית מרוחקת20. מודל זה ישמש כבסיס ללימודי להעריך את ההשפעות של חמתו על PC באמצעות טיפול מורחבת פרמטרים ושילובים שונים.
הדבר הכי חשוב שיש לקחת בחשבון במהלך הפרוטוקול הוא הג...

אדנוקרצינומה ductal הלבלב (PC) צפוי להיות הגורם המוביל השני של מקרי מוות מסרטן בארה ב סביב 20201. הרוב המכריע של חולים שאובחנו עם המחשב ימותו בסופו של דבר בשל מחלה גרורתית מרוחקת2. Microenvironment PC הוא לשמצה לדיכוי המערכת החיסונית ואת chemoresistant. משתית desmoplastic שלה מכיל את המחסור בתאי T אפקטור (אנטי הגידול) חשיבותו של לויקוציטים לדיכוי המערכת החיסונית, כולל סרטניים הקשורים מקרופאגים (תאמי), משתיק קול נגזר מיאלואידית תאים (MDSCs) ו- T רגולטורי תאים (Tregs)3 . אלה מושתתות את הצורך לפתח אסטרטגיות עם מודאלים מרובים לנטרל השפעות אלו של microenvironment.
חמתו פותחה כשיטה הלא-thermal סרטן אבלציה. בניגוד בטכניקות אבלציה תרמי, חמתו אינו גורם לנמק coagulative מהירה אבל במקום תוצאות אפופטוטיים להיפגע הדרגתית לתא המוות4. חשוב עבור גידולים בלבלב, חמתו, אינה חשופה להשפעות "מפזר החום", ניתן לבצע ליד כלי הדם5. כיום משמש קלינית, למטופלים שנבחרו עם מקומי מתקדם או גבולית resectable סרטן הלבלב, ויש 510(k) לאישור ה-FDA6 טכנולוגיה זו. בסדרת הגדול ביותר שפורסם חמתו עבור PC7, חציון ההישרדות של חולים שעברו חמתו היה בערך כפול ההישרדות של חולים שטופלו מודרני כימותרפיה לבד ללא כריתה8,9.
מספר מחקרים הראו שאבלציה תרמית זה גורם לתגובה החיסונית מערכתית בסוגים אחרים הגידול (שבתוך צ'ו. et al. 10)-Radiofrequency אבלציה (RFA) בגידול בעלי חיים מודלים הפניות לתא T מוגברת מחלחל11,12, כולל גידול תאים הרוצח מופעל הטבעיים (NK) hepatocellular סרטן המטופלים13, בת 14. ירידה Tregs לדיכוי המערכת החיסונית חולי סרטן ריאות15. מספר קטן יותר של מחקרים בחנו מערכת החיסון, microenvironmental, ותגובות פציעה חמתו16. חמתו הוכח לעורר תגובה חיסונית מערכתית במודלים של העכבר immunocompetent שבו הצמיחה של תאי הכליה (contralateral) משני allografts הייתה מצומצמת או למניעה על ידי חמתו של גידול ראשוני שבועיים לפני17. הם גם ציין כי עכברים immunocompetent נדרש פחות מתח עבור רגרסיה מלאה מאשר עכברים immunocompromised. זה היה שיערו כי חמתו עלולה לגרום במצגת אנטיגן משופרת לעומת לנמק coagulative של אבלציה תרמית, אבל זה לא נחקרה באופן ספציפי.
פיתחנו מודל syngeneic העכבר של המחשב האישי משורת תא 4580 KPC-לוק (מתנה ג'יי ג'יי Yeh ב אוניברסיטת צפון קרוליינה), אשר נבעה גידול שהתפתח במהלך LSL-קראס זכרG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL-ROSA26 לוק / + העכבר, לחקור את ההשפעות המקומי ומערכתית של חמתו18,19. זו שורת התאים לבטא לוציפראז הוא immunogenic גם tumorigenic בעכברים C57BL/6 immunocompetent כאשר מוזרק קמ ר או orthotopically ומייצרת באופן אמין גרורות בכבד כאשר הוא מוזרק הטחול. אנחנו נעזרו גנרטור הדופק ניתן לתיכנות גל מרובע כדי לספק 100-µs פולסים של חשמל ביחס מתח/מרחק של 1,500 V/ס מ באמצעות בדיקה מערך שני-מחט (מופרדות על ידי 5 מ מ) או פלטינה פינצטה-trodes קמ ר או orthotopic גידולים, בהתאמה, ב עכברים לדגמן את ההשפעות של חמתו של חיים קטן.

<table><tbody><tr><td>ECM 830 גל מרובע אלקטרופורטור</td><td>הרווארד מכשיר</td><td>BTX # 45-0002 ( 58018-004)</td><td></td></tr> <tr><td>2 אלקטרודה מערך מחטים</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>45-0167</td><td></td></tr><tr><td>מתג רגל בטיחות</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>45-0211</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה פלטינה</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>&nbsp; 45-0486</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12 מדיה</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>סיגמא-אולדריץ', בע"מ</td><td></td><td></td>792632</tr><tr><td>Lacrilube</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>19090646</tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>פישר סיינטיפיק&nbsp;</td><td></td><td></td>NC1292810</tr><tr><td>D-לוציפרין</td><td>פרקין אלמר</td><td>122799</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&nbsp; מערכת הדמיה ספקטרום In Vivo</td><td>פרקין אלמר</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>זן עכבר C57BL/6J</td><td>מעבדת ג'קסון&nbsp;</td><td>קו תאים 000664/שחור 6</td><td></td></tr><tr><td>(KPC-Luc 4580)</td><td>מעבדת J.J. Yeh באוניברסיטת צפון קרוליינה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD מחטי מזרק Precisionglide</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td></td><td></td>Z192406</tr><tr><td>ספוגית אלכוהול (70% אלכוהול איזופרופיל</td>) <td>BD</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>קליפרים דיגיטליים</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-648-17</td><td></td></tr><tr><td>אזמלים חד פעמיים, סטרילי</td><td>VWR</td><td>21909</td><td></td></tr><tr><td>אפליקטורים עם קצה כותנה</td><td>VWR</td><td>89198</td><td></td></tr><tr><td>מחט תפרים, 45 ס"מ, גודל 6-0</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>72-3308</td><td></td></tr><tr><td>מחט תפרים, 45 ס"מ, גודל 4-0</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>72-3314</td><td></td></tr><tr><td>פובידון-יוד 10%</td> <td>BD</td><td>29900-404</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום חד פעמית&nbsp;</td><td>קנט סיינטיפיק קורפ</td><td>TP-3E</td><td></td></tr><tr><td>קוצץ שיער עכבר</td><td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td><td>CL8787</td><td></td></tr><tr><td>וילון כירורגי</td><td>הרווארד מנגנון</td><td>59-7421</td><td></td></tr><tr><td>10010023</td><td></td> <td>מדעי מלוח ThermoFisher חוצץ פוספט</td><td></td></tr></tbody></table>

דגם העכבר סרטן הלבלב syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

סרטן הלבלב (PC), מחלה אשר הורג כ 40,000 חולים כל שנה בארצות הברית, הוא התחמק בהצלחה מספר גישות טיפוליות כולל את האסטרטגיות immunotherapeutic מבטיח. אלקטרופורציה בלתי הפיך (חמתו) היא טכניקה-thermal אבלציה שגורם מוות של תאים סרטניים ללא הרס של מבנים סמוכים סילוק, ובכך מאפשר את ההליך שיבוצע בגידולים קרוב מאוד אל כלי הדם. בניגוד בטכניקות אבלציה תרמי, חמתו גורמת מוות של תאים אפופטוטיים להיפגע הדרגתית, יחד עם נמק אבלציה מיידית המושרה, נמצא כעת בשימוש קליני למטופלים שנבחרו עם מחשב מקומי מתקדם. פולשני, ללא-יעד הליך מסוים כמו חמתו יכול לגרום מספר עצום של תגובות ב microenvironment הגידול. מעט מחקרים עסקו השפעת חמתו על הגידול בסוגי סרטן אחרים, אבל אף אחד לא התמקדו PC. פיתחנו מודל syngeneic עכבר של מחשב תת עורית (SQ), orthotopic גידולים יכולים להיות מטופלים בהצלחה עם חמתו באווירה מבוקרת מאוד, להקל על הליך פוסט האורך מחקרים שונים. מודל זה בעל חיים משמש מערכת איתנה כדי לבחון את השפעות חמתו, דרכים לשפר את היעילות הקלינית של חמתו.

עקבנו אחר ההליך המתואר לעיל, ועורר גידולים SQ בשבוע 5-6 זקן פראי סוג C57BL/6 עכברים מחוסן עם עונה 1 פרק 106 תאים עם 50% BMM. כאשר גודל הגידול 5-6 מ מ קוטר, כמה מן העכברים היו מורדמים, גידולים שלהם היו טוחנות, מושתל orthotopically בעכברים C57BL/6 הנמען. חמתו היה שבוצעו 10 ימים שלאחר ההשתלה, כפי שמוצג על ציר הזמן על איור 1. חמתו בוצעה על העכברים הנותרים הנושאת גידולים SQ.
ב ר גידולים, חמתו ...

אלקטרופורציה בלתי הפיך (חמתו) היא טכניקה-thermal אבלציה המשמשת לטיפול של סרטן לבלב מקומי מתקדם. להיות טכניקה חדשה יחסית, ההשפעות של חמתו על הגידול הם הבינו כהלכה. פיתחנו מודל העכבר syngeneic המאפשרת לימוד השפעת חמתו על סרטן הלבלב.

דגם העכבר סרטן הלבלב Syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

המטרה הכוללת של מודל זה היא לחקור את ההשפעות של אלקטרופורציה בלתי הפיכה או IRE, על סרטן הלבלב בעכברים בעלי יכולת חיסונית. מודל זה יכול לעזור לענות על שאלות מפתח רבות הנוגעות לתפקידו של IRE בסרטן הלבלב. כגון, כיצד IRE משפיע על המיקרו-סביבה המקומית של הגידול?היתרון העיקרי של מודל זה הוא בכך שהוא מאפשר הערכה מדויקת של צמיחת הגידול במערכת חיסונית, ללא צורך במודלים של עכברים נוקאאוט או מוטנטיים. שיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי ההשפעות של IRE על מערכת החיסון, במודל עכבר בעל יכולת חיסונית של סרטן הלבלב. לצורך השראת גידול תת עורי, ראשית, יש לגלח את מקום ההזרקה על עכבר מורדם בן שישה שבועות, זכר, C57 שחור שישה שבועות, והשתמש במקלון אלכוהול כדי לנקות את המקום פעמיים.לאחר מכן, טען מזרק קר של מיליליטר עם אחד עד פעמיים עשרה לשבעת התאים למיליליטר ו -250 מיקרוליטר של מטריצת קרום המרתף. חבר מחט בגודל 25 למזרק, וטען את המחט עם תרחיף תאי הגידול. לחץ ומשוך את הבוכנה כמה פעמים כדי להסיר בועות אוויר.הכנס בזהירות את המחט מתחת לעור של מקום ההזרקה, בזווית של 30 מעלות. כשהמחט מקבילה לגוף, יש להזריק לאט 50 מיקרוליטר מתאי הגידול. לאחר 10 שניות, משוך לאט את המחט, תוך שמירה על מקבילה ללא כל תזוזה הצידה, ונקה בעדינות את מקום ההזרקה בעזרת ספוגית אלכוהול, לפני החזרת העכבר לכלוב שלו.כאשר הגידול מגיע לחמישה עד שבעה מילימטרים, השתמש במלקחיים סטריליים ובמספריים מיקרו כדי לכרות את הגידול התת עורי, בתנאים סטריליים במכסה מנוע ברמת בטיחות ביולוגית שתיים, תוך הקפדה לא לנקב את חלל הצפק. שטפו מיד את הגידול שנכרת, פעמיים, ב-PBS סטרילי. והשתמש באזמלים סטריליים כדי לטחון את הגידול לחתיכות קוביות של מילימטר אחד עד שניים.לאחר מכן, העבירו את חלקי הגידול לצלחת פטרי, המכילה מדיום בסיסי DMEM קר וסטרילי על קרח. כדי להשתיל את שברי הגידול, לאחר אישור חוסר תגובה לצביטה בבוהן, יש למרוח משחה על עיני החיה המורדמת, ולהניח את העכבר על צדו הימני, כך שהצד השמאלי של הבטן ייחשף. מסירים את שיער הבטן בעזרת קרם אפילציה ומסירים את הקרם בעזרת גזה.לאחר חיטוי העור החשוף בשלושה מגבונים עוקבים של 10% פובידון בתוספת יוד ואלכוהול, השתמשו באזמל סטרילי כדי לבצע חתך של 1.5 סנטימטר בעור, סנטימטר אחד משמאל לקו האמצע, מתחת לכלוב הצלעות, ומעט מדיאלי לטחול. החצנו בעדינות את הטחול בעזרת מלקחיים שטוחים ומוליך כותנה סטרילי, והשתמשו במלקחיים כדי למשוך לרוחב את זנב הלבלב, בתחתית הטחול. בעזרת מלקחיים סטריליים, אחוז בחתיכת גידול אחת טחונה דק, והעביר מחט תפירה סטרילית עדינה 6-O דרך החתיכה.הכנס את המחט המכילה שבר גידול לזנב הלבלב, והעביר את התפר לאט דרך הרקמה. הקפד להימנע ממגע בין הגידול לשרירי דופן הבטן והצפק, כדי למנוע זריעת גידול. לאחר שבר הגידול מאובטח, הסר לחלוטין את המחט מהרקמה, ושמור על האיברים מוחצנים לחלוטין, למשך 60 שניות נוספות, תוך בדיקת סימני דימום.אם לא נצפה דימום, השתמש במלקחיים קהים, או באפליקטור קצה כותנה, כדי להחזיר בעדינות את הטחול, הלבלב והגידול לחלל הבטן. לפני שהגידול מגיע לקוטר של שישה מילימטרים, הניחו את החיה המורדמת על צדה הימני כדי לאפשר גישה לגידול, והשתמשו בקוצץ ובמטוש אלכוהול כדי לנקות את אתר הגידול. בעזרת מלקחיים, הרם את העור ישירות מתחת לגידול, והחדיר שתי אלקטרודות מערך מחטים דרך העור, במקביל לגוף, כדי לסגור את הגידול, תוך הקפדה שהאלקטרודות לא יחדרו לחלל הצפק.הגדר את האלקטרופורטור לספק פולסים של 100 מיקרו-שניות בתדר הרץ אחד, ב-1500 וולט לסנטימטר, בסך הכל 150 פולסים, והשתמש בדוושת הרגל כדי להעביר את הפולסים, תוך הפרדת כל קבוצה של 10 פולסים ב-10 שניות, כדי לאפשר פיזור חום בין כל סט פולסים. מכיוון שעוויתות שרירים מתרחשות במהלך מתן ה-RE, ובולטות יותר במהלך סט הפולסים הראשוני, ודא שהאלקטרודות עדיין במיקום הרצוי, ושהחיה עדיין מורדמת לאחר כל סט פולסים. לאחר לא יותר מ-200 שניות של מינון, הסר את האלקטרודות ורשום את המתח בפועלtage שנמסר, כפי שמוצג על האלקטרופורטור.לאחר מכן, החזר את העכבר לכלוב שלו. עבור IRE של גידול אורתוטופי, שמונה עד 10 ימים לאחר השתלת הגידול, השתמש במלקחיים קהי אף כדי להחצין את הגידול עם המלקחיים, וללכוד בחוזקה את הגידול עם אלקטרודות הפלטינה של הפינצטה, להעביר את פולסי האלקטרופורציה, כפי שהודגם זה עתה, תוך שמירה על הגידול מוחצן לקבוצת הפולסים האחרונה, למשך 60 שניות לפחות, כדי לעקוב אחר סימני דימום. לאחר מכן, החזר את הגידול לחלל הבטן וסגור את החתך, כפי שהודגם, תוך מעקב אחר החיה עד להחלמה מלאה.בניסוי מייצג זה, גידולים תת עוריים, בכמעט 50% מהעכברים, נסוגו לחלוטין לאחר 150 פולסים של IRE, עם רגרסיה קלה בלבד לאחר 75 פולסים. ניתוח היסטולוגי של רקמת הגידול, שבוע לאחר IRE, חשף אזורים גדולים של נמק גידול מרכזי, שלא נצפו בגידולי ביקורת שלא טופלו, ואשר היו מוקפים ברקמת גידול חיה, במקרים של רגרסיה לא שלמה של הגידול. ניטור שיעורי הצמיחה של גידולים אורתוטופיים מושתלים חשף גידול עקבי לאורך זמן בבעלי חיים מקבלים, שיכול להיות מופרע גם על ידי IRE, מה שמדגים את יכולתו של מודל זה לדמות את ההשפעות של IRE, במודל עכבר בעל יכולת חיסונית.לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 15 דקות לכל עכבר, אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לשמור על גודל הגידול במרחק העבודה של אלקטרודות ה-IRE הזמינות, מכיוון שגידולים גדולים יותר ייצרו תגובות לא עקביות עקב אבלציה לא שלמה. גישות טיפול אחרות, כגון הקרנות או כימותרפיה, יכולות לשמש גם כדי לענות על שאלות נוספות האם שילוב טיפולים יכול לשפר את תגובות הגידול ל-IRE.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליצור סרטן לבלב תת עורי ואורתוטופי בעכברים, וכיצד לבצע IRE על גידולים אלה.

a-syngeneic-pancreatic-cancer-mouse-model-to-study-effects

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

הסרטון מסביר שיטה כירורגית מדורגת להשתלה אורתוטופית של קטע גידול מתורם סרטני ללבלב של עכברים מושתלים שאינם סרטניים לצורך התפתחות סרטן הלבלב. PDAC מושתל אורתוטופית יכול ללכוד מחדש את המיקרו-סביבה הרקמתית של סרטן הלבלב האנושי מאשר מודלים תת-עוריים קונבנציונליים (SC) בצורה מדויקת יותר.

השתלת גידול הומוגרפט אורתוטופית: טכניקה ליצירת מודלים של עכברי גידול בלבלב

סרטון זה מתאר את ההליך לביצוע אלקטרופורציה בלתי הפיכה (IRE) עבור אבלציה לא תרמית של גידולי לבלב בעכברים. ניתן לטפל בהצלחה הן בגידולים תת עוריים (SQ) והן בגידולים אורתוטופיים באמצעות IRE בסביבה מבוקרת ביותר, מה שמקל על מחקרים שונים לאחר ההליך.

אלקטרופורציה בלתי הפיכה: טכניקה לטיפול בגידול לבלב בעכבר

סרטון זה מדגים את הפרוטוקול להשתלת תאי סרטן לבלב המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק באופן אורתוטופי בלבלב העכבר. מודל העכבר האורתוטופי מסייע בחקירת יעילותם של טיפולים חדשניים על גידולים ראשוניים וגרורתיים.

מודל עכבר אורתוטופי פלואורסצנטי: השתלת GFP המבטא תאים סרטניים בעכבר להערכת התקדמות הגידול ב- Vivo

סרטון זה מדגים מודל אורתוטופי של סרטן הלבלב המשתמש במטריג'ל להעברת תאים מקומית והדמיית ביולומינסנציה in vivo לניטור לא פולשני של התקדמות הגידול. המודל האורתוטופי מתאים הן למודלים סינגניים והן למודלים של קסנוגרפט, וניתן להשתמש בו בניסויים פרה-קליניים כדי לחקור את ההשפעה של טיפולים אנטי-סרטניים חדשניים על צמיחת הגידול הראשוני בלבלב וגרורות.

מודל עכבר סרטן לבלב אורתוטופי ביולומינסנטי: טכניקה לא פולשנית למעקב אחר התקדמות סרטן בעכברים

מודל פרה קליני, עכברי של גרורות בכבד מבוצע באמצעות טכניקת הזרקת hemispleen.

דגם Murine פרה של גרורות כבדית

מטרת פרוטוקול זה היא ליישם הדמיית תהודה מגנטית משופרת בניגודיות דינמית (DCE-MRI) עבור השתלות גידול לבלב אורתוטופי בעכברים. DCE-MRI היא שיטה לא פולשנית לניתוח מיקרו-כלי דם ברקמת מטרה, ושימושית להערכת תגובת כלי הדם בגידול לאחר טיפול חדשני.

הדמיית תהודה מגנטית משופרת ניגודיות דינמית של דגם orthotopic סרטן לבלב עכבר

הליך להשתלת תאי סרטן לבלב פלואורסצנטיים ירוקים המבטאים חלבון פלואורסצנטי (PANC-1 GFP) באופן אורתוטופי לתוך הלבלב של עכברי Balb-c Ola Hsd-Fox1nu כדי להעריך את התקדמות הגידול והגרורות מוצג כאן.

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

אנו מתארים פרוטוקול עבור אולטרסאונד השרשה המודרכת של הלבלב הנגזר מוראן של דוטל לבלב שורות תאים ישירות לתוך אתר הגידול הטבעי. גישה זו הביא לגידולים בלבלב לגילוי על ידי סריקת אולטרסאונד בתוך 2-4 שבועות של הזרקה, והקטינה באופן משמעותי את הגידול בפרופורציה של תאים בקיר הצפק לעומת השרשה כירורגית אורתודפית.

אולטרה סאונד-הדרכה אורתודפית של הלבלב מורלין אדנוקרצינומה

בהקשר הקליני, חולים עם סרטן הלבלב מקומי יעברו כריתת לבלב ואחריו טיפול אדג'ובנטי. פרוטוקול זה שדווח כאן נועד לבסס שיטה בטוחה ויעילה של מידול תרחיש קליני זה בעכברים עירומים, באמצעות השתלה אורתוטופית של סרטן הלבלב ואחריו כריתת לבלב דיסטלית וכריתת טבור.

מודל עכבר כריתה אורתוטופי של סרטן הלבלב

אלושתלים אורתוטופיים סינגניים של אדנוקרצינומה צינורית הלבלב (PDAC) משחזרים את הביולוגיה, הפנוטיפים והתגובות הטיפוליות של תת-סוגי מחלות. בשל התקדמות הגידול המהירה והניתנת לשחזור, הם נמצאים בשימוש נרחב במחקרים פרה-קליניים. כאן, אנו מראים שיטות עבודה נפוצות ליצירת מודלים אלה, הזרקת תרביות PDAC מורין סינגני לתוך הלבלב.

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts למודל סרטן הלבלב

הפרוטוקול הנוכחי מתאר גישה חדשה למידול דלקת לבלב חסימתית כרונית, הכוללת הדמיה של צינור הלבלב ואלקטרו-קואגולציה של צינור הלבלב כדי לגרום לחסימת צינור הלבלב.

מודל חסימתי של דלקת לבלב כרונית שהוקם באמצעות אלקטרו-קואגולציה

חקור את השפעות האלקטרופורציה הבלתי הפיכה על סרטן הלבלב באמצעות דגם עכברים סינגני. שיטה זו מאפשרת הערכת צמיחת גידולים במערכת חיסונית תקינה ומספקת תובנות לגבי תגובת המערכת החיסונית לטיפול.

דגם העכבר סרטן הלבלב Syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה

גלה סרטונים נוספים