דגם העכבר סרטן הלבלב Syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה

המטרה הכוללת של מודל זה היא לחקור את ההשפעות של אלקטרופורציה בלתי הפיכה או IRE, על סרטן הלבלב בעכברים בעלי יכולת חיסונית. מודל זה יכול לעזור לענות על שאלות מפתח רבות הנוגעות לתפקידו של IRE בסרטן הלבלב. כגון, כיצד IRE משפיע על המיקרו-סביבה המקומית של הגידול

היתרון העיקרי של מודל זה הוא בכך שהוא מאפשר הערכה מדויקת של צמיחת הגידול במערכת חיסונית, ללא צורך במודלים של עכברים נוקאאוט או מוטנטיים. שיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי ההשפעות של IRE על מערכת החיסון, במודל עכבר בעל יכולת חיסונית של סרטן הלבלב. לצורך השראת גידול תת עורי, ראשית, יש לגלח את מקום ההזרקה על עכבר מורדם בן שישה שבועות, זכר, C57 שחור שישה שבועות, והשתמש במקלון אלכוהול כדי לנקות את המקום פעמיים.

לאחר מכן, טען מזרק קר של מיליליטר עם אחד עד פעמיים עשרה לשבעת התאים למיליליטר ו -250 מיקרוליטר של מטריצת קרום המרתף. חבר מחט בגודל 25 למזרק, וטען את המחט עם תרחיף תאי הגידול. לחץ ומשוך את הבוכנה כמה פעמים כדי להסיר בועות אוויר.

הכנס בזהירות את המחט מתחת לעור של מקום ההזרקה, בזווית של 30 מעלות. כשהמחט מקבילה לגוף, יש להזריק לאט 50 מיקרוליטר מתאי הגידול. לאחר 10 שניות, משוך לאט את המחט, תוך שמירה על מקבילה ללא כל תזוזה הצידה, ונקה בעדינות את מקום ההזרקה בעזרת ספוגית אלכוהול, לפני החזרת העכבר לכלוב שלו.

כאשר הגידול מגיע לחמישה עד שבעה מילימטרים, השתמש במלקחיים סטריליים ובמספריים מיקרו כדי לכרות את הגידול התת עורי, בתנאים סטריליים במכסה מנוע ברמת בטיחות ביולוגית שתיים, תוך הקפדה לא לנקב את חלל הצפק. שטפו מיד את הגידול שנכרת, פעמיים, ב-PBS סטרילי. והשתמש באזמלים סטריליים כדי לטחון את הגידול לחתיכות קוביות של מילימטר אחד עד שניים.

לאחר מכן, העבירו את חלקי הגידול לצלחת פטרי, המכילה מדיום בסיסי DMEM קר וסטרילי על קרח. כדי להשתיל את שברי הגידול, לאחר אישור חוסר תגובה לצביטה בבוהן, יש למרוח משחה על עיני החיה המורדמת, ולהניח את העכבר על צדו הימני, כך שהצד השמאלי של הבטן ייחשף. מסירים את שיער הבטן בעזרת קרם אפילציה ומסירים את הקרם בעזרת גזה.

לאחר חיטוי העור החשוף בשלושה מגבונים עוקבים של 10% פובידון בתוספת יוד ואלכוהול, השתמשו באזמל סטרילי כדי לבצע חתך של 1.5 סנטימטר בעור, סנטימטר אחד משמאל לקו האמצע, מתחת לכלוב הצלעות, ומעט מדיאלי לטחול. החצנו בעדינות את הטחול בעזרת מלקחיים שטוחים ומוליך כותנה סטרילי, והשתמשו במלקחיים כדי למשוך לרוחב את זנב הלבלב, בתחתית הטחול. בעזרת מלקחיים סטריליים, אחוז בחתיכת גידול אחת טחונה דק, והעביר מחט תפירה סטרילית עדינה 6-O דרך החתיכה.

הכנס את המחט המכילה שבר גידול לזנב הלבלב, והעביר את התפר לאט דרך הרקמה. הקפד להימנע ממגע בין הגידול לשרירי דופן הבטן והצפק, כדי למנוע זריעת גידול. לאחר שבר הגידול מאובטח, הסר לחלוטין את המחט מהרקמה, ושמור על האיברים מוחצנים לחלוטין, למשך 60 שניות נוספות, תוך בדיקת סימני דימום.

אם לא נצפה דימום, השתמש במלקחיים קהים, או באפליקטור קצה כותנה, כדי להחזיר בעדינות את הטחול, הלבלב והגידול לחלל הבטן. לפני שהגידול מגיע לקוטר של שישה מילימטרים, הניחו את החיה המורדמת על צדה הימני כדי לאפשר גישה לגידול, והשתמשו בקוצץ ובמטוש אלכוהול כדי לנקות את אתר הגידול. בעזרת מלקחיים, הרם את העור ישירות מתחת לגידול, והחדיר שתי אלקטרודות מערך מחטים דרך העור, במקביל לגוף, כדי לסגור את הגידול, תוך הקפדה שהאלקטרודות לא יחדרו לחלל הצפק.

הגדר את האלקטרופורטור לספק פולסים של 100 מיקרו-שניות בתדר הרץ אחד, ב-1500 וולט לסנטימטר, בסך הכל 150 פולסים, והשתמש בדוושת הרגל כדי להעביר את הפולסים, תוך הפרדת כל קבוצה של 10 פולסים ב-10 שניות, כדי לאפשר פיזור חום בין כל סט פולסים. מכיוון שעוויתות שרירים מתרחשות במהלך מתן ה-RE, ובולטות יותר במהלך סט הפולסים הראשוני, ודא שהאלקטרודות עדיין במיקום הרצוי, ושהחיה עדיין מורדמת לאחר כל סט פולסים. לאחר לא יותר מ-200 שניות של מינון, הסר את האלקטרודות ורשום את המתח בפועלtage שנמסר, כפי שמוצג על האלקטרופורטור.

לאחר מכן, החזר את העכבר לכלוב שלו. עבור IRE של גידול אורתוטופי, שמונה עד 10 ימים לאחר השתלת הגידול, השתמש במלקחיים קהי אף כדי להחצין את הגידול עם המלקחיים, וללכוד בחוזקה את הגידול עם אלקטרודות הפלטינה של הפינצטה, להעביר את פולסי האלקטרופורציה, כפי שהודגם זה עתה, תוך שמירה על הגידול מוחצן לקבוצת הפולסים האחרונה, למשך 60 שניות לפחות, כדי לעקוב אחר סימני דימום. לאחר מכן, החזר את הגידול לחלל הבטן וסגור את החתך, כפי שהודגם, תוך מעקב אחר החיה עד להחלמה מלאה.

בניסוי מייצג זה, גידולים תת עוריים, בכמעט 50% מהעכברים, נסוגו לחלוטין לאחר 150 פולסים של IRE, עם רגרסיה קלה בלבד לאחר 75 פולסים. ניתוח היסטולוגי של רקמת הגידול, שבוע לאחר IRE, חשף אזורים גדולים של נמק גידול מרכזי, שלא נצפו בגידולי ביקורת שלא טופלו, ואשר היו מוקפים ברקמת גידול חיה, במקרים של רגרסיה לא שלמה של הגידול. ניטור שיעורי הצמיחה של גידולים אורתוטופיים מושתלים חשף גידול עקבי לאורך זמן בבעלי חיים מקבלים, שיכול להיות מופרע גם על ידי IRE, מה שמדגים את יכולתו של מודל זה לדמות את ההשפעות של IRE, במודל עכבר בעל יכולת חיסונית.

לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 15 דקות לכל עכבר, אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לשמור על גודל הגידול במרחק העבודה של אלקטרודות ה-IRE הזמינות, מכיוון שגידולים גדולים יותר ייצרו תגובות לא עקביות עקב אבלציה לא שלמה. גישות טיפול אחרות, כגון הקרנות או כימותרפיה, יכולות לשמש גם כדי לענות על שאלות נוספות האם שילוב טיפולים יכול לשפר את תגובות הגידול ל-IRE.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליצור סרטן לבלב תת עורי ואורתוטופי בעכברים, וכיצד לבצע IRE על גידולים אלה.