דגם Syngeneic Orthotopic זוהרים, פלורסנט מאתר של סירוס עמידים ו אנדרוגן תלויי סרטן הערמונית

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבצע הזרקה תוך ערמונית של תאי סרטן עכברים כדי לגרום להיווצרות גידולים אורתוטופיים סינגניים שיכולים לדגמן סרטן ערמונית תלוי אנדרוגן ועמיד לסירוס. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום סרטן הערמונית, כגון מה מניע את התפתחות סרטן הערמונית ואילו טיפולים פועלים בצורה הטובה ביותר בחיסול גידולים אלה. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שגידולים אורתוטופיים מורכבים יותר מבחינה גנטית, הם מתפתחים במיקרו-סביבת גידול מייצגת קלינית, וניתן לשנות אותם גנטית לפני ההזרקה.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על הטיפול בסרטן הערמונית האנושי מכיוון שגידולים אורתוטופיים מגיבים לטיפולים באופן דומה לזה שנצפה בחולים אנושיים. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטה בבוהן, מרחו משחה על עיני העכבר וגלחו את כל הפרווה מבטן החיה. עקרו את העור החשוף בשלושה סבבים של קרצוף כירורגי באמצעות רפידות סטריליות שאינן נדבקות ואחריהם מגבוני אלכוהול סטריליים.

כאשר העור יבש, הנח את העכבר במצב שכיבה על משטח נקי מעל כרית חימום ישירות מתחת למטרה של מיקרוסקופ כירורגי נקי. ומכסים את החיה בווילון סטרילי עם חור קטן שנחתך מעל הבטן. בצע חתך של סנטימטר אחד בעור החיצוני ובשרירי הבטן הפנימיים לאורך קו האמצע של הבטן מעל הפין והבלוטות הקדם-פוטיאליות.

אתר את אחת משלפוחיות הזרע הדו-צדדיות ואונות הערמונית הקדמיות המחוברות שהן בדרך כלל אחוריות, רוחביות ומעט עליונות על שלפוחית השתן בקש מהעוזר לערבב את תמיסת תאי הסרטן MIC-CAP Matrigel עם פיפטינג עדין ולשאוב לאט 30 מיקרוליטר של תאים למחט בגודל 28 המחוברת למזרק של 50 מיקרוליטר. לאחר מכן, באמצעות מלקחיים של רקמות Graefe, הרם בעדינות את קצה שלפוחית הזרע כדי ליצור מתח על הרקמה מבלי לנקב את השלפוחית והכנס בזהירות את שיפוע המחט במקביל לציר הארוך של אונת הערמונית הקדמית. הזרקו לאט את כל נפח התאים לאונה ואחריו נסיגה איטית של המחט כדי למנוע דליפה.

הזרקה מוצלחת תהיה ניכרת על ידי גודש באונה הקדמית של הערמונית. שמור בזהירות ובהתמדה על שלפוחית הזרע ועל אונת הערמונית המוזרקת מחוץ לעכבר למשך כ-30 שניות כדי לאפשר למטריג'ל להתמצק חלקית בתוך האונה. השתמש באפליקטור סטרילי עם קצה פוליאסטר כדי לאסוף כל דליפת תמיסת תאים לבטן כדי למנוע התפתחות גידול לא אורתוטופי.

הזרקה תוך-תותבת מדויקת היא קריטית להתפתחות גידול לא אורתוטופי. הקפדה יתרה על הימנעות מניקוב שלפוחית הזרע, הזרקה איטית של תרחיף התאים הסרטניים ואיסוף כל דליפת תאים תגביר את הצלחת הליך זה. כעת, החזר בעדינות את שלפוחית הזרע והאונה המוזרקת לבטן מבלי להפעיל לחץ על האונה והחלף רקמות חיצוניות.

באמצעות תפרי מחט חיתוך הפוך נספגים 5-0 ויקריל, סגור את שרירי הבטן הפנימיים בתפרים רציפים ואחריהם סגירה של עור הבטן החיצוני עם תפרים קטועים באמצעות תפרי מחט חיתוך הפוך 4-0 מונופילמנט ניילון שאינם נספגים. לאחר מכן, יש לתת משככי כאבים לאחר הניתוח ולהניח את העכבר בכלוב ללא מצעים באמצע הדרך על כרית חימום עם ניטור עד להחלמה מלאה. טרנספקציה יציבה של תאי Myc-CaP לביטוי לוציפראז ו-mCherry מאפשרת לגידולי הערמונית לעקוב אחר ביולומינסנציה ופלואורסצנטיות לא פולשניות.

כאן מוצגים גידולים מייצגים שנותחו מהבטן ביום 30 לאחר הזרקה תוך ערמונית. בטכניקה נכונה, ניתן לרשום את נפח הגידול ומשקלו עם שגיאת תקן קטנה יחסית, אם כי צפויה שונות מסוימת בין גושי גידול קטנים וגדולים. ניתן לנתח תאי סרטן עכברים המוזרקים תוך ערמונית גם על ידי אימונוהיסטוכימיה לנוכחות תאי T חיוביים ל-CD3 החודרים לגידול או תאים חיסוניים אחרים בעלי עניין.

יתר על כן, מודל זה מספק נקודת קצה הישרדות אובייקטיבית מכיוון שמסת הגידול הראשונית הגדולה גורמת למיימת בטנית דימומית ו/או לירידה בטיפוח האמבולציה ו/או בזקיפה. סירוס שלושה ימים לאחר הזרקה תוך ערמונית מביא לרגרסיה חזקה של הגידול ואחריה הישנות הגידול בסופו של דבר לאחר כ-30 יום המייצג סרטן ערמונית עמיד לסירוס. דיסקציה וניתוח היסטולוגי של גידולי סרטן הערמונית העמידים לסירוס מגלים שאין התמיינות נוירואנדוקרינית מכיוון שהגידולים שומרים על רמות גבוהות של קולטני אנדרוגן והם שליליים לסמן הנוירואנדוקריני סינפטופיזין.

לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 20 עד 30 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לתת משככי כאבים לפני ואחרי הניתוח ולבצע את כל הניתוחים בטכניקה סטרילית ובעזרת עוזר כירורגי. לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו אימונוהיסטוכימיה, זרימה ציטומטרית והערכת נפח ומשקל הגידול והישרדות בעלי חיים כדי לענות על שאלות נוספות לגבי תגובות לאימונותרפיה וטיפולים ניסיוניים אחרים.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להזריק תאי סרטן הערמונית לאונה הקדמית של הערמונית של עכברים לצורך סירוס כירורגי בסופו של דבר וניתוח רגרסיה והישנות של הגידול. אל תשכח שעבודה עם תאים סרטניים עלולה להיות מסוכנת ביותר וישנם אמצעי זהירות כגון לבישת ציוד המגן האישי הנכון יש לנקוט תמיד בעת ביצוע הליך זה.