Name: שילוב Pericytes חרוז תא אנדותל הלבלוב Assay (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 21 s
Description: חקור שילוב תאי אנדותל ופריסיטים באמצעות מבחן חרוזים חדשני לחקר אנגיוגנזה ספונטנית. שיטה זו מאפשרת לחקור אינטראקציות תאיות קריטיות בביולוגיה כלייתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ד"ר ויקטוריה Bautch, ג'ושוע בושה על דיונים מועילים, עצות על אופטימיזציה חרוז סטנדרטי הלבלוב assay והתנאים של assay נבטי מכתים פרוטוקול. S.H.A. נתמך בחלקו על ידי מענק של הלאומית המכון כללי רפואי למדעים תחת פרס 5T32 GM007092.

<ol><li>Hanahan, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+and+emerging+mechanisms+of+the+angiogenic+switch+during+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis.</a> Cell. 86 (3), 353-364 (1996).</li>
<li>Semenza, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+ischemic+and+neoplastic+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Med%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in ischemic and neoplastic disorders.</a> Annu Rev Med. 54, 17-28 (2003).</li>
<li>Zhang, Z. G., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurorestorative+therapies+for+stroke%3A+underlying+mechanisms+and+translation+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neurorestorative therapies for stroke: underlying mechanisms and translation to the clinic.</a> Lancet Neurol. 8 (5), 491-500 (2009).</li>
<li>Nakatsu, M. N., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+three-dimensional+in+vitro+model+for+the+analysis+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">An optimized three-dimensional in vitro model for the analysis of angiogenesis.</a> Methods Enzymol. 443, 65-82 (2008).</li>
<li>Nehls, V., Drenckhahn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel%2C+microcarrier-based+in+vitro+assay+for+rapid+and+reliable+quantification+of+three-dimensional+cell+migration+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">A novel, microcarrier-based in vitro assay for rapid and reliable quantification of three-dimensional cell migration and angiogenesis.</a> Microvasc Res. 50 (3), 311-322 (1995).</li>
<li>Sims, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pericyte--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">The pericyte--a review.</a> Tissue Cell. 18 (2), 153-174 (1986).</li>
<li>Armulik, A., Genove, G., Betsholtz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes%3A+developmental%2C+physiological%2C+and+pathological+perspectives%2C+problems%2C+and+promises%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Pericytes: developmental, physiological, and pathological perspectives, problems, and promises.</a> Dev Cell. 21 (2), 193-215 (2011).</li>
<li>Tattersall, I. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+modeling+of+endothelial+interaction+with+macrophages+and+pericytes+demonstrates+Notch+signaling+function+in+the+vascular+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">In vitro modeling of endothelial interaction with macrophages and pericytes demonstrates Notch signaling function in the vascular microenvironment.</a> Angiogenesis. 19 (2), 201-215 (2016).</li>
<li>Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalization+of+tumor+vasculature%3A+an+emerging+concept+in+antiangiogenic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Normalization of tumor vasculature: an emerging concept in antiangiogenic therapy.</a> Science. 307 (5706), 58-62 (2005).</li>
<li>Tahergorabi, Z., Khazaei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+angiogenesis+and+its+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Iran+J+Basic+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">A review on angiogenesis and its assays.</a> Iran J Basic Med Sci. 15 (6), 1110-1126 (2012).</li>
<li>Popson, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-induced+transmembrane+protein+1+regulates+endothelial+lumen+formation+during+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Interferon-induced transmembrane protein 1 regulates endothelial lumen formation during angiogenesis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34 (5), 1011-1019 (2014).</li>
<li>Coultas, L., Chawengsaksophak, K., Rossant, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+and+VEGF+in+vascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells and VEGF in vascular development.</a> Nature. 438 (7070), 937-945 (2005).</li>
<li>Newman, A. C., Nakatsu, M. N., Chou, W., Gershon, P. D., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+requirement+for+fibroblasts+in+angiogenesis%3A+fibroblast-derived+matrix+proteins+are+essential+for+endothelial+cell+lumen+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">The requirement for fibroblasts in angiogenesis: fibroblast-derived matrix proteins are essential for endothelial cell lumen formation.</a> Mol Biol Cell. 22 (20), 3791-3800 (2011).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

פרוטוקול זה מציג שיטה אפיון שלבי מורכבים ואינטראקציות הסלולר heterotypic של לבלוב אנגיוגנזה על-ידי הפיכת החוקר להעסיק גישות גנטיות הדמיה לקיים חקירות יסודיות מכניסטית. בעת ביצוע וזמינותו, זה חיוני כי ציפוי אנדותל יעיל של החרוזים מתרחש בתקופת החרוז עצבנות צעדים. מסכן ציפוי אנדותל ייעשה ניכר, אם החרוזים לא מופיעות יש משטח מחוספס דמוי כדור גולף למחרת בבוקר לפני ההשתלה ג'ל, במקום זאת מופיעים חלקים לחלוטין. . שמור על עצמך כדי להבטיח כי החרוזים הם מספיק resuspended במהלך כל שלב עצבנות מאת נמרצות לזעזע את צינורות כדי לאפשר חשיפ...

אנגיוגנזה חיוני מופרה המתאים, ריפוי פצעים, היא גם משחקת את תפקידי המפתח רבים מחלות כולל סרטן התקדמות1 ועורקים המחלה. 2 , 3 יש הבנה טובה יותר של כיצד אנגיוגנזה מתרחשת במהלך התפתחות רגילה, כיצד להפעילה בהקשרים פיפטות, הינה קריטית לפיתוח של הרומן, יעיל הרפוי. נאמן במבחנה בדגמי לסכם את השלבים החשובים ואת סוגי תאים מעורב אנגיוגנזה ויוו נדרשים כדי לאפשר לחוקרים כדאי לאפיין את המנגנונים המולקולריים נהיגה אנגיוגנזה, תגליות הרומן בתקנה אנדותל.
Nakatsu ו יוז יש אופטימיזציה של assay חרוז נבטי אשר הם הפגינו עובר בשלבים ידועים רבים של לבלוב אנגיוגנזה. 4 , 5 מטרת השיטה המובאת כאן היא לבנות וזמינותו אופטימיזציה על ידי Nakatsu ו יוז על ידי שילוב perictyes וזמינותו, כך ניתן לשלב את התפקידים paracrine ו- juxtracrine של ציור קיר תאי אנדותל תא הלבלוב ב מחקרים חדשניים אנגיוגנזה. Pericytes הם תאים ציור קיר המוגדרות על-ידי התפקיד שלהם התאים לשמור קרוב מגע פיזי עם תאי אנדותל עקב שלהם להיות מוטבע בתוך קרום המרתף כלי הדם. 6 Pericytes ותאי אנדותל לעסוק מורכבים צולבות לדבר באמצעות איתות המסלולים כולל חריץ איתות, אנג-Tie2, PDGFRβ, TGFRβ, ועוד רבים אחרים. 7 , 8 דגמים העכבר בנכונותם איתות המסלולים האלה מדגימים pericyte המסכן כיסוי של פיתוח להערכת ב מופרה, שמוביל שיפוץ כלי הדם המסכן, להערכת תפקוד לקוי. 7 . בנוסף, התפקיד של pericytes ב אנגיוגנזה פיפטות הוא חשוב, אבל לעתים קרובות מוערכת. לדוגמה, תכונה ייחודית של הגידול להערכת היא כלי הם יותר ילדותי דולפים, לקוי בשל כיסוי עניים pericyte. 9 שהוא הוצע כי נוכחות או היעדרות של pericytes באופן משמעותי משפיע על פנוטיפ של גידול כלי דם והוא מתווך חשוב של תגובות אנטי-אנגיוגנטי וטיפולים antitumor. 9 . לפיכך, כולל התפקיד של pericytes ב במבחנה מבחני הוא מפתח ללכוד יותר לחלוטין על מנגנוני רגולציה אנדותל חשוב.
למרות שיש מבחני במבחנה , לשעבר vivo רבים מועסקים כיום ללמוד אנגיוגנזה, ישנם חסרונות לשקול בכל אחד מהם. כמה, כמו התפשטות אנדותל, מבחני ההעברה אנדותל, הופכות לפשוטות יותר מדי ולהתמקד על פונקציה אחת אנדותל באווירה מבודדת על תרביות רקמה פלסטיק. 10 מבחני אחרים מתרחשים בסביבה עוד 3 מימדי (3D), כגון Matrigel צינור היווצרות וזמינותו,10 אבל מבחני אלה הם עדיין oversimplified להתמקד יותר על היכולת של תאי אנדותל כדי להעביר ויוצרים דה נובו כלי דם מבנים, בניגוד מגיחה להערכת הקיימת מראש. יתר על כן, אף אחד אלה מבחני לשלב סוגי תאים ציור קיר. Ex-vivo מודלים כגון הטבעת אבי העורקים וזמינותו המשלבים pericytes נוכח האיבר המארח, אך מניפולציה גנטית של מודלים אלה הוא מאתגר יותר בשל הצורך של יצירת עכבר נוקאאוט או הטרנסגניים דגמי מסלולים מעניינים. החרוז הלבלוב assay אידיאלי כי זה מודלים הלבלוב אנדותל, הפצה, העברה ו אפילו השקה לומן היווצרות במטריצה תלת-ממד. 4 וזמינותו מאפשר בנאמנות להערכת מכניסטית בשלבים שונים רבים של לבלוב, תוך מתן אפשרות של שינוי גנטי ישיר של תאי אנדותל או pericytes באווירה מבוקרת יותר. קרישי פיברין המכיל את החרוזים נבטי יכול להיות בקלות קבוע, צבעונית, עם תמונה בשלבים שונים של לבלוב; נבטים אלה גם להנחה בתוך תא הדמיה חיה כדי לבצע הדמיה בזמן אמת של לבלוב. המתודולוגיה המוצגת כאן הינו אידיאלי עבור לימוד מנגנונים בסיסיים של אנגיוגנזה דרך ב phenotyping עומק וניתוח מעמיק של המסלולים מופעלים במהלך אנגיוגנזה.

<table><tbody><tr><td>קצות פיפטה סטריליות</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettors</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ערכת כדורי מדיה EGM2 מלאה</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>HUVEC Media</td></tr><tr><td>MEM</td><td>Gibco</td><td>11095114</td><td>10T1/2 Media</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965118</td><td>NHLF Media</td></tr><tr><td>Tissue Culture-Grade PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>מגנזיום וסידן</td></tr> ללא <tr><td>Accutase</td><td>Life Technologies</td><td>A1110501</td><td>להרמת HUVEC</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Life Technologies</td><td>15050065</td><td>להרמת 10T 1/2 ו-NHLF</td></tr><tr><td>Customs siRNAs</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine RNAiMax</td><td>Life Technologies</td><td>13778150</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC</td><td>Lonza</td><td>C2517A</td><td></td></tr><tr><td>10T 1/2</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHLF</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cytodex 3 חרוזי מיקרו-נשא</td><td>Sigma</td><td>C3275</td><td></td></tr><tr><td>צלחות מצופות תרבית רקמות 6 ו-10 ס"מ</td><td>קורנינג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיברינוגן מפלזמת בקר</td><td>סיגמא</td><td>F8630</td><td></td></tr><tr><td>תרומבין</td><td>סיגמא</td><td>t9549</td><td></td></tr><tr><td>אפרוטינין</td><td>סיגמא</td><td>a3428</td><td></td></tr><tr><td>Falcon צינורות תחתונים עגולים</td> חממת תרבית <td>רקמות קורנינג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ומכסה המנוע</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>צלחות תחתונות זכוכית 24 בארות</td><td>MatTek</td><td>P24G1.513F</td><td>יש צורך בלוחות תחתית זכוכית רק אם הנבטים הולכים להיות מצולמים. אם לא, גם פלסטיק תרבית רקמות מקובל.</td></tr><tr>מכשיר <td></td><td></td><td></td><td>סינון סטרילי</td></tr></tbody></table>

שילוב pericytes חרוז תא אנדותל הלבלוב assay

Incorporating Pericytes into an Endothelial Cell Bead Sprouting Assay

אנגיוגנזה הגידול של כלי חדש מ להערכת הקיימת מראש והוא מרכיב חשוב של תהליכים ביולוגיים רבים, כולל מופרה, ריפוי פצעים, הגידול ופיתוח גרורות, עינית ומחלות לב וכלי דם. יעיל במבחנה בדגמי לסכם את הביולוגיה של אנגיוגנזה יש צורך ללמוד את התהליך הזה ולזהות מנגנונים של רגולציה זה ניתן לפלח בסופו של דבר הרומן אסטרטגיות טיפוליות בהתאם. חרוז אנגיוגנזה וזמינותו הוכח בעבר כדי לסכם בשלבים רבים של לבלוב אנדותל במבחנה. אולם, מגבלה של זה וזמינותו היא מחסור של אנדותל – ציור קיר התא אינטראקציות, אשר הם המפתח ברגולציה פנוטיפי המולקולריים של תאי אנדותל לתפקד ויוו. פרוטוקול הנקובים להלן מציג מתודולוגיה שילוב של ציור קיר תאים לתוך חרוז אנגיוגנזה וזמינותו ומדגים קשר חזק של תאי אנדותל, pericytes במהלך נבטי חוץ גופית בתוך. הפרוטוקול מפרט גם במתודולוגיה לביצוע יעיל להחרשת גנים היעד באמצעות siRNA בתאי האנדותל ללימודי מכניסטית. בסך הכל, פרוטוקול זה מספק assay במבחנה הולם יותר מודלים של סוגי תאים מגוונים מעורב הלבלוב אנגיוגנזה, והוא מספק פלטפורמה פיזיולוגית-רלוונטיים יותר טיפולית מגוונת גילוי הרומן מנגנוני רגולציה אנגיוגנזה.

פרוטוקול זה מאפשר חזק התאחדות תא שני סוגי במבחנה, ומשלים הנוכחות של pericytes המופע של נבטי (איור 1 א', ב'). הפרוטוקול מאפשר יעיל שתיקה (למשל באמצעות התערבות RNA) של גנים עניין בסוג התא של עניין כמו (VEGFA במיוחד בתאי האנדותל) או PDGFRβ ב pericytes7,12 גם במהלך וזמינותו, אשר ניתן לתרגם את עיכוב של פנוטיפ נבטי ב וזמינותו. חוקרים העסקת פרוטוקול זה מעודדים לביצוע של תקן...

מתנות פרוטוקול זה חרוז הרומן במבחנה assay זה יותר כראוי מודלים מתהליך ויוו הלבלוב אנגיוגנזה על-ידי שילוב pericytes. שינוי זה מאפשר וזמינותו חרוז רוצה להתרכז יותר בנאמנות באינטראקציה תאית heterotypic בין תאי אנדותל ותאים ציור קיר זה הם קריטיים עבור אנגיוגנזה.

שילוב Pericytes חרוז תא אנדותל הלבלוב Assay

Angiogenesis is the growth of new vessels from pre-existing vasculature and is an important component of many biological processes, including ...

המטרה הכוללת של בדיקה זו היא לשלב אינטראקציות תאיות הטרוטיפיות במבחנה העוטפות את המורכבות של אנגיוגנזה in vivo. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הביולוגיה של כלי הדם לגבי החשיבות של אינטראקציות תאי אנדותל פריציטים במהלך אנגיוגנזה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא משלבת את השלבים השונים של אנגיוגנזה הנבטה, כולל התפשטות, נדידה ואנסטומוזיס תוך שהיא מאפשרת חקר אינטראקציות פריציטים של תאי אנדותל.התחל בהרכבה מחדש של חרוזי המיקרו-נשא בריכוז של שש פעמים 10 עד הרביעי למיליליטר ב-PBS, ולאחר מכן עיקור חיטוי של תרחיף חרוזי המיקרו-נשא. לאחר מכן, ציטט מיליליטר אחד של מדיום שלם למספר המתאים של צינורות מיון תאים מופעלים פלואורסצנטיים, או FACS, והוסף 20 מיקרוליטר של תרחיף חרוזי מיקרו-נושא מעוקר בטמפרטורת החדר לכל צינור. הוסף מיליליטר אחד של תאים לכל צינור.מערבבים צינורות ודוגרים את הצינורות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים וחצי עד שלוש שעות עם תסיסה עדינה כל 20 דקות. בסוף הדגירה, הניחו את התאים בחרוזים בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות כדי לאפשר לתאים ולחרוזים להתיישב בתחתית הצינורות. לאחר מכן, השתמש בפיפטה P1000 כדי להחליף 0.5 מיליליטר מדיום מכל צינור בפעמיים 10 לפריציטים החמישיים ו-0.5 מיליליטר של מדיום שלם.מערבבים את תרחיף חרוזי התא, ומחזירים את התאים לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס בתסיסה עדינה כל 20 דקות עד שהחרוזים נסערים במשך ארבע שעות בסך הכל. בתום הדגירה, ערבבו בעדינות את הצינורות בפעם האחרונה, והעבירו מיד את כל נפח התמיסה של שני מיליליטר מכל צינור לצלחות בודדות של שישה סנטימטרים. לאחר מכן, הוסיפו שלושה מיליליטר נוספים של מדיום שלם לכל צלחת, ודגרו את הצלחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה.למחרת בבוקר, בחנו את צלחות החרוזים המצופים במיקרוסקופ בהגדלה של פי 20 כדי לוודא שכל החרוזים צופו מספיק על ידי תאי האנדותל. העבירו את הצלחות למכסה זרימה למינרית, והשתמשו בפיפטה P1000 כדי לשאוב ולהוציא במרץ את תמיסות החרוזים המצופים כדי לנתק את התאים מתחתית הצלחות ולהעביר את הסופרנטנטים לצינורות בודדים. הניחו לחרוזים להתיישב בתחתית הצינורות למשך שלוש דקות.לאחר מכן השתמש בפיפטה P1000 כדי להסיר כמה שיותר מהסופרנטנטים מבלי להפריע לאשכולות החרוזים. השעו מחדש את החרוזים במיליליטר אחד של מדיום שלם לכל צינור, והניחו לחרוזים להתיישב למשך 30 עד 60 שניות. השתמש בפיפטה P1000 כדי לשאוב שוב את הסופרנטנט, ושטוף את תאי האנדותל הצפים בחופשיות מתרחיף החרוזים עם מדיום שלם טרי פעמיים נוספות כפי שהודגם זה עתה.לאחר הכביסה השלישית, השעו מחדש את החרוזים ב -2.5 מיליליטר תמיסת פיברינוגן. הוסף 13 מיקרוליטר תמיסת תרומבין לבאר בצלחת עם 24 בארות עם תחתית זכוכית. לאחר מכן הוסיפו 0.5 מיליליטר מתמיסת פיברינוגן החרוזים לכל באר, תוך הקפדה על פיפטה בזהירות של החרוזים ישירות לתוך התרומבין, ולאט לאט פיפטה למעלה ולמטה פעמיים-שלוש כדי לערבב היטב את התמיסות.לאחר שכל הבארות נזרעו, אפשר לתמיסת התרומבין-פיברינוגן להיקרש במכסה הזרימה הלמינרית למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. בתום הדגירה מעבירים בזהירות את הצלחת לחממה של 37 מעלות צלזיוס למשך 1.5 עד שעתיים נוספות. כאשר הג'ל התמצק במלואו, השהה מחדש פיברובלסטים רגילים של ריאות אנושיות בריכוז כפול 10 עד 4 תאים למיליליטר במדיום שלם, והוסף מיליליטר אחד של פיברובלסטים לכל באר.ואז החזר את הצלחת לחממת תרבית התאים. הקפדה על פרוטוקול הציפוי תביא לחרוזים מצופים תאים בעלי מראה מחוספס דמוי כדור גולף, כפי שמודגם בתמונה מייצגת זו של חרוזים מצופים מספיק המוכנים להשתלת ג'ל פיברין. יתר על כן, פרוטוקול זה מאפשר אסוציאציה הדוקה של שני סוגי התאים במבחנה עם נוכחות הפריציטים המשלימים את התרחשות הנביטה.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לצפות לחלוטין את החרוזים בתאים במהלך שלבי התסיסה, ולהטמיע בזהירות את החרוזים בג'ל הפיברין מבלי להכניס בועות במהלך השתלת הג'ל. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע ניתוחים אחרים כמו מחקרי עכברים של אנגיוגנזה כדי לענות על שאלות נוספות, כגון מהי הרלוונטיות in vivo של המנגנונים והפנוטיפים שנחקרו בבדיקת חרוזי הפריציט הנבטים במבחנה? טכניקה זו תהיה שימושית לחוקרים בתחום הביולוגיה של הסרטן ולחקור אינטראקציות ותפקודים של פריציטים של תאי אנדותל במודל רלוונטי יותר מבחינה פיזיולוגית של אנגיוגנזה.

incorporating-pericytes-into-an-endothelial-cell-bead-sprouting-assay

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

וידאו זה מדגים את פרוטוקול ב assay אנגיוגנזה במבחנה כי משחזר שלבים שונים של אנגיוגנזה. זמן לשגות תמונות של הנבטה, היווצרות לומן, הסתעפות ו השקה - התכונות העיקריות של אנגיוגנזה - מוצגים.

אופטימליים הפיברין ג&#39;ל ביד Assay לחקר אנגיוגנזה

סרטון זה מדגים בדיקה מבוססת חרוזים מיקרו-נשאים המשלבת פריציטים לחקר הנבטת אנדותל בשלבים המוקדמים של אנגיוגנזה. הבדיקה מספקת מודל ניסויי במבחנה להבנת מנגנונים מולקולריים של אנגיוגנזה ואת ההשפעה של טיפולים אנטי-אנגיוגנטיים.

בדיקת הנבטת חרוזים להערכת אנגיוגנזה בשלב מוקדם: מודל מבוסס חרוזים במבחנה לחקר הנבטת אנדותל בנוכחות פריציטים

כתב יד זה מציג שיטת הזרקה להנדס microvessels כי לשחזר מאפיינים פיסיולוגיים של האנדותל. תהליך microfluidic המבוסס יוצר רשתות כלי דם 3D פטנט עם תנאי tailorable, כגון זרימה, רכב הסלולר, גיאומטריה, והדרגות ביוכימיים. תהליך ייצור ודוגמאות של יישומים פוטנציאליים מתוארים.

Micropatterning והרכבת 3D microvessels

אנו מציגים פרוטוקול ללמוד אינטראקציות אנדותל-pericyte אדם העכבר באמצעות וריאציה של assay אנגיוגנזה תקע ג'ל מטריקס.

In vivo לחקר האדם האנדותל-pericyte אינטראקציה באמצעות assay Plug מטריקס ג&#39;ל עכבר

שמירה על כיסוי מחסום דם מוחי היא המפתח להומיאוסטזיס של מערכת העצבים המרכזית. פרוטוקול זה מתאר טכניקות חוץ גופית כדי לתמצת את התהליכים הבסיסיים הפתולוגיים כי לווסת דם מוח המכשול הכיסוי.

ב מבחני מבחנה כדי להעריך דם מוח מחסום כמו רשת כלי שיטפון ושיבוש

שיטה זו מתארת את התרבות של תאים מבוססי iPSC-נגזרות כמו 40 מיקרוכלי תלת-ממד של מיקרו בפלטפורמת microfluאידיג מתוקננת. פלטפורמה זו מאפשרת לימוד של לבלוב אנגיוגנטית מונחה הדרגתי ב-3D, כולל השקה וייצוב של נבטי האנגיוגנטי באופן מדרגי ותפוקה גבוהה.

שיטת הלימוד הסטנדרטית והמדמדית למחקר בלבלוב אנגיוגנטית בתלת-ממד של התאים הנגזרים מתוך מבחנה

מערכת שיתוף התרבות התלת-ממדית של החברה מיועדת לחקות את האנגיוגנזה הפיזיולוגי. שיתוף תרבות הספרואידים נוצרות על ידי שני מקדים האדם תא כלי דם, ECFCs ו MSCs, ו מוטבע ג'ל קולגן. המערכת החדשה יעילה להערכת מאפטורים מאופגנטיים, ומספקת מידע רלבנטי יותר למחקר בvivo.

3-מימדי אנגיוגנזה שיטת מערכת באמצעות Spheroids שיתוף תרבות נוצר על ידי ויוצרים מושבת המושבה תאים ותאי גזע Mesenchymal

אנחנו מציגים פרוטוקול להפקת. קרום המוח של מורציטים פרוטוקול זה הינו כלי רב ערך עבור מחקרים בלתי מתורבת המספקים טוהר גבוה ותשואה גבוהה, ובכך מקטין את מספר החיות הנסיוניות המשמשות.

שיטת פלט גבוהה כדי לבודד קרום הלב של מוחין מהעכבר

בדיקה זו משתמשת בתאי גזע עובריים של עכברים המתמיינים לגופי עובר בתרבית בג'ל קולגן תלת-ממדי כדי לנתח את התהליכים הביולוגיים השולטים באנגיוגנזה נובטת במבחנה. הטכניקה יכולה להיות מיושמת לבדיקת תרופות, מידול מחלות, ולחקר גנים ספציפיים בהקשר של מחיקות קטלניות עוברית.

במבחנה בדיקת הנבטה תלת מימדית של אנגיוגנזה באמצעות תאי גזע עובריים של עכבר לצורך מידול מחלות כלי דם ובדיקות סמים

מחקר זה מציג את בדיקת נדידת פצעי השריטה הדו-ממדית (2D) ואת בדיקת הנבטת הספרואידים התלת-ממדית (3D), יחד עם שיטות הניתוח שלהם במורד הזרם, כולל מיצוי RNA ואימונוציטוכימיה, כבדיקות מתאימות לחקר אנגיוגנזה במבחנה.

חקירת אנגיוגנזה ברמה תפקודית ומולקולרית על ידי מינוף בדיקת נדידת פצע השריטה ובדיקת הנבטת הספרואיד

חקור שילוב תאי אנדותל ופריסיטים באמצעות מבחן חרוזים חדשני לחקר אנגיוגנזה ספונטנית. שיטה זו מאפשרת לחקור אינטראקציות תאיות קריטיות בביולוגיה כלייתית.

שילוב Pericytes חרוז תא אנדותל הלבלוב Assay

גלה סרטונים נוספים