Name: השפעות כפול של מלנומה נגזר תא גורמים על בידול Adipocytes מח עצם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-23T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: חקור את ההשפעות הכפולות של גורמים נגזרים מתאי מלנומה על בידול Adipocytes מח עצם באמצעות מערכת תרבית משותפת דו-ממדית. שיטה זו מאפשרת חקר אינטראקציות בין תאי גידול ל-Adipocytes ומספקת תובנות למנגנוני גרורות עצם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים דב צפורי (מכון ויצמן למדע, רחובות) חביב על לספק לנו את התא סטרומה של מח העצם מאתר קו 14F1.1. מחקר זה נתמך על ידי מענקים סינית טבעית הקרן הלאומית למדע (' קט ' 81771729) ואוניברסיטת Yongchuan חולים של צ'ונגצ'ינג רפואי (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).

הערה: כל התאים המשמשים פרוטוקול זה צריך להיות בוגר לפחות שלושה דורות לאחר מפשיר מתאי מניות קפוא.
1. הקציר גורמים נגזר תא מלנומה
<ol><li>
ההכנות
	<ol>
<li>להשיג B16F10 תאים וקו תא מלנומה העכבר. הערה: עבור פרוטוקול זה, קו תא מלנומה העכבר הושג מהבנק תאי גזע של האקדמיה הסינית למדעים.</li>
		<li>להפוך למדיום מלאה לתרבות תא B16F10 (100 מ"ל). השתמש בינוני ששינה הנשר של Dulbecco (DMEM) בתוספת 10% עוברית שור סרום (FBS), 50 U/mL פנצילין ולאחר 50 µg/mL של סטרפטומיצין.</li>
		<li>להפוך מדיום ללא סרום עבור הרעב של תאי B16F10 (50 מ"ל). השתמש DMEM הבינונית ללא FBS U/mL 50 של פניצילין, µg 50/mL של סטרפטומיצין.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
להכין בינוני ממוזגים מלנומה (ס מ)
	<ol>
<li>זרע 2.0 x 105 B16F10 בתאים 100 מ מ מגישים עם 10 מ"ל של 10% FBS DMEM. ואז דגירה התאים 37 ° C חממה באווירה של 5% CO2 במשך 24 שעות ביממה.</li>
		<li>כאשר התאים מגיעים כ- 80% של זרימה, להסיר את המדיום תרבות, לשטוף את התאים פעמיים עם 5 מ ל תמיסת באגירה פוספט (PBS) (1 x, ה-pH 7.4), והחלף המדיום 10 מ"ל ללא סרום בינונית עבור הרעב.</li>
		<li>להחזיר את התאים החממה במשך 18 – 24 שעות.</li>
		<li>לאחר הרעב, לאסוף את המדיום ממוזגים (ס מ) עם פיפטה, להעביר אותו שפופרת צנטרפוגה מ"ל. הערה: המדיום ממוזגים הוא תגובת שיקוע של התרבויות תא B16F10. ודא כי התאים B16F10 הם במצב טוב לפני איסוף של ס מ.</li>
		<li>Centrifuge את ס"מ על 5 דקות ב x 1000 גרם -4 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>Pipette את תגובת שיקוע והעבר אותו צינור סטרילי טריים או בקבוק. הערה: יש להימנע pipetting את בגדר בתחתית הצינורית.</li>
		<li>כדי להסיר את שאריות תאים, לסנן את ס מ על ידי העברתו דרך מסנן מיקרומטר 0.45 מזרק המחובר על גבי בקבוק סטרילי או צינור. הערה: 0.22 מיקרומטר מסננים הם אופטימליים עבור סינון של ס מ.</li>
		<li>לאחסן את תגובת שיקוע המסוננות ב-20 ° C עד השימוש. הערה: מומלץ לא לאחסן את תגובת שיקוע ב-20 מעלות צלזיוס במשך יותר מחודש. לחלופין, לאחסן את ס"מ ב-80 מעלות צלזיוס לתקופות ממושכות יותר של זמן הבידול של adipocyte.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. אינדוקציה של מח עצם Adipocytes על ידי גורמים נגזר תא מלנומה
<ol><li>
ההכנות
	<ol>
<li>להפוך 100 מ של adipogenic אינדוקציה בינונית28. השתמש DMEM מלאה בתוספת 5 µg/mL של אינסולין, 0.5 מ מ 3-איזובוטיל-1-methylxanthine 1 מיקרומטר דקסמתזון. לאחסן אותו עד שבועיים, 4 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>הכן 100 מ של adipogenic תחזוקה בינוני. השתמש DMEM מלאה או מעורבב עם מלנומה 50% ס מ בתוספת 5 µg/mL של אינסולין.</li>
		<li>להפוך את פתרון מניות הנפט אדום O. לפזר 30 מ ג של אבקת שמן אדום O ב- 10 מ"ל של אלכוהול איזופרופיל (≥ 99.5%) ומערבבים אותם היטב על ידי מערבולת. הערה: לאחסן אותו עד 1 שנה-4 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>להפוך את פתרון עובד שמן אדום O. בשכונה fume, לדלל את שמן אדום O מניות הפתרון (מתוך שלב 2.1.3) עם מים יונים על יחס של 3:2. דגירה את התערובת למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר ולסנן אותו דרך מסנן מיקרומטר 0.22 לפני השימוש. הערה: השתמש רק את הפתרון עובד טריים בתוך שעתיים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
בידול adipocyte
	<ol>
<li>תרבות תא סטרומה קו 14F1.1 מן העכבר מח עצם29 בצלחת 60 מ מ עם DMEM מלאה ב- 80% confluency ב חממה 37 ° C באווירה של 5% CO2. הערה: לחלופין, להחליף 14F1.1 תאים mesenchymal הנגזרות מח העצם העיקרי30.</li>
		<li>Trypsinize התאים עם 1.5 מ של פתרון טריפסין 0.25% באינקובטור למשך 1-2 דקות.</li>
		<li>הוסף 5 מ של 10% FBS בינוני לתאים ולספור את מספרי הטלפון הנייד עם hemocytometer זכוכית; ואז להתאים את צפיפות התאים עד כ 1-2 x 105/mL.</li>
		<li>זרע 5 x 104 תאי 14F1.1 לכל טוב לתוך צלחת 24-ובכן עם 0.5 מ של adipogenic אינדוקציה בינוני. אחרי שני ימי דגירה, התאים להגיע כ- 90% של הנהרות. הערה: השלב זה קריטי מאוד. תאי סטרומה מח העצם לא יכול להיגרם כדי adipocytes ללא בינוני אינדוקציה adipogenic.</li>
		<li>להסיר את המדיום אינדוקציה ולשטוף את התאים פעמיים עם 1 מ"ל של PBS בכל פעם.</li>
		<li>לשנות ל 1 מ"ל adipogenic תחזוקה בינוני ולהמשיך התרבות התאים עד ההבשלה adipocyte. הערה: תחת מיקרוסקופ, adipocytes נראה כמו בועות סבון קטן או גדול, קל מאוד לזהות. בדרך כלל, adipocytes בוגר נוכחים את 6th או ביוםה 8.</li>
		<li>כתם על adipocytes בוגרת עם שמן אדום O או לאסוף את adipocytes עבור ניתוח (qPCR), תגובת שרשרת של פולימראז כמותית.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Adipocyte מכתים
	<ol>
<li>לשטוף 14F1.1 הבדיל תאים 2 x עם PBS ותקן אותן בפורמלין 3.7% לשעה.</li>
		<li>לשטוף את התאים ב- 60% אלכוהול איזופרופיל ולאפשר להם להתייבש לגמרי.</li>
		<li>הוספת 0.2 מ"ל של הפתרון עובד שמן אדום O הבארות, דגירה זה בטמפרטורת החדר במשך 0.5 עד 2 h.</li>
		<li>לשטוף את התאים עם מים כדי להסיר את צבע לא מאוגד.</li>
		<li>תמונה של adipocytes צבוע תחת מיקרוסקופ אור.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. coculture של מח עצם Adipocytes עם תאי מלנומה
<ol><li>
ההכנות
	<ol>
<li>להכין adipocytes מח עצם בוגרת: זירוז התאים 14F1.1 לתוך adipocytes מוניטור בוגרים ב- 24-ובכן צלחות עם המדיום אינדוקציה adipogenic 2 ימים, ולאחר מכן לשמור אותם בתוך המדיום תחזוקה adipogenic עבור 6-8 ימים נוספים.</li>
		<li>להכין את התאים B16F10: התרבות התאים B16F10 במנות 60 מ מ עם 5 מ של DMEM בינונית.</li>
		<li>להרטיב את תותב ממברנה (למשל transwell): להוסיף 150 µL בינוני DMEM נטולת FBS 0.4 µm גודל הנקבוביות ממברנה התוספות, לטבול אותם על הבארות של לוחות 24-ובכן מלא 500 µL של DMEM FBS ללא מדיום.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הגדרת coculture
	<ol>
<li>פיפטה לאט את המדיום של כל הוספה. הערה: לא מחריבים את הקרום בעת הסרת המדיום.</li>
		<li>זרע תאי B16F10 (0/103/105/106) הנקבובית מיקרומטר 0.4 מוסיף מהשלב 3.2.1.</li>
		<li>החלף המדיום תחזוקה adipogenic ב הבארות adipocytes מח עצם בוגרת מהשלב 3.1.1. עם 600 µL בינוני DMEM מלאה.</li>
		<li>להעביר את הכיסויים מלא עם תאי B16F10 (מתוך שלב 3.2.2) על הבארות עם adipocytes מח עצם בוגרת (מתוך שלב 3.2.3) עבור הניסויים coculture.</li>
		<li>תקופת דגירה של cocultures-CO 37 ° C ו-5%2 של 2 ימים.</li>
		<li>לאחר 48 שעות של דגירה, הסר את המכסים של coculture ולאחר מכן לשטוף את adipocytes 2 x עם 500 µL ל- 1 x PBS. הערה: לחלופין, איסוף התאים B16F10 הכיסויים לניתוח במידת הצורך.</li>
		<li>מכתים את adipocytes עם הפתרון עובד שמן אדום O או לאסוף את adipocytes לניתוח qPCR. הערה: עיין בהליך מכתימים בשלב 2.3.</li>
		<li>תמונה של adipocytes צבוע תחת מיקרוסקופ אור.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. qPCR ניתוח של החתימה גנים ספציפיים Adipocyte
<ol><li>להוסיף 0.5 מיליליטר מוכן לשימוש RNA בידוד מגיב לכל טוב לתוך צלחת 24-ובכן adipocyte בוגר אשר הוא מוכן לזהות.</li>
	<li>בצע את פרוטוקול תקני עבור החילוץ RNA ו- סינתזה cDNA31.</li>
	<li>להשתמש ומהצמיגים 18S, GAPDH שליטה, ו CEBPα/β, PPARγ, FABP4, לפטין, לבחירות-1 או אדיפונקטין לחתימה ג'ין adipocyte ספציפי (טבלה 1).</li>
	<li>להפעיל את התגובה הבאה הצנטרפוגה תרמי: 95 ° C עבור 20 s, ואחריו 40 מחזורי 95 ° C 1 s ו- C ° 60 20 s.</li>
	<li>השתמש בשיטתΔΔCt –2 כדי לחשב שהקיפול שינויים32.</li>
</ol>

<ol><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipogenic+niches+for+melanoma+cell+colonization+and+growth+in+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">Adipogenic niches for melanoma cell colonization and growth in bone marrow.</a> Laboratory Investigation. 97 (6), 737-745 (2017).</li>
<li>Trotter, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte-Lineage+Cells+Support+Growth+and+Dissemination+of+Multiple+Myeloma+in+Bone%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Adipocyte-Lineage Cells Support Growth and Dissemination of Multiple Myeloma in Bone.</a> The American Journal of Pathology. 186 (11), 3054-3063 (2016).</li>
<li>Morris, E. V., Edwards, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+bone+marrow+adipocytes+in+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+Oncology%22%5BJournal%5D)">The role of bone marrow adipocytes in bone metastasis.</a> Journal of Bone Oncology. 5 (3), 121-123 (2016).</li>
<li>Diedrich, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+adipocytes+promote+the+Warburg+phenotype+in+metastatic+prostate+tumors+via+HIF-1alpha+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Bone marrow adipocytes promote the Warburg phenotype in metastatic prostate tumors via HIF-1alpha activation.</a> Oncotarget. 7 (40), 64854-64877 (2016).</li>
<li>Chkourko Gusky, H., Diedrich, J., MacDougald, O. A., Podgorski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Omentum+and+bone+marrow%3A+how+adipocyte-rich+organs+create+tumour+microenvironments+conducive+for+metastatic+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+Reviews%22%5BJournal%5D)">Omentum and bone marrow: how adipocyte-rich organs create tumour microenvironments conducive for metastatic progression.</a> Obesity Reviews. 17 (11), 1015-1029 (2016).</li>
<li>Chen, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+fat+diet+increases+melanoma+cell+growth+in+the+bone+marrow+by+inducing+osteopontin+and+interleukin+6%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">High fat diet increases melanoma cell growth in the bone marrow by inducing osteopontin and interleukin 6.</a> Oncotarget. 7 (18), 26653-26669 (2016).</li>
<li>Balaban, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+lipolysis+links+obesity+to+breast+cancer+growth%3A+adipocyte-derived+fatty+acids+drive+breast+cancer+cell+proliferation+and+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Adipocyte lipolysis links obesity to breast cancer growth: adipocyte-derived fatty acids drive breast cancer cell proliferation and migration.</a> Cancer & Metabolism. 5, 1(2017).</li>
<li>Huang, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+promote+malignant+growth+of+breast+tumours+with+monocarboxylate+transporter+2+expression+via+beta-hydroxybutyrate%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Adipocytes promote malignant growth of breast tumours with monocarboxylate transporter 2 expression via beta-hydroxybutyrate.</a> Nature Communications. 8, 14706(2017).</li>
<li>Wang, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+adipocytes+stimulate+breast+cancer+invasion+through+metabolic+remodeling+of+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Mammary adipocytes stimulate breast cancer invasion through metabolic remodeling of tumor cells.</a> JCI Insight. 2 (4), 87489(2017).</li>
<li>Wang, C., Gao, C., Meng, K., Qiao, H., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipocytes+stimulate+invasion+of+breast+cancer+MCF-7+cells+by+secreting+IGFBP-2%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human adipocytes stimulate invasion of breast cancer MCF-7 cells by secreting IGFBP-2.</a> PLoS One. 10 (3), 0119348(2015).</li>
<li>Nieman, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+promote+ovarian+cancer+metastasis+and+provide+energy+for+rapid+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth.</a> Nature Medicine. 17 (11), 1498-1503 (2011).</li>
<li>Herroon, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+adipocytes+promote+tumor+growth+in+bone+via+FABP4-dependent+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Bone marrow adipocytes promote tumor growth in bone via FABP4-dependent mechanisms.</a> Oncotarget. 4 (11), 2108-2123 (2013).</li>
<li>Tabe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+Marrow+Adipocytes+Facilitate+Fatty+Acid+Oxidation+Activating+AMPK+and+a+Transcriptional+Network+Supporting+Survival+of+Acute+Monocytic+Leukemia+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Bone Marrow Adipocytes Facilitate Fatty Acid Oxidation Activating AMPK and a Transcriptional Network Supporting Survival of Acute Monocytic Leukemia Cells.</a> Cancer Research. 77 (6), 1453-1464 (2017).</li>
<li>Wen, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocytes+activate+mitochondrial+fatty+acid+oxidation+and+autophagy+to+promote+tumor+growth+in+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Adipocytes activate mitochondrial fatty acid oxidation and autophagy to promote tumor growth in colon cancer.</a> Cell Death & Differentiation. 8 (2), 2593(2017).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+adipocytes+in+bone+marrow+protect+myeloma+cells+against+chemotherapy+through+autophagy+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Mature adipocytes in bone marrow protect myeloma cells against chemotherapy through autophagy activation.</a> Oncotarget. 6 (33), 34329-34341 (2015).</li>
<li>Ye, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukemic+Stem+Cells+Evade+Chemotherapy+by+Metabolic+Adaptation+to+an+Adipose+Tissue+Niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Leukemic Stem Cells Evade Chemotherapy by Metabolic Adaptation to an Adipose Tissue Niche.</a> Cell Stem Cell. 19 (1), 23-37 (2016).</li>
<li>Templeton, Z. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+Cancer+Cell+Colonization+of+the+Human+Bone+Marrow+Adipose+Tissue+Niche%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Breast Cancer Cell Colonization of the Human Bone Marrow Adipose Tissue Niche.</a> Neoplasia. 17 (12), 849-861 (2015).</li>
<li>Daquinag, A. C., Souza, G. R., Kolonin, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+engineering+in+three-dimensional+levitation+tissue+culture+system+based+on+magnetic+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C%3A+Methods%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue engineering in three-dimensional levitation tissue culture system based on magnetic nanoparticles.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 19 (5), 336-344 (2013).</li>
<li>Emont, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+a+3D+Culture+System+to+Differentiate+Visceral+Adipocytes+In+Vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Using a 3D Culture System to Differentiate Visceral Adipocytes In Vitro.</a> Endocrinology. 156 (12), 4761-4768 (2015).</li>
<li>Katt, M. E., Placone, A. L., Wong, A. D., Xu, Z. S., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Tumor+Models%3A+Advantages%2C+Disadvantages%2C+Variables%2C+and+Selecting+the+Right+Platform%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">In Vitro Tumor Models: Advantages, Disadvantages, Variables, and Selecting the Right Platform.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 12(2016).</li>
<li>Edmondson, R., Broglie, J. J., Adcock, A. F., Yang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+culture+systems+and+their+applications+in+drug+discovery+and+cell-based+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22ASSAY+and+Drug+Development+Technologies%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell culture systems and their applications in drug discovery and cell-based biosensors.</a> ASSAY and Drug Development Technologies. 12 (4), 207-218 (2014).</li>
<li>Herroon, M. K., Diedrich, J. D., Podgorski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+3D-Culture+Approaches+to+Study+Interactions+of+Bone+Marrow+Adipocytes+with+Metastatic+Prostate+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Endocrinology+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">New 3D-Culture Approaches to Study Interactions of Bone Marrow Adipocytes with Metastatic Prostate Cancer Cells.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 7, 84(2016).</li>
<li>Lee, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+microenvironment+alters+protein+expression+and+chemosensitivity+of+epithelial+ovarian+cancer+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional microenvironment alters protein expression and chemosensitivity of epithelial ovarian cancer cells in vitro.</a> Laboratory Investigation. 93 (5), 528-542 (2013).</li>
<li>Imamura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+2D-+and+3D-culture+models+as+drug-testing+platforms+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">Comparison of 2D- and 3D-culture models as drug-testing platforms in breast cancer.</a> Oncology Reports. 33 (4), 1837-1843 (2015).</li>
<li>Birgersdotter, A., Sandberg, R., Ernberg, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+perturbation+in+vitro--a+growing+case+for+three-dimensional+%283D%29+culture+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cancer+Biology%22%5BJournal%5D)">Gene expression perturbation in vitro--a growing case for three-dimensional (3D) culture systems.</a> Seminars in Cancer Biology. 15 (5), 405-412 (2005).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+spheroid+culture+system+on+micropatterned+substrates+for+improved+differentiation+efficiency+of+multipotent+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">3D spheroid culture system on micropatterned substrates for improved differentiation efficiency of multipotent mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 30 (14), 2705-2715 (2009).</li>
<li>Dirat, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+adipocytes+exhibit+an+activated+phenotype+and+contribute+to+breast+cancer+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated adipocytes exhibit an activated phenotype and contribute to breast cancer invasion.</a> Cancer Research. 71 (7), 2455-2465 (2011).</li>
<li>Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+methods+of+adipogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells and Development. 20 (10), 1793-1804 (2011).</li>
<li>Zipori, D., Toledo, J., von der Mark, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+heterogeneity+among+stromal+cell+lines+from+mouse+bone+marrow+disclosed+in+their+extracellular+matrix+composition+and+interactions+with+normal+and+leukemic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Phenotypic heterogeneity among stromal cell lines from mouse bone marrow disclosed in their extracellular matrix composition and interactions with normal and leukemic cells.</a> Blood. 66 (2), 447-455 (1985).</li>
<li>Maridas, D. E., Rendina-Ruedy, E., Le, P. T., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+Culture%2C+and+Differentiation+of+Bone+Marrow+Stromal+Cells+and+Osteoclast+Progenitors+from+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (131), e56750(2018).</li>
<li>Iguchi, T., Niino, N., Tamai, S., Sakurai, K., Mori, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absolute+Quantification+of+Plasma+MicroRNA+Levels+in+Cynomolgus+Monkeys%2C+Using+Quantitative+Real-time+Reverse+Transcription+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Absolute Quantification of Plasma MicroRNA Levels in Cynomolgus Monkeys, Using Quantitative Real-time Reverse Transcription PCR.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e56850(2018).</li>
<li>Bozec, A., Hannemann, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+Regulation+of+Adipocyte+Numbers+in+Adult+Organisms+Through+Differentiation+and+Apoptosis+Homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mechanism of Regulation of Adipocyte Numbers in Adult Organisms Through Differentiation and Apoptosis Homeostasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e53822(2016).</li>
<li>Shafat, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukemic+blasts+program+bone+marrow+adipocytes+to+generate+a+protumoral+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Leukemic blasts program bone marrow adipocytes to generate a protumoral microenvironment.</a> Blood. 129 (10), 1320-1332 (2017).</li>
<li>Gazi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+of+lipid+translocation+between+adipocytes+and+prostate+cancer+cells+with+imaging+FTIR+microspectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Direct evidence of lipid translocation between adipocytes and prostate cancer cells with imaging FTIR microspectroscopy.</a> The Journal of Lipid Research. 48 (8), 1846-1856 (2007).</li>
<li>Brown, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+omega-6+PUFA+arachidonic+acid+and+bone+marrow+adipocytes+on+metastatic+spread+from+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Influence of omega-6 PUFA arachidonic acid and bone marrow adipocytes on metastatic spread from prostate cancer.</a> British Journal of Cancer. 102 (2), 403-413 (2010).</li>
<li>Hardaway, A. L., Herroon, M. K., Rajagurubandara, E., Podgorski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+adipocyte-derived+CXCL1+and+CXCL2+contribute+to+osteolysis+in+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Marrow adipocyte-derived CXCL1 and CXCL2 contribute to osteolysis in metastatic prostate cancer.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 32 (4), 353-368 (2015).</li>
<li>Aebi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+metastasis+in+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22European+Spine+Journal%22%5BJournal%5D)">Spinal metastasis in the elderly.</a> European Spine Journal. 12, Suppl 2 202-213 (2003).</li>
<li>Wagner, M., Bjerkvig, R., Wiig, H., Dudley, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+adipocyte+specification+and+necrosis+augment+tumor-associated+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Adipocyte%22%5BJournal%5D)">Loss of adipocyte specification and necrosis augment tumor-associated inflammation.</a> Adipocyte. 2 (3), 176-183 (2013).</li>
<li>Bochet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+adipocytes+promotes+breast+tumor+radioresistance%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated adipocytes promotes breast tumor radioresistance.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 411 (1), 102-106 (2011).</li>
<li>Hirano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+adipogenesis+induction+by+conditioned+media+obtained+from+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Enhancement of adipogenesis induction by conditioned media obtained from cancer cells.</a> Cancer Letters. 268 (2), 286-294 (2008).</li>
<li>Gordeev, A. A., Chetverina, H. V., Chetverin, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planar+arrangement+of+eukaryotic+cells+in+merged+hydrogels+combines+the+advantages+of+3-D+and+2-D+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Planar arrangement of eukaryotic cells in merged hydrogels combines the advantages of 3-D and 2-D cultures.</a> Biotechniques. 52 (5), 325-331 (2012).</li>
</ol>

המחברים יש ריהצהל.

Cocultures עם מוסיף היה בשימוש נרחב ללמוד אינטראקציות מתא לתא. מערכת 2D coculture היא דרך יעילה כדי לבחון איך שני חלקים crosstalk במבחנה, שלפיו שהצגנו כאן שני סרטן שונים מונחה תא אפקטים על מח עצם adipocytes. מעבדות רבות השתמשו בשיטה זו כדי לחקור crosstalk בין adipocytes לבין סרטן תאים6,12,27,39.
באופן כללי, לכן, coculture דו-מימדית הוא הגישה פשוטה בצורה הטוב...

גרורות בעצמות נפוץ בקרב חולי סרטן מתקדם, אך טיפול המרפא אינו זמין עדיין. מעבר המתמחה באחסון אנרגיה כשומן, adipocytes יכול לתמוך הגידול, גרורות במח העצם, שאר האיברים1,2,3,4,5,6. יתר על כן, adipocytes ממלאות תפקיד חיוני בוויסות סרטן התא ביולוגיה7,8,9,10 ואת חילוף החומרים4,11,12 ,13,14,15,16, כמו גם כמו ב עצם גרורות1,4,12. בנישה מח עצם, adipocytes יכולים להשפיע גם על ההתנהגות הביולוגית של סרטן תאים4,6,17. יחסי הגומלין בין מח עצם adipocytes תאים סרטניים עם osteotropism היא משמעותית להבנת עצם גרורות. עם זאת, מעט מאוד ידוע.
על סמך המחקרים הנוכחי, שיטות שונות חלות adipocytes, כולל שני - או תלת ממדית (2) / 3יח ו- ex-vivo תרבויות17,18,19,20,21. לאחרונה, Herroon. ואח עיצב גישה 3D-תרבות חדשה ללמוד אינטראקציות של מח עצם adipocytes עם סרטן תאים22. אמנם coculture 3D אופטימלי מחקה פיזיולוגיים אינטראקציות בין adipocytes לבין סרטן תאים ויוו, זה סובל מסכן הפארמצבטית22,23. לעומת מערכת 2D coculture, מערכת 3D coculture עשויה לספק פנוטיפים הסלולר שונים, כגון תא מורפולוגיה21,22,24,25,26. יתר על כן, התרבות שמחוץ שברי רקמת עצם ספוגית מבודד יכול להוביל המוצלח חזקים adipocytes מ מח עצם בתרבית תאים17.
לעומת דגמים קודמים אלה, עם זאת, המודל התרבות התא 2D נשאר טכניקה קלאסית, אמין וקל עבור במהירות הסריקה מולקולות המועמד, על הפנוטיפים השתנה adipocytes או סרטן תאי במבחנה1, 4,6,12,15,27. כדי להבין טוב יותר crosstalk בין מח עצם adipocytes בתאי מלנומה, אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור מערכת coculture דו-מימדית של מח עצם adipocytes עם תאי מלנומה.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen Inc.</td><td></td><td></td>11965092</tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Invitrogen Inc.</td><td>16000&ndash; 044</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח</td><td>Invitrogen בע"מ</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>91077C</td><td></td></tr><tr><td>3-איזובוטיל-1-מתיל-קסנטין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I5879</td><td></td></tr><tr><td>דקסמתזון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>שמן אדום o</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>O0625</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 24 בארות</td><td>קורנינג</td><td>CLS3527</td><td></td></tr><tr><td>הכנסת</td> <td>טרנסוולMillipore</td><td>MCHT24H48</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>איזופרופנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I9516</td><td></td></tr><tr><td>0.25% טריפסין</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>המוציטומטר</td><td>Bio-Rad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>תרבית אינקובטור תרבית</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל פלקון</td><td>קורנינג</td><td>CLS430828</td><td></td></tr><tr><td>ספסל נקי</td><td>תרמו-מיקרוסקופיה</td><td></td> מדעית-מיקרוסקופיה <td></td></tr><tr><td></td><td>אולימפוס-200</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>&mu; קצות פיפט L</td><td>BeyoGold</td><td>FTIP620</td><td></td></tr><tr><td>1,000 מ"ל קצות פיפט</td><td>BeyoGold</td><td>FTIP628</td><td></td></tr></tbody></table>

השפעות כפול של מלנומה נגזר תא גורמים על בידול adipocytes מח עצם

Dual Effects of Melanoma Cell-derived Factors on Bone Marrow Adipocytes Differentiation

Crosstalk בין מח עצם adipocytes תאים סרטניים עשוי לשחק תפקיד קריטי בתהליך של עצם גרורות. מגוון שיטות זמינות עבור הלומדים crosstalk משמעותי; עם זאת, מערכת transwell דו-ממדי עבור coculture נשאר קלאסי, אמינה, בעלת דרך קלה עבור מחקר crosstalk זה. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט המציג את coculture של מח עצם adipocytes, בתאי מלנומה. למרות זאת, מערכת כזו coculture יכול לתרום המחקר של תא transductions אות של תאים סרטניים המושרה על ידי מח העצם adipocytes אלא גם לעתיד מכניסטית ללמוד על עצם גרורות אשר עלול לגלות מטרות טיפוליות חדשות עבור עצם גרורות.

במח העצם, adipocytes יכול להופיע גידול microenvironment1,13,33,34,35 בשלב מוקדם לתמיכה התקדמות הגידול דרך גורמים מסיסים או הפעלת osteoclastogenesis6,12,36, במיוחד בהקשר של השמנה6,12<...

כאן, אנו מציגים את מערכת אמינה וישירה דו-ממדית (2D) coculture ללמוד את האינטראקציה בין תאים סרטניים adipocytes מח עצם, אשר חושף את אפקט כפול של מלנומה נגזר תא גורמים על adipocytes מח העצם בידול גם מהווה שיטה קלאסי לצורך המחקר מכניסטית של עצם גרורות.

השפעות כפול של מלנומה נגזר תא גורמים על בידול Adipocytes מח עצם

The crosstalk between bone marrow adipocytes and tumor cells may play a critical role in the process of bone metastasis. A variety of methods are ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר של גרורות בעצם, כגון אילו שינויים מושרים בצמיחת אדיפוציטים במח העצם והתפתחותם במיקרו-סביבה סרטנית. היתרונות הגדולים של טכניקה זו הם שהיא קלה לביצוע ושניתן להשיג במהירות את המולקולות המועמדות לביצוע. שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי הדיבור ההדדי בין אדיפוציטים של מח העצם לתאים המלנומליים.ניתן ליישם אותו גם על סוגי תאים אחרים, כגון אוסטאובלסטים. התחל בזריעה פעמיים 10 לתאי המלנומה החמישיים B16F10 בצלחת של 100 מילימטר עם 10 מיליליטר DMEM בתוספת 10% FBS, לדגירה של 24 שעות ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2. למחרת, שטפו את תרבית התאים הקונפלואנטית של כ-80% פעמיים עם חמישה מיליליטר PBS בכל שטיפה, והרעיבו את התאים עם 10 מיליליטר של מדיום תרבית ללא סרום בחממת תרבית התאים למשך 18 עד 24 שעות.למחרת, השתמש בפיפטה כדי להעביר את הסופרנטנט המותנה לצינור חרוטי של 50 מיליליטר לצנטריפוגה, והעמיס את המדיום למזרק המצויד במסנן נקבוביות של 0.45 מיקרון. לאחר מכן, סננו את התמיסה לתוך מיכל סטרילי כדי להסיר את כל שאריות התאים, ואחסנו את המדיום המותנה במינוס 20 מעלות צלזיוס עד חודש. כדי לגרום לאדיפוציטים של מח עצם, עכבר תרבית F14 1.1 תאי סטרומה של מח עצם בצלחת של 60 מילימטר עם DMEM מלא עד מפגש של 80%.בשלב המתאים של התרבית, קצרו את התאים עם 1.5 מיליליטר של תמיסת טריפסין של 0.25% למשך דקה עד שתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. כאשר התאים מתנתקים, עצרו את התגובה האנזימטית עם חמישה מיליליטר של מדיום בתוספת 10% FBS, והתאימו את התאים לריכוז אחד עד פעמיים של 10 לחמישי תאים למיליליטר עם מדיום תרבית טרי בתוספת סרום. זרע חמש פעמים 10 לתאים הרביעיים ב -0.5 מיליליטר של מדיום אינדוקציה אדיפוגני לבאר בצלחת של 24 בארות, והחזיר את התאים לחממת תרבית התאים למשך יומיים נוספים, עד שהם מגיעים לכ- 90% מפגש.לאחר מכן, החלף את הסופרנטנט במיליליטר אחד של מדיום תחזוקה אדיפוגני לכל באר, והמשיך לתרבית התאים עד להבשלת השומן. כאשר התאים נראים כמו בועות סבון קטנות עד גדולות במיקרוסקופ אור, שטפו את האדיפוציטים הבוגרים הללו פעמיים עם PBS, ולאחר מכן קיבעו ב-0.2 מיליליטר של פורמלדהיד 3.7% למשך שעה. שוטפים את התאים הקבועים באיזופרופנול של 60%, ומאפשרים לבארות להתייבש לחלוטין.הוסף 0.2 מיליליטר של תמיסת עבודה Oil Red O לתאים למשך 30 עד 120 דקות דגירה בטמפרטורת החדר, ושטוף את התאים במים כדי להסיר כל צבע לא קשור להדמיה של האדיפוציטים במיקרוסקופ אור. לחלופין, עם התבגרותם, הוסף 0.5 מיליליטר של ריאגנט בידוד RNA מוכן לשימוש לכל תרבית אדיפוציטים, והשתמש בפריימרים המתאימים כדי לאשר את חתימת הגן הספציפית לאדיפוציטים של התאים. לאחר מכן, הפעל את התגובה במחזור תרמי באמצעות ההגדרות המצוינות.כדי להקים תרבית משותפת של תאי מלנומה אדיפוציטים שמקורם במח העצם, הוסף תחילה 150 מיקרוליטר של DMEM נטול סרום לתאים הפנימיים של תוספות ממברנה בגודל 0.4 מיקרון נקבוביות, והנח כל תוספת לבאר אחת של צלחת של 24 בארות המכילה 500 מיקרוליטר של מדיום נטול סרום לבאר. יש לדלל תאי מלנומה B16F10 מתרבית תאים של 80% לריכוז המתאים לניסוי במדיום טרי נטול סרום, ולהחליף את המדיום בתא הפנימי של כל תוספת ב-150 מיקרוליטר תאים. לאחר מכן, החלף את מדיום התחזוקה האדיפוגני בכל באר של תרבית שומן מח עצם בוגר של 90% ב-600 מיקרוליטר של DMEM שלם, והעביר את התוספות המכילות תאי מלנומה לכל באר של צלחת תרבית השומן הבוגרת.לאחר שכל התוספות הועברו, הנח את הצלחת בחממת תרבית התאים. לאחר יומיים, הסר את התוספות ושטוף את תחתית כל באר פעמיים עם 500 מיקרוליטר PBS לכל כביסה. לאחר מכן, צבעו את האדיפוציטים בתמיסת העבודה Oil Red O, או נתחו את ביטוי הגן של השומן על ידי PCR כמותי, כפי שהודגם.אדיפוציטים בוגרים המובחנים במדיום מותנה לגידול מכילים טיפות שומנים, המאפשרות לזהות בקלות את האדיפוציטים המובחנים על ידי צביעת שמן אדום O. ניתן לאשר את חתימת הגן הספציפית לאדיפוציטים של תאים אלה גם על ידי PCR כמותי. ירידה באחסון השומנים נצפתה באדיפוציטים שגודלו בתרבית משותפת בנוכחות מספר גבוה של תאי מלנומה, כמו גם דה-דיפרנציאציה בפנוטיפ אדיפוציטים, כפי שמעידה ירידה בביטוי הגנים הספציפיים לאדיפוציטים בתאים בוגרים אלה לשעבר.אחרי הצפייה בסרטון הזה, אתם אמורים להבין היטב כיצד לתכנן ולהקים מערכת תרבית משותפת דו-ממדית לחקר האינטראקציות בין שני סוגי תאים שונים.

dual-effects-melanoma-cell-derived-factors-on-bone-marrow-adipocytes

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סרטון זה מדגים את ההתמיינות של תאי סטרומה ממח עצם (BMSCs) לאדיפוציטים. בתהליך הדו-שלבי, בנוכחות גורמי גדילה והורמונים ספציפיים, BMSCs בלתי ממוינים מתמיינים תחילה לפראדיפוציטים. השלב השני הכולל טיפול בגלוקוז ואינסולין מוביל להיווצרות אדיפוציטים בוגרים עם טיפות שומנים מרובות.

בעכבר חוץ גופי עצם עצם התמיינות תאי סטרומה לאדיפוציטים

רקמת שומן (AT) יכולה להשפיע על הומאוסטזיס של כל הגוף, ולכן יש חשיבות להבנת המנגנונים המולקולריים של התמיינות ותפקוד אדיפוציטים. אנו מספקים פרוטוקול להשגת תובנות חדשות לגבי תהליכים אלה על ידי ניתוח הומאוסטזיס, התמיינות וחשיפה להיפוקסיה כמודל לאפופטוזיס אדיפוציטים מושרים.

מנגנון הוויסות של מספרי adipocyte למבוגרים אורגניזמים באמצעות בידול הומאוסטזיס אפופטוזיס

באורגניזמים רב-תאיים, גורמים מסיסים המופרשים מעוררים תגובות מסוגי תאים שונים כתוצאה מאיתות פרקריני. מערכות תרבית משותפת מציעות דרך פשוטה להעריך את השינויים המתווכים על ידי גורמים מסיסים המופרשים בהיעדר מגע תא-תא.

פיתוח של מערכת כנס עמית התרבות שני סוגים סלולריים בהעדר לתקשר Cell-Cell

כאן אנו מדווחים על שיטה לבידוד של אוכלוסיות תאי אב (APC) של אדיפוציטים (APC) מתוך רקמת אדיפוס (Perivascular Adipose Tissue) (PVAT) תוך שימוש במיון תאים מגנטיים המופעל (MCS). שיטה זו מאפשרת בידוד מוגבר של APC לכל גרם של רקמת השומן בהשוואה לפלואורסצנטי המופעל תא מיון (FACS).

הרחבת אדיפוגנזה השראה של אבות אדיפוציטים מ רקמות אדיבוס perivascular מבודדים על ידי מיון מגנטי המופעל תא

שיטות מסורתיות של הערכת בידול adipogenic זול, קל לשימוש, אך אינם ספציפיים על שינויים בביטוי הגנים. פיתחנו וזמינותו של לכמת mesenchymal תאית התמיינות לתוך בוגרת adipocytes באמצעות סמן שושלת היוחסין הספציפי. Assay הזה יש יישומים שונים ומגוונים ברחבי מחקר בסיסי ברפואה קלינית.

ויזואליזציה, כימות פוטנציאל בידול Adipogenic תא Mesenchymal עם סמן ספציפי שושלת היוחסין

הבידול של adipocytes לבן ובייז של רקמת שומן אבות כלי הדם נושא פוטנציאל שיפור חילוף החומרים ההשמנה. נתאר פרוטוקולים של CD34 + CD31 + בידוד תאי אנדותל של שומן אנושי ואת הבאים במבחנה הרחבה, בידול לתוך לבן ובייז adipocytes. הם דנו מספר יישומים במורד הזרם.

בידוד, הרחבה, אינדוקציה Adipogenic CD34 + CD31 + תאי אנדותל של אדם עם פגיעה ו התת-עורית שומן

הפרוצדורה הבאה מתארת שיטה לשליטה מרחבית וטמפורלית של ייזום גידול מלנוציטוטי בעור מוראני, באמצעות דגם עכבר מהונדס גנטית. פרוטוקול זה מתאר מאקרוסקופי כמו גם חניכה מיקרוסקופיים עורית מלנומה.

שליטה מרחבית וטמפורלית של מלנומה מורין ייזום מוטציה תאי גזע מלנוציט

הפרוטוקול מאפשר יצירת אוכלוסיית אדיפוציט טהורה מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs). חומצה רטינואית משמשת להתמיינות iPSCs לתאי גזע מזנכימליים (MSCs) המשמשים לייצור אדיפוציטים. לאחר מכן, גישת מיון המבוססת על צביעה אדומה של הנילוס משמשת להשגת אדיפוציטים טהורים.

התמיינות איתנה של תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים לאוכלוסייה טהורה של אדיפוציטים כדי לחקור הפרעות הקשורות לאדיפוציטים

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

מאמר זה מתאר פרוטוקול להתפשטות תאי גידול במחזור נוזל המוח בעמוד השדרה (CSF-CTCs) שנאסף מחולים עם מחלת לפטומנינגיאלית הקשורה למלנומה (M-LMD) כדי לפתח מודלים פרה-קליניים לחקר M-LMD.

אקס ויוו תרבית של תאי גידול במחזור הדם בנוזל השדרה המוחי מחולי מלנומה לחקר מחלת לפטומנינגה הקשורה למלנומה

חקור את ההשפעות הכפולות של גורמים נגזרים מתאי מלנומה על בידול Adipocytes מח עצם באמצעות מערכת תרבית משותפת דו-ממדית. שיטה זו מאפשרת חקר אינטראקציות בין תאי גידול ל-Adipocytes ומספקת תובנות למנגנוני גרורות עצם.

השפעות כפול של מלנומה נגזר תא גורמים על בידול Adipocytes מח עצם

גלה סרטונים נוספים