Name: דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: למדו את פרוטוקול ה-TAC המינימלי-פולשני להשגת היפרטרופיה של החדר השמאלי בעכברים. שיטה זו מאפשרת חקר תגובות מקרופאגים לבביים ומפחיתה טראומה כירורגית ותגובות דלקתיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים סטילה Frede, סוזאן שולץ על הסיוע הטכני שלהם. מחקר זה קיבל מימון.

פרוטוקול זה אושרה על ידי ועדת האתיקה של חיה ניסויים LANUV אסן (#84-02.04.2016.A374). בדרך כלל, הליך זה מבוצע על עכברים בוגרים > בגיל 10 שבועות. עם זאת, ניתן לבצע את הניתוח הזה על חיים צעירים גם כן. כלי ניתוח חייבים לעקר לפני השימוש, כל הצעדים שיש לבצע בתנאים אספטי.
1. אינדוקציה של צנרור והרדמה
<ol><li>להזריק הבופרנורפין 0.1 µg/גרם משקל intraperitoneally להקלה בכאבים. חזור על זריקות בקרום הבטן של 0.1 מ"ג/ק"ג. הבופרנורפין כל 8 שעות עבור שלושה ימים לאחר הניתוח.</li>
	<li>על אינדוקציה, מקם את העכבר לתוך תיבת אינדוקציה של הרדמה אשר מחובר את מכשיר אידוי מוגדר כ- 3.0% Vol איזופלוריין עם זרימת החמצן 1 ליטר/דקה.</li>
	<li>להבטיח הרדמה עמוקה על ידי גרימת גירוי חוש המישוש. הערה: % עלייה Vol איזופלוריין עד 5%, אם נכשלת אינדוקציה הרדמה או הרדמה אינו עמוק מספיק.</li>
	<li>לצבוט את הזנב של העכבר כדי להבטיח היעדרות רפלקס. במקרה של היעדרות מוחלטת של רפלקסים, שוקל את העכבר להתקנה ההנשמה אופטימלית (ראה 1.12).</li>
	<li>להזיז את העכבר על שולחן הניתוחים טמפרטורה מבוקרת כדי לשמור על טמפרטורת גוף של 37 מעלות צלזיוס לאורך כל ההליך.</li>
	<li>מקם את האף של העכבר קונוס פלסטיק אשר מחובר אל תיבת אינדוקציה הרדמה כדי לשמור על הרדמה.</li>
	<li>לתקן את החותכות העליונות של העכבר בתפר ניילון. שמלמדות הגפיים עם דבק.</li>
	<li>הפעילו לחץ על הכפה האחוריות עם קצה המלקחיים כדי להבטיח הרדמה נאותה שוב. בהיעדרו של רפלקס הנסיגה להמשיך לשלבים הבאים. הערה: להגביר את אמצעי האחסון % של איזופלוריין אם נכשלת אינדוקציה הרדמה או הרדמה אינה מספיק עמוק ולחכות העדר רפלקס הנסיגה.</li>
	<li>המקום סטרילי סיכה אופטלמולוגיות על הקרנית כדי למנוע לייבוש תחת הרדמה.</li>
	<li>לשמן את בדיקה רקטלית כדי למנוע טראומה רקטלית. הוספת בדיקה טמפרטורה רקטלית כדי להבטיח לטמפרטורה הליבה של 37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>Depilate הגרון, החזה העליון עם קרם depilatory על פי הוראות היצרן. . תנגב את הקרם לאחר 1 דקות. אם יש צורך, חזור על שלב זה עד להצלחה. הערה: השתמש שקצהו כותנה מטליות במקרה של דימום.</li>
	<li>לנקות את האזור depilated עם 70% אתנול. לאחר מכן להחיל povidone יוד לחיטוי העור המקומי 3 פעמים, לפחות 3 דקות.</li>
	<li>לכוונן הגדרות ההנשמה כדי פיסיולוגיים. הגדר את קצב הנשימה 150/min ואמצעי אחסון ענק עד 8-10 µL/גרם משקל (BW).</li>
	<li>לשים על זוג חדש של כפפות סטריליות. הנח את העכבר תחת מיקרוסקופ כירורגי, הצב תלוי fenestrated סטרילי על העכבר.</li>
	<li>פצעים וחתכים בעור בקו האמצע כ 3 מ מ תחת הלסת אל הצלע 2nd . לזהות את קו האמצע ואת רקמות החיבור של בלוטת נקראות. ואז להשתמש מלקחיים intracapsular בזווית כדי לחלק את בלוטת בקו האמצע בפשטות עם מלקחיים שני ולחקור את השריר והכו אותי בעדינות.</li>
	<li>הכינו את קנה הנשימה בעדינות על ידי משיכת השרירים פארא-הנשימה בנפרד בפשטות עם מלקחיים intracapsular.</li>
	<li>משוך את הלשון עם מלקחיים כדי ליישר את הגרון תנאים צנרור קל יותר ולהוסיף בעדינות בצינורית צנרור (OD 1.2 מ מ) בתוך קנה הנשימה. לאשר את צנרור מאת פריט חזותי ישיר של הצינור בתוך קנה הנשימה ועל -ידי בדיקת לתנועה נכונה לחזה.</li>
	<li>התאם את הריכוז איזופלוריין לאחר צנרור לאיזופלוריין 2% עם זרם של 1.0 L/min ו- 100% O2. הערה: אם תנועות נשימה לא מפסיקים או עכברים מתחילים לנוע, תחילה להגביר את קצב הנשימה עד 180/min. במידת הצורך, להגדיל ריכוז איזופלוריין עד 3.5% בגיחות עד העכבר מפסיק לנשום בכוחות עצמו. הערך leakages או מילוי לקוי של מאדה כמו הבעיות הנפוצות ביותר.</li>
	<li>לחלופין, לבצע צנרור כפי שהוצע ב sub בשלבים הבאים.<ol>
<li>מיקום העכבר על שולחן בזווית של 60°.</li>
		<li>שמלמדות הגפיים של העכבר עם דבק, ובעליה בראש.</li>
		<li>במקום מקור אור קר ישירות על העור מעל הגרון.</li>
		<li>משוך את הלשון בעדינות עם מלקחיים להמחיש את מיתרי הקול.</li>
		<li>הכנס צינור פלסטיק של IV-בצינורית (24 גרם) דרך מיתרי וחבר את צינור פלסטיק בהגדרות ההנשמה.</li>
		<li>להתחבר ההנשמה הצינורית כדי לאשר צנרור על ידי תנועות החזה synchrone. הערה: אם תנועות נשימה לא מפסיקים או עכברים מתחילים לנוע, תחילה להגביר את קצב הנשימה עד 180 לכל מין. במידת הצורך, להגדיל באופן משני הריכוז איזופלוריין עד 3.5% עד העכבר מפסיק לנשום בכוחות עצמו. הערך leakages או מילוי לקוי של מאדה הבעיות הכי סביר.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. לפני הניתוח דופלר מדידה
<ol><li>להכין שני בעורקים איזה תיאור על פרופיל לקנה הנשימה על ידי משיכה עדינה רקמת החיבור ביניהם עם מלקחיים.</li>
	<li>המקום קצה המכשיר דופלר MHz 20 עם קצת ג'ל אולטרסאונד סטרילי (מימין) את העורק השמאלי ב זווית פחות 45°.</li>
	<li>לאט לאט לסובב את המכשיר כדי להזיז אותו לרוחב ו המדיאלי למצוא אות דופלר, להטות את המכשיר כדי למטב את האות.</li>
	<li>השתמש תוכנה דופלר כדי להציג וכדי לאחסן מהירויות זרימה ימינה ושמאלה נפוצות עורק במחשב.</li>
</ol>3. ניקור חזה
<ol><li>להשתמש בערכה של כפפות סטריליות עבור כל עכבר בודדות כדי למנוע זיהומים באתר כירורגית.</li>
	<li>להרחיב את החתך בעור אל החלל הבין-צלעי 2nd עם מספריים.</li>
	<li>לזהות את 2nd לחלל הבין-צלעי ויזואלית על ידי ספירת הצלעות ולחדור אז בלשון בוטה החלל הזה עם מלקחיים intracapsular. הערה: הצלעst 1 ממוקם מתחת לעצם הבריח ולכן לא נראה לעין כי לחלל הבין-צלעי 2nd נמצא בין הצלעות גלוי הראשון (כלומר 2nd צלעות) הצלע 3rd .</li>
	<li>לפתוח את 2nd לחלל הבין-צלעי בעזרת מלקחיים טיפים והכנס את רטרקטורים.</li>
	<li>התאם את רטרקטורים עם גומייה מחובר לשולחן הניתוחים יש תצוגה ברורה של בלוטת התימוס.</li>
	<li>במקרה של דימום להשתמש כותנה-עצה ולחץ על כלי שטחית למשך 2 דקות.</li>
</ol>4. רצועות של אבי העורקים רוחבי
<ol><li>התאם את רמת ההגדלה ל- 200% כדי לזהות קו האמצע ואת רקמות החיבור. לאחר מכן להשתמש מלקחיים בזווית לחלק בעדינות את בלוטת התימוס. הסרת רקמות שומן עד לקשת אבי העורקים ניתן לראות בבירור.</li>
	<li>להכין מנהרה עם זווית קשירת מלקחיים תחת העורקים רוחבי בין brachiocephalic העורק השמאלי עורק תרדמני (ראה איור 1). חכי לסוף התפר 6.0 בעזרת מלקחיים בסדר ולהעביר את החוט מתחת לקשת אבי העורקים.</li>
	<li>קח את החוט עם המלקחיים השני מהצד השני של הקשת.</li>
	<li>חתך אורך קטע ארוך של 3 מ מ G 27 להשתמש המחט כמו מרווח עבור טק-מצדו עבור עכברים במשקל בין 19-25 גרם משקל מחט 26 גרם כמו כרווח עבור עכברים > 25 גרם BW.</li>
	<li>בזהירות המקום את מרווח במקביל העורקים רוחבי.</li>
	<li>להכין קשר כפול רופף על מרווח ולהבטיח מיקום אופטימאלי של מרווח במקביל אבי העורקים. ואז לקשור את הזריקה הראשונה ולבצע במהירות זריקה להפך השני. הסר את מרווח באופן מיידי.</li>
	<li>כדי לבצע עכברים מזויפים עבור פקד, בצע באותו פרוטוקול השמטת את מצדו של אבי העורקים.</li>
	<li>סגור את 2nd לחלל הבין-צלעי בתפר פוליפרופילן 6.0. שים לב מיוחד כלי subclavian כאשר נבדק.</li>
	<li>תפר העור באמצעות בתפר פוליפרופילן 6.0 בדפוס בתפר רצוף.</li>
</ol>5. אישור על מצדו מוצלחת של אבי העורקים רוחבי
<ol><li>המקום בדיקה דופלר MHz 20 משני צידי הצוואר בזווית של 45 מעלות כמו סעיף 2.</li>
	<li>מסמך בין המהירויות זרימה בכל צד. הערה: טק מצליחים הניתנים לאימות על ידי מהירות זרימת דופלר כמוצג באיור2. יחס מהירות הזרימה של 4-10 בין ימינה ושמאלה העורק הראשי בדרך כלל מבטיחה טק נאותה (ראה איור 2).</li>
</ol>6. לב קציר
<ol><li>לגרום הרדמה על פי שלבים 1.2. 1.3.</li>
	<li>הנח את העכבר בתא המתת חסד ולהתאים את קצב הזרימה של פחמן דו-חמצני לעקור 10-30% נפח/הדקה.</li>
	<li>שמלמדות את העכבר על שולחן הניתוח. פתח את הבטן עם מספריים ו הקציר הדם הכלילי התחתון עם בצינורית לצורך ניתוח נוסף.</li>
	<li>חותכים את הסרעפת ואת בחיתוך של העצם במספריים חזקים ולהסיר את הלב.</li>
	<li>הסר כל העורקים ורקמות לפני במשקל של הלב.</li>
	<li>להפריד בין החדר הימני, מחצה מן החדר השמאלי ולשקול שתי דגימות.</li>
	<li>להקפיא בשתי דגימות רקמה של חנקן נוזלי.</li>
</ol>

<ol><li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol+Clifton+NJ%22%5BJournal%5D)">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods Mol Biol Clifton NJ. 573, 115-137 (2009).</li>
<li>Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+cardiac+surgery%3A+comprehensive+techniques+for+the+generation+of+mouse+models+of+human+diseases+and+their+application+for+genomic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies.</a> Physiol Genomics. 16 (3), 349-360 (2004).</li>
<li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (18), 8277-8281 (1991).</li>
<li>deAlmeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transverse+Aortic+Constriction+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+JoVE%22%5BJournal%5D)">Transverse Aortic Constriction in Mice.</a> J Vis Exp JoVE. (38), (2010).</li>
<li>Grossman, W., Jones, D., McLaurin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wall+stress+and+patterns+of+hypertrophy+in+the+human+left+ventricle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Wall stress and patterns of hypertrophy in the human left ventricle.</a> J Clin Invest. 56 (1), 56-64 (1975).</li>
<li>Hartley, C. J., Reddy, A. K., Madala, S., Michael, L. H., Entman, M. L., Taffet, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doppler+estimation+of+reduced+coronary+flow+reserve+in+mice+with+pressure+overload+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy.</a> Ultrasound Med Biol. 34 (6), 892-901 (2008).</li>
<li>Reddy, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+Doppler+signal+processing+for+use+in+mice%3A+applications%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Pulsed Doppler signal processing for use in mice: applications.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 52 (10), 1771-1783 (2005).</li>
<li>Shioura, K. M., Geenen, D. L., Goldspink, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiac+function+with+the+pressure-volume+conductance+system+following+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+-+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiac function with the pressure-volume conductance system following myocardial infarction in mice.</a> Am J Physiol - Heart Circ Physiol. 293 (5), H2870-H2877 (2007).</li>
<li>Zhang, B., Davis, J. P., Ziolo, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+Catheterization+in+Mice+to+Measure+the+Pressure+Volume+Relationship%3A+Investigating+the+Bowditch+Effect%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE+J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect.</a> JoVE J Vis Exp. (100), e52618(2015).</li>
<li>Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+response+to+pressure+overload+in+129S1%2FSvImJ+and+C57BL%2F6J+mice%3A+temporal-+and+background-dependent+development+of+concentric+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 292 (5), H2119-H2130 (2007).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure%3A+development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure: development of novel therapies, past and present.</a> Circ Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).</li>
<li>Zaw, A. M., Williams, C. M., Law, H. K. W., Chow, B. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+Invasive+Transverse+Aortic+Constriction+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+JoVE%22%5BJournal%5D)">Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice.</a> J Vis Exp JoVE. (121), (2017).</li>
<li>Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+of+Minimally+Invasive+Transverse+Aortic+Constriction+in+Mice+for+Induction+of+Left+Ventricular+Hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy.</a> J Vis Exp. (127), (2017).</li>
<li>Kim, S. -C., Boehm, O., Meyer, R., Hoeft, A., Knüfermann, P., Baumgarten, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Murine+Closed-chest+Model+of+Myocardial+Ischemia+and+Reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+JoVE%22%5BJournal%5D)">A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion.</a> J Vis Exp JoVE. (65), (2012).</li>
<li>Veldhuizen, R. A., Slutsky, A. S., Joseph, M., McCaig, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+mechanical+ventilation+of+isolated+mouse+lungs+on+surfactant+and+inflammatory+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Effects of mechanical ventilation of isolated mouse lungs on surfactant and inflammatory cytokines.</a> Eur Respir J. 17 (3), 488-494 (2001).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

תחילתה מהירה של יתר לחץ דם עקב טק שונה היפרטרופיה הרלוונטית קלינית נגרמת על ידי באבי העורקים או יתר לחץ דם. ובכל זאת, השימוש במודלים קטנים כדי לגרום אי ספיקת לב יש יתרונות רבים, הוא, לכן, נבחר על ידי חוקרים רבים11. החזה-מודל סגור זה משפר את הדגמים כבר קיימת טכניקה כירורגית לזירוז רוחבי כיווץ העורקים עכברים4.
השלב הקריטי ביותר הוא המעבר מתחת לקשת אבי העורקים. בתפר חזק מדי סביב העורקים עלול לגרום ירידה קטלנית של זרימת דם לאיברים חשובים כגון הכליות....

העכבר מודלים משמשים לעתים קרובות כדי לחקות מחלות אנושיות1. התרחבות אבי העורקים רוחבי (טק) משמש כדי לגרום עומס, שמאלה חדרית יתר2. המודל טק, החזה פתוח בעכברים אומתה על ידי יובל בנאי-ג'וליה. et al. 3 והליך כירורגי מתואר בפירוט על ידי. DeAlmeida et al. 4. Banding של אבי העורקים רוחבי היא חיובית יותר בהשוואה לתעוקה אב-עורקית של הבטן כי חלק גדול יותר של מחזור הדם יכול לפצות את ההשפעות השליליות של זה האחרון נוהל2.
רצועות של אבי העורקים רוחבי מוביל ללחץ עורקי מוגבר העורקים, העורק brachiocephalic עולה אבל משאיר זלוף מספיקות של האיברים באמצעות כלי דיסטלי (כלומר השמאלי עורק תרדמני, עצם הבריח השמאלית עורק, אבי העורקים). זה מוביל afterload הלב מוגבר והלחץ של קיר לב מוגברות. הלחץ קיר כתוצאה מכך יורדת עקב סיבים עיבוי5. שינוי ספיקת הדם לב כרונית התוצאה maladaptation הרחבה של החדר השמאלי. בדרך זו עיגול יוצר מודל לשחזור של היפרטרופיה המוביל בסופו של דבר אי ספיקת לב.
הליך רגיל עבור טק כפי שתואר על ידי. DeAlmeide et al. 4 גישות של קשת אבי העורקים באמצעות ניקור העליון חלקית באמצעות ניתוח הצלעות לעצם החזה, או להזין את. החיץ הקרומי, כמו גם את חלל הצדר. דבר זה מאפשר תצפית טובה על הקשת אבי העורקים ואת סניפיה בצד. למרבה הצער, והטרף הצלעות לא ניתן לחבר אותן, מה שמשאיר אותם צפים בחופשיות, ובכך לשנות את הדינמיקה נשימה.
לכן, הקמנו בגישה פולשנית סגור-החזה קשת אבי העורקים באמצעות בגישה כירורגית לרוחב דרך המרחב הבין-צלעי 2nd . היתרון הגדול ביותר של מודל זה הוא היכולת לבצע טק בלי אפילו לחתוך לצלעות. הטראומה כירורגי מוגבל החתך של העור, את הקרע של השרירים הבין-צלעי. הליך זה ממזער את הטראומה עצמו ומסייע לשמור על יציבות החזה נאותה.
כאן נתאר הליך מפורט שלב אחר שלב כדי לבצע ניתוח טק בעכברים מבלי לבצע את הסכום או את ניקור חזה עליון. דופלר בתדירות גבוהה שימש כדי להבטיח שההצלחה של טק שתואר קודם לכן כמו 6,7.

<table><tbody><tr><td>קטטר נפח לחץ</td><td>Millar Instruments, ארה"ב</td><td>SPR-839</td><td></td></tr><tr><td>מאוורר עכבר</td><td>Harvard Apparatus GmbH, גרמניה</td><td>Minivent - TYPE 845</td><td></td></tr><tr><td>מאוורר עכבר</td><td>Harvard Apparatus GmbH, גרמניה</td><td>חיבור Y עם צינורית אינטובציה OD 1.2 מ"מ 73-2844</td><td></td></tr><tr><td>וופורייזר</td><td>Dr&auml; ger Medical AG&CO. KG, גרמניה</td><td>19.3 איזופלורן-וופורייזר (גרסה חדשה יותר זמינה תחת מספר קטלוגי&nbsp; D-877-2010)</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ&nbsp;</td><td>Leica Microsystems, גרמניה</td><td>MZ 7.5</td><td></td></tr><tr><td>מקור אור&nbsp;</td><td>Schott AG, גרמניה</td><td>KL 1500 LCD</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Prolene</td><td>Ethicon, ארה"ב</td><td>תפר פוליפרופילן BV-1 9.3 מ"מ 3/8c</td><td>תפר לניתוח</td></tr><tr><td>Seraflex</td><td>Serag Wiessner, גרמניה</td><td>USP 5/0 schwarz; &nbsp; IC108000&nbsp;</td><td>תפר להתכווצות</td></tr><tr><td>שולחנות ניתוח מבוקרים הומו-תרמיים</td><td>מכשיר הרווארד GmbH, גרמניה</td><td>Typ 872/3 HT עם מעמד חצובה ובקר הומו-תרמי מסוג 874; 73-4233</td><td></td></tr><tr><td>בדיקה רקטלית גמישה</td><td>מכשיר הרווארד GmbH, גרמניה</td><td>1.6 מ"מ OD; 55-7021</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר הדמיית אותות דופלר</td><td>מכשירי אינדוס, ארה"ב</td><td>תחנת עבודה לעיבוד אותות דופלר (DSWP) עם מודול דופלר פועם 20 מגה-הרץ</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים תוך-קפסולריים של ארוגה</td><td>Altomed, בריטניה</td><td>A5400</td><td></td></tr><tr><td>Doppler Probe</td><td>Indus Instruments, ארה"ב</td><td>20MHz בדיקה</td><td></td>רכובה על צינורות</tr><tr><td>Jaffe מפרקר מכסה</td><td>Altomed, בריטניה</td><td>A3513</td><td></td></tr></tbody></table>

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

מחקר על היפרטרופיה ואי ספיקת לב מבוססת לעתים קרובות על הלחץ עומס העכבר מודלים שנגזרות טק. הנוהל הסטנדרטי הוא לבצע ניקור חלקית כדי להמחיש את קשת אבי העורקים רוחבי. עם זאת, כירורגי הטראומה הנגרמת על ידי ניקור חזה במודלים פתוח-החזה משתנה על פיזיולוגיה של מערכת הנשימה תוך הצלעות גזור, עזב כעיגולים בצבע אחרי סגירת החזה. כדי למנוע זאת, הקמנו בגישה פולשנית, סגור את החזה באמצעות ניקור חזה לרוחב. בזאת אנו ניגשים את קשת אבי העורקים באמצעות לחלל הבין-צלעי 2nd מבלי להזין חללים החזה, עוזב את העכבר עם פציעה פחות טראומטי להתאושש. אנו לבצע פעולה זו באמצעות הגדרות מעבדה סטנדרטיים להליכי החזה עיגול עם שיעורי ההישרדות שווה. מלבד שמירה על דפוסי הנשימה פיזיולוגיים עקב הגישה החזה סגור, העכברים כנראה תועלת מציג התאוששות מהירה, כפי השיטה פחות פולשני מופיע כדי להקל על תהליך ריפוי מהיר וכדי להקטין את התגובה החיסונית אחרי טראומה.

טק מוצלחת ערבויות של אינדוקציה של עומס ושל גדילת. אימות אד הוק של לחץ יתר יכולה להיות מושגת באמצעות מדידת מהירות דופלר כמוצג באיור2. בעוד מהירות זרימת הדם לפני הניתוח הוא שווה בשני עורק, טק גורם של מהירות דם מוגבר בעורק התרדמה הימני בלחץ גבוה בין החדר השמאלי לאבי העורקים תוך גרימת מהירות זרימת הדם הקלוש פוסט-stenotic ב העורק השמאלי הראשי.
היעילות של טק ואת יתר וכתוצאה מכך שלה אומתה על ידי חישוב של ה...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של אבי העורקים רוחבי הכיווץ (טק) באמצעות ניקור לרוחב. טכניקה זו היא הליך ניתוחי החזה פולשנית, סגור במטרה לדמות עומס ואי ספיקת לב בעכברים ניצול ההגדרות הרגילות של מעבדה טק.

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

המטרה הכוללת של הליך זה, היא לבצע כיווץ אבי העורקים הרוחבי, במודל חזה סגור של עכבר, הגורם להיפרטרופיה של שריר הלב של החדר השמאלי. טכניקה זעיר פולשנית זו, מסייעת להפחית בעיות נשימה ולמזער את התגובה הדלקתית. שיטה זו יכולה לעזור לנו לענות על שאלות מפתח, בתחום האימונולוגיה, למשל, תגובת מקרופאגיה לבבית בהתפתחות היפרטרופיה של החדר השמאלי.היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שכלוב הצלעות נשאר שלם, ולכן הטראומה ממוזערת. מכיוון שחללים ונפחי גאות מותאמים למשקל הגוף, ניתן להשתמש בפרוטוקול זה בעכברים בגדלים שונים. זה גם מפחית טראומה כירורגית, ומפחית סטייה בערכי המדידה.לאחר הרדמת עכבר, על פי פרוטוקול הטקסט, העבירו את העכבר לשולחן ניתוחים מבוקר טמפרטורה, ונתקו את האף המחובר לקופסת האינדוקציה להרדמה כדי לשמור על נרקוזה. בעזרת תפר ניילון, תקן את החותכות העליונות של העכבר. צבט את הזנב כדי להבטיח היעדר רפלקס.השתמש בנייר דבק כדי לקבע את הגפיים. לאחר החדרת בדיקה רקטלית, מרחו קרם אפילציה על הגרון והחזה העליון, לפי הוראות היצרן, והניחו לו לשבת במשך דקה. לאחר מכן, נגב את הקרם וחזור על הפעולה במידת הצורך.כאשר הגדרות מכונת ההנשמה מותאמות לפרמטרים פיזיולוגיים, והחיה תחת מיקרוסקופ כירורגי, חותכים את העור בקו האמצע כשלושה מילימטרים מתחת ללסת התחתונה עד לצלע השנייה. זהה את קו האמצע ורקמות החיבור של הבלוטה התת-לסתית. לאחר מכן, השתמש בשני מלקחיים זוויתיים כדי לחלק בעדינות ובבוטות את הבלוטה בקו האמצע, ולחקור את שריר קנה הנשימה.הכן בעדינות את קנה הנשימה, על ידי משיכה בוטה של שרירי קנה הנשימה. השתמש במלקחיים כדי למשוך את הלשון כדי ליישר את הגרון לאינטובציה קלה יותר, והכניס בעדינות צינורית אינטובציה לתוך קנה הנשימה. אשר את האינטובציה על ידי הדמיה ישירה של הצינור בתוך קנה הנשימה, ועל ידי בדיקת תנועה תקינה של החזה.הכן את שני עורקי הצוואר, המונחים בצמוד לקנה הנשימה, באמצעות מלקחיים כדי למשוך בעדינות את רקמת החיבור. מרחו ג'ל אולטרסאונד על קצה בדיקת הדופלר של 20 הרץ, והניחו את קצה הגשושית על עורק הצוואר הימני והשמאלי, בזווית של פחות מ-45 מעלות. סובב לאט את הגשושית כדי להזיז אותה לרוחב ומדיאלי כדי למצוא אות דופלר, ולאחר מכן הטה את הגשושית כדי לייעל את האות.בעזרת סט טרי של כפפות ומספריים סטריליים, הרחב את חתך העור עד לחלל הבין-צלעי השני. לאחר מכן, בעזרת קצה המלקחיים, פתח את החלל הבין-צלעי השני והכנס את המחזירים. בהגדלה של 200%, זהה רקמות קו אמצע וחיבור.לאחר מכן, השתמשו במלקחיים זוויתיים כדי לחלק בעדינות את בלוטת התימוס. הסר את רקמת השומן עד שניתן לראות בבירור את קשת אבי העורקים. בעזרת מלקחיים זוויתיים של האגודל, הכינו מנהרה מתחת לאבי העורקים הרוחבי, בין העורק הברכיוצפלי לעורק הצוואר המשותף השמאלי.לאחר מכן, בעזרת מלקחיים עדינים, החזיקו תפר 6-0 והעבירו את החוט מתחת לקשת אבי העורקים. בעזרת המלקחיים השני, קח את החוט מהצד השני של הקשת. הנח בזהירות את המרווח במקביל לאבי העורקים הרוחבי.הכן קשר כפול רופף על המרווח וודא מיקום אופטימלי של המרווח במקביל לאבי העורקים. לאחר מכן, קשרו את הקשר הראשון, וצרו במהירות קשר נגדי שני, לפני שתסירו מיד את המרווח. השלב הקריטי ביותר בכל ההליך הוא לקשור את שני הקשרים במהירות ובחוזקה, ולהסיר את המרווח מיד.סגור את החלל הבין-צלעי השני, עם תפר פוליפרופילן 6-0, ושים לב במיוחד לכלים התת-בריחיים בעת הקשירה. לאחר מכן, בעזרת תפר פוליפרופילן 6-0, תפר את העור בתבנית תפר רציפה. אשר קשירה, ובצע טיפול לאחר הניתוח, על פי פרוטוקול הטקסט.מדידות מהירות זרימת דופלר אלו מאמתות TAC מוצלח, הגורם למהירות דם מוגברת בעורק הצוואר הימני, עקב לחץ מוגבר בחדר השמאלי ובאבי העורקים, תוך גרימת מהירות זרימת דם מוחלשת לאחר סטנוטית בעורק הצוואר השמאלי. כפי שמוצג בגרף זה, יחסי משקל הלב ומשקל הגוף עלו באופן משמעותי בעכברי TAC, בהשוואה לעכברים ללא פסים, שישה ימים לאחר הניתוח. יחס זה היה כמעט קבוע לאחר 21 יום.לקצב הלב יש השפעה משמעותית על התכווצות החדר השמאלי ותפוקת הלב. גרף זה מגלה כי לא היו הבדלים בקצב הלב של עכברים עם פס אבי העורקים וללא פס אבי העורקים, לאחר 21 יום. כפי שהודגם כאן, רצועה קבועה של אבי העורקים, הוכחה על ידי לחץ דם סיסטולי מוגבר, שנמדד באמצעות קטטר חדר שמאל לאחר 21 יום.C57 שישה עכברים שחורים, ידועים בדרך כלל כמפתחים היפרטרופיה אקסצנטרית עם תפקוד סיסטולי לאחר TAC. נמצאה עלייה בקוטר החדר השמאלי, שנראה משמעותי גם במדידות נפח הלחץ. כתוצאה מכך, נפחי הקצה הסיסטולי והדיאסטולי גדלו משמעותית.לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך פחות מ-10 דקות, אם היא נעשית כראוי. לבסוף, הליך זה מספק ניתוח אופטימלי של התגובה החיסונית בהיפרטרופיה של החדר השמאלי, מכיוון שהטראומה הכירורגית המינימלית מגבילה את האינדוקציה הלא ספציפית של מערכת החיסון. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע התכווצות אבי העורקים הרוחבית הרוחבית הסטנדרטית והזעיר פולשנית.

a-closed-chest-model-to-induce-transverse-aortic-constriction-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללמוד המנגנונים היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב הפיתוח. כאן אנו מתארים נהלים להתכווץ אבי העורקים כדי ליצור תואר לשחזור של היפרטרופיה לב בעכברים.

אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

טראומה ניתוחית גורם לתגובה דלקתית. ציטוקינים ligands אנדוגניים ידועים לווסת את גודל האוטם בשריר הלב בעקבות איסכמיה ו reperfusion. אנו מציגים שונה סגור החזה מודל של איסכמיה reperfusion Murine באמצעות משקולות תלויות כדי למזער את ההשפעות של פתיחת בית החזה.

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

בסרטון זה אנו מדגימים פרוטוקול ניסיוני להתכווצות זעיר פולשנית של אבי העורקים הרוחבי בעכברים כדי לבחון אי ספיקת לב הנגרמת כתוצאה מעומס יתר.

פסים רוחביים של קשת אבי העורקים במודל עכבר: טכניקה זעיר פולשנית בעכברים להשראת לחץ גבוה בחדר השמאלי

אנו מתארים הליך בשלבים ליצירת עומס יתר לחץ והיפרטרופיה של חדר שמאלי בחולדות Wistar ידי התכווצות של אב העורקים עולים באמצעות קליפ מתכתי קטן. דגם זה נעשה שימוש נרחב ללימוד שינויי שיפוץ במהלך היפרטרופיה לבבית ולזיהוי והערכה של אסטרטגיות לנסיגה של שינויים כאלה.

עולה אבי העורקים תעוקה בחולדות ליצירת עומס יתר לחץ לב היפרטרופיה הדגם

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך לב פולשנית לשינויים מבניים ותפקודיים במודל של עכברים של מחלת לב נוצר על ידי התכווצות רוחבי אבי העורקים, באמצעות B ו- M-mode אקוקרדיוגרפיה וצבע / הדמיה דופלר גל הדופק.

שינויים הערכה לב מורפולוגי תפקודי עכבר דגם של מועקה הרוחבית אב עורקים על ידי הדמית אקו

התכווצות העורקים רוחבי פולשנית (MTAC) חוסך את עיקרי התכווצות העורקים רוחבי רגיל (TAC) תוך ביטול השימוש מאוורר עם אינטובציה לקנה הנשימה. זה מוכיח להיות שיטה רצויה מאוד ללימודי תפוקה גבוהה על עומס של חדר שמאלי, בעיקר חקר תרגום.

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.

הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת

פרוטוקול זה מציג שיטה משופרת להשגת היפרטרופיה שריר הלב חולפת עם תפר נספג, המדמה ירידה היפרטרופיה חדרית שמאל לאחר הסרת עומס לחץ. זה יכול להיות בעל ערך עבור המחקרים על תנאי היפרטרופי שריר הלב.

הפעלת התכווצות אבי העורקים רוחבית עם תפר נספג להשגת היפרטרופיה שריר הלב ארעית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה שונה ופשוטה עם הליך היצרות אבי העורקים הרוחבי (TAC) זעיר פולשני באמצעות retractor מתוצרת עצמית. הליך זה יכול להתבצע ללא מכונת הנשמה או מיקרוסקופ ומציג עומס לחץ, המוביל בסופו של דבר היפרטרופיה לבבית או אי ספיקת לב.

טכניקה שונה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים

זיהום של עכברים עם adenovirus להביע autoantigen אדם גדול ציטוכרום P450 2D6 (hCYP2D6) המוכרים על ידי סרה של חולים הסובלים מסוג 2 תוצאות אוטואימוניות הפטיטיס בצורה מתמשכת של מחלה אוטואימונית בתיווך הכבד המאופיינת סיסטיק נרחב צהבת, ואת הדור של CYP2D6 ספציפית התגובה החיסונית.

CYP2D6 מודל החיה: כיצד לגרום דלקת כבד אוטואימונית עכברים

למדו את פרוטוקול ה-TAC המינימלי-פולשני להשגת היפרטרופיה של החדר השמאלי בעכברים. שיטה זו מאפשרת חקר תגובות מקרופאגים לבביים ומפחיתה טראומה כירורגית ותגובות דלקתיות.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

גלה סרטונים נוספים