Name: ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: למדו שיטה לאינדוקציה של נאווסקולריזציה בקשתית בעכברים אלבינוס לחקר מחלות נאווסקולריות בעיניים. הטכניקה מאפשרת הדמיה ישירה של תהליכי אנגיוגנזה בחי וניתוח ביופסיות קשתית לבדיקת טיפולים חדשים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים Linnea Tankred ודיאנה Rydholm על גידול בעלי חיים.

BALB/c העכבר הגורים של מין או על פי המשפט שימשו את השימוש של בעלי חיים Ophthalmologic ומחקר חזון, הפרוטוקולים אושרו על ידי הוועדה של שטוקהולם לחקר בעלי חיים אתיים. עכברים היו בבניין המלטות, יחד עם האמא סיעוד, עם מחזור יום/לילה 12 שעות, גישה חופשית מזון ומים, ולא תחת פיקוח יומיומי.
הערה: עבור הליך כירורגי, עכברים נשמרו תחת הרדמה עם איזופלוריין נדיף. משחות עינית הן רוחך במהלך הליכי עינית, כפי שהם עשויים להפריע טיפולים וחומרים בשימוש. במידת הצורך, כדי למנוע עין-יבש, טיפה של פתרון סטרילי מלוחים נורמלי יכול להיות מיושם. אך דקירות uveal הריפוי העצמי, הוקדשה במהלך דקירות uveal כדי להבטיח עקרות כלי ניתוח. טיפול לאחר ניתוח כולל שתיה עם תמיסת מלח רגיל subcutaneously, שיכוך כאבים עם עינית הממשל אקטואלי של tetracaine הידרוכלוריד. הגורים הורשו לשחזר recumbency בחזה ובצלעות על כרית החימום לפני מוחזר אם מניקה, בתוך כלוב נקי. המלטות נשמרו עם האם ההנקה באותו להימנע ממתח נפשי.
1. הרדמה
<ol><li>הכינו את התא אינדוקציה של הרדמה, לנהל איזופלוריין הרדמה ולהבטיח כי מסכת עכבר קטן זה משולב גם. הערה: לבצע ניסויים בבעלי חיים כל מסכים עם כל האישורים אתיים החלים.</li>
	<li>Prefill תא אינדוקציה עם 3-4% איזופלוריין נדיפים באוויר האטמוספרי. הערה: הרדמה חומרים שונים חוץ מאשר איזופלוריין עשוי לשמש, על-פי היתרים אתית. נדיף הרדמה הליכי צריכה להתבצע על ברדס ספסל או fume מאוורר.</li>
	<li>המקום לאחר הלידה (P) בת 12.5 יום BALB/c העכבר גור בבית הבליעה אינדוקציה. לאשר המנגנון הרדמה הוא מוכן למסור את איזופלוריין אל התא אינדוקציה. הערה: העכבר הגורים הם מאוד שבירים ויכולים טיפל בצורה הטובה ביותר עורפה. לשמור יחד את הגורים בהמלטה או עם האם ההנקה להימנע ממתח נפשי.</li>
	<li>לאפשר הכלבלב להיות מורדם לחלוטין.</li>
	<li>. בעדינות, תרים את הכלבלב העכבר הזה. הערה: לשמור את התא אינדוקציה סגורים בבית כל הזמן אינדוקציה יציבה ובטוחה.</li>
	<li>להעביר את העכבר המסכה מכרסמים. הקפד להחליף את זרימת הרדמה מן החדר אינדוקציה למסיכה בעת הזזת העכבר.</li>
	<li>לבצע צביטה הבוהן כדי לאשר הרדמה.</li>
</ol>2. לנקב הליך תחת סטריאוסקופ כירורגי
<ol><li>מיקום העכבר במצב recumbency לרוחב. לאשר שהמסכה היא ממוצבת היטב כך העין העכבר נמצא שדה הראייה של סטריאוסקופ.</li>
	<li>סובב בעדינות את הראש העכבר כך העין פונה מעלה, לעבר סטריאוסקופ. הערה: מיקוד של העין צריך להיעשות תחת סטריאוסקופ. עבור מיקום, מומלץ על ההגדלה של 16 X, בעוד 40 X אמור לשמש לביצוע הליך כירורגי. אם היתרים אתית מאפשרות זאת, חיתוך קצה נכון יכול להקל את הפריט החזותי של העין.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים קשירת קטן, בזהירות בולטות העין של הכלבלב על ידי הפעלת לחץ כלפי מטה על העפעפיים הגבי ו הגחון לעין.</li>
	<li>לשמור על אחיזה עדינה, אך המשרד ליד של הגורים העין, עם מלקחיים קטנים. הערה: מומלץ לבצע את חדירת העין, מכסה מחזיק ביד האחרת, כמו היד הדומיננטית צריך לבצע את ההליך פנצ'רים.</li>
	<li>השתמש את סטריאוסקופ כדי לאתר את הקרנית לימבוס. הלבקן BALB/c לימבוס ניתן לזהות בקלות על ידי מקלעת וסקולרית מעגלית האחורי בקרנית.</li>
	<li>עם מחט בקוטר (30 גרם) 0.25 mm משופע, לבצע ניקוב uveal קטן, ליד הגבול limbal האחורי הענבייה. השתמש רק את קצה המחט, לא יותר מחצי שיקוע (שקול ל- 0.5 מ מ), לנקב את uvea. אם מבוצע כהלכה, הנקבים uveal הם עצמית איטום, אבל תוך-עיני הזרקת חומר הלימוד יכול להינתן דרך הפצע לנקב אותו. הערה: אם חווה עם עכבר עינית האנטומיה, הניקוב uveal מבוצע בין ריסי הגוף serrata אורה. חייבים להקפיד בעת ביצוע הניקוב uveal כדי למנוע קריעה העדשה.</li>
	<li>לבצע הניקוב uveal השני באתר הנגדי של העין מן החדירה הראשונה. למטב את המרחק והמיקום של הנקבים; שקול 12, שעה 6 נקבים, עם 12 השעה להיות כמו הגבי ככל האפשר.</li>
	<li>חזור על הפעולות דקירות uveal כל 4 ימים עד P24.5. לפני כל ניקוב uveal רצופים, לנטר מצב החיות תשומת לב מיוחדת הימצאות קטרקט טראומטי עקב נזק לעדשה במהלך חדירה uveal, או ברור לחץ עינית מופחתת. המטרה עבור ביצוע דקירות. אני חוזר-באותן משרות כמו דקירות קודמות על השפעות אופטימאליות.</li>
</ol>3. לא פולשנית in Vivo ניטור
<ol><li>לפני ' דקירה או זריקות בכל יום ניסיוני, עזים ומתנגד העכבר כפי שבוצע לעיל.</li>
	<li>עם העכבר במצב recumbency לרוחב, בעדינות בולטות לעין.</li>
	<li>מתמקדים איריס להערכת עם סטריאוסקופ כירורגי.</li>
	<li>לצלם להערכת איריס עם מצלמה התאימה ל סטריאוסקופ כירורגית. הערה: אם כי לא הכרחי, גרימת מיוזה עשויה להועיל לנרמל את איריס שטח, בעלי חיים. קח בחשבון היתרים אתית בעת בחירת סוכן בתדר מיוזה. זהירות מוקד להערכת איריס יקל עוד ניתוח כמותי. בסדר גודל של 40 X מומלץ.</li>
</ol>4. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>הכלבלב BALB/c להסיר המסכה מכרסמים, בעדינות להעביר אותו כרית החימום שכבתית עם מזרן כירורגי.</li>
	<li>טיפה אחת של 1% פתרון tetracaine חלות על העיניים מנוקבת. הערה: פתרונות כאבים אחרים ניתן להשתמש, על-פי היתרים אתית.</li>
	<li>מימה החיה עם זריקה תת עורית של µL 200 תמיסת סטרילית נורמלי.</li>
	<li>לחזור הגורים האמא סיעוד בתוך כלוב עכבר נקי.</li>
	<li>לפקח על תהליך ההחלמה. הכלבלב אמור להיות מסוגל deambulate ולחזור הגורים.</li>
</ol>5. עין העקירה
<ol><li>להרדימו על ידי נקע בצוואר הרחם. לבצע את העקירה לנתיחה תחת סטריאוסקופ להמחשת טוב יותר של ההליך. הערה: המתת חסד שונות ניתן להשתמש בהליכים. מומלץ לדבוק בקפדנות היתרים אתית.</li>
	<li>להפריד את העפעפיים כדי לשפר את החשיפה לעין.</li>
	<li>לעשות חתך קטן (כ 0.5 ס מ) ליד canthus של בעפעפיים במספריים העין מעוקל של בון.</li>
	<li>להשתמש בשטח חשוף periocular להוספת מיקרו מלקחיים קשירה מאחור (תחת) כדור הארץ במסלול.</li>
	<li>. תפוס את הרקמות הסובבות את העין ומשוך בעדינות כלפי מעלה. להימנע המעצר על גבי גלגל העין, השתמש הרקמות הסובבות קרוב כדי ארובת העין.</li>
	<li>הכנס את המספריים העין בון מעוקל מאחורי העולם העין מסלולו.</li>
	<li>לחתוך דרך הרקמות הסובבות עד העין הוא שוחרר מן השקע. הערה: טכניקה דיסקציה זו שומרת על העין אנטומיה ויתרונות חשפה.</li>
	<li>המשך הסרת רקמה שאינם שייכים מהעין. הסרת רקמת חיצוני יכול להתבצע לאחר תיקון, אם מועדף. הערה: BALB/c עכברים הם מלנין לקוי, לכן, כדי להגדיל את החדות, רקע כהה מומלץ כדי להקל על הליך לנתיחה.</li>
	<li>בקצרה שטיפה העין כולה בצלחת פטרי מלא מלח סטרילית באגירה פוספט (PBS).</li>
	<li>להעביר את העין צינור 2 מ"ל המכיל 1.5 מ של 4% פורמלין buffered פתרון.</li>
	<li>לתקן את העין במשך 6 שעות בטמפרטורת החדר. הערה: תיקון מקנה את הנוקשות של הרקמה ואסטמה ומקילה על ניתוח של הקשתית. תיקון זמן עליו נבדק, מותאם עבור יישומים שונים.</li>
</ol>6. איריס הליך ניתוח תחת סטריאוסקופ
<ol><li>הסר את הפתרון מקבע הצינור עם פיפטה פסטר פלסטיק של 1.5 mL (או דומה), ולשטוף את העין 3 פעמים עם PBS טריים.</li>
	<li>מקום העין קבוע משטח יבש חלק (דיסקציה מעמד) לחדר הקדמיות כלפי מעלה.</li>
	<li>עם מחט 30 G משופע, לבצע נקודת כניסה האחורי לימבוס.</li>
	<li>מחזיק את המקטע הקדמי עם מלקחיים קשירת קטן, להוסיף עצה אחת מספריים ישר קליימן-Vannas לתוך הפתח שנוצרו בעבר. הערה: מומלץ כדי לשלוט המלקחיים עם היד הלא דומיננטית, את המספריים עם הדומיננטי.</li>
	<li>תוך כדי סיבוב את העין עם המלקחיים קשירה, לעקוף לימבוס להסיר את המקטע האחורי של העין. הערה: ביצוע חלקית הקיצוצים יאפשר הקצה הפנימי של המספריים להמשיך בתוך רקמת ו מאוד מקלה על התהליך.</li>
	<li>מקם את המקטע הקדמי מופנות כלפי מטה, לחשוף את העדשה.</li>
	<li>הסר את העדשה בקפידה על ידי תופס אותו עם מלקחיים קטנים ומושך כלפי מעלה. הערה: מחט משופע יכול לשמש כדי לנקב ומשוך את העדשה.</li>
	<li>מקם את המקטע הקדמי עם הקרנית פונה כלפי מטה, החתך בניצב שדה הראייה.</li>
	<li>בעדינות לתפוס את הרקמה האחורי לגוף ריסי עם המלקחיים קשירת קטן.</li>
	<li>במספריים ישר קליימן-Vannas, להמשיך לקצץ רק והשתרשה עמוק בלבה לגוף ריסי כדי להסיר את trabecular meshwork ולבודד את הקשתית. לאשר כי meshwork trabecular מוסר; הקשתית צריכה להעביר בתוך הקרנית.</li>
	<li>בזהירות להעביר את עיינית הקדמי עם המלקחיים קשירת קטן, מחזיק את הקרנית, על צלחת 96-ובכן המכיל 200 µL ל- PBS.</li>
	<li>המשך החזקת הקרנית בבאר ומנתחים את הקשתית על ידי שטיפה עם PBS עם פיפטה. הערה: אם כנצרות שרידים איריס בקרנית, meshwork trabecular מסוימים ייתכן ההוה שיפוע של מחט 30 G יכול לשמש כדי לעזור ועקרו מבתיהם את הקשתית.</li>
	<li>להסיר את הקרנית 96-ובכן עם המלקחיים קשירת קטן, ולשמור את הקשתית מבודד בתוך הבאר לניתוח נוסף.</li>
	<li>לאחסן דגימות איריס לתרשים ב 4 º C. הערה: למרות להיות קבוע, אחסון לטווח ארוך של הדגימות לתרשים איריס אינה מומלצת.</li>
</ol>7. אפשרי הקריאות ניסיוני
<ol><li>כדי להמחיש את כלי הדם ב- האיריסים גזור, השתמש לתרשים אימונוהיסטוכימיה כולה-הר מכתים שיטות כגון טסיות תא אנדותל אדהזיה מולקולה (PECAM)-1 או isolectin B4. לחלופין, השתמש זלוף לכל הגוף עם צביעת כלי דם, כגון התווית על-ידי פלורסנט משקל מולקולרי גבוה dextrans.</li>
	<li>השתמש ויוו תמונות לא פולשנית כדי לבצע סיליקו שטוח-הרכבה ולכמת להערכת איריס מלא עם תוכנת הדמיה המתאימה. הערה: להערכת ניתן לכמת, הן ויוו והן במבחנה, באמצעות densitometry או להערכת ניתוח תוכנה9.</li>
	<li>לעבד את כל גלגל העין עבור חומצות גרעין והפקת חלבונים, ואחריו בשיטות PCR או immunoblotting, לבצע ניתוח מולקולרית של העיניים מנוקבת. הערה: אנליזה מולקולרית של הרקמות מבוצעת בצורה הטובה ביותר עם רקמת שאינו קבוע, אבל ניתוח של איריס שאינו קבוע הוא מאוד מאתגר, השימוש של העין כל הפכה תוצאות משמעותיות מבחינה סטטיסטית מחקרים קודמים8.</li>
</ol>

<ol><li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li>
<li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4600930/">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043(2015).</li>
<li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA%2FuPAR+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Adh+Migr%22%5BJournal%5D)">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li>
<li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neovascular+glaucoma%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Retina+Vitreous%22%5BJournal%5D)">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26(2016).</li>
<li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophth+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li>
<li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+and+wound+repair%3A+when+enough+is+enough%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukocy+Biol%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li>
<li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+angiogenesis%3A+Wound+healing+as+a+model%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Histochem+Cytoc%22%5BJournal%5D)">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li>
<li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., André, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235(2017).</li>
<li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li>
<li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+neovascularization%3A+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li>
<li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+angiogenesis%3A+the+role+of+growth+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li>
<li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Res%22%5BJournal%5D)">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li>
<li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients%3A+A+Population-Based+Single+Center+Study%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662(2016).</li>
<li>Speier, S., Nyqvist, D., Köhler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li>
<li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophth+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li>
<li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol-Chic%22%5BJournal%5D)">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li>
<li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophth+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li>
<li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol-Chic%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li>
<li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li>
<li>Takei, A., Ekström, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546(2017).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

בפרוטוקול הנוכחי, מוצגת שיטה עבור אינדוקציה של איריס תגובת כלי הדם על ידי ניקוב uveal. הניקוב מפעיל מנגנוני ריפוי הפצע ומקדם תגובות כלי הדם איריס10,11. . זה מסכים עם פתולוגיות עינית, כגון PDR ו- NVG, שבו האנגיוגנזה החמירה תגובות מן הרשתית בקטע האחורי של העין, מסתיימים המצב הקליני של rubeosis iridis, אמוניה בסביבות מוגברת הקשתית12 ,13.
הקרנית avascular, בעל מבנה מוזר קולגן וכתו...

איריס, יחד עם גוף ריסי, דמית, כוללת את uvea, המהווה הרקמה vascularized ביותר של העין. איריס להערכת חיוני בשמירה על הומאוסטזיס בתא הקדמי של העין. כתוצאה שופע קשרים anastomotic בין העורקים והוורידים, כלי דם איריס לספק חומרים מזינים אספקת החמצן לא רק את הקשתית עצמה, אלא על כל קטע הקדמי של העין1.
היווצרות של כלי דם חדשים, או אנגיוגנזה מכל אלה קיימים, היא מהותית תהליכים פיזיולוגיים, כגון פיתוח ו-2ריפוי הפצע. אנגיוגנזה דק מוסדר על ידי מספר רב של גורמים הקנוני, כגון כלי הדם צמיחה אנדותל (VEGF) והמעכב activator plasminogen (PAI), וכן מספר גורמים דלקתיים, והוא חוסר איזון של גורמים אלה יכול להוביל ל פיפטות אנגיוגנזה3.
בעיניים, כורוידאלית הוא הגורם למחלות מסכנות הראייה, כמו רטינופתיה סוכרתית המקדימות (PDR) ו neovascular גלאוקומה (NVG). אלה מחלות עינית, מוקד כורוידאלית בדרך כלל ממוקם רקמות ברשתית, ובכל זאת חוסר איזון של דלקתיות, גורמי אנגיוגנזה בנבכי בשני האחורי ו הקדמי עינית העין שויכה rubeosis iridis, מונח רפואי עבור איריס פתולוגיים neoangiogenesis4. פתולוגיות אלה מציינים את היכולת של הקשתית הבוגרים לעבור אנגיוגנזה. בעכברים, להערכת עינית לא בוגר לאחר הלידה וממשיך לאחר לידה התבגרות. זה ייחודו של הפיתוח הוא מנוצל במודל עכבר של חמצן-induced רטינופתיה, מודל זה מקרוב מחקה את המצב הקליני של רטינופתיה prematurity5. בנוסף, אנגיוגנזה ודלקת לשחק תפקיד מרכזי מנגנונים6ריפוי הפצע, פצע מרפא את עצמו שויכה אנגיוגנזה מודלים7.
במחקר זה, נתאר מודל של איריס פנצ'רים-induced כורוידאלית. דקירות uveal מבוצעות ליד הגבול של לימבוס, אשר זירוז איריס כורוידאלית על ידי מפעילה מערכת ריפוי הפצע. בשל שקיפות הקרנית, איריס להערכת יכול להיות מנותח בקלות ויוו באמצעות שיטות לא פולשנית. העיניים מנוקבת להציג עלייה של המיטה כלי הדם של הקשתית, אשר היה קשור עם עלייה של הפעלת plasminogen וסמנים דלקתיים8. המודל שהוצגו יש פוטנציאל גדול כמו כלי חדש ללמוד אנגיוגנזה וסינון האנגיוגנזה תרכובות ומאפשרת ישירה ויוו ויזואליזציה של תהליכי אנגיוגנזה.

<table><tbody><tr><td>מספריים לעיניים של Bonn</td><td>Bausch & Lomb</td><td>23060</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מעוקלים Clayman-Vannas</td><td>Bausch & Lomb</td><td>E3383 C</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas מספריים ישרים</td><td>Bausch & Lomb</td><td>E3383 S</td><td></td></tr><tr><td>מתאם אובייקטיבי למצלמה</td><td>בעבודת יד</td><td>N / A</td><td>או כל מערכת המאפשרת התאמת מצלמה למיקרוסקופ</td></tr><tr><td>כרית חימום 100-110 וואט</td><td>לא ישים</td><td>N/A</td><td>זמין בחנויות לחיות מחמד / וטרינרים</td></tr><tr><td>היפודרמי 30 גרם מחט משופעת</td><td>KDM GmBH גרמניה</td><td>911914</td><td></td></tr><tr><td>אייפון 4S</td><td>אפל</td><td>לא ישים</td><td>או מכשיר אחר לרכישת תמונות ברזולוציה גבוהה</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>KDG 9623</td><td></td></tr><tr><td>McPherson מלקחיים קשירת</td><td>Bausch & Lomb</td><td>E1815 S</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים מיקרו קשירה</td><td>Bausch & Lomb</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>מינימום טטרקאין הידרוכלוריד</td><td>Bausch & Lomb</td><td>N/A</td><td>1% (w/v) טיפות עיניים</td></tr><tr><td>פורמלין ניטרלי חוצץ</td><td>Bioreagens</td><td>0018-40</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח רגילה</td><td>Fresenius Kabi</td><td>210352</td><td>0.9% (w/v) NaCl במים הניתנים להזרקה</td></tr><tr><td>מי מלח חוצץ פוספט</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td>מאוזן וחוצץ PBS pH 7.4</td></tr><tr><td>צלחת פטרי 10 ס"מ</td><td>Starstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי 3 ס"מ</td><td>Starstedt</td><td>83.3900</td><td></td></tr><tr><td>צינור איטום בטוח 2.0 מ"ל</td><td>Starstedt</td><td>72.685.200</td><td>או כל צינורות בסגנון אפנדורף</td></tr><tr><td>צלחת TC 96-well</td><td>Starstedt</td><td>83.3924</td><td></td></tr><tr><td>העברת פיפטה 3.5 מ"ל</td><td>Starstedt</td><td>86.1171</td><td>או כל פיפטה אחרת בסגנון פסטור</td></tr><tr><td>Univentor 400 יחידת הרדמה</td><td>Univentor Limited</td><td>N/A</td><td>או ווסת זרימה שווה ערך עם תא אינדוקציה ומסכה להרדמה נדיפה</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ כירורגי Wild M650</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>N/A</td><td>או סטריאוסקופ כירורגי או מגדיל אחר</td></tr></tbody></table>

ניקוב-induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של rubeosis iridis

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

נתאר מודל של איריס פנצ'רים-induced כורוידאלית כמודל כללי להערכה לא פולשנית של אנגיוגנזה. המודל הוא גם רלוונטי עבור מיקוד neovascular גלאוקומה, סיבוך סכנת הראייה של רטינופתיה סוכרתית. שיטה זו מבוססת על אינדוקציה של איריס תגובת כלי הדם על ידי סדרה של דקירות uveal עצמית איטום על עכברים BALB/c, מנצל ההבשלה לאחר לידה של עכבר עינית להערכת. הגורים העכבר לעבור דקירות uveal מיום כמחנכת 12.5, כאשר הגורים באופן טבעי לפקוח את עיניהם, עד ליום כמחנכת 24.5. בשל שקיפות הקרנית, איריס להערכת ניתן לנתח בקלות בזמן על ידי שיטות לא פולשנית ויוו . יתר על כן, הקשתית שקוף למחצה של עכברים BALB/c ניתן flatmounted לניתוח נתונים היסטוריים immunohistologic עם רקע שאינם ספציפיים מכתים. במודל זה, אנגיוגנזה הוא מונע בעיקר על ידי דלקתיות, הפעלת מערכות plasminogen. המודל הנוצרות על-ידי ניקוב הוא הראשון כדי לגרום כורוידאלית איריס, מכרסמים קטנים, ויש לו יתרון המאפשר ישירה לא פולשנית ויוו ניתוח של תהליך אנגיוגנזה. יתר על כן, המודל יכול להיות משולב עם חומרים להתכוונן האנגיוגנזה, אשר מדגיש את הפוטנציאל במחקר של אנגיוגנזה בפרספקטיבה ויוו .

הגורים העכבר BALB/c לבקן-P12.5 היו נתונים נקבים uveal, חוזר על עצמו בכל יום הרביעי (ניסיוני יום 0, 4, 8, 12), עד P24.5. P27.5, עכברים היו מורדמים, אירוסים גזור בקפידה (ניסיוני יום 15). תמונות של העכבר העיניים צולמו עם מצלמה מחוברת סטריאוסקופ כירורגי לפני כל סדרת לנקב בכל יום ניסיוני להעריך הערכה לא פולשנית של איריס תגובת כלי הדם. דקירות uveal לגרום לתגובה כלי הדם של הקשתית ידי המעוררים את הפצע ריפוי מערכת (איור 1). בשל שקיפות הקרנית, עכברים BALB/c מלנין לקויה...

איריס כורוידאלית, סיבוך נפוץ של מחלת רשתית איסכמי, עלול להוביל סכנת הראייה neovascular גלאוקומה. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מאתר להשראת כורוידאלית איריס ניסיוני העשויות לשמש להערכה לא פולשנית של חומרים להתכוונן אנגיוגנזה.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לגרום לכלי דם בקשתית, המאפשרת הדמיה ישירה של תהליכים אנגיוגניים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום רפואת העיניים, במיוחד במחלות ניאו-וסקולריות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא משתמשת בעכברים לבקנים כדי לאפשר הדמיה מכוונת של כלי הדם.באמצעות שיטה זו יכול לתת תובנה לגבי מחלות ניאו-וסקולריות בעיניים. ניתן ליישם אותו גם כמודל כללי של אנגיוגנזה, כגון בדיקות לטיפולים אנגיוגניים חדשים. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שדיסקציה של הקשתית מאתגרת בגלל גודלה הקטן של עין העכבר.עם תרגול, לעומת זאת, ניתן לשלוט בו. לאחר הרדמת עכבר P12.5 והכנתו להליך, הכניסו אותו למצב שכיבה לרוחב מתחת לסטריאוסקופ וודאו שהמסכה ממוקמת היטב. העין צריכה למלא את שדה הראייה.מיקוד ברור של העין הוא הכרחי. לאחר מכן, באמצעות מלקחיים קטנים של קשירה ביד הלא דומיננטית, הבליטו בזהירות את העין על ידי הפעלת לחץ כלפי מטה על העפעפיים, הגב והגחון לעין. שמירה על אחיזה חזקה בעפעף עוזרת.לפני שתמשיך, תעד את כלי הדם ב-40X. לאחר מכן, השתמש בסטריאוסקופ כדי לאתר את לימבוס הקרנית. ניתן לזהות בקלות את הלימבוס של עכברי BALB/c לבקנים כמקלעת כלי הדם העגולה האחורית לקרנית.כעת, ביד הדומיננטית, החזק מחט משופעת בגודל 30 והשתמש בה כדי לבצע ניקוב ענבה קטן ליד הגבול הלימבלי האחורי של הענביה בין הגוף

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בסרטון זה, חולדה מורדמת עוברת הליך עיניים שבו מוזרקים חרוזים מגנטיים לתוך החדר הקדמי תחת שדה מגנטי כדי לחסום את הזווית האירידו-קרנית. חסימה זו חוסמת את הרשת הטרבקולרית, מונעת ניקוז הומור מימי ומובילה ללחץ תוך עיני מוגבר, הפוגע בתאי הגנגליון ברשתית ובעצב הראייה. זה מפתח מצב דמוי גלאוקומה.

אינדוקציה ניסיונית של גלאוקומה באמצעות חסימת זווית אירידו-קרנית במודל עכבר

מקור: Lani-Louzada, R., et al., צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים. J. Vis. Exp. (2022)סרטון זה מדגים את האינדוקציה והניטור של לחץ תוך עיני מוגבר (IOP) במודל חולדות. התהליך כולל צריבה של כלי הדם הלימבליים, וכתוצאה מכך חסימת כלי דם ועלייה ב-IOP. לאחר מכן נותנים לחולדה להתאושש, ו-IOP מנוטר באופן קבוע הן בעיני הניסוי והן בעיני הביקורת לצורך השוואה.

 אינדוקציה של לחץ תוך עיני מוגבר במודל חולדה

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול הניאו-וסקולריזציה הכורואידלית (CNV) המושרה על ידי לייזר עכבר, מודל ניסיוני המשחזר את סימני ההיכר של כלי הדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל ניאו-וסקולרי (AMD). לאחר שליטה, הוא יכול לגרום באופן אמין ויעיל ל-CNV כמערכת מודל לבדיקת אמצעים ניסיוניים שונים.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

מאמר זה מתאר הליך גרימת פציעה איסכמיה-רה-פרפוזיה הרשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר בעכברים. פציעת איסכמיה-רה-פרפוזיה רשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר משמשת מודל פתולוגיות אנושי מתאפיין חמצן שנפרץ משלוח מזין ברשתית, המאפשר לחוקרים לבחון מנגנונים הסלולר פוטנציאל וטיפולים למחל אדם של היחידה העצבה וכלי דם ברשתית.

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע&quot;י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

כאן, אנו מציגים את התועלת של האורך ויוו הדמיה מעקב אחר שינויים מורפולוגיים של לייזר המושרה neovascularization כורוידאלית בעכברים.

אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

יתר לחץ דם כרוני עינית הנגרמת על-ידי החלת בתפר circumlimbal אצל חולדות ועכברים, שמוביל התדרדרות תפקודית ומבניים של תאי גנגליון עקבית עם גלאוקומה.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

רטינופתיה הנגרמת על ידי חמצן (OIR) יכולה לשמש למודל מחלות רשתית איסכמיות כגון רטינופתיה של פגות ורטינופתיה סוכרתית מתפשטת ולשמש כמודל למחקרים הוכחת הרעיון בהערכת תרופות אנטי אנגיוגניות למחלות ניאו-שריריות. OIR גורם neovascularization חזק לשחזור ברשתית שניתן לכמת.

מודל רטינופתיה הנגרמת על ידי חמצן למחלות רשתית איסכמיות במכרסמים

בדו"ח זה אנו מציגים פרוטוקול המאפשר לחוקר ליצור מודל עכבר של אובאיטיס תוך עינית. מודל מבוסס זה, המכונה בדרך כלל אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU), לוכד היבטים רבים של מחלות אנושיות. במאמר זה נתאר כיצד לגרום ולנטר את התקדמות המחלה באמצעות מספר קריאות.

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

כאן, אנו מתארים פרוטוקול אופטימלי לחסימת ורידים ברשתית באמצעות ורד בנגלי ומערכת מיקרוסקופ הדמיית רשתית מונחה לייזר עם המלצות למקסם את יכולת השחזור שלה בזנים מהונדסים גנטית.

אופטימיזציה של מודל העכבר לחסימת ורידים ברשתית כדי להגביל את השונות

מטרת פרוטוקול זה היא לאפיין מודל חדשני של ניוון עצבי גלאוקומטי המבוסס על צריבה תרמית של 360° של מקלעת כלי הדם הלימבלית, הגורמת ליתר לחץ דם עיני תת-חריף.

צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים

פרוטוקול זה מדגמן פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית בעין עכבר על ידי השראת איסכמיה ברשתית באמצעות צינורית החדר הקדמי והעלאת הלחץ התוך עיני, ולאחר מכן נורמליזציה של לחץ תוך עיני כדי להתחיל את הרפרפוזיה.

אינדוקציה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית במודל עין עכבר

למדו שיטה לאינדוקציה של נאווסקולריזציה בקשתית בעכברים אלבינוס לחקר מחלות נאווסקולריות בעיניים. הטכניקה מאפשרת הדמיה ישירה של תהליכי אנגיוגנזה בחי וניתוח ביופסיות קשתית לבדיקת טיפולים חדשים.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

גלה סרטונים נוספים