Name: גישה חלופית ללמוד העיקרי אירועים הקשורים ניוון מוחיים לשעבר Vivo עכברוש המוח בפרוסות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: חקור אירועים מולקולריים מוקדמים בניוון עצבי באמצעות שיטת פרוסות מוח ex-vivo עם חצאי-פרוסות צמודים. שיטה זו מאפשרת השוואה ישירה של תנאי טיפול ובקרה באותו מסגרת אנטומית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומן על ידי נוירו-ביו בע מ ברצוננו להודות Ferrati ג'ובאני ד ר ד ר סרג'יו ברוטונדו (נוירו-ביו) הערות, עצות על כתב היד.

מחקרים שנעשו בבעלי חיים כל בוצעו תחת פרוטוקולים שאושרו.
הערה: בחלק זה, רצף השלבים העיקריים שבוצעו במהלך ההליך ניסיוני, מרווח הזמן המוצע הינו מסופק (איור 1). יתר על כן, תיאור צעד אחר צעד של הפרוטוקול בתוספת לוח המחשה, מציג פעולות קריטיות ועד המוח להסרת רקמות המגון לאחר תקופת הדגירה (איור 2). הפרטים לגבי חומרים ו הוראות לבנות את המנגנון ואת השלב שלאחר מכן לניתוח WB הם שתואר לעיל22.
1. כלי ניתוח, Vibratome הגדרות והכנה לטיפול
הערה: בצע את השלבים הבאים לפני תחילת ההליך ניסיוני:
<ol><li>להכין שני שונים מלאכותי מוחי שדרתי נוזלים (aCSFs), אחד משמש את המוח עם פרוסות ותיאר השני לשלב הדגירה כאמור29. בקצרה, ריכוז העבודה (ב mmol) aCSFs שני מיועדים כלנית חדד "חותך": 120 NaCl, 5 אשלגן כלורי, 20 NaHCO3, 2.4 CaCl2, 2 MgSO4, 1.2 ח'2PO4ו- 10 גלוקוז; 6.7 HEPES מלח וחומצה HEPES 3.3; pH: 7.1. זמן כלנית חדד "רישום": 124 NaCl, 3.7 אשלגן כלורי, 26 NaHCO3, 2 CaCl2, 1.3 MgSO4, 1.3 ח'2PO4ו גלוקוז 10; pH: 7.1.</li>
	<li>מערבבים היטב את הפתרונות ואז לשים קרח, חמצן של כלנית חדד עם פרוסות על מנת שיהיה קר בעת הסרת את המוח ואת חלוקתה עוקבות. לשמור בטמפרטורת החדר (RT), אספקת חמצן חנה המבר ההקלטה.</li>
	<li>מניחים את המכשירים מתחת למכסה המנוע לנתיחה עבור הסרת עריפת ראש ומוח, קרי, גיליוטינה, ערכת חיתוך כירורגי (מספריים, מלקחיים, להבים), מרית.</li>
	<li>הגדר את פרמטרי vibratome על-ידי בחירת פרוסה בעובי (300 מיקרומטר בהכנה זו) ואת התדירות-7 ואת המהירות ב-6. הוספת תא vibratome בחלל המתאים שלה, להקיף אותו עם קרח.</li>
	<li>. פתח את הברז carbogen (95% או2, 5% CO2) לחמצן את "חיתוך" (חנה המבר) במהלך חלוקתה המוח בחר את קצב זרימה מינימלית, סביב 2 mL/min.</li>
	<li>קח שני צינורות 15-mL כדי להכין את התנאים כדי לבדוק. הוסף בשפופרת אחת 10 מיליליטר "רישום" כלנית חדד לבד (קבוצת הביקורת) וב -האחר, 10 מ"ל של כלנית חדד"רישום"מועשר T30-ריכוז של 2 מיקרומטר (קבוצת מטופלים). מערבולת שני צינורות, לשמור אותם על קרח עד השימוש בהם במסגרת שלב הכנת ההתקנה (סעיף 3).</li>
</ol>2. הרדמה, המוח החילוץ וחלוקת
הערה: במחקר זה, 9 פראי סוג P14 הגברית Wistar חולדות שימשו. המוח החילוץ וחלוקת הבאים מהווים חלק הכרחי של הפרוטוקול מאז הם במהירות לבצע (במרחק של 10 דקות) על מנת למנוע או לפחות להאט תהליכי ניוון רקמות.
<ol><li>להוסיף 1.5 מ ל 100% w/w של איזופלוריין על שכבה כותנה אל החדר אינדוקציה, למקם את. החיה בפנים, סגור את המכסה. המתן עד החיה עמוק הוא מורדם, המאשרת רפלקס פדלים, העדר, אז לכרות את החיה באמצעות הגיליוטינה.</li>
	<li>. תמשיך הראש של החיה בתוך סיר המכילה קרח לחבר חנה המבר במהלך השלב הסרת המוח (איור 2 א -C).</li>
	<li>תחתכי את העור על פני הגולגולת עם להב כירורגי, ואז לחתוך את הגולגולת באמצעות מספריים בעקבות האמצע, מן החלק האחורי והמשך anteriorly עד שהגיע העצם מעל מכשול (איור 2 א).</li>
	<li>משוך רוחבית שני הצדדים של הגולגולת בעזרת זוג מלקחיים כדי לקבל גישה אל המוח (איור 2B). הכנס מרית ventrally אל המוח, סקופ בעדינות החוצה, ושומרים את שזה להתייבש תוך קר כקרח יצחק "חותך" גרגיר במשך כ 5 דקות (איור 2C).</li>
	<li>תשליך את המוח על נייר סינון, לחתוך את המוח הקטן באמצעות להב (איור דו-ממדי). הדבק את המוח בצורה אנכית על הדיסק vibratome להוסיפו בתוך החדר אופטים, למלא אותו קר כקרח "חותך" כלנית חדד ו לספק חמצן (2E איור).</li>
	<li>. להתאים את מרווח חיתוך ולהמשיך חלוקתה המוח (2F איור). לאסוף את הסעיפים המכיל אזור מעניינים, כמו מחצה המדיאלי (MS), פס אלכסוני של ברוקה (DBB) ולאחר הסובסטנציה innominata (SI), כפי שתואר לעיל22. מלמעלה למטה, שלוש פרוסות להכיל את rostral (R), בינוני (I), (ג) סימטרית, חלק BF (איור 2G).</li>
	<li>לחלק לאורך קו האמצע כל מקטע עם מספריים קטנות, קבלת שני סימונים hemislices (איור 2 H), משמש בנפרד הפיקוח ואת תנאי שטופלו על אותו מישור אנטומיים.</li>
	<li>לשמור את hemisections בבית הבליעה vibratome למשך 5-10 דקות, ולאחר מכן להעביר אותם באמצעות פיפטה מזכוכית לתוך סיר מבעבע המכיל הקלטה כלנית חדד. שמור ב RT כ 30 דקות כדי להתאושש.</li>
	<li>למלא, בינתיים, שלוש מבחנות זכוכית עם 3 מ"ל של הקלטה חנה המבר לבד (בעבר להכין בשלב 1.6 עבור קבוצת הביקורת), שלוש מבחנות עם 3 מ של חנה המבר מועשר T30 (בעבר להכין בשלב 1.6) עבור קבוצת מטופלים.</li>
</ol>3. הגדרת הכנה
<ol><li>להעביר את hemisections לתוך צלוחיות זכוכית המתאימים שלהם (איור 2I) על מנת לקבל שלושה hemislices רצופים (כולל אזור BF rostral ביניים, סימטרית) עבור קבוצת הביקורת (מסגרת ירוקה, איור 2J) שלהם התאמת עמיתיהם עבור קבוצת מטופלים (מסגרת אדומה, איור 2J).</li>
	<li>העברה על רקמת המוח עם שתי מברשות שונות, אחת hemislices שליטה והשניה עבור עמיתיהם שטופלו, כדי למנוע כל זיהום בין תנאי.</li>
	<li>חותם כל בקבוקון זכוכית עם מכסה המתאים, מציגים את המחט oxygenating (21 גרם) (דמות 2J). לחבר את הצינור הראשי של המנגנון המקור carbogen (איור 2 K). לספק חמצן hemislices לאורך כל תקופת הדגירה עם קצב זרימה מינימלית של 2 מ לדקה על מנת למנוע כל תנועה של רקמת המוח, פגיעה מכנית אפשרית במהלך הניסוי. תתחיל הדגירה 5 שעות. בצע את השלבים 3.1-3.3 בתוך 5 דקות. הערה: סימון לעתים קרובות (כל 15-20 דקות) אם החמצן המסופקת לתוך כל הבקבוקונים, כי הזרימה שלו לא זזה הרקמה מלמטה.</li>
</ol>4. דוגמת המגון
<ol><li>מפסיקים את זרימת החמצן לאחר הדגירה ולהסיר את כל המכסים הבקבוקונים. להעביר את hemislices, באמצעות מברשות נכונה, לתוך צינורות 1.5 mL המכיל 250 µL מאגר פירוק, שמירה על הצינורות על קרח (איור 2 L). כדי להפוך את פירוק מאגר, לערבב PBS 1 x עם קוקטיילים מעכבי פוספטאז, פרוטאז מדולל-מטריים, והן homogenize הרקמה עם בקווקז שונים למניעת זיהום בין הדגימות. להשלים את פעולות אלה תוך 10-15 דקות.</li>
	<li>Centrifuge המוח lysate-1000 g x עבור 5 דקות ב 4 º C. להעביר את תגובת שיקוע לתוך צינורות חדשים, שומרים את הדגימות ב-80 מעלות צלזיוס.</li>
</ol>5. קריאה של חלבונים ריכוז וניתוח תספיג חלבון
<ol><li>לקבוע את ריכוז חלבון כל דגימה, לאחר מכן להכין את aliquots לניתוח תספיג כפי שתואר לעיל22.</li>
	<li>לבצע ניתוח סטטיסטי כדי להעריך את השפעת הטיפול על ביטוי חלבון.</li>
</ol>

<ol><li>Braak, H., Braak, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+stageing+of+Alzheimer-related+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes.</a> Acta Neuropathologica. 82 (4), 239-259 (1991).</li>
<li>Schliebs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+forebrain+cholinergic+dysfunction+in+Alzheimer%27s+disease--interrelationship+with+beta-amyloid%2C+inflammation+and+neurotrophin+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemical+Research%22%5BJournal%5D)">Basal forebrain cholinergic dysfunction in Alzheimer's disease--interrelationship with beta-amyloid, inflammation and neurotrophin signaling.</a> Neurochemical Research. 30 (6-7), 895-908 (2005).</li>
<li>Schmitz, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+forebrain+degeneration+precedes+and+predicts+the+cortical+spread+of+Alzheimer%27s+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Basal forebrain degeneration precedes and predicts the cortical spread of Alzheimer's pathology.</a> Nature Communications. 7, 13249(2016).</li>
<li>Fjell, A. M., McEvoy, L., Holland, D., Dale, A. M., Walhovd, K. B. Alzheimer's Disease Neuroimaging Initiative. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+normal+in+normal+aging%3F+Effects+of+aging%2C+amyloid+and+Alzheimer%27s+disease+on+the+cerebral+cortex+and+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">What is normal in normal aging? Effects of aging, amyloid and Alzheimer's disease on the cerebral cortex and the hippocampus.</a> Progress in neurobiology. 117, 20-40 (2014).</li>
<li>Kovács, T., Cairns, N. J., Lantos, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+centres+in+Alzheimer%27s+disease%3A+olfactory+bulb+is+involved+in+early+Braak%27s+stages%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Olfactory centres in Alzheimer's disease: olfactory bulb is involved in early Braak's stages.</a> Neuroreport. 12 (2), 285-288 (2001).</li>
<li>Winblad, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defeating+Alzheimer%27s+disease+and+other+dementias%3A+a+priority+for+European+science+and+society%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Defeating Alzheimer's disease and other dementias: a priority for European science and society.</a> The Lancet Neurology. 15 (5), 455-532 (2016).</li>
<li>Herrup, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+for+rejecting+the+amyloid+cascade+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The case for rejecting the amyloid cascade hypothesis.</a> Nat Neurosci. 18 (6), 794-799 (2015).</li>
<li>De Strooper, B., Karran, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Cellular+Phase+of+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Cellular Phase of Alzheimer's Disease.</a> Cell. 164 (4), 603-615 (2016).</li>
<li>Scheltens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(15)01124-1/abstract">Alzheimer's disease.</a> Lancet. 388 (10043), 505-517 (2016).</li>
<li>Arendt, T., Brückner, M. K., Lange, M., Bigl, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+acetylcholinesterase+and+butyrylcholinesterase+in+Alzheimer%27s+disease+resemble+embryonic+development-A+study+of+molecular+forms%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemistry+International%22%5BJournal%5D)">Changes in acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase in Alzheimer's disease resemble embryonic development-A study of molecular forms.</a> Neurochemistry International. 21 (3), 381-396 (1992).</li>
<li>Auld, D. S., Kornecook, T. J., Bastianetto, S., Quirion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+and+the+basal+forebrain+cholinergic+system%3A+relations+to+%CE%B2-amyloid+peptides%2C+cognition%2C+and+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease and the basal forebrain cholinergic system: relations to β-amyloid peptides, cognition, and treatment strategies.</a> Progress in Neurobiology. 68 (3), 209-245 (2002).</li>
<li>Arendt, T., Bruckner, M. K., Morawski, M., Jager, C., Gertz, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+neurone+loss+in+Alzheimer%27s+disease%3A+cortical+or+subcortical%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Early neurone loss in Alzheimer's disease: cortical or subcortical?</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 10(2015).</li>
<li>Mesulam, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Cholinergic+Lesion+of+Alzheimer%27s+Disease%3A+Pivotal+Factor+or+The+Cholinergic+Lesion+of+Alzheimer%27s+Disease%3A+Pivotal+Factor+or+Side+Show%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">The Cholinergic Lesion of Alzheimer's Disease: Pivotal Factor or The Cholinergic Lesion of Alzheimer's Disease: Pivotal Factor or Side Show?</a> Learn Mem. , 43-49 (2004).</li>
<li>Schliebs, R., Arendt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cholinergic+system+in+aging+and+neuronal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The cholinergic system in aging and neuronal degeneration.</a> Behavioural Brain Research. 221 (2), 555-563 (2011).</li>
<li>Mesulam, M. M., Mufson, E. J., Wainer, B. H., Levey, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+cholinergic+pathways+in+the+rat%3A+An+overview+based+on+an+alternative+nomenclature+%28Ch1-Ch6%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Central cholinergic pathways in the rat: An overview based on an alternative nomenclature (Ch1-Ch6).</a> Neuroscience. 10 (4), 1185-1201 (1983).</li>
<li>Mesulam, M., Mufson, E. J., Levey, A. I., Wainer, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+innervation+of+cortex+by+the+basal+forebrain%3A+cytochemistry+and+cortical+connections+of+the+septal+area%2C+diagonal+band+nuclei%2C+nucleus+basalis+%28substantia+innominata%29%2C+and+hypothalamus+in+the+rhesus+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cholinergic innervation of cortex by the basal forebrain: cytochemistry and cortical connections of the septal area, diagonal band nuclei, nucleus basalis (substantia innominata), and hypothalamus in the rhesus monkey.</a> J Comp Neurol. 214 (2), 170-197 (1983).</li>
<li>Greenfield, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+and+targeting+the+basic+mechanism+of+neurodegeneration%3A+The+role+of+peptides+from+the+C-terminus+of+acetylcholinesterase%3A+Non-hydrolytic+effects+of+ache%3A+The+actions+of+peptides+derived+from+the+C-terminal+and+their+relevance+to+neurodegenerat%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Discovering and targeting the basic mechanism of neurodegeneration: The role of peptides from the C-terminus of acetylcholinesterase: Non-hydrolytic effects of ache: The actions of peptides derived from the C-terminal and their relevance to neurodegenerat.</a> Chemico-Biological Interactions. 203 (3), 543-546 (2013).</li>
<li>Garcia-Ratés, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%28I%29+Pharmacological+profiling+of+a+novel+modulator+of+the+%CE%B17+nicotinic+receptor%3A+Blockade+of+a+toxic+acetylcholinesterase-derived+peptide+increased+in+Alzheimer+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">(I) Pharmacological profiling of a novel modulator of the α7 nicotinic receptor: Blockade of a toxic acetylcholinesterase-derived peptide increased in Alzheimer brains.</a> Neuropharmacology. 105, 487-499 (2016).</li>
<li>Eimerl, S., Schramm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quantity+of+calcium+that+appears+to+induce+neuronal+death%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurochemistry%22%5BJournal%5D)">The quantity of calcium that appears to induce neuronal death.</a> Journal of neurochemistry. 62 (3), 1223-1226 (1994).</li>
<li>Greenfield, S., Vaux, D. J. <a target="_blank" href="https://pdfs.semanticscholar.org/0d25/c7e053b9eed98e759c2e2879cb53195c084e.pdf">Commentary Parkinson's Disease, Alzheimer's Disease and Motor Neurone Disease: Identifying a Common Mechanism.</a> Science. 113 (3), 485-492 (2002).</li>
<li>Badin, A. S., Morrill, P., Devonshire, I. M., Greenfield, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%28II%29+Physiological+profiling+of+an+endogenous+peptide+in+the+basal+forebrain%3A+Age-related+bioactivity+and+blockade+with+a+novel+modulator%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">(II) Physiological profiling of an endogenous peptide in the basal forebrain: Age-related bioactivity and blockade with a novel modulator.</a> Neuropharmacology. 105, 47-60 (2016).</li>
<li>Brai, E., Stuart, S., Badin, A. -S., Greenfield, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Ex+Vivo+Model+to+Investigate+the+Underlying+Mechanisms+in+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Novel Ex Vivo Model to Investigate the Underlying Mechanisms in Alzheimer's Disease.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 291(2017).</li>
<li>Cho, S., Wood, A., Bowlby, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+slices+as+models+for+neurodegenerative+disease+and+screening+platforms+to+identify+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Current+neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Brain slices as models for neurodegenerative disease and screening platforms to identify novel therapeutics.</a> Current neuropharmacology. 5 (1), 19-33 (2007).</li>
<li>Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+cultures%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice cultures: A review.</a> Neuroscience. 305, 86-98 (2015).</li>
<li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+techniques+for+studying+ionic+channels+in+excitable+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes.</a> Annual review of physiology. 46, 455-472 (1984).</li>
<li>Jensen, M. S., Lambert, J. D. C., Johansen, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+recordings+from+rat+hippocampus+slices+following+in+vivo+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological recordings from rat hippocampus slices following in vivo brain ischemia.</a> Brain Research. 554 (1-2), 166-175 (1991).</li>
<li>Ferrati, G., Martini, F. J., Maravall, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+Adenosine+Receptor-Mediated+Regulation+of+Diverse+Thalamocortical+Short-Term+Plasticity+in+the+Mouse+Whisker+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Presynaptic Adenosine Receptor-Mediated Regulation of Diverse Thalamocortical Short-Term Plasticity in the Mouse Whisker Pathway.</a> Frontiers in Neural Circuits. 10, 1-9 (2016).</li>
<li>Grinvald, A., Hildesheim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VSDI%3A+a+new+era+in+functional+imaging+of+cortical+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">VSDI: a new era in functional imaging of cortical dynamics.</a> Nature Reviews Neuroscience. 5 (11), 874-885 (2004).</li>
<li>Badin, A. S., John, E., Susan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+spatio-temporal+bioactivity+of+a+novel+peptide+revealed+by+optical+imaging+in+rat+orbitofrontal+cortex+in+vitro%3A+Possible+implications+for+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">High-resolution spatio-temporal bioactivity of a novel peptide revealed by optical imaging in rat orbitofrontal cortex in vitro: Possible implications for neurodegenerative diseases.</a> Neuropharmacology. 73, 10-18 (2013).</li>
<li>Greenfield, S. A., Badin, A. S., Ferrati, G., Devonshire, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+of+the+rat+brain+suggests+a+previously+missing+link+between+top-down+and+bottom-up+nervous+system+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Optical imaging of the rat brain suggests a previously missing link between top-down and bottom-up nervous system function.</a> Neurophotonics. 4, 31213(2017).</li>
<li>Opitz-Araya, X., Barria, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3197400/">Organotypic hippocampal slice cultures.</a> Journal of visualized experiments: JoVE. (48), (2011).</li>
<li>Gong, C. -X., Lidsky, T., Wegiel, J., Grundke-Iqbal, I., Iqbal, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolically+active+rat+brain+slices+as+a+model+to+study+the+regulation+of+protein+phosphorylation+in+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Protocols%22%5BJournal%5D)">Metabolically active rat brain slices as a model to study the regulation of protein phosphorylation in mammalian brain.</a> Brain Research Protocols. 6 (3), 134-140 (2001).</li>
</ol>

המחברים מצהירים אינטרסים כלכליים מתחרים. סוזן א גרינפילד הוא מייסד נשיא מוגבלת נוירו-ביו, חברה בבעלות פרטית, מחזיק במניות החברה. כוח המוח עמנואלה, אנטונלה Cogoni עובדים של נוירו-ביו בע מ

ההיבט העיקרי של פרוטוקול זה, המבוסס על טכניקת המוח ומבוססת ex-vivo , מאפשר לבחון באופן סינכרוני שני hemislices סימונים, המתקבל אותו מישור אנטומיים, ניטור התגובה שלהם לאחר היישום של ספציפי תנאי (לשלוט או לטפל); זה מציע לכן פרדיגמה נסיונית מבוקר חזק ככל האפשר. האפשרות של הערכת פעם, מינון-ו באופן ספציפי לאתר neurochemicals שונים הקשורים ליקוי עצביים, כפי שניתן לראות במהלך אירועים ניווניות22, מייצגת תכונה חיונית. מתודולוגיה זו מקשרת את היתרונות של סביבה ויוו פיזיולוגיים עם אלה של ההכ...

המודעה היא שמחלה כרונית המאופיינת על ידי ליקוי ניווניות הדרגתית להשפיע על אזורים שונים במוח, כגון entorhinal קליפת (EC), BF, ההיפוקמפוס (HC) וכן הריח הנורה (אבוב)1,2,3, 4,5. כך שהאח של AD התפתחות להוביל ירידה קוגניטיבית מתקדמת, גורם מחלה זו הצורה הנפוצה ביותר של דמנציה, והיוו כ-70% של המקרים כל6. למרות ניסיונות נרחב להבין בשלבים הראשונים גורם לספירה, אין כרגע אינדיקציה ניסיוני מוגדר שחקרתי אותם. בנוסף, התיאוריה המקובלת ביותר - "עמילואיד ההשערה" - נחקרת יותר ויותר מאז הוא אינו מספק פרופיל מלא להסביר את pathobiology לספירה, ולא מטרה התרופות הוכיח יעילות7,8 ,9.
תיאוריה חלופית אשר מקבל תשומת לב גדלה והולכת מרמז כי המנגנון הראשוני המתרחשים במהלך הקשורים ניוון מוחיים הקשורים מקבץ עצביים רגישים בעיקר לספירה3,10,11 , 12 , 13 , 14. רכזת הסלולר הטרוגנית זו הקיפה במסגרת הפרויקטים BF, המוח האמצעי, גזע המוח, באזורים מרובים, כגון ה EC, HC ו- OB15,16. למרות המגוון שלה מורפולוגיה עצביים, סינתזה נוירוטרנסמיטר, הגרעין של תאים משתף תכונה נפוצה לבטא כאב, אשר יכול להיות גם של פונקציה אנזימטי17,18. התפקיד-קלאסי זה כמו רומן איתות מולקולה שמתווכת סידן (Ca2 +) מזרימה נוירונים אשר יכול לחוות אירועים עם מחלות או רעילים ביחס במינון2 + Ca, זמינות ו עצביים בגיל17,18 , 19.
במהלך הקשורים ניוון מוחיים, אובדן תאי שנצפה יכול להיות לכן קשור עם זה פונקציה שאינה אנזימטי17,18,20, אשר אינה משרתת פפטיד 30mer (T30) ביקע מ כאב קרבוקסילי 20. בקנה אחד עם תוצאות קודמות, נישא על תרבית תאים וההכנות אופטי הדמיה18,21 , הפגנו, באמצעות גישה חדשנית המבוססת על שמחוץ עכברוש המוח פרוסות המכילות מבנים BF, שהביאה T30 המודעה דמוי22. באופן ספציפי, מתודולוגיה חדשה זו מציעה תרחיש פיזיולוגית יותר מאשר תרבית תאים מאז זה משמר רבים מהמאפיינים של רקמות ללא פגע, ועד אנטומי שימור המעגלים, גם אם עבור חלון זמן של שעות. אנחנו מוחלים פרוטוקול זה לחקור את האירועים המתרחשים במהלך השלבים המוקדמים של הקשורים ניוון מוחיים, ניטור התגובה חריפה עם יישום T30.
למרות גוף גדול של הספרות על משתמש במוח פרוסות לחקור מסלולים מולקולריים נרמז נזקים עצביים או23,נוירוג'נסיס24, פרוטוקול זה מספק בפעם הראשונה מיידי יותר, רגיש הקריא בהשוואה לשימוש משותף של פרוסות organotypic. עם זאת, כפי שקורה organotypic מקטעים המוח, הליך חריפה פרוסה יכול גם להיות מאומץ למספר מטרות, כגון הערכת neuroprotective או מולקולות העצבים, גילוי ראשוני השינויים המולקולריים המתרחשים תהליך ספציפי, immunohistochemical ניתוח ולאחר מבחני תרופתי על מערכת העצבים המרכזית הקשורים פתולוגיות.

<table><tbody><tr><td>נתרן כלורי (NaCl)</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>S7653</td><td>מגיב להכנת aCSF</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי (KCl)</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>P9333</td><td>מגיב להכנת aCSF</td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט (NaHCO3)</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>S5761</td><td>מגיב להכנת aCSF</td></tr><tr><td>מגנזיום סולפט הפטהידראט (MgSO4 (7H2O))</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>63138</td><td>מגיב להכנת aCSF</td></tr><tr><td>אשלגן פוספט מונובייסי (KH2PO4)</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>P5655</td><td>מגיב להכנת aCSF</td></tr><tr><td>מלח הפס</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>H7006</td><td>מגיב להכנת aCSF</td></tr><tr><td>חומצת הפס</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>H3375</td><td>מגיב להכנת aCSF</td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>מגיב G7528</td><td>להכנת aCSF</td></tr><tr><td>סידן כלוריד מיובש</td><td>סיגמא-אולדריץ', גרמניה</td><td>223506</td><td>מגיב להכנת aCSF</td></tr><tr><td>פפטיד T30</td><td>Genosphere Biotechnologies, צרפת</td><td></td><td>נבדק פפטיד שמקורו ב-AChE</td></tr><tr><td>ערכת ניתוח כירורגית</td><td>World Precision Instruments, ארה"ב</td><td>פריט #: MOUSEKIT</td><td>שלב הסרת מוח</td></tr><tr><td>להבים כירורגיים</td><td>סוואן-מורטון, בריטניה</td><td>BS 2982</td><td>הסרת מוח שלב</td></tr><tr><td>נייר סינון פישר</td><td>סיינטיפיק, ארה"ב</td><td>11566873</td><td>הכנת המוח לחיתוך</td></tr><tr><td>דבק</td><td></td><td></td><td>הכנת המוח לחיתוך</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica, גרמניה</td><td>VT1000 S</td><td>מברשות</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> חיתוך טיפול <td>ברקמות</td></tr><tr><td>מיכל</td><td></td><td></td> <td>חמצןשלב חיתוך ודגירה</td></tr><tr><td>1x מי מלח מאגר פוספט (PBS)</td><td>פישר סיינטיפיק, ארה"ב</td><td>BP2438-4</td><td>שלב הומוגניזציה</td></tr><tr><td>מעכבי פוספטאז</td><td>פישר סיינטיפיק, ארה"ב</td><td>1284-1650</td><td>שלב הומוגניזציה</td></tr><tr><td>מעכבי פרוטאז</td><td>רוש שלמים PIC, ארה"ב</td><td>4693116001</td><td>שלב הומוגניזציה</td></tr><tr><td>Pestles</td><td>Starlab, בריטניה</td><td>I1415-5390</td><td>שלב הומוגניזציה</td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פירס 660 ננומטר בדיקת חלבון</td><td>תרמו מדעית, ארה"ב</td><td>22660</td><td>ריכוז חלבון</td></tr></tbody></table>

גישה חלופית ללמוד העיקרי אירועים הקשורים ניוון מוחיים לשעבר vivo עכברוש המוח בפרוסות

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

למרות מחקרים רבים המנסים לפתח מודלים אמינים בעלי חיים אשר המשקף העיקרית תהליכים הקשורים ניוון מוחיים הבסיסית, מעטים התקבלו באופן נרחב. כאן, אנו מציעים הליך חדש מקורי ידועים שמחוץ המוח פרוסה הטכניקה, אשר מציעה יישום קרוב ויוו-כמו לתרחיש יותר במבחנה הכנות, על חקירת האירועים בתחילת מפעילה ניוון תאים, כמו נצפתה מחלת אלצהיימר (AD). וריאציה זו כוללת צעדים לשחזור בקלות ופשוט, המאפשר שימור cytoarchitecture האנטומי של האזור שנבחר המוח ופונקציונליות המקומית שלה וחשש פיזיולוגיים. ניתן להשיג במגוון תחומים אנטומיים המוח באותו, מתן האפשרות לבצע ניסויים מרובים עם הטיפולים המדובר האתר - מינון-, באופן תלוי-זמן. מגבלות פוטנציאליים, אשר עלול להשפיע על התוצאות הקשורות מתודולוגיה זו קשורים שימור הרקמה, קרי, שמירה על שלמותה אנטומי במהלך השלבים הדגירה וגזירה, העובי סעיף, אשר יכול להשפיע על הניתוח הביוכימי ו- immunohistochemical. גישה זו יכולה להיות מועסק למטרות שונות, כגון חקר המנגנונים המולקולריים המעורבים בתנאים פיזיולוגיים או פתולוגית, והתרופות הקרנה או מבחני מנה-תגובה. לבסוף, פרוטוקול זה גם יכול להפחית את מספר בעלי חיים המועסקים במחקרים התנהגותיים. היישום דיווחו כאן שתוארו לאחרונה ובדק בפעם הראשונה ב- ex-vivo עכברוש המוח פרוסות המכילות הקדמי הבזליים (BF), אשר הוא אחד האזורים במוח מושפע בעיקר לספירה. באופן ספציפי, זה הוכח כי הממשל של פפטיד רעילים שמקורם את קצה קרבוקסילי של אצטילכולין אסטראז (AChE) יכול לבקש פרופיל כמו AD, מפעילה, לאורך ציר גישה antero-אחוריים BF, ביטוי דיפרנציאלי של חלבונים שינו לספירה, כגון הקולטן nicotinic alpha7 (α7-nAChR), phosphorylated טאו (p-טאו), עמילואיד ביתא (Aβ).

פרוטוקול המובאת כאן מציין כי הממשל של פפטיד רעילים, T30, שמחליש באופן תלוי-אתר הביטוי של α7-nAChR, p-טאו, ו Aβ במקטעים המכילים BF (איור 3 א). הקולטן nicotinic מציג עלייה משמעותית hemislice rostral שטופלו לעומת המקביל שליטה (פרוסה 1, p = 0.0310) (איור 3B), בעוד הפרוסה ביניים אינו חושף כל שינוי בין (שני תנאים פרוסה 2, p = 0.1195) (איור 3B). במקטע האחורי הפחתה משמעותית קיים בחלק החשופי...

אנו מציגים שיטה אשר יכול לספק עוד תובנות האירועים בתחילת שבבסיס הקשורים ניוון מוחיים, המבוססת על הטכניקה המוח הוקמה לשעבר-vivo , המשלב את היתרונות של ניסויים ב- vivo ו- in vitro לקשרי . יתר על כן, הוא מייצג הזדמנות ייחודית השוואה ישירה של קבוצת טיפול ללא טיפול באותו מישור אנטומיים.

גישה חלופית ללמוד העיקרי אירועים הקשורים ניוון מוחיים לשעבר Vivo עכברוש המוח בפרוסות

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לחקור בו זמנית שתי חצי-פרוסות ספקולריות המתקבלות מאותו מישור אנטומי ולמנוע את ההשפעות לאחר הטיפול. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מכריעות בתחום מדעי המוח המולקולריים, כגון האירועים הראשוניים המשפיעים על מולקולות מפתח המעורבות בתהליכים ניווניים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יכולה לספק ומדיום המתבצע של מפלים מולקולריים העומדים בבסיס אירועים ניווניים.למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי אירועים ראשוניים המתרחשים בניוון עצבי, ניתן ליישם אותה גם כדי לחקור מודלים של בעלי חיים של הפרעות שונות או תכונות אחרות של איברים ורקמות. התחל בהכנת שני נוזלי מוח שדרתיים מלאכותיים שונים. האחד משמש לחיתוך המוח, והשני לשלב הדגירה.לאחר הכנת ה-ACSF החיתוך, מערבבים את התמיסה ושומרים אותה על קרח. באופן דומה, הכינו את ההקלטה ACSF, אך שמרו אותה בטמפרטורת החדר. חמצן את שתי התמיסות.לאחר מכן, הכינו את המכשירים לעריפת הראש והסרת המוח במכסה המנוע. לאחר מכן, הגדר את פרמטרי הרטט. הגדר את עובי הפרוסה לפי הצורך.כמו שלוש מאות מיקרון. הגדר את התדר לשבע ואת המהירות לשש. לאחר מכן, הכנס את תא הרטט והקיף אותו בקרח.עבור חתך המוח, פתיחת שסתום הקרבוגן כדי לחמצן את ה-ACSF החיתוך. בחר את קצב הזרימה המינימלי של כשני מיליליטר לדקה. עכשיו בשני צינורות של 15 מיליליטר, הכינו את תנאי הטוס.טען צינור אחד עם 10 מיליליטרים של ההקלטה ACSF כבקרה. טען את השני עם 10 מיליליטר של הקלטה ACSF מועשר בטיפול. במקרה זה, שני מיקרוטולר של T30.מערבל את שני הצינורות ושמור אותם על קרח עד שהם נחוצים. חתכו את העור מעל הגולגולת בעזרת להב כירורגי. לאחר מכן בעזרת מספריים, חותכים את הגולגולת לאורך קו האמצע מהחלק האחורי לעצם שמעל נורות הריח.לאחר מכן, משוך לרוחב את שני צידי הגולגולת באמצעות מלקחיים כדי לגשת למוח. הכנס מרית בגחון למוח. הוציאו אותו בעדינות ושמרו עליו לחות ב-ACSF קר כקרח למשך כחמש דקות.לאחר המנוחה ב-ACSF קר, העבירו את המוח לנייר פילטר. ולאחר הסרת המוח הקטן, הדביקו את המוח אנכית על דיסק הרטט. לאחר מכן העבירו אותו לתא החיתוך המלא בחיתוך קרח ACSF.כעת התחל את זרימת החמצן לתמיסת החדר. לאחר מכן התאם את מרווח החיתוך והמשך בחתך המוח. אסוף את הסעיפים המכילים את אזור העניין בשיטות סטנדרטיות.כעת חלקו בזהירות כל חלק במספריים קטנים לאורך קו האמצע כדי לקבל שתי חצי פרוסות ספקולריות. השתמש בכל זוג חצי-פרוסות למצב הבקרה והמטופל. לאחר החלוקה, הניחו להמיסקציות לנוח בתא הרטט למשך חמש עד עשר דקות.לאחר השאר, העבירו בעדינות את החצי חתכים באמצעות צינור זכוכית לסיר מבעבע המכיל הקלטה ACSF בטמפרטורת החדר. לאחר מכן הניחו להמיקטורים להתאושש במשך כ-30 דקות לפני שתמשיכו. במהלך ההפסקה, טען שלושה בקבוקוני זכוכית עם שלושה מיליליטר ACSF הקלטה לקבוצת הביקורת ושלושה בקבוקונים עם שלושה מיליליטר ACSF מועשר ב-T30 לקבוצה המטופלת.לאחר מנוחה של 30 דקות, תוך חמש דקות, העבירו את הדגימה לאמבטיות. ראשית טען את חצי הפרוסות הרצופות לתמיסת הבקרה באמצעות מברשת. לאחר מכן, בעזרת מברשת אחרת, העבירו את ההמיחתכים הנגדיים לתמיסת הטיפול.לאחר מכן, אטמו את הבקבוקונים עם פקקי פלסטיק המכילים 21 מחטים לאספקת קרבוגן לדגימה. לספק חמצן בקצב זרימה מינימלי, כגון שני מיליליטר לדקה כדי למנוע כל תנועה של רקמת המוח וכתוצאה מכך נזק מכני אפשרי לרקמה. פעולה זו משלימה את ההגדרה.עכשיו התחל דגירה של חמש שעות. לאחר הדגירה, עצרו את זרימת החמצן ופתחו את הבקבוקונים. לאחר מכן העבירו בעדינות את החצי פרוסות באמצעות המברשת המתאימה לצינורות של 1.5 מיליליטר המכילים 250 מיקרוליטר של מאגר ליזה הנשמר על קרח.לאחר מכן באמצעות עליים נפרדים, הומוגניזציה של כל רקמה. השלם את שלבי ההעברה וההומוגניזציה תוך 10 עד 15 דקות עבור כל שש הדגימות. כעת צנטריפוגה את הדגימות ההומוגניות בכוח הכבידה פי 1,000 למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס.לאחר הסיבוב, העבירו את הסופרנטנטים לצינורות חדשים ואחסנו את הדגימות בטמפרטורה שלילית של 80 מעלות צלזיוס. למתן פפטיד רעיל, T30, למוח הקדמי של בזיליקום המכיל המיסקציות היו שלוש השפעות ספציפיות לאתר על הרקמה. הוא מווסת את הביטוי של קולטן אלפא 7 ניקוטיני, את הזרחן של טאו ואת הביטוי של עמילואיד בטא.הקולטן הניקוטיני הראה עלייה משמעותית בהמיסליצה שטופלה ברוסטרל, בעוד שפרוסת הביניים לא חשפה כל שינוי בין שני המצבים. בחלק האחורי נמצאה הפחתה משמעותית בחלק שנחשף ל-T30. רמות הטאו הזרחני עלו באופן משמעותי באזור הקדמי.מצד שני, שני חלקי המוח הקדמיים האחרים של בזיליקום אינם מראים הבדל משמעותי בין התנאים. עמילואיד בטא השתפר משמעותית לאחר חשיפה ל-T30 בהמיסקציה הרוסטרלית והביניים. עם זאת, בשקופית הקודל, לא הייתה השפעה מדידה על ביטוי בטא עמילואיד.לאחר שליטה, טכניקה זו יכולה להיעשות תוך שבע שעות אם היא מבוצעת כראוי.

an-alternative-approach-to-study-primary-events-neurodegeneration

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פורסים תרבות Organotypic של E18 מוח החולדה

מאמר זה מתאר פרוצדורות להכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים סינפטיים הקשורים להזדקנות המוח הקשורים לגיל מחלות ניווניות כגון מחלת אלצהיימר.

הכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות חריפה העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים Synaptic במהלך ההזדקנות עמילואיד פתולוגיה

דו"ח זה מדגים טכניקה בידוד מכני של נוירונים בודדים קיימא שמירה boutons presynaptic המצורפת. נוירונים Vibrodissociated יש את היתרונות של ייצור מהיר, שליטה מעולה תרופתי ושיפור חלל מהדק ללא השפעה של תאים שכנים. שיטה זו יכולה לשמש עבור הדמיה של אלמנטים הסינפטי ו-clamp תיקון ההקלטה.

Vibrodissociation של נוירונים בין פרוסות המוח מכרסמים לחקר הילוכים Synaptic ותמונה מסופי Presynaptic

סרטון זה מדגים את ההליך להכנה וטיפול בחצי פרוסות מוח של חולדות עם פפטיד נוירוטוקסיל כדי לחקות ניוון עצבי. הפרוטוקול מאפשר ניתוח אירועים ניווניים על ידי השוואה ישירה של פרוסות בקרה ומטופלות באותו מישור אנטומי.

טיפול בפרוסות עטרה של חולדות עם פפטיד נוירוטוקסיל

סחר קרום עצבי דינמי שולט זמינה פלזמה קרום חלבון ומשמעותי עצבית משפיע. נכון להיום, זה כבר מאתגר למדוד סחר endocytic עצבי בנוירונים בוגרים. כאן אנו מתארים שיטה יעילה מאוד, כמוני למדידת שינויים מהירים בביטוי חלבון פני השטח vivo לשעבר בפרוסות מוח חריפות.

המוח פרוס Biotinylation:<em&gt; Ex Vivo</em&gt; גישה למדוד סחר חלבון פלזמה ממברנה אזור ספציפי בתאי עצב בוגרים

פיתחנו מודל פרוסת מוח שבו ניתן להשתמש כדי לבחון מנגנונים מולקולריים מעורבים בפגיעה במוח בתיווך הפעלת יתר רעילה. טכניקה זו יוצרת רקמת מוח בוגרת קיימא ומפחיתה את המספרים של בעלי חיים הנדרשים לניסויים, תוך שמירה על המעגלים עצביים, אינטראקציות הסלולר, ותאי postsynaptic שלמים בחלקו.

הפעלת יתר רעיל גירוי של המוח כMicroslices<em&gt; במבחנה</em&gt; דגם של שבץ

אנו מתארים הליכים לעיבוד רקמות המוח היילוד הנולד כדי להשיג מיקרוגרפים אלקטרונים ברזולוציה גבוהה עבור ניתוח מורמטרי של הפצת שלפוחית סינפטית במסופי העצבים. המיקרוגרפים שהושגו בשיטות אלה יכולים לשמש גם לחקר המבנה של מספר רכיבים סלולאריים אחרים ולמערכות היחסים המבדיות שלהם.

הכנת התינוק היילוד רקמת המוח עבור ניתוח בדיקת מבנית באולטרסאונד של הפצת שלפוחית סינפטית במסופי העצבים

פרוטוקול זה מתאר את הכנת פרוסות קליפת המוח ההיפוקמפוס-סנטורינאלית האופקית (HEC) מעכברים המציגים פעילות אדווה ספונטנית של גל חד. פרוסות מודגרות בתא החזקת ממשק פשוט והקלטות מבוצעות בתנאים שקועים עם נוזל שדרתי מלאכותי זורם במהירות כדי לקדם חמצון רקמות ואת הופעתה הספונטנית של פעילות ברמת הרשת.

חריף המוח עכבר חותכת לחקור פעילות רשת היפוקמפוס ספונטנית

אנו מציגים פרוטוקול להכנת פרוסות חריפות מההיפוקמפוס הגבי-ביניים של עכברים. אנו משווים הכנה רוחבית זו עם חתך קורנל במונחים של איכות הקלטות ושמירה על תכונות מורפולוגיות של נוירונים מוקלטים.

הכנת פרוסות חריפות מהיפוקמפוס הגבי להקלטה של תא שלם ושחזור עצבי בGyrus דנטאטה של עכברים בוגרים

פרוטוקול זה מדגים שיטה פשוטה וחזקה לחקר גדילת אקסון באתרו ודינמיקת חרוט גדילה. הוא מתאר כיצד להכין פרוסות מוח חריפות רלוונטיות מבחינה פיזיולוגית ex vivo ומספק צינור ניתוח ידידותי למשתמש.

באתרו הדמיה של גדילה וצמיחה של דינמיקת חרוט אקסון בתרביות פרוסות מוח עובריות אקס-ויוו חריפות

חקור אירועים מולקולריים מוקדמים בניוון עצבי באמצעות שיטת פרוסות מוח ex-vivo עם חצאי-פרוסות צמודים. שיטה זו מאפשרת השוואה ישירה של תנאי טיפול ובקרה באותו מסגרת אנטומית.

גישה חלופית ללמוד העיקרי אירועים הקשורים ניוון מוחיים לשעבר Vivo עכברוש המוח בפרוסות

גלה סרטונים נוספים