Name: מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין Fractionated קרינה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: למדו להעריך תפקוד בלוטות רוק בעכברים באמצעות גירוי פילוקרפין. הפרוטוקול כולל טרכאוסטומיה, איסוף רוק וניתוח בלוטות לחקר הפרעות בלוטות הרוק והתערבויות קליניות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

מחקר דיווח בפרסום זה נתמך על ידי מחקר ואסטתיים (NIDCR) את נבחרת המכון של שיניים ו של המכון הלאומי לסרטן (NCI) של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R56 DE025098, UG3 DE027695 ו F30 CA206296. התוכן הוא אך ורק באחריות המחברים, ואינם מייצגים בהכרח את הנופים הרשמי של מכוני הבריאות הלאומיים. עבודה זו נתמכה גם על ידי 1206219 DMR של ה-NSF וחדשנות IADR את פרס טיפול אוראלי (2016).
ברצוננו להודות מרוימה ערי ד ר אנדרו Hollomon לסיוע שלהם עם אוסף רוק. ברצוננו להודות וונג פיי-לון לסיוע שלו עם ניתוח בלוטת. ברצוננו להודות אינגלס מתיו על עזרתו איור הכנה. ברצוננו להודות ד ר איליין Smolock, אמילי וו על קריאה ביקורתית של כתב היד הזה.

כל ויוו ההליכים המתוארים להלן אושרו על ידי ועדת האוניברסיטה חיה משאבים ב אוניברסיטת רוצ'סטר, רוצ'סטר. NY.
1. הכנה
<ol><li>באמצעות איזון האנליטי, שוקלים 20 מ"ג פילוקרפין. להמיס ב 2 מ ל תמיסת סטרילית צינור microcentrifuge. הערה: כי פילוקרפין רגיש אור ולא מאבד את הפעילות לאורך זמן, פתרון זה צריך להיות מוכן ביום ההזרקה, מוגן מפני אור עד מנוהל.</li>
	<li>באמצעות איזון האנליטי, שוקל ולזהות כל אוסף צינורות, נימים זכוכית. המספר של אוסף צינורות, נימים זכוכית צריך להתאים את מספר עכברים.</li>
</ol>2-מיכשור וציוד
<ol><li>שוקלים C57/BL6 עכברים באמצעות איזון האנליטי.</li>
	<li>באמצעות מזרק 0.5 mL עם 29G x ½" מחט, עזים ומתנגד עכברים עם פתרון סטרילי מלוחים intraperitoneally מוזרק של 100 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 10 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים. המשך לשלב הבא כאשר העכבר אינו מגיב לגירויים (דהיינו היעדר רפלקס הנסיגה פדלים), אשר בדרך כלל מתרחשת בתוך 5-10 דקות לאחר ההזרקה.</li>
	<li>לאחר dispensing חומר סיכה על המוליך שקצהו כותנה, בעדינות להחיל על העיניים, מקם את העכבר במצב פרקדן על הבמה. החיה anesthetized חייב להישמר על משטח חם. הערה: כל הפעולות מבוצעות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>אבטח את האף הגפיים, זנב אל הבמה באמצעות הדבקה.</li>
	<li>נקי, להרטיב את הצוואר עם המחיקה אלכוהול. הערה: זה יעזור למנוע חדירה החתכים הבאים פרווה.</li>
	<li>מרימה את העור בצוואר קו האמצע הגחון עם מלקחיים, לעשות חתך קטן, שטחי באמצעות מספריים ויבתר. להנחות את המספריים לתוך הפתח ופתח לאט את להבי subcutaneously כדי להפריד בין רקמות מטוסים.</li>
	<li>יש לשמור על עור הרים, לחתוך בזהירות כדי 1 ס מ מתחת בפה.</li>
	<li>להזמין שני חתכים לרוחב-ההיבט נחות מעולה של החתך הראשון. באמצעות מלקחיים, בעדינות משקפים משם את העור כדי לאפשר גישה למבנים הראש והצוואר.</li>
	<li>באמצעות המיקרוסקופ ויבתר בהגדלה X 8, להמחיש את בלוטות submandibular (קו האמצע: איור 1).</li>
	<li>בעזרת מלקחיים בסדר, הרם בעדינות את בלוטות לחשוף את השרירים infrahyoid (רצועה) ארבעה המכסים את קנה הנשימה. הימנע קריעה או לשבש את להערכת שמסביב או צינורות excretory.</li>
	<li>אם אוסף רוק מכל עכבר אחד או יותר, חזור על השלבים 2.1-2.10 עם העכבר כל לפני שתמשיך. הערה: הליך זה שניתן לבצע בביטחה על עד 5 עכברים בו-זמנית.</li>
	<li>במספריים ויבתר קטן, להסיר את החלק המדיאלי של השרירים רצועה בעודם שוהים קרוב קו האמצע ככל האפשר. חותכים רק ככל הדרוש להמחיש את קנה הנשימה ולשמור רצועה השרירים מהדרך במהלך ההליך. הימנע חותך כל ספינות בקרבת מקום, כי אם יש דלדול אחסון משני דימום משמעותי, פילוקרפין לא יהיה יעיל וגורם הפרשת.</li>
	<li>משקפים את השרירים רצועה מן קנה הנשימה.</li>
	<li>דמיינו את הקול, קנה הנשימה, בלוטת התריס. ודא קנה הנשימה ברור עודפי רקמת.</li>
	<li>לבצע חתך אופקי לקנה נחות/אחוריים בלוטת התריס באמצעות מספריים ויבתר קטנות. ודא דרכי הנשימה פטנטים וברור של נוזל.</li>
</ol>3. רוק אוסף
<ol><li>הוצא את הקלטת ליד הפה ואת הזווית לנתיחה הבמה כלפי מטה (45°, cranially) כדי לסייע עם זרימת הרוק.</li>
	<li>באמצעות מזרק 0.5 mL עם 29G x ½" מחט, לבצע הזרקה בקרום הבטן של 10 µL/g הגוף משקל פילוקרפין עבור מנה סך של 100 מ"ג/ק"ג.</li>
	<li>להפעיל טיימר. אם מינון עכברים מרובים, להפחית זמן חפיפה ובמהירות ועל ידי יש לי עוזר בו-זמנית להזריק העכברים הנותרים.</li>
	<li>בעזרת מלקחיים רגילה, פתח את הפה לגישה צינור קפילרי.</li>
	<li>פעם חרוז של רוק נצפית בפה, מקום לסוף הפרוקסימלית צינור קפילרי לתוך הנוזל, בקצה הדיסטלי להציב לתוך צינור איסוף ממוקם מתחת לזירה ויבתר (שני צינורות מראש שקל). הערה: בעכברים הנשי C57/BL6 6-10 שבועות של גיל, ריור ברוטו מתרחשת בתוך 2 דקות של הזרקת פילוקרפין.</li>
	<li>אם רוק בניין בפה, אך לא זורם דרך הצינור, reattempt הצעד הקודם. ודא כי הצינור אינם ממוקמים ישירות נגד משטח הרירית, אשר יכול לחסום את הים.</li>
	<li>לאסוף את הרוק עבור סכום כולל של 12 דקות בעקבות גירוי פילוקרפין. להבטיח פיונית יישאר נקי. הערה: נפח מוגבר, הפרשות (הרוק, בדרכי השתן, צואה) תקינים בתקופה זו.</li>
	<li>אם עכברים יש מדוכא רוק פונקציה (למשל., עקב פציעה או התערבות), להעביר את הנוזלים הנותרים מן הפה אל הצינור אוסף באמצעות micropipette P200. אם איסוף של עכברים מרובים, ודא כי טיפים משתנים.</li>
	<li>להקליט את המשקל של רוק שנאספו פלוס צינורות 12 דקות לאחר ההזרקה פילוקרפין.</li>
</ol>4. בלוטת לנתיחה
<ol><li>המתת חסד עכברים מאת CO2 המתת חסד (כפי שמתואר ההנחיות AVMA המתת חסד של בעלי חיים: 2013 מהדורה) ואחריו ניקור חזה, דואגת לשמר את המבנים של הראש והצוואר. מסיבה זו, להימנע נקע בצוואר הרחם כשיטה של המתת חסד.</li>
	<li>הנח את העכבר במצב פרקדן על הבמה. מיקום מחדש של בלוטות באתר המקורי מעל קנה הנשימה (איור 1).</li>
	<li>באמצעות מיקרוסקופ ויבתר תחת הגדלה X 8, להמחיש את בלוטות העיקריים: PG, SMG, סיג. כדי להבחין בין הבלוטות בזמן, לזהות כי פ ג הוא מפוזר, משקר לרוחב SMG, סיג. הערה: אם לנתח את PG, זה צריך להיעשות קודם כי זה לפחות מוגדר וכנראה להיקרע.</li>
	<li>לתפוס את הזנב של PG עם מלקחיים, משיכתו הרחק מבנים המשמשים כבסיס, ולהחיל בעדינות את המתח לפני חיתוך ראש PG עם לנתח מספריים.</li>
	<li>הפרה הקפסולה המקיפים את SMGs באמצעות מלקחיים. הפרד בעדינות את SMG ימינה ושמאלה.</li>
	<li>חינם ההיבט הגבי SMG מרקמות nonglandular מודבקת באמצעות מלקחיים.</li>
	<li>הסר את SMG הצוואר על ידי ציור צינור של וורטון מתוח עם מלקחיים, לחתוך את צינור עם לנתח מספריים.</li>
	<li>בעדינות להפריד את סיג SMG באמצעות מלקחיים. הערה: סיג הוא בהיבט superolateral של SMG.</li>
	<li>באמצעות איזון אנליטית, להקליט SMG משקולות.</li>
</ol>

<ol><li>Bradley, P., O'Hara, J. <a target="_blank" href="http://www.surgeryjournal.co.uk/article/S0263-9319(15)00194-5/pdf">Diseases of the salivary glands.</a> Surgery (Oxford). 33 (12), 614-619 (2015).</li>
<li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+enhancement+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Caries+Research%22%5BJournal%5D)">Salivary enhancement therapies.</a> Caries Research. 38 (3), 241-246 (2004).</li>
<li>Konings, A. W. T., Coppes, R. P., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+salivary+gland+radiosensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of salivary gland radiosensitivity.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 62 (4), 1187-1194 (2005).</li>
<li>Burlage, F. R., Coppes, R. P., Meertens, H., Stokman, M. A., Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parotid+and+submandibular%2Fsublingual+salivary+flow+during+high+dose+radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Parotid and submandibular/sublingual salivary flow during high dose radiotherapy.</a> Radiotherapy and Oncology. 61 (3), 271-274 (2001).</li>
<li>Aure, M. H., Konieczny, S. F., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+gland+homeostasis+is+maintained+through+acinar+cell+self-duplication%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Salivary gland homeostasis is maintained through acinar cell self-duplication.</a> Developmental Cell. 33 (2), 231-237 (2015).</li>
<li>Aure, M. H., Arany, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+Glands%3A+Stem+Cells%2C+Self-duplication%2C+or+Both%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Salivary Glands: Stem Cells, Self-duplication, or Both?</a> Journal of Dental Research. 94 (11), 1502-1507 (2015).</li>
<li>Ono, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+effects+of+cevimeline+and+pilocarpine+on+salivary+mechanisms%2C+cardiovascular+response+and+thirst+sensation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Distinct effects of cevimeline and pilocarpine on salivary mechanisms, cardiovascular response and thirst sensation in rats.</a> Archives of Oral Biology. 57 (4), 421-428 (2012).</li>
<li>Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+salivary+gland+function+by+autonomic+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Auton+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Regulation of salivary gland function by autonomic nerves.</a> Auton Neuroscience. 133 (1), 3-18 (2007).</li>
<li>Nezu, A., Morita, T., Tojyo, Y., Nagai, T., Tanimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+agonistic+effects+of+pilocarpine+on+Ca%282%2B%29+responses+and+salivary+secretion+in+the+submandibular+glands+of+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">Partial agonistic effects of pilocarpine on Ca(2+) responses and salivary secretion in the submandibular glands of live animals.</a> Experimental Physiology. 100 (6), 640-651 (2015).</li>
<li>Urita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rebamipide+and+mosapride+enhance+pilocarpine-induced+salivation%5BTitle%5D)+AND+%22North+American+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Rebamipide and mosapride enhance pilocarpine-induced salivation.</a> North American Journal of Medical Sciences. 1 (3), 121-124 (2009).</li>
<li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li>
<li>Kondo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+differences+in+the+acinar+cells+of+the+murine+major+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Functional differences in the acinar cells of the murine major salivary glands.</a> Journal of Dental Research. 94 (5), 715-721 (2015).</li>
<li>Evans, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+impairment+of+salivation+in+Na%2B%2FK%2B%2F2Cl-+cotransporter+%28NKCC1%29-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Severe impairment of salivation in Na+/K+/2Cl- cotransporter (NKCC1)-deficient mice.</a> Journal of Biological Chemistry. 275 (35), 26720-26726 (2000).</li>
<li>Delanian, S., Lefaix, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+radiation-induced+fibroatrophic+process%3A+therapeutic+perspective+via+the+antioxidant+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">The radiation-induced fibroatrophic process: therapeutic perspective via the antioxidant pathway.</a> Radiotherapy and Oncology. 73 (2), 119-131 (2004).</li>
<li>Guchelaar, H. J., Vermes, A., Meerwaldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+clinical+course+and+supportive+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Support+Care+Cancer%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, clinical course and supportive treatment.</a> Support Care Cancer. 5 (4), 281-288 (1997).</li>
<li>Lin, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+short-term+%CE%B3-irradiation+effects+on+mouse+salivary+gland+function+using+a+new+saliva+collection+device%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring short-term γ-irradiation effects on mouse salivary gland function using a new saliva collection device.</a> Archives of Oral Biology. 46 (11), 1085-1089 (2001).</li>
<li>Montenegro, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+differences+between+humans+and+rodents+in+the+ability+to+concentrate+salivary+nitrate%3A+Implications+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+biology%22%5BJournal%5D)">Profound differences between humans and rodents in the ability to concentrate salivary nitrate: Implications for translational research.</a> Redox biology. 10, 206-210 (2016).</li>
<li>Choi, J. S., Park, I. S., Kim, S. K., Lim, J. Y., Kim, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+and+Functional+Changes+of+Salivary+Gland+Dysfunction+After+Radioactive+Iodine+Ablation+in+a+Murine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Morphometric and Functional Changes of Salivary Gland Dysfunction After Radioactive Iodine Ablation in a Murine Model.</a> Thyroid. 23 (11), 1445-1451 (2013).</li>
<li>Imamura, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+pilocarpine-induced+saliva+secretion+by+adrenergic+agonists+in+ICR+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Pharmacology+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of pilocarpine-induced saliva secretion by adrenergic agonists in ICR mice.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 39 (12), 1038-1043 (2012).</li>
<li>Ma, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+Secretion+of+Saliva+in+Transgenic+Mice+Lacking+Aquaporin-5+Water+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Defective Secretion of Saliva in Transgenic Mice Lacking Aquaporin-5 Water Channels.</a> Journal of Biological Chemistry. 274 (29), 20071-20074 (1999).</li>
<li>Parkes, M. W., Parks, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supersensitivity+of+salivation+in+response+to+pilocarpine+after+withdrawal+of+chronically+administered+hyoscine+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Supersensitivity of salivation in response to pilocarpine after withdrawal of chronically administered hyoscine in the mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 46 (2), 315-323 (1972).</li>
<li>Nishiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up-Regulated+PAR-2-Mediated+Salivary+Secretion+in+Mice+Deficient+in+Muscarinic+Acetylcholine+Receptor+Subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Up-Regulated PAR-2-Mediated Salivary Secretion in Mice Deficient in Muscarinic Acetylcholine Receptor Subtypes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 320 (2), 516(2007).</li>
<li>Yang, B., Song, Y., Zhao, D., Verkman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotype+analysis+of+aquaporin-8+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Phenotype analysis of aquaporin-8 null mice.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 288 (5), C1161-C1170 (2005).</li>
<li>Kamiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-Ray-Induced+Damage+to+the+Submandibular+Salivary+Glands+in+Mice%3A+An+Analysis+of+Strain-Specific+Responses%5BTitle%5D)+AND+%22BioResearch+Open+Access%22%5BJournal%5D)">X-Ray-Induced Damage to the Submandibular Salivary Glands in Mice: An Analysis of Strain-Specific Responses.</a> BioResearch Open Access. 4 (1), 307-318 (2015).</li>
<li>Patel, R. M., Varma, S., Suragimath, G., Zope, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+and+Comparison+of+Salivary+Calcium%2C+Phosphorous%2C+Alkaline+Phosphatase+and+pH+Levels+in+Periodontal+Health+and+Disease%3A+A+Cross-sectional+Biochemical+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+and+Diagnostic+Research%22%5BJournal%5D)">Estimation and Comparison of Salivary Calcium, Phosphorous, Alkaline Phosphatase and pH Levels in Periodontal Health and Disease: A Cross-sectional Biochemical Study.</a> Journal of Clinical and Diagnostic Research. 10 (7), ZC58-ZC61 (2016).</li>
<li>Droebner, K., Sandner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+salivary+secretion+assay+in+F508del+mice--the+murine+equivalent+of+the+human+sweat+test%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Modification of the salivary secretion assay in F508del mice--the murine equivalent of the human sweat test.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 12 (6), 630-637 (2013).</li>
<li>Lamy, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+mouse+whole+saliva+soluble+proteome+induced+by+tannin-enriched+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Proteome+Science%22%5BJournal%5D)">Changes in mouse whole saliva soluble proteome induced by tannin-enriched diet.</a> Proteome Science. 8 (1), 65(2010).</li>
<li>Mahomed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+mucin+immunohistochemistry+in+salivary+gland+tumors+and+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in mucin immunohistochemistry in salivary gland tumors and head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 47 (9), 797-803 (2011).</li>
<li>Kohlgraf, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+SPLUNC1+in+saliva+with+an+xMAP+particle-based+antibody+capture+and+detection+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitation of SPLUNC1 in saliva with an xMAP particle-based antibody capture and detection immunoassay.</a> Archives of Oral Biology. 57 (2), 197-204 (2012).</li>
<li>Maimets, M., Bron, R., de Haan, G., van Os, R., Coppes, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+ex+vivo+expansion+and+post-irradiation+regenerative+potential+of+juvenile+and+aged+salivary+gland+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Radiotherapy+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Similar ex vivo expansion and post-irradiation regenerative potential of juvenile and aged salivary gland stem cells.</a> Radiotherapy and Oncology. , (2015).</li>
<li>Lombaert, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> PLoS One. 3 (4), e2063(2008).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

אנו מציגים שיטה שקודמים להעריך תפקוד בלוטת הרוק, אשר יכול להיות מיושם ללמוד פציעה בלוטת ו הרפוי. את הנהלים שלנו כולל מיכשור וציוד, אוסף רוק ו בלוטת לנתיחה, שלכל אחד מהם יש יישומים ניסיוני יכול לתמוך לימוד משולב של בלוטת הרוק הביולוגיה. לדוגמה, מיכשור וציוד מאתר שימש לניהול כללי דרכי הנשימה במהלך הליכי הפרעה לחלל הפה.
דיסקציה תקין, החתך והכו אותי נדרשים עבור פילוקרפין המרצת הפרשת רוק-100 מ ג/ק ג. לחלופין, מנה פילוקרפין מופחת יכול למנוע את הצורך מיכשור וציוד, ולכן ניתן להשתמש עבור הערכה האורך של...

הפרעות בלוטת הרוק כוללים תסמונות של dysregulated או הפרשת לקוי מוביל עודף (sialorrhea) או underproduction (xerostomia ו- hyposalivation) של רוק1. בשני המקרים, יש אינטרס לשפר את ההבנה שלנו של בלוטת הרוק ביולוגיה לעבר היעד הסופי של התפתחות טיפולית2.
בלוטות הרוק הן איברים מאוד רגיש, פגעו לעיתים קרובות במהלך הקרנות סרטן הראש והצוואר, המוביל הקבוע יובש בפה (xerostomia)3,4. בניגוד לרקמות אחרות רגיש, עם זאת, שיעור תחלופה בלוטת הרוק הוא יחסית נמוך, המנגנון של אובדן הפרשה ממעטים להבין5,6. בהגדרה פגיעה ייחודי, התחדשות רקמות אסטרטגיות המכון להגנת דורשים הערכה תפקודית הרוק. השפעול, אוסף רוק מאתר הוא כלי יקר במיוחד בהערכת התגובה בלוטת קרינה וגם סוכני טיפולית.
כאן, אנו מציגים את שיטת ביצוע וכימות הפרשת רוק מגורה באמצעות פילוקרפין, אגוניסט מוסקריניים חזק7. פילוקרפין מגרה את מערכת העצבים האוטונומית לזירוז בלוטת הפרשה8,9. כדי להשלים את המבחן הזה כראוי, מיכשור וציוד נדרש כדי להבטיח כי העכבר שומרת על דרכי הנשימה פטנטים לאורך כל ההליך, וכדי להפחית את הסיכונים של חנק השאיפה של חלל הפה10. הפרשות במאגר.
זהו הליך מסוף, שהגיעה לשיאה להסרת בלוטות הרוק הגדולות שלושה: את parotid (עמוד), submandibular (SMG) ו את sublingual (. סיג). ללימודים פונקציונלי, בלוטת משקולות נרשמים, משמשים לעתים קרובות כדי לנרמל רוק למדידה11,12,13. המידע הזה חשוב במיוחד במחקרים קרינה, שבתוכה בלוטת ניוון נמצא14,התוצאה הצפויה15
יש השתנות בספרות לגבי איך ממריצים הפרשת רוק מבוצעת ודיווח16. לדוגמה, פילוקרפין מנות בתוך ספרות span לפחות שלושה סדרי גודל17,18,19,20,21,22,23. כאן, אנו מציגים פרוטוקול פילוקרפין במינון גבוה ממוטבת עם כוונה הפארמצבטית משופרת שיטת הביצוע, כמו גם מתן פלטפורמה מודולרית של טכניקות (מיכשור וציוד, אוסף רוק ו ניתוח בלוטת) כי ניתן להתאים כמו הצורך.
בנוסף פרוטוקול הדגמה, אנו כוללים נציג נתונים פונקציונלי של זרימת הרוק-2 שבועות לאחר fractionated קרינה (4 מנות של 6.85 Gy) לאזור SMG.

<table><tbody><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6503</td><td>Pilocarpine</td></tr><tr><td>Student Vannas מספריים אביב</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>91500-9</td><td>מספריים אביביים לטרכאוסטומיה</td></tr><tr><td>תמיסת מלח סטרילית</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>מלח</td></tr><tr><td>Dumont #7 מלקחיים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11274-20</td><td>מלקחיים מעוקלים</td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>מלקחיים ישרים</td></tr><tr><td>דפוס סטנדרטי מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>מלקחיים קהים</td></tr><tr><td>מספריים עדינים- טונגסטן קרביד</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14568-09</td><td>מספריים לדיסקציה</td></tr><tr><td>Microhematocrit צינורות נימיים Heparinized</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>צינורות נימיים</td></tr> חומר <tr><td>סיכה משחת עיניים</td><td>רענון</td><td>N/A</td><td>רענון Lacri-Lube</td></tr><tr><td>עז פוליקלונלי אנטי-Nkcc1</td><td>סנטה קרוז ביוטק</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 נוגדן</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד)</td> <td>תרמו פישר מדעי</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad פריזמה</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>תוכנה סטטיסטית</td></tr><tr><td>מוליך כותנה עם קצה</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>מוליך למשחת עיניים</td></tr><tr><td>מזרק אינסולין 0.5 סמ"ק, מזרק 29G x 1/2 אינץ'</td> <td>BD</td><td>7629</td><td>להזרקה תוך צפקית</td></tr></tbody></table>

מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין fractionated קרינה

Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

Hyposalivation הוא ציין כלל התגובה אוטואימונית של תסמונת סיוגרן או הקרנות הבאה, לפגיעה בלוטות הרוק הגדולות. במקרים אלה, נותרו שאלות לגבי המחלה פתוגנזה והתערבויות יעיל. שיטת אופטימיזציה המאפשר הערכה תפקודית של בלוטות הרוק לא יסולא בפז עבור חוקרים בלוטה אקסוקרינית ביולוגיה, תפקוד, הרפוי. כאן, אנו מציגים גישה צעד אחר צעד כדי ביצוע פילוקרפין המרצת הפרשת הרוק, כולל מיכשור וציוד את הקרע של שלוש הגדולות מאתר בלוטות הרוק. אנחנו גם פירוט המתאימה מאתר הראש והצוואר האנטומיה גישה במהלך הטכניקות הללו. גישה זו היא מדרגית, המאפשרות מספר עכברים יעובדו בעת ובעונה אחת, ובכך שיפור היעילות של תהליך עבודה. אנו שואפים לשפר את הפארמצבטית בשיטות אלה, שלכל אחד מהם יש נוספת יישומים בתוך השדה. בנוסף אוסף רוק, נדון מדדי לכימות, נורמליזציה קיבולת תפקודית של רקמות אלה. נציג נתונים כלולים מ בבלוטות submandibular עם תפקוד בלוטת הרוק מדוכא 2 שבועות בעקבות קרינה fractionated (4 מנות של 6.85 Gy).

אחרי ביצוע במינון גבוה פילוקרפין גירוי אוסף רוק, זה חשוב לשמור על האוויר כדי למנוע שאיפה או חנק מן הפרשות בחלל הפה. תיאור סכמטי של מיכשור וציוד מסופק (איור 1). בעקבות החתך בקנה הנשימה, פיונית חייבת להישאר ברורה של רקמות ונוזלים.
כדי לשפר נימיות במהלך אוסף רוק, שנמצאת עכברים עם הראש כלפי מטה בזווית של 45°. ניתן לבצע את הפעולות הבאות ב- &gt; 1 עכבר, למרות שאין זה מומלץ לחרוג 5 עכברים בבת אחת (<strong ...

אנו מציגים גישה מפורטת לביצוע אוסף רוק, כולל מיכשור וציוד מאתר את ניתוקה של שלושה בלוטות הרוק הגדולות.

מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין Fractionated קרינה

Hyposalivation is commonly observed in the autoimmune reaction of Sj&#246;gren's syndrome or following radiation injury to the major salivary glands. In ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעריך את תפקוד הרוק של העכברים על ידי גירוי פילוקרפין. ניתן ליישם שיטה זו הן כדי להבין את ההיסטוריה הטבעית של תפקוד לקוי של בלוטות הרוק, והן כדי לבחון את היעילות של כל התערבויות פוטנציאליות. הפרוטוקול שלנו מספק פלטפורמה מודולרית של טכניקות, כולל טרכאוטומיה של עכברים, איסוף רוק ודיסקציה של בלוטות.מבחינה קלינית, לטכניקה זו יש השלכות על מחקרים המעריכים יובש בפה, או ייצור יתר של רוק. וניתן ליישם אותו גם על פרוצדורות תוך-אוראליות אחרות הדורשות ניהול דרכי נשימה. אלה שלומדים לראשונה את הפרוטוקול הזה עשויים למצוא את הטרכאוסטומיה ודיסקציה של הבלוטה מאתגרים.אנו מקווים שסרטון זה יעזור לכם ללמוד טכניקת בידוד בלוטות נכונה, כמו גם את האנטומיה הרלוונטית. בעזרת איזון אנליטי, שקלו 20 מיליגרם פילוקרפין, ואז ממיסים אותו ב -2 מיליליטר מי מלח סטריליים. יש להכין פתרונות פילוקרפין טריים ביום השימוש בהם.לאחר מכן, שקלו את כל כלי האיסוף להליך, ושקלו את העכבר כדי למנות אותו במדויק. השתמש בזן C57 שחור 6. לאחר הרדמת העכבר, ואישור ההרדמה עם צביטת הבוהן, יש למרוח משחה עיניים באמצעות אפליקטור עם קצה כותנה, ולהניח את העכבר בשכיבה.לאחר מכן, אבטח את הגפיים, האף והזנב שלו עם סרט כירורגי. לאחר מכן, יש לנקות ולהרטיב את הצוואר בעזרת מגבון אלכוהול. כעת, השתמש במלקחיים כדי לצבוט את צוואר קו הא

murine-salivary-functional-assessment-via-pilocarpine-stimulation

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פרוטוקול אופטימיזציה עבור בידוד של בתאי גזע מבלוטת הרוק עכבר מתואר. שיטה מעסיקה עיכול אנזימטי מכני, והיתרי הבידוד של salispheres המכילה תאים בעלי מאפיינים של בתאי גזע.

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

פרוטוקול עבור cannulation של בלוטת הרוק עכבר submandibular דרך צינור של וורטון מתואר. לצורך ניסוי זה, הפתרון כחול trypan משמש הצבעים כדי להדגים כיצד טכניקה זו יעילה מספק חליטות לתוך בלוטת ממוקד, ולהציע את האמינות של הגישה החדשה הזו כמו טיפול פוטנציאלי סמים / תא קליניות לגבי רגנרצית של בלוטות הרוק.

Cannulation של בלוטת הרוק באמצעות עכבר Submandibular Duct של וורטון

הפונקציה של תאי עצב של יונקים בוגרים שנולדו נשארת אזור פעיל של חקירה. קרינה מייננת מעכבת את לידתו של נוירונים חדשים. באמצעות הקרנה המונחה טומוגרפיה מחשב מוקד (CFIR), מיקוד אנטומיים תלת ממדי של אוכלוסיות עצביות ספציפיות כעת ניתן להשתמש כדי להעריך את התפקיד הפונקציונלי של neurogenesis למבוגרים.

חקירה תפקודית של מבוגרים ההיפותלמוס Neurogenesis עם הפוקוס ברדיולוגית עיכוב

תת תפקוד בלוטות הרוק, תופעת לוואי משמעותית של רדיותרפיה בראש ובצוואר מפחיתה את איכות החיים של המטופל. הוכחת היעילות של טיפולים חדשים במודלים של בעלי חיים היא תנאי מוקדם לפני המעבר הקליני. פרוטוקול זה מתאר מתן רטרודוקטי והקרנה מקומית של בלוטות תת-לסתות של חולדות.

Retroductal submandibular בלוטת החדרה ונקודות מופרדות הקרנה במודל עכברים של הרוק hypofunction

אנו מתארים שיטה באמצעות הקרנה היקפית ממוקדת כדי לגרום התנהגות כמו-עייפה בעכברים. מינון ההקרנה לא הקטלני שנבחר מוביל לירידה של שבוע בפעילות ריצת גלגל מרצון.

במודל עכבר של עייפות הנגרם על ידי הקרנה ההיקפית

בלוטת הרוק hypofunction הוא תוצאה תכופים של מחלות אוטואימוניות והקרנות. לשחזור הערכה של תפקוד בלוטת הרוק במודלים של העכבר המחלות האלה היא אתגר טכני. . הנה, מתוארת שיטה פשוטה למדידה מדויקת, לשחזור של ייצור רוק בעכברים.

שיטת המדידה של תפקוד בלוטת הרוק בעכברים

משלוח סמים מקומי נקראות בלוטות הוא עניין בביולוגיה בלוטת הרוק ההבנה ועל ההתפתחות של הריפוי. אנו מציגים פרוטוקול הזרקת retroductal מעודכן ומפורט, שנועדו לשפר את המסירה ודיוק הפארמצבטית ניסיוני. היישום שהוצגו במסמך זה הוא המסירה של חלקיקים פולימרים.

ננו-חלקיק Retroductal הזרקה אל בלוטת Submandibular מאתר

שימוש תלת מימדי בתרבויות אורגאותוגית להמחיש מורפולוגיה וסמנים פונקציונלי של בלוטות הרוק עשוי לספק תובנות הרומן לתוך מנגנונים של נזק רקמות לאחר הקרינה. מתוארים כאן הוא פרוטוקול לסעיף, תרבות, הקרנת, כתם, תמונה 50 – 90 יקרומטר עבה בלוטת הרוק סעיפים לפני ובעקבות חשיפה לקרינה מייננת.

הטיפול בקרינה של תרבויות אורגנוטימית מתוך הלסת התחתונה ובלוטות הרוק פרודה מודלים מפתח Vivo מאפיינים

הדמיה אימונופלואורסצנטית מוגבלת על ידי היכולת לצפות בתהליכים ביולוגיים מורכבים ותלויי זמן בתמונת מצב אחת בלבד בזמן. מחקר זה מתאר גישת הדמיה חיה שנערכה על פרוסות בלוטות תת-לסתיות של עכברים שנחתכו בחיתוך מדויק. גישה זו מאפשרת תצפית בזמן אמת על אינטראקציות תא-תא במהלך הומאוסטזיס ותהליכי התחדשות ותיקון.

חקירת אינטראקציות תאים-תאים בבלוטת הרוק באמצעות Ex Vivo Live Cell Imaging

כאן אנו מציגים פרוטוקול ליישום דקירות אש בהנחיית אולטרסאונד על שכבות הבלוטות או השרירים לטיפול בסיאלוריאה אצל מטופלים שעברו טרכאוטומיה לאחר שבץ.

דיקור סיני במחט אש מונחית אולטרסאונד לטיפול בסיאלוריאה במטופלים שעברו טרכאוטומיה

למדו להעריך תפקוד בלוטות רוק בעכברים באמצעות גירוי פילוקרפין. הפרוטוקול כולל טרכאוסטומיה, איסוף רוק וניתוח בלוטות לחקר הפרעות בלוטות הרוק והתערבויות קליניות.

מאתר הערכה תפקודית הרוק באמצעות בעקבות גירוי פילוקרפין Fractionated קרינה

גלה סרטונים נוספים