מודל לולאת המעי מחוברים בעופות חינם ומורדמת פתוגן מסוים ללמוד החיידק Clostridium התקפה אלימה

כאן אנו מציגים פרוטוקול ליצירת בניתוח 'לולאות מעיים מחוברים' בהמעי הדק עוף. הליך זה מאפשר ההשוואה של מספר זנים של החיידק Clostridium התקפה אלימה בחיי עיר שורה בודדת. שיטה זו פוחתת במידה ניכרת את מספר התרנגולות ההכרחיות בדרך כלל לצורך ניסויים דומים ויוו .

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר דלקת פרקטיות נמק עוף. כגון השוואת הארסיות של זנים ספציפיים Clostridium perfringens הגורמים למחלה זו. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מפחיתה באופן ניכר את מספר התרנגולות הנחוצות בדרך כלל לניסויי אמביבור דומים.

בעוד שיטה זו יכולה לספק תובנה לתוך פוטנציאל ארסיות של זנים Clostridium perfringens, זה יכול להיות מיושם גם על פתוגנים מעיים אחרים כגון Clostridium difficile, או סלמונלה אנטריקה. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו כי הליכים כירורגיים זקוקים להכשרה ספציפית ויבוצעו רק על ידי אלה שרכשו מיומנויות כגון תירה, טכניקה לפני הניסוי. לאחר הרדמה של עוף בן 10 שבועות ללא פתוגן, הקים את הצגים למדידות חיוניות והתחל להסיר ידנית את הנוצות מהבטן על ידי מתיחה עדינה.

לאחר מכן, לשפשף את האתר הכירורגי באמצעות כלורקסידין gluconate עם מברשת זיפים רכה. מקרצפים בעדינות את העור מהמרכז לפריפריה במשך חמש דקות ללא היפוך מסלול. לאחר מכן, לבצע שלושה קטעים לסירוגין באתר הניתוח עם פתרון גלוקונאט כלורקסידין ואלכוהול Isopropyl באמצעות גזות סטריליות.

שוב, ללכת מהמרכז לפריפריה, ולאחר מכן, לעטוף את העוף. התחל על ידי פתיחת הווילון מעל האתר הכירורגי, ולאחר מכן להפוך חתך עור קו אמצע נמוך בצורת L עם מספר שלוש אזמל, החל חיבוק סנטימטר אחד אל עצם החזה, ומסתיים בגולגולת סנטימטר אחד כדי cloicha. לאחר מכן, המשיכו את החתך בצורת L בניצב הראשון על ידי ביצוע חתך שני החל בקצה החיבוק של החתך הראשון והמשיכו חמישה סנטימטרים לצד שמאל של הבטן על ידי ביצוע קו האגן.

פתח זה יאפשר מיצוי קל של המעיים. לאחר מכן, פתח את שרירי הלידה והבטן באמצעות אותו דפוס בצורת L כדי לגשת לחלל הבטן. שיקי האוויר ייחשפו כעת ויש לשמור אותם לחים באמצעות גזה ספוגה מלוחה.

לאחר מכן, הכנס וו מעוקר Snook לתוך חלל הבטן על ידי ביצוע דופן הבטן השמאלית עובד את הוו סביב שקעי אוויר הבטן כדי לחלץ את המעיים. לאחר מכן, באמצעות גזה יבשה, להמשיך בעדינות חיצונית המעיים כדי לחשוף את Jejunum. מורחים את המעיים ולשמור אותם לחים עם ריסוס תכופים עם מלוחים ועל ידי כיסוי אותם עם גזה ספוגה מלוחים.

חשוב להיות עדין מאוד בעת נטילת המעיים כי מתח מוגזם יכול לקרוע את כלי mesenteric אשר עלול להוביל נגעים איסכמיים במעיים מאוד לסכן את התוצאה של ההליך. לאחר החיצוניות של המעיים, לעשות סדרה של לולאות במעיים החל Jejunum. כל לולאה יכולה לשמש לטיפול שונה.

ב Jejunum proximal, מניחים קשירה פשוטה עם חומר רב-פילמנט פוליגלוטמין סינטטי לספיגה תוך הימנעות קשירה של כלי mesenteric העיקריים. לאחר מכן, מניחים קשירה דיסטלית שני סנטימטרים מן הקשירה הפרוקסימלית כדי להשלים את הלולאה הראשונה. כל הקשירות הפרוקסימליות והדיסטליות צריכות להיות מ רווחים של כשני סנטימטרים.

כל זוג קשירה יוצר לולאה, שהיא קטע הרמטי. לאחר מכן, ליצור interloop או קטע של המעי בין לולאות. מניחים קשירה פשוטה חצי סנטימטר aboreeter כדי קשירה דיסטלית של הלולאה הראשונה.

קשירה זו נמצאת באמצע interloop ותפחית זיהום לחצות אפשרי בין לולאות. עכשיו, להמשיך את הדפוס של יצירת לולאה נוספת חצי סנטימטר aboreeter מן הקשירה interloop. כאן, תשע לולאות ושמונה interloops נוצרים מכסה 26 סנטימטרים של המעי.

ניתן להתאים את מספר הלולאות לפי הצורך. לאחר מכן, להמשיך עם זן הזרקת Clostridium perfringens לתוך לולאות. לתוך הצד האנטי-mesenteric של הלולאה, להשתמש מחט מד 26 בזווית של 45 מעלות להזריק 0.2 מיליליטר של פתרון BHI, המכיל מיליון מושבה להרכיב יחידות של חיידקים בשלב הצמיחה midlog.

במצב זה, עם תשע לולאות, חמישה זנים שונים מוזרקים לולאות לסירוגין עם לולאות להתערב מוזרק עם הרכב לבד כמו פקדים שליליים. לאחר הזרקת הפתוגנים, החלף בעדינות את מערכת העיכול לאזור הגבי של חלל הבטן מתחת לשקי האוויר. לאחר מכן, סגור את חלל הבטן.

לתפור את שרירי צפא והבטן לאורך האגן עם דפוס תפר מתמשך פשוט באמצעות חומר ספיגה סינתטי Polyglutamine Multifilament סינתטי. המשך על ידי תפור את צמיטונום ושרירי הבטן מעצם החזה אל הקלוש באמצעות תפרים רציפים פשוטים. לאחר מכן, לתפור את העור קרוב באמצעות חומר סינתטי Multifilament פוליגלוטמין דפוס רציף פשוט.

ראשית, תפר לאורך האגן, ולאחר מכן תפר מעצם החזה אל הקלוש. לאחר סגירת החתכים, לשמור על העוף תחת הרדמה כללית עם שימוש נכון של משככי כאבים כדי למזער את הכאב של בעלי חיים במהלך זמן הזיהום. המשך ניטור הרדמה כדי להבטיח רמת הרדמה נאותה.

לאחר הכמות הרצויה של זמן ההדבקה, כגון שבע שעות בניסוי הנוכחי, המתת דם לציפור ולאסוף את רקמות המעי. באמצעות אזמל מספר שלוש, לגזור חצי עד קטע לולאה סנטימטר אחד. לאחר מכן, להעביר את החלק ל 10% פורמלין עבור קיבעון לילה וניתוח היסטופתולוגי נוסף.

לאחר מכן, השתמש באותו להב אזמל על אותה לולאה כדי לחתוך את שארית הלולאה ולהעביר את הרקמה לצינור microfused לבידוד של החיידקים. חזור על הליך זה עבור כל לולאה באמצעות להב אזמל חדש בכל פעם. שבע שעות לאחר ההזרקה, לולאת מעיים מוזרקת עם מדיום סטרילי שליטה יש גבול מברשת רירית שלם ללא נמק.

גודש קל בשכבות המעיים של המקטעים אינו נדיר. שבע שעות לאחר הזרקה עם הפתוגן, Clostridium perfringens, טיפים villi נשחקים עם אתרי כניסה נמק המקיפים את הטיפים. ואז חומר נמק המקיף את הווילי, יש אשכולות של חיידקים גדולים בצורת מוט.

לפעמים נמק נובע ביצוע פרוצדורלי לקוי והוא יכול להיות מתפרש לא נכון כמו נגעים המיוצרים על ידי חיידקים. סימן מסגיר הוא היעדר חיידקים בחלק ההיסטולוגי. כמו כן, כלי הדם בשכבת השרירים הם הוחממו קשות על ידי הצטברות של אריתרוציטים מנוון רבים המעידים על גודש בכלי הדם.

זה נגרם על ידי כלי דם mesenteric קשור כי סביר היו קשורות לעשות עומס פיזי מוגזם על המעיים. לולאות איסכמיות ניתן לזהות בקלות מיקרוסקופית במהלך ההליכים הכירורגיים. בעקבות גודש חמור בכלי הדם כמה דקות לאחר הקשירה, serosa יהיה כחול כהה במקום צבע אדמדם ורוד רגיל שלה.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה של איך ליצור לולאות מעיים מרובות במודל עוף על ידי הצבת קשירה על המעיים. לאחר שלל את ההליכים הכירורגיים, למעט זמן זיהום, ניתן לעשות זאת בתוך פחות משלוש שעות, אם הוא מבוצע כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לשמור על העוף תחת הרדמה עמוקה כדי לשלוט בכאב ולפקח על סימנים חיוניים במהלך כל ההליכים, כולל חלק כירורגי ולאחר זמן ההדבקה.

בעקבות הליך זה או השיטות שלהם כמו בידוד חיידקי, וזיהוי ישר כגון זיהוי גנים על ידי PCR ניתן לבצע על מנת לענות על שאלות חיצוניות כמו התאוששות וזיהוי הפתוגן הראשוני מוזרק. לאחר התפתחות זו, טכניקה זו סללה דרך לחוקרים בתחום Clostridium perfringens פתוגנזה לחקור דלקת פרקטית נקרטית בתרנגולות. אל תשכח כי עבודה עם בעלי חיים חיים יכול להיות משתנה מאוד.

ואמצעי זהירות כגון ניטור הרדמה מתמשך של העוף צריך תמיד להיעשות בעת ביצוע הליך זה.